肝X受体激动剂对 RAW264.7细胞摄取Ac-LDL能力的影响

目的:研究肝X受体激动剂3β-羟基-5α,6α-环氧胆烷酸甲酯(MHEC)和T-0901317对小鼠巨噬细胞株RAW264.7细胞摄取乙酰化低密度脂蛋白(Ac-LDL)能力的影响。方法:以5×10~5/孔培养的RAW264.7细胞为巨噬细胞模型,实验分为5组:①空白对照组;②MHEC组;③MHEC 9-顺式视黄酸(9-cRA)组;④T-0901317组;⑤T-0901317 9-cRA组。药物终浓度均为10μmol·L~(-1),作用24h,用Dil荧光标记的Ac-LDL(Dil-Ac-LDL,10 mg·L~(-1))孵育RAW 264.7细胞4h,应用流式细胞仪检测RAW 264.7细胞的荧光强度。结果:MHEC和T-0901317均可抑制RAW264.7细胞对Ac-LDL的摄取。维甲酸X受体(RXR)激动剂9-cRA与T-0901317联合作用时,RAW 264.7细胞对Ac-LDL的摄取受到更明显的抑制。结论:肝X受体激动剂MHEC和T-0901317均可抑制巨噬细胞对Ac-LDL的摄取。     

LXR激动剂3β-羟基-5α、6α仪环氧胆酸甲酯对血管内皮细胞ABCA1、LXRα表达的影响

目的初步研究LXRα激动剂3β-羟基-5α、6α环氧胆酸甲酯(Methyl 3β—hydroxy-5α、6α-epoxycholanate MHEC）对体外培养的人ECV-304血管内皮细胞ABCA1mRNA、LXRαmRNA表达的影响，探寻血管内皮细胞中LXR途径激活的机制及意义，并为国产LXR激动剂MHEC作为临床药物应用的可能性提供实验依据。方法以ECV-304血管内皮细胞株为研究对象，应用RT-PCR方法栓测LXR激动剂MHEC作用前后细胞ABCAlmtLNA、LXRαmRNA表达的变化，应用免疫组化S-P法检测MHEC对ECV-304细胞ABCA1蛋白表达的影响。结果MHEC能够显著上调血管内皮细胞中ABCA1、LXRα基因的表达，并呈时间和剂量依赖性。实验证实血管内皮细胞中存在LXRα基因的自身激活机制。结论MHEC是一种强力有效的LXR激动剂，能以剂量和时间依赖的方式上调血管内皮细胞中ABCA1和LXRα基因的表达。     

X射线照射对RAW264·7细胞TNF-α和NF-κB表达的影响

目的探讨X射线照射诱发小鼠巨噬细胞分泌TNF-α和NF-κB的规律。方法以8Gy X射线单次照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,并于照后不同时间收集细胞培养上清液,采用ELISA法检测RAW264.7细胞TNF-α分泌水平;以8Gy X射线单次照射小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,并于照后不同时间收集细胞并进行裂解,采用Western blot实验检测NF-кB（p65）的表达。结果 X射线照射能使小鼠巨噬细胞分泌TNF-α增加,在照射后34h达到一次分泌峰值;细胞核中NF-κB（p65）分布增多,并且随着时间的延长其核移位明显增多,照射后4h达到一次最高值。结论 X射线照射能诱发小鼠巨噬细胞TNF-α和NF-κB表达增强。     

PPARγ激动剂对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出的影响

目的观察PPARγ激动剂吡格列酮对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出调节蛋白三磷酸腺苷结合核转运蛋白G1(ABCG1)、肝X受体α(LXRα)表达的影响。方法 (1)体外培养RAW 264.7巨噬细胞,用50 mg/L的氧化型低密度脂蛋白胆固醇(ox-LDL)孵育48 h诱导成泡沫细胞,油红O染色并在光镜下鉴定泡沫细胞形态及变化。(2)以不同浓度吡格列酮(0、5、10、20、30μmol/L)作用泡沫细胞24 h后,酶法检测泡沫细胞内胆固醇酯的含量。用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫印迹法测定ABCG1、LXRα的mRNA及蛋白的表达。结果 PPARγ激动剂吡格列酮可显著减少泡沫细胞内胆固醇酯含量,并呈浓度依赖性增加RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCG1、LXRα的mRNA和蛋白的表达。结论 PPARγ激动剂吡格列酮减少泡沫细胞内胆固醇酯的含量可能是通过上ABCG1、LXRα的mRNA及蛋白表达来实现的。     

IL-6在巨噬细胞向M2型极化过程中的诱导作用

目的 将小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞和骨髓瘤细胞系KM3细胞共培养,探讨IL-6在巨噬细胞向M2型极化的过程的作用.方法 取对数生长期细胞,分为3组:A组(KM3细胞组),B组(RAW264.7细胞组),C组(RAW264.7细胞+KM3细胞组).分别予以ACTA(IL-6特异性抑制剂激活素A)或rIL-6(重组人IL-6)处理后,检测肿瘤相关M2型巨噬细胞表达标志F4/80+ CD206+的比例.RT-PCR和Westernblot方法检测各组细胞因子CCL22、IL-10、IL-12、TNF-αmRNA和蛋白表达量.ELISA法检测各组细胞培养上清中IL-6的含量.结果 RAW264.7和KM3细胞共培养24 h后,与对照组相比,M2 型巨噬细胞比例显著增加(P<0.05);予以ACTA处理后M2型巨噬细胞表达明显下降(P<0.05);而予以rIL-6处理后M2型巨噬细胞表达明显上调(P<0.05).与B组(RAW264.7细胞组)相比,C组(RAW264.7细胞+KM3细胞)M2型巨噬细胞相关细胞因子CCL22,IL-10的mRNA和蛋白表达水平明显上调(P<0.05),而M1型巨噬细胞相关因子IL-12,TNF-α的mRNA和蛋白表达水平明显下调(P<0.05).与A组、B组相比,C组细胞上清液中IL-6含量在24 h、48 h、72 h时间点均明显上调(P<0.05).通过浓度梯度改变RAW264.7细胞或KM3细胞的数量,发现RAW264.7细胞数量的改变显著影响了IL-6的表达水平.结论 将RAW264.7细胞和KM3细胞共培养后,后者能诱导RAW264.7细胞向肿瘤相关M2型巨噬细胞转化, IL-6在上述转化过程中发挥重要作用.     

比卡鲁胺对乳腺癌细胞周期、巨噬细胞极化及p38/p-STAT1水平的影响

目的 探究比卡鲁胺对乳腺癌细胞凋亡周期、巨噬细胞极化及p38/p-STAT1水平的影响。方法 CCK-8检测不同浓度(25、50、100 μmol/L)比卡鲁胺对乳腺癌细胞和巨噬细胞增殖能力的影响。将细胞随机分为RAW264.7细胞组、RAW264.7细胞+比卡鲁胺100 μmol/L组、MCF-7细胞组、RAW264.7细胞+MCF-1细胞组、RAW264.7细胞+MCF-1细胞+比卡鲁胺100 μmol/L组。流式细胞仪检测极化指标CD86和CD206表达;ELISA法检测细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平;Transwell检测细胞侵袭能力;流式细胞仪检测细胞周期;蛋白质印迹检测细胞中p-p38、p21、p-STAT蛋白表达。结果 卡鲁胺可抑制乳腺癌MCF-7细胞和巨噬细胞RAW264.7细胞增殖能力,且呈剂量相关性(P<0.05)。与RAW264.7细胞组相比,RAW264.7细胞+比卡鲁胺100 μmol/L组CD86阳性表达、IL-6和TNF-α水平显著升高,CD206阳性表达和IL-10水平显著降低...     

蛇六谷葡苷露聚糖对小鼠巨噬RAW264.7细胞免疫调节作用及机制研究

目的探讨蛇六谷葡苷露聚糖(KGM)对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用及机制。方法采用MTT法检测KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞存活率的影响,观察巨噬细胞形态的变化;采用吞噬中性红和流式细胞仪测FITC-dextran的方法检测KGM处理后小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性;采用Griess法测定NO,ELISA法检测细胞培养液中IL-6,IL-1β和TNF-α等细胞因子的含量;采用qRT-PCR法检测小鼠巨噬细胞RAW264.7相关基因iNOS,IL-6,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6,TRAM和NF-κB等的表达。结果 KGM在50～400 mg·L~(-1)对小鼠巨噬细胞RAW264.7没有细胞毒性。KGM处理24 h后,RAW264.7细胞体积增大,胞内颗粒小泡增多,呈不规则多边形,部分细胞伸出伪足,表现为典型的激活态;中性红吞噬实验和流式测定FITC-dextran实验结果表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能显著提升小鼠巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)分别使细胞吞噬活性提高101.4%和404.3%。Griess法检测表明,KGM能显著增加小鼠巨噬细胞RAW264.7合成和释放NO,其中KGM100 mg·L~(-1)处理组细胞NO含量与LPS 5 mg·L~(-1)作用相当,与对照组相比,NO含量提高318.1%。ELISA检测表明,KGM 50～200 mg·L~(-1)能诱导RAW264.7细胞分泌IL-6,TNF-α和IL-1β等细胞因子,与对照组相比,KGM 100 mg·L~(-1)明显使细胞因子分泌量分别增加415.5%,158.6%和458.0%(P<0.01)。qRT-PCR的结果显示,与对照组相比,KGM组IL-6,i NOS,TNF-α,IL-1β,TLR4,My D88,TRAF-6和NF-κB的mRNA表达水平升高(P<0.05),表明KGM可以激活小鼠巨噬细胞RAW264.7中的核转录因子NF-κB和TLR4。结论 KGM对小鼠巨噬RAW264.7细胞具有免疫调节活性,能够显著提升小鼠细胞RAW264.7的吞噬能力,促进分泌与释放NO和TNF-α等相关细胞因子,推测可能是通过激活TLR4/My D88/NF-κB信号通路发挥免疫调节作用。     

复方金银花外洗液体外抗炎作用的实验研究

目的对复方金银花外洗液的体外抗炎作用进行研究。方法采用MTT法测定复方金银花外洗液对RAW264.7细胞活性的影响;采用ELISA法观察RAW264.7细胞上清液中TNF-α、IL-6的分泌情况;采用Western-blot法检测TNF-α、IL-6蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示,复方金银花外洗液在0~210μL/mL对RAW264.7细胞活力无显著影响(P>0.05);同时,金银花外洗液能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的增殖活性,且呈剂量依赖性。ELISA检测结果显示,模型组细胞培养上清中TNF-α、IL-6含量显著升高,与正常组相比差异有统计学意义(P<0.01),复方金银花外洗液中、高剂量组培养液上清中TNF-α、IL-6含量低于模型组(P<0.05)。Western blot结果显示,模型组中TNF-α、IL-6的蛋白含量明显高于正常组(P<0.01),不同浓度外洗液处理后,炎症因子TNF-α、IL-6的蛋白表达水平显著降低,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论复方金银花外洗液在细胞水平的主要抗炎作用与抑制炎症因子TNF-α、IL-6的蛋白表达水平有关。     

知母皂苷通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能

目的研究知母皂苷(SAaB)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞功能的影响,以及对NF-κB-诱导型一氧化氮合酶(iNOS)-NO信号通路的调节。方法以LPS刺激RAW264.7细胞构建体外炎症细胞模型,采用Griess法和ELISA法分别检测SAaB干预下,RAW264.7炎症细胞中的NO、iNOS、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-6(IL-6)的含量;Western blot检测RAW264.7细胞NF-κB p65蛋白的表达水平。结果 RAW264.7细胞在LPS(10 mg·L~(-1))诱导下,NO、iNOS、TNF-α、IL-6的含量以及NF-κB p65蛋白表达水平与正常对照组比较均明显增高。SAaB(0.3、3、30 mg·L~(-1))可明显降低RAW264.7炎症细胞中NO、iNOS、TNF-α和IL-6的含量(P<0.01),且明显下调NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.01)。结论 SAaB可通过调节NF-κB-iNOS-NO信号通路,抑制LPS诱导的RAW264.7细胞功能。     

香青兰总黄酮对RAW264.7巨噬细胞泡沫化及炎症反应的调控作用北大核心CSCD

目的研究香青兰总黄酮(total flavonoids of Dracocephalum moldavica L.,TFDM)对氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)泡沫化及炎症的影响,进一步阐明TFDM抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的作用机制。方法体外培养RAW264.7巨噬细胞,采用ox-LDL刺激诱导使其成为泡沫细胞,TFDM(25、50、100 mg·L^(-1))及辛伐他汀(10μmol·L^(-1))进行干预,油红O染色法观察胞内脂滴的聚集情况,CCK-8法检测细胞活力,活性氧试剂盒测定ROS的生成,实时荧光定量PCR测定细胞中NF-κB、NLRP3、caspase-1、IL-18和IL-1βmRNA的表达,免疫蛋白印迹法检测巨噬细胞中IκBα、NF-κB p65、NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1、IL-1β以及IL-18蛋白的表达,ELISA法检测TNF-α和IL-10的表达。结果TFDM可以减少泡沫巨噬细胞的形成,降低炎症因子IL-1β、IL-18和TNF-α的表达,增加抑炎因子IL-10的表达;并且下调NF-κB p65、NLRP3、pro-caspase-1、caspase-1蛋白的表达,上调IκBα的蛋白表达。结论TFDM能够减轻巨噬细胞的泡沫化,抑制炎症因子的表达,从而可能延缓动脉粥样硬化的发展进程。其作用机制可能是通过抑制NF-κB途径,减少ox-LDL诱导的RAW264.7细胞中炎症介质的产生。     

海菖蒲黄酮FEA对LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应的改善作用研究

目的 研究海菖蒲黄酮FEA(Enhalus acoroides in flavonoids, FEA ) 对LPS刺激RAW264.7细胞引起的炎症反应的改善作用。方法 用浓度为1 μg/mL的LPS刺激RAW264.7细胞6个小时后,用含有不同浓度的海菖蒲黄酮FEA作用RAW264.7细胞20 h,采用ELISA方法测定RAW264.7细胞分泌的NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,采用western-blot方法检测NF-κB信号通路中IκBα、P-IκBα、p65、P-p65的蛋白表达含量。结果 海菖蒲黄酮FEA可以抑制由LPS刺激RAW264.7细胞引起的NO、TNF-α、IL-1β和IL-6细胞因子的分泌,减少磷酸化蛋白IκBα和p65的表达量。结论 海菖蒲黄酮FEA可以减少细胞炎症因子的产生和抑制NF-?B信号通路的活化来改善炎症作用。     

梓醇对AGEs刺激巨噬细胞介导肾系膜细胞损伤的影响

目的探讨梓醇对晚期糖基化终末产物(AGEs)刺激巨噬细胞(RAW264.7)介导肾系膜细胞(MMCs)损伤的影响。方法将MMCs接种于Transwell小室,RAW264.7接种于下层孔板共培养,设置空白对照组、模型组、梓醇组(0.1、1.0、10.0μmol·L-1),设置氨基胍组(10.0μmol·L-1)作为阳性对照。各组加入药物孵育1 h后,用AGEs(100 mg·L-1)刺激RAW264.7,继续孵育23 h。采用MTT法检测MMCs增殖;免疫荧光法检测MMCs中COL-Ⅳ的表达;Western blot法检测MMCs中FN、COL-Ⅳ、TGF-β的表达;ELISA法检测RAW264.7上清液中IL-6、IL-12、TNF-α水平。结果梓醇可抑制AGEs刺激巨噬细胞介导系膜细胞的增殖(P<0.05,P<0.01),下调系膜细胞FN、COL-Ⅳ、TGF-β蛋白表达(P<0.05,P<0.01),降低巨噬细胞上清中IL-6、IL-12、TNF-α水平(P<0.05,P<0.01)。结论梓醇对AGEs刺激巨噬细胞介导系膜细胞损伤有明显的的保护作用,下调系膜细胞FN、COL-Ⅳ、TGF-β蛋白表达,抑制巨噬细胞炎症因子分泌,减轻炎症反应,从而缓解糖尿病肾病炎性损伤。     

复方甘草酸苷制剂对脂多糖诱导小鼠RAW264.7细胞分泌炎症因子的调节作用

目的:研究复方甘草酸苷片剂和注射剂对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7分泌炎症因子的调节作用。方法:采用脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RWA264.7,建立体外炎症模型。取复方甘草酸苷片剂和注射剂,制备供试药液。分别通过,MTT、Griess和双抗体夹心ABC-ELISA等实验,测定在不同浓度的供试药液作用下RAW264.7细胞活力以及经脂多糖诱导后的RAW264.7细胞的一氧化氮、肿瘤坏死因子TNF-α及白介素IL-1β、-6和-10等炎症因子分泌量的变化。结果:复方甘草酸苷的2种制剂药液在0～300μmol.L-1浓度范围内对RAW264.7细胞活力无影响。复方甘草酸苷注射剂药液在75、150和300μmol.L-1浓度下对经脂多糖处理的RAW264.7细胞的一氧化氮分泌抑制率分别为13.8%、40.4%和53.8%,并致细胞的TNF-α分泌量降低29.8%、41.5%和52.1%,IL-1β分泌量降低39.5%、55.6%和69.6%,IL-6分泌量降低18.3%、29.5%和39.1%,但IL-10分泌量却提高了8.2%、23.8%和30.8%;而复方甘草酸苷片药液在相同浓度下对同样细胞的一氧化氮分泌抑制率分别为9.8%、27.1%和37.8%,致细胞的TNF-α分泌量降低16.6%、37.0%和48.4%,IL-1β分泌量降低28.1%、47.9%和57.9%,IL-6分泌量降低13.5%、19.9%和28.2%,IL-10分泌量提高了3.9%、14.8%和23.4%。复方甘草酸苷的2种制剂对细胞分泌炎症因子的调节作用与阳性对照药地塞米松相似,其中注射剂的作用强于片剂。结论:复方甘草酸苷可剂量依赖性地显著抑制脂多糖诱导小鼠RAW 264.7细胞产生促炎因子一氧化氮、TNF-α及IL-1β和-6并促进抗炎因子IL-10的表达,这可能为其抗炎作用机制。     

铁皮石斛多糖对RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响

目的研究铁皮石斛多糖(polysaccharides from Den-drobium officinale,DOP)对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞分泌TNF-α的影响并探讨其作用机制。方法 MTT法检测细胞活性;ELISA法检测TNF-α的分泌水平;反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TNF-αmRNA表达量;Western blot技术检测胞质I-κBα蛋白的表达量。结果 DOP在20～160mg·L-1范围内明显促进RAW264.7细胞增殖,无细胞毒性;与空白对照组比较,DOP剂量依赖性地促进TNF-α的分泌;上调TNF-αmRNA表达;Western blot结果显示DOP能明显降低胞质内I-κBα蛋白水平。结论 DOP能增强RAW264.7细胞分泌TNF-α,其作用机制可能与降低胞质内I-κBα蛋白水平,活化核转录因子NF-κB,诱导TNF-αmRNA的表达有关。     

PI3K/PTEN/Akt/mTOR通路在浒苔多糖粗提物调节小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能中的作用

目的:验证浒苔多糖粗提物上调小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫功能,并初步探讨其是否通过PI3K/PTEN/Akt/m TOR通路实现。方法:以不同浓度浒苔多糖粗提物干预RAW264.7细胞,干预不同时间后四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法测定巨噬细胞RAW264.7增殖率;ELISA法测定白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR检测m TORm RNA的表达水平;以100nmol/L雷帕霉素、500μg/ml浒苔多糖粗提物、500μg/m L浒苔多糖粗提物+100nmol/L雷帕霉素干预RAW264.7细胞,测定细胞因子IL-6、TNF-α分泌水平。结果:500μg/m L浒苔多糖粗提物干预12h,可获得最佳增殖率53.47%;RAW264.7细胞分泌IL-6的水平随着浒苔多糖粗提物浓度的增大而增加,且在24h达到分泌高峰,TNF-α分泌水平随着时间延长而增加(F=311.63,P0.001),同时随着干预浓度的提高而增加(F=51.80,P0.001);浒苔多糖粗提物干预12、24h后,m TOR表达水平增高(F=4.256,P=0.029;F=20.606,P0.001);较之500μg/m L浒苔多糖粗提物组,500μg/m L浒苔粗提物+100nmol/L雷帕霉素组IL-6水平下降44.58%,TNF-α水平下降65.96%(P均0.001)。结论:浒苔多糖粗提物促进巨噬细胞RAW264.7增殖,调节其细胞因子释放,可能与PI3K/PTEN/Akt/m TOR通路有关。     

中介素通过激活AMPK信号通路对脂多糖诱导巨噬细胞极化的影响

目的探讨中介素(intermedin,IMD)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW 264.7极化的影响及其作用机制。方法RAW 264.7细胞随机分为对照组、LPS组、LPS+IMD组、LPS+IMD+CC(AMPK抑制剂Compound C)组。Real time-PCR法检测TNF-α、CD86、iNOS、Arg^-1、CD206 mRNA表达,Western blot法检测p-AMPK、AMPK、TNF-α、IL-6和IL^-10蛋白表达,流式细胞术检测巨噬细胞亚型,ELISA法检测培养基上清IL-6和TNF-α浓度。结果与对照组及LPS组比较,IMD处理可增加AMPK磷酸化水平,增加p-AMPK/AMPK比值;与对照组相比,LPS诱导可导致巨噬细胞发生M1极化,M1型标志分子CD86、TNF-α及iNOS mRNA表达升高,M2型标志分子CD206、Arg^-1 mRNA表达降低,上调促炎因子TNF-α、IL-6表达,降低抑炎因子IL^-10表达,使M1型细胞数量增加,细胞上清中TNF-α、IL-6分泌增加;而IMD处理可抑制LPS诱导的M1极化,AMPK抑制剂Compound C组处理可在一定程度上拮抗这一作用。结论IMD通过激活AMPK信号通路抑制LPS诱导的巨噬细胞M1型极化。     

丹参酮II-A通过调控TLR4/IκBα/NFκB信号通路抑制LPS诱导的细胞炎症

目的建立脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)炎症模型,探究丹参酮II-A(Tan IIA)的抗炎活性及其机制。方法CCK-8法测定Tan IIA对细胞活力的影响;迁移小室测定Tan IIA对LPS诱导细胞迁移能力作用;ELISA法测定细胞上清液中小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factoralpha,TNF-α)、白介素6(interleukin 6,IL-6)、IL^-1β、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein,MCP-1)的含量;Western blot法检测基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMP-2)、MMP-9、Toll样受体-4(TLR4)、IκB-α、p-IκB-α、NFκB和p-NFκB蛋白的表达。结果Tan IIA对LPS诱导的RAW264.7细胞培养液中炎症因子TNF-α、IL-6、IL^-1β和MCP-1的分泌有明显的抑制作用;明显下调MMP-2、MMP-9、TLR4、p-IκB-α和p-NFκB的蛋白的表达,抑制IκB-α磷酸化和NFκB的入核和活化。结论Tan IIA可通过抑制MMP-2和MMP-9的表达以及TLR4/κB-α/NF-κB信号通路,调控TNF-α、IL-6、IL^-1β等炎症因子的释放而发挥抗炎活性。     

脂联素对巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及机制

目的探讨脂联素对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1及胆固醇含量的影响及其可能的机制。方法体外培养RAW264.7细胞,加入20 mg/L氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)共同孵育48 h,将其诱导成泡沫细胞,加入不同浓度(0、1、5、10μg/mL)的脂联素干预24 h,RT-PCR测定ABCA1 mRNA的表达,高效液相色谱测定细胞内胆固醇含量。观察脂联素对泡沫细胞中ABCA1表达的影响。结果脂联素显著增加RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1 mRNA的表达(P<0.05),并增加细胞内胆固醇含量,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论脂联素可以增加巨噬源性泡沫细胞ABCA1转录水平,促进胆固醇流出,延缓AS的发生发展。     

染料木素通过TIPE 2负性调控Akt活性促进脂多糖活化的巨噬细胞凋亡

目的探究染料木素(genistein,GEN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)活化的RAW264.7细胞凋亡的影响及其可能的药理学作用机制。方法GEN预孵育RAW264.7细胞或慢病毒介导的肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(tumor necrosis factor-α-induced protein 8-like 2,TIPE 2)过表达细胞2 h,再与LPS共孵育24 h,采用CCK 8试剂盒检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI试剂盒检测细胞凋亡水平,qRT-PCR检测TNF-α、IL-6、caspase-8、caspase-3和TIPE 2 mRNA,Western blot检测iNOS、COX-2、caspase-8、caspase-3、TIPE 2、Akt和p-Akt蛋白表达。结果LPS促进RAW264.7细胞TNF-α、IL-6、iNOS、COX-2合成;GEN抑制LPS活化的RAW264.7细胞活力,凋亡细胞增多,并上调caspase-8、caspase-3、TIPE 2 mRNA及蛋白表达;TIPE 2过表达上调活化RAW264.7细胞caspase-8、caspase-3 mRNA及蛋白表达,减少Akt磷酸化,且与GEN具有协同作用。结论GEN可能通过上调TIPE 2抑制Akt活性,激活外源性凋亡途径,促进LPS活化的RAW264.7细胞凋亡。     

人参总皂苷在巨噬细胞RAW264.7中降低脂多糖诱导的炎症和氧化应激

目的:通过脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7建立炎症和氧化应激模型,探讨人参总皂苷的抗炎和抗氧化效果以及对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7自噬水平的影响。方法:培养RAW264.7细胞,给予脂多糖刺激并加入不同浓度人参总皂苷,使用硝酸还原酶法检测细胞内一氧化氮水平;ELISA法检测小鼠肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的分泌;DCFH-DA荧光探针法检测人参总皂苷处理后活性氧的变化;超氧化物阴离子荧光探针(dihydroethidium, DHE)检测细胞内超氧化物阴离子水平;吖啶橙染色法检测自噬体的形成;Western Blot法检测COX-2、NF-кB、Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM、Beclin1、ATG7和LC3的蛋白表达。结果:与脂多糖模型组相比,随着TGS的浓度增加,细胞一氧化氮水平、TNF-α的分泌降低,细胞内活性氧和超氧阴离子的含量降低,巨噬细胞RAW264.7酸性自噬体的数量增加;Nrf2、HO-1、GCLC、GCLM、Beclin1、ATG7及LC3的蛋白表达提高,COX-2、NF-кB的蛋白表达降低。结论:在...