原发性高血压患者血清NO、NOS及其亚型水平的分析

目的:测定原发性高血压患者外周血中血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)及其亚型水平,探讨NO/NOS系统参与血压调节的可能机制.方法:原发性高血压患者135例,正常对照组35例.采用化学法检测所有病例外周血的一氧化氮(NO)、总NOS、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和结构型一氧化氮合酶(cNOS)水平并作统计学分析.结果:高血压组NO、NOS、iNOS和cNOS水平均低于正常对照组,且差异具有显著性意义(分别为:P＜0.05,P＜0.01,P＜0.01,P＜0.01);iNOS/cNOS比值与正常对照组相比无显著差异(P＞0.05);对照组和高血压组的NOS浓度与iNOS和cNOS浓度均呈显著正相关;高血压组的cNOS水平与iNOS水平呈显著负相关.结论:高血压患者NO、NOS及其亚型浓度值可以作为临床评估高血压的参考指标;iNOS在正常人体内有表达;在高血压情况下,机体有通过增加iNOS的表达来弥补cNOS水平的病理性降低、调控NOS总体水平从而调节和平衡血压的趋势.     

体外反搏对心肌梗死犬一氧化氮系统的影响

目的:探讨体外反搏对心肌梗死犬一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)和其基因表达的影响。方法:19只健康杂种犬随机分为对照组、缺血组和缺血+反搏组(反搏组)3组,采用开胸结扎冠状动脉左前降支的方法建立心肌缺血模型,用改良硝酸还原酶法测定心肌缺血前后血清NO含量、以及心肌组织的NO含量和NOS比活性,采用免疫组化方法检测缺血区心肌组织的NOS亚型即诱导型NOS(iNOS)和内皮型NOS(eNOS)的蛋白合成,用原位杂交方法检测构成型NOS(cNOS)信使核糖核酸(mRNA)的基因表达。结果:在冠状动脉结扎前和结扎后60min,3组犬血清NO含量均无明显差异(P＞0.05);结扎后120min和180min时,反搏组犬血清NO含量明显高于缺血组(P＜0.05)。正常组和反搏组犬心肌组织NO含量和NOS比活性均大于缺血组(P＜0.05)。免疫组化结果表明心肌缺血时iNOS蛋白合成增多,而eNOS蛋白合成减少;体外反搏对iNOS有抑制作用,对eNOS有促进作用。此外心肌缺血时cNOSmRNA的表达明显减少,反搏可促进cNOSmRNA的表达。结论:体外反搏促进NO的产生可能是其抗心肌缺血性损伤的重要机制之一。     

一氧化氮及诱导型一氧化氮合酶在颈动脉粥样硬化中的作用

目的:探讨颈动脉粥样硬化斑块患者血浆一氧化氮(NO)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)含量的变化及其临床意义.方法:选择60例经CT或彩色多普勒超声诊断仪证实的颈动脉粥样硬化症患者,采用放射免疫法、硝酸还原酶法及分光光度法进行血浆ET、N0及iNOS水平检测.结果:按超声结果动脉粥样硬化(AS)病变程度分为:I期14例,II期23例,III期26例,I、II、III期ET、iNOS水平显著高于对照组(P均<0.01),NO含量显著低于对照组(P均<0.01).三组间比较,Ⅲ期ET、iNOS水平显著高于I期、Ⅱ期(P均<0.01);NO含量显著低于I期、Ⅱ期(P均<0.01),而Ⅱ期NO、iNOS及ET水平与I期比较亦有高度显著性差异(P均<0.01).与无斑块组比较,有斑块组ET、iNOS明显增高,NO明显降低(P<0.01);与稳定斑块组比较,易损斑块组ET、iNOS明显增高,NO明显降低(P<0.01).结论:血清NO、iNOS在颈动脉粥样硬化患者中有明显变化,iNOS处于高水平,而N0处于低水平,NO、iNOS水平与患者病变程度和斑块稳定性相关.     

慢性乙型肝炎患者氧化损伤的研究

目的　探讨慢性乙型肝炎 (乙肝 )患者体内氧化损伤的情况。方法　检测 30例慢性乙肝患者氧化损伤指标 (丙二醛、总抗氧化能力、抗坏血酸 )、肝功能、乙型肝炎病毒 (HBVDNA) ,并做出统计分析。结果　慢性乙肝患者组与正常对照组比较 :丙二醛浓度明显升高 (P <0 0 5 ) ;ALT正常组与正常对照组比较 :抗坏血酸血清浓度明显升高 (P <0 0 1) ;ALT异常组与正常对照组及ALT正常组比较 :丙二醛血清浓度均明显升高 (P <0 0 5 )。在慢性乙型肝炎患者中 ,丙二醛浓度与ALT水平呈明显正相关 (r=0 6 1) ,抗坏血酸浓度与ALT水平呈明显负相关 (r =- 0 6 4 )。乙肝HBVDNA与抗氧化指标间无联系 (P >0 0 5 )。总抗氧化能力指标在各组间比较均无明显改变。结论　乙肝患者体内有氧化 抗氧化功能障碍。慢性乙肝患者ALT升高时 ,体内氧化损伤程度加重。慢性乙型肝炎患者ALT正常者 ,体内氧化损伤程度不高。氧化损伤指标与HBVDNA是肝炎患者中相对独立的检查指标。     

睡眠剥夺对大鼠一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的：探讨睡眠剥夺对大鼠脑组织一氧化氮（NO）及一氧化氮合酶（NOS）影响。方法：采用小平台水环境法（Flower Pot)制作大鼠睡眠剥夺模型，采用化学法和酶法观察不同时间睡眠剥夺后大鼠额叶、海马、中脑和下丘脑NO含量及NOS活性变化。结果：与正常对照组及大平台组比较，大鼠在SD后额叶和海马的NO含量及NOS活性增高，有显著性差异（P＜0．01－0．05），其余脑区无显著性差异（P＞0．05）。随着剥夺时间的延长，额叶和海马NO含量及NOS活性增高更加明显。结论：睡眠剥夺可致NO及NOS升高，可能与其学习障碍有关，NO可能参与大鼠的睡眠调节。     

肝癌组织中诱导型一氧化氮合酶的表达及其与血管形成、bcl-2和细胞增生的关系

一氧化氮合酶 (NOS)是NO合成的关键限速酶 ,它的生物学活性直接决定着NO的合成量。NOS有两个异构体 ,即结构型NOS(cNOS)和诱导型NOS(iNOS)。通常iNOS与肿瘤的免疫相关 ,且产生NO的能力较cNOS高出 10 0～ 10 0 0倍。NOS活性的增高与肿瘤血管形成关系密切[1] 。另有研究显示 ,iNOS产生的NO可通过bcl 2介导途径抑制细胞凋亡并有利于生长停止的肿瘤细胞的存活[2 ] 。我们采用免疫组织化学法检测肝细胞性肝癌中iNOS、血管内皮生长因子(VEGF)、CD34标记的微血管密度 (MVD)及凋亡相关蛋白bcl 2和p5 3蛋白的表达。同时应用流式…     

亚低温对缺氧缺血性脑病大鼠脑内一氧化氮代谢的影响

目的　探讨亚低温对缺氧缺血性脑病大鼠脑内一氧化氮 (NO)代谢的影响。方法　制备新生大鼠缺氧缺血性脑病 (HIE)模型 ,采用 34℃亚低温干预 4 8h ,监测大鼠脑组织内NO含量及一氧化氮合酶 (NOS)的活性。结果　HIE 4 8h后NO含量及NOS的活性明显升高 ,与正常对照组相比有显著差异 (P <0 .0 1) ,亚低温干预组NO含量及NOS的活性无明显升高 ,与HIE组相比有显著差异 (P <0 .0 1)。结论　亚低温可通过抑制NOS活性 ,减少NO的生成 ,防止NO大量生成所致的神经毒性 ,从而对缺氧缺血性脑损伤有保护作用。     

小鼠巨噬细胞一氧化氮诱生型合酶的免疫测定

<正> 一氧化氮(NO)在细胞信号传递中起着重要作用,参与调节心血管、神经和免疫系统功能,与许多疾病的发病过程有关。一氧化氮合酶(nitric oxidesynthase,NOS)是NO合成过程的关键酶。目前已知有3种异构体:神经型(neuronal,nNOS),内皮型(endothelial,eNOS),及诱生型(inducible,iNOS)。前两者又称为原生型(constitutive,cNOS),其活性依赖细胞内钙离子浓度的增加,cNOS活化后可生成少量NO,引起局部效应:而iN-OS活性不依赖钙离子浓度,受多种细胞因子(TNF-α、IFN-γ、IL-1β))和 LPS等诱导激活,可产生大量NO,导致广泛效应,iNOS存在于多种细胞的胞浆内,故测定iNOS具有重要意义。     

低糖诱导人脐静脉内皮细胞一氧化氮与活性氧变化的研究

目的观察低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞一氧化氮（NO）与活性氧（ROS）变化的影响。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12为研究对象,将实验分为正常对照组（5.5mmol/L葡萄糖）、低糖组（2.8mmol/L葡萄糖）、无糖组（0mmol/L葡萄糖）。分别用2.8、0mmol/L葡萄糖干预HUVEC-12细胞,经过1、2、4、12h后,硝酸还原酶法测定NO产量,化学比色法测定一氧化氮合成酶（NOS）活性,Dihydroethidium荧光探针法测定细胞内ROS水平。结果与正常对照组相比,低糖组与无糖组NO水平降低（P〈0.01）,NOS活性下降（P〈0.01）,细胞内ROS水平升高（P〈0.01）,均呈剂量依赖关系。同一浓度组内随着时间的延长,内皮细胞NO水平、NOS活性进一步降低（P〈0.01）,ROS水平进一步升高（P〈0.05）,各指标都具有浓度和时间依赖性。结论低糖可导致内皮细胞功能障碍,NO水平降低,NOS活性下降,其机制可能与低糖导致内皮细胞氧化应激损伤有关。     

叶酸对去卵巢大鼠抗氧化酶、一氧化氮合酶和一氧化氮的影响

 目的: 观察叶酸对去卵巢大鼠抗氧化酶、一氧化氮合酶和一氧化氮的影响。方法: 40只3月龄健康雌性SD大鼠,随机分成5组:假手术组、去卵巢组、二乙基己烯雌酚(0.03 mg·kg^-1·d^-1)组、低剂量(5 mg·kg^-1·d^-1)叶酸组和高剂量(20 mg·kg^-1·d^-1)叶酸组。各组大鼠于术后1周开始灌胃给药,假手术组和去卵巢组给予蒸馏水,10周后,取L₅椎体和右股骨行骨密度(BMD)检测;测定血浆和骨匀浆总抗氧化能力(TAC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)和一氧化氮(NO)水平。结果: 与假手术组比较,去卵巢组大鼠L₅椎体和股骨BMD显著降低(P < 0.01),血浆GSH-Px、NO和骨匀浆TAC、GSH-Px、NOS及NO水平明显降低(P < 0.01),MDA浓度升高显著(P < 0.01);与去卵巢组大鼠比较,高剂量叶酸组大鼠L₅椎体和股骨BMD增加(P < 0.01),骨匀浆TAC、GSH-Px、NOS和NO水平升高(P < 0.01),MDA浓度降低(P < 0.01),血浆GSH-Px和NO水平升高。结论: 去卵巢大鼠体内抗氧化酶、NOS和NO水平降低,氧化应激参与了去卵巢大鼠骨质疏松的发生;高剂量叶酸能提升去卵巢大鼠腰椎和股骨BMD,提高其体内抗氧化酶、NOS和NO水平,改善氧化应激,这可能是高剂量叶酸防治去卵巢大鼠骨质疏松的机制之一。     

抗血小板药物对缺血再灌注后一氧化氮合酶的影响

目的:评价急性心肌梗死（acute myocardial infarction, AMI）再灌注后一氧化氮合酶(NOS)的变化及抗血小板药物对其影响。 方法:中华小型猪24只，随机分成对照组、氯吡格雷与阿司匹林合用治疗组、替罗非斑治疗组和假手术组,每组8只。冠状动脉结扎3 h , 松解1 h制备AMI再灌注模型。采用硝酸还原酶法检测AMI前、后和再灌注后血一氧化氮 (NO) 的含量;采用催化L-Arg法和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）的方法观察正常、再流和无再流区心肌组织内NOS及其mRNA的表达。 结果:（1）替罗非斑组可提高血NO水平(P<0.05-0.01)，增加再流区心肌组织中cNOS活性及其mRNA表达，减少再流区心肌组织中iNOS活性及其mRNA表达(均P<0.05-0.01)。而氯吡格雷与阿司匹林合用不能提高血NO水平，增加再流区心肌组织中cNOS活性及其mRNA表达，仅能减少再流区心肌组织中iNOS活性及其mRNA表达。 结论:替罗非斑可能通过保护内皮细胞起到了减少无再流的作用，而氯吡格雷与阿司匹林合用并不能保护内皮功能，仅能减轻再灌注后的炎性反应。     

慢性低O2高CO2肺动脉高压大鼠血浆NO和肺动脉NOS及其基因表达的变化

目的：探讨一氧化氮体系在慢性低O₂高CO₂肺动脉高压形成中的作用。方法：雄性Sprague-Dawley大鼠分为正常对照组和4周低O₂高CO₂肺动脉高压组。测定血浆NO含量,免疫组化法检测肺细小动脉cNOS和iNOS活性,原位杂交法检测其cNOS mRNA和iNOS mRNA的表达。结果：肺动脉高压组血浆NO含量、肺细小动脉cNOS活性和cNOS mRNA表达显著低于对照组（均P<0.01）,而iNOS活性和iNOS mRNA表达明显高于对照组（均P<0.01）。结论：低O₂高CO₂时肺动脉NOS活性和NOS mRNA表达的改变引起的NO变化参与了肺动脉高压的形成。     

高原低氧对大鼠下丘脑谷氨酸、天门冬氨酸和NOS的影响

目的:观察高原低氧大鼠下丘脑谷氨酸(Glu)、天门冬氨酸(Asp)和一氧化氮合酶(NOS)的变化。方法:应用氨基酸测定和NADPH-d组化法,检测高原低氧模型大鼠下丘脑Glu、Asp含量和NADPH-d阳性神经元的数量。结果:高原低氧大鼠下丘脑Glu、Asp含量明显增多,室旁核、视上核可见密集深染的NADPH-d阳性神经元;用NMDA受体拮抗剂氯氨酮(Ketamine)和AP-V对高原低氧大鼠进行预处理后置于低压氧舱,观察到大鼠下丘脑室旁核、视上核NADPH-d阳性神经元数明显少于相应时间的高原低氧组(P＜0.01)。结论:NMDA受体可能参与了高原低氧引起的下丘脑NOS的表达。     

Myenteric denervation in gastric carcinogenesis: differential modulation of nitric oxide and annexin-A1

This study evaluated the properties of endogenous nitric oxide synthases (NOS) and annexin-A1 (ANXA1) and determined how they can be exploited in the N-methyl-N-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG)-induced gastric carcinogenesis and myenteric denervation model. Male Wistar rats were treated with MNNG and/or aminoguanidine (AG) for 20 weeks. In another set of experiments, rats with nondenervated and denervated stomachs were treated with MNNG or water for 28 weeks. Fragments of the pyloric region were processed for histopathology, NOS activity, and immunohistochemistry to explore the activity and expression of constitutive (cNOS) and inducible (iNOS) NO synthase and their relationship with annexin-A1 (ANXA1) expression. NO inhibition by AG increased the percentage of animals with adenocarcinomas (~29%) compared with the untreated MNNG group (~4%). Myenteric denervation did not alter NOS activity. cNOS activity was significantly greater in nondernervated and denervated stomachs with or without lesions (P<0.001) than iNOS activity (P<0.01), as confirmed by immunohistochemistry. Further, cNOS activity in normal stomachs and outside the lesion area was considerably higher than inside it (P<0.01). By densitometric analysis of nondenervated and denervated stomachs, ANXA1 expression was modulated in epithelial and inflammatory cells (mast cells and neutrophils), wherein significant alterations were induced by lesion development and myenteric denervation. In conclusion, NO protects against the development of gastric adenocarcinomas. The pattern of ANXA1 expression was not associated with NOS activity or expression, suggesting that NO and ANXA1 act in gastric tumors in disparate pathways.     

慢性乙型肝炎患者肝细胞凋亡的研究

目的 探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者肝细胞凋亡与肝组织诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、肝脏病理及血清转氮酶水平之间的相关关系.方法 取37例CHB患者和10例正常对照,采用dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测肝组织中的细胞凋亡情况,免疫组化法检测肝组织iNOS的表达,并常规测定患者肝组织炎症分级和纤维化分期、血清丙氨酸转氨酶(ALT)、HBV DNA水平.结果 所有CHB患者的肝组织中均见到不同程度的TUNEL染色阳性.正常对照肝组织中未见到TUNEL阳性肝细胞.在CHB肝组织中,凋亡指数(A1)与炎症分级(r=0.404,P=0.015)及肝组织iNOS水平(r=0.465,P=0.004)明显相关并有统计学意义,而与血清ALT水平、HBV DNA以及组织学纤维化分期无明显关系.结论 慢性乙型肝炎患者体内氧化应激水平可能是肝细胞凋亡的诱导因素之一,细胞凋亡参与了CHB的肝细胞损伤过程,但并不影响患者的生物化学指标.     

Constitutively synthesized nitric oxide is a physiological negative regulator of mammalian angiogenesis mediated by basic fibroblast growth factor

We recently reported that the systemically administered nitric oxide synthase (NOS) inhibitor Nw-nitro-L-arginine methyl ester, L-NAME, administered before, during and after the angiogenic treatment stimulated angiogenesis induced by basic fibroblast growth factor, bFGF, in the rat. This suggests that suppression of constitutively expressed NOS, cNOS, plus inducible NOS, iNOS, and thus reduced production of nitric oxide, NO, was the stimulating factor. In those studies, the rat mesenteric-window angiogenesis assay was used. Moreover, the systemic administration of a NO releaser inhibited bFGF-mediated angiogenesis. Using the same experimental system, we have now studied whether the inhibition of cNOS alone in adult animals under physiological conditions, i.e. prior to the administration of the angiogenic stimulation with bFGF, affected the subsequent angiogenic response. cNOS constitute endothelial cell NOS (ecNOS) and neuronal NOS (nNOS). L-NAME or its inactive enantiomer Nw-nitro-D-arginine methyl ester, D-NAME, were given continuously in the drinking water (1.0 g/L) during 14 days prior to the start of the treatment with bFGF. The treatment with L-NAME significantly enhanced the subsequent angiogenic response. NO synthesized under physiological conditions by ecNOS in endothelial cells and platelets or nNOS in platelets may thus act as a first constitutional angiostatic factor in bFGF-mediated mammalian angiogenesis.     

氨基胍等对严重烧伤大鼠一氧化氮表达及烧伤休克的影响

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂与严重烧伤大鼠体内NO产量、NOS表达以及平均动脉压(MAP)变化的关系。方法:复制大鼠重症烧伤模型,检测应用非选择性NOS抑制剂L-NAME和选择性诱生型NOS(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)后大鼠血液中NO代谢产物(NO₂^-／NO₃^-)以及肺和十二指肠组织中神经型NOS(nNOS)mRNA的表达水平,同时测定各组大鼠的MAP。结果:烧伤后大鼠血液中NO₂^-／NO₃^-含量显著增高,L-NAME和AG都能抑制NO₂^-／NO₃^-的升高,P<0.01;烧伤后nNOS的mRNA表达在肺和十二指肠中均有不同程度升高,AG和L-NAME使nNOS表达增加,L-NAME作用更为显著,P<0.01;烧伤后大鼠MAP略有上升,然后进行性下降,L-NAME组大鼠MAP显著升高,但于3h后急剧下降,AG组大鼠MAP下降速度明显低于对照组。结论:结构型NOS(cNOS)与iNOS在烧伤休克病理生理过程中的作用明显不同,iNOS活性过度增高与烧伤休克发病关系密切。