创伤性脑损伤激活miR-124-3p/Notch通路促进大鼠神经干细胞增殖和分化

目的观察创伤性脑损伤(TBI)大鼠伤侧海马区微小RNA-124-3p(miR-124-3p)的表达变化,探讨miR-124-3p对大鼠TBI后神经再生的影响。方法将健康雄性大鼠按随机数字表法分为假手术组、 TBI组、 miR-124-3p激动剂(miR-124-3p agomir)组与miR-124-3p抑制剂(miR-124-3p antagomir)组,后3组大鼠应用控制性皮层撞击(CCI)法建立TBI模型。创伤后, miR-124-3p agomir组与miR-124-3p antagomir组通过由创伤对侧侧脑室分别注射miR-124-3p agomir或miR-124-3p antagomir各1 nmoL,假手术组和TBI组注入等量溶剂。造模后12 h、 1 d、 3 d、 7 d,实时定量PCR检测大鼠伤侧海马区组织miR-124-3p的表达, Western blot法检测Delta样分子1(DLL1)的表达水平,免疫荧光组织化学染色检测海马组织5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、神经元核抗原(NeuN)、神经上皮干细胞蛋白(nestin)的表达。生物信息学软件预测并通过荧光素酶报告实验验证miR-124-3p与DLL1之间的靶向结合作用。结果与假手术组相比, TBI组大鼠海马区miR-124-3p和DLL1的表达均显著升高;与TBI组比较, miR-124-3p agomir组miR-124-3p的表达量明显升高、 DLL1表达量明显减少, miR-124-3p antagomir组miR-124-3p表达量明显降低, DLL1表达量则明显升高。创伤后7 d, TBI大鼠海马组织BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量明显多于假手术组, miR-124-3p agomir处理增加BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量, miR-124-3p antagomir处理则减少BrdU~+NeuN~+细胞与BrdU~+nestin~+细胞数量。生物信息学分析证实DLL1为miR-124-3p的靶基因。结论创伤区miR-124-3p的高表达可靶向抑制DLL1蛋白表达,促进神经干细胞增殖和分化。     

miR-150-5p抑制TLR-5/NF-κB p65信号通路对大脑中动脉阻塞模型大鼠的神经保护效应

文题释义： 缺血性脑梗死：临床常见的一种中枢神经系统疾病,是由于脑组织局部供血动脉血流的减少或停止,造成脑组织缺血、缺氧导致脑组织坏死,具有较高的死亡率和致残率,严重威胁人类的健康和生存质量。 微小RNA：是一类长度为18-25 nt的非编码单链小分子RNA,广泛存在于从病毒到人类的各种生物中,能够与mRNA互补结合调控蛋白编码基因的表达,与细胞的生物学行为密切相关。 背景：缺血性脑梗死的病变组织中发生炎症反应,且miR-150-5p表达明显下降,miR-150-5p是否经Toll样受体5/核因子κB途径抑制炎症因子释放并减轻缺血性脑梗死组织损伤尚不清楚。 目的：探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在大鼠缺血性脑梗死中的作用及初步机制。 方法：①构建大脑中动脉阻塞模型大鼠,建模后将大鼠分为5组：对照组、miR-150-5p agomir 组、agomir control、miR-150-5p antagomir组和antagomir control组;②对照组大鼠给予生理盐水脑室注射,后4组大鼠脑室分别给予miR150-5p agomir(miR150-5p激动剂)、agomir阴性对照、miR150-5p antagomir (miR150-5p抑制剂)和antagomir阴性对照;③干预7 d后进行神经功能缺损程度(mNNS)评分,磁共振检测法测量脑梗死体积,苏木精-伊红染色观察脑组织病理学变化,qRT-qPCR法、ELISA法和免疫印迹法检测分别检测脑组织中miR-150-5p、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、Toll样受体5和核因子κB p65表达情况,通过检索生物信息学网站Targetscan预测miR-150-5p与Toll样受体5的结合位点,荧光素酶试验验证二者的靶向关系。 结果与结论：①与对照组比较,miR-150-5p agomir组大鼠神经功能损伤评分、脑组织中白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平及Toll样受体5、核因子κB p65蛋白表达明显降低(P < 0.05);miR-150-5p antagomir组生理评分及生化指标均明显升高(P < 0.05);②苏木精-伊红染色显示,对照组神经细胞排列紊乱、轮廓模糊不清,神经细胞明显变性坏死;上述病理变化在miR-150-5p agomir组明显减轻,而在miR-150-5p antagomir组中明显加重。而agomir control 组和antagomir control组与对照组各指标比较差异均无显著差异(P > 0.05);③TargerScan网站预测结果和荧光素酶报告基因分析显示,miR-150-5p与Toll样受体5存在靶向结合位点;④结果证实,miR-150-5p可抑制缺血所致脑损伤过程中Toll样受体5/核因子κB p65炎性信号通路,降低炎性反应,从而减轻神经功能损害,发挥保护作用。 ORCID: 0000-0003-4635-0842(谢媛媛) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

miR-98-5p通过靶向调控TRAF6表达促进肺泡巨噬细胞M2表型分化以保护脓毒症引起的急性肺损伤

目的在脓毒症急性肺损伤中探讨miR-98-5p对肺泡巨噬细胞表型分化的影响并初步探究其相关分子机制。方法利用盲肠结扎穿孔(cecal ligation and puncture,CLP)术建立大鼠急性肺损伤(ALI)模型,并将40只SD大鼠分为4组(n=10):假手术(Sham)组,脓毒症组(以下简称CLP),CLP~+agomir NC组(CLP~+agomir NC),CLP~+miR-98-5p agomir组(CLP~+miR-98-5p agomir)。在CLP术后24 h处死各组大鼠并收集肺泡灌洗液(BALF)及双肺组织,利用HE染色、ELISA及检测肺组织干湿比重(W/T)来探究在大鼠体内过表达miR-98-5p对脓毒症介导的ALI的肺组织结构、肺泡灌洗液(BALF)中炎性因子的表达及肺部含水量的影响;分离大鼠原代肺泡巨噬细胞(AMs),细胞流式检测过表达miR-98-5p对ALI大鼠AMs的M1、M2表型分化影响;免疫磁珠分选F4/80~+AMs,利用RT-PCR检测M1、M2表型特征分子标记基因iNOS、CD206、Arg1的表达水平;生物信息学筛选TRAF6作为miR-98-5p的潜在靶基因,利用双荧光素酶基因报告实验进行检测;利用RT-PCR检测过表达miR-98-5p后的ALI大鼠AMs中miR-98-5p与TRAF6 mRNA的表达;应用细胞免疫化学法与Western blot实验在F4/80~+AMs中检测TRAF6与TLR4/MyD88/NF-κB信号通路中TLR4、MyD88、p65、p-p65蛋白的表达。结果 HE染色、ELISA及肺组织干湿比重(W/T)的检测结果表明,在脓毒症大鼠ALI模型中,过表达miR-98-5p可明显缓解ALI大鼠肺部病理学改变,降低BALF中促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α的分泌水平,增加抗炎因子IL-10的分泌,并减少ALI肺部含水量;细胞流式结果显示过表达miR-98-5p可诱导ALI大鼠AMs向M2表型分化,抑制其向M1表型分化;在F4/80~+AMs中,RT-PCR实验结果显示,过表达miR-98-5p可抑制M1表型特征分子iNOS mRNA表达水平,而促进M2型特征分子CD206、Arg1表达水平;双荧光素酶基因报告实验结果显示,在大鼠AMs中miR-98-5p可靶向调控ARTF6 mRNA的表达。细胞免疫化学法与Western blot实验结果显示,过表达miR-98-5p明显抑制ALI大鼠的F4/80~+AMs中TRAF6及TLR4、MyD88、p-p65蛋白表达表达。结论 miR-98-5p可通过TLR4/MyD88/NF-κB信号通路负向调控TRAF6的表达来诱导脓毒症急性肺损伤大鼠的肺泡巨噬细胞向M2型分化,从而减轻肺部的炎症反应并保护肺泡组织的正常结构及功能。     

miR-140-5p靶向HMGB1/IκB-α轴对糖尿病大鼠视网膜病变的影响

目的 探讨微小RNA(miRNA)miR-140-5p通过靶向调节高迁移率族蛋白1(HMGB1)/核因子κB抑制蛋白α(IκB-α)轴对糖尿病大鼠视网膜病变的影响。方法 将糖尿病大鼠随机分为模型组、miR-140-5p激动剂(miR-140-5p agomir)组、激动剂阴性对照(agomir-NC)组，10只/组，另取10只正常大鼠作为对照组。分离血清及视网膜组织，RT-qPCR检测血清和视网膜组织miR-140-5p、HMGB1 mRNA表达水平；HE染色检测病理学变化；ELISA检测血清单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)含量；TUNEL染色检测视网膜细胞凋亡；双荧光素酶报告基因实验检测miR-140-5p、HMGB1的靶向关系；Western blot检测视网膜组织HMGB1、IκB-α、NF-κB p65蛋白表达。结果 HMGB1为miR-140-5p的靶基因。模型组、agomir-NC组MCP-1、TNF-ɑ、ICAM-1含量、HMGB1、NF-κB p65表达、凋亡细胞及组织损伤较对照组增加，miR-140...     

miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤北大核心CSCD

目的:探究miR-410-3p通过介导HMGB1的表达调控NF-κB信号通路调控缺氧缺血性脑损伤的机制。方法:进行PC12细胞培养并分组:Normal组(正常PC12细胞)、NC组(缺血性处理的PC12细胞,转染阴性对照质粒)、Model组(缺血性处理的PC12细胞)、miR-410-3p mimic组(缺血性处理的PC12细胞,转染miR-410-3p过表达质粒)、HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,转染HMGB1过表达质粒)、miR-410-3p mimic+HMGB1 vector组(缺血性处理的PC12细胞,共染miR-410-3p过表达和HMGB1过表达质粒)。双荧光素酶报告实验验证miR-410-3p和HMGB1靶向关系。Western blot检测各组细胞中HMGB1、NF-κB p65的蛋白表达情况,qRT-PCR检测miR-410-3p表达情况。CCK8和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。ELISA检测各组细胞炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量。结果:miR-410-3p与HMGB1存在靶向关系。与Normal组相比,其余组细胞中miR-410-3p表达显著降低,HMGB1表达显著升高(均P<0.05)。与Normal组对比,其余各组细胞的增殖率明显下降,细胞凋亡率,炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量,HMGB1、NF-κB p65水平均明显升高(均P<0.05)。miR-410-3p可促进细胞增殖,降低细胞凋亡率、炎症因子IL-8、IL-6、TNF-α含量及NF-κB p65水平,且miR-410-3p可通过负向调控HMGB1的表达,从而影响HMGB1/NF-κB通路对缺血性神经元的调控。结论:miR-410-3p过表达后,可通过抑制HMGB1/NF-κB通路表达,从而影响脑缺血性神经元细胞增殖、凋亡以及炎症损伤。     

miR-143靶向TREM1调控免疫因子白介素-6/10对克罗恩病模型肠黏膜HT-29细胞增殖的影响机制北大核心CSCD

目的探讨miR-143靶向TREM1调控免疫因子IL-6、IL-10对克罗恩病模型肠黏膜HT-29细胞增殖的影响及其机制。方法采用LPS刺激HT-29细胞建立克罗恩病(Crohn′s disease,CD)肠黏膜细胞炎症反应模型,将模型细胞分为agomir NC组、antagomir NC组、miR-143 agomir组和miR-143 antagomir组,通过ELISA、Western blot、qRT-PCR实验检测各组细胞炎性因子、细胞活力、细胞凋亡及TREM1表达水平,探究miR-143对模型细胞炎症反应、细胞凋亡的影响及miR-143与TREM1的靶向关系;并通过生物信息学数据库和双荧光素酶基因报告实验对miR-143和TREM1靶向关系进行验证。结果与正常组比较,模型组细胞IL-6表达水平显著升高(P<0.01),而IL-10表达水平显著下降(P<0.01),提示CD细胞模型建立成功;与agomir NC组相比,miR-143 agomir能显著降低促炎因子IL-6水平(P<0.01)、增加抗炎因子IL-10水平(P<0.01),增加模型细胞活力,降低细胞凋亡;同时,miR-143 agomir能显著下调CD模型细胞中TREM 1的蛋白和mRNA表达水平(P<0.01)。双荧光素酶基因报告实验证实miR-143与TREM1的靶向结合作用。结论miR-143可靶向抑制TREM1减少IL-6的分泌和增加IL-10的分泌,并抑制肠黏膜细胞的凋亡,从而缓解CD中肠黏膜的损伤。     

miR-203靶向调节PEG3/NF-κB信号通路对糖尿病肾病大鼠肾纤维化的影响

目的：探究微小RNA-203(miR-203)对父本表达基因3(PEG3)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的靶向调控作用及其对糖尿病肾病（DN）大鼠肾纤维化的影响。方法：建立大鼠DN模型，高糖培养大鼠肾小管上皮细胞（NRK-52E）模拟体外DN模型，qRT-PCR检测miR-203表达水平，Western blot检测PEG3、NF-κB蛋白表达。双荧光素酶报告基因技术检测miR-203与PEG3的靶向关系。构建miR-203模拟物（miR-203 mimic）及阴性对照（mimic NC）,PEG3高表达重组载体（pcDNAPEG3）及阴性对照（pcDNA-NC），分别注射及转染至DN大鼠及DN模型细胞中，设置为：对照组、模型组、miR-203 mimic组、mimic NC组、miR-203 mimic+pcDNA-PEG3组、miR-203 mimic+pcDNA-NC组。检测大鼠24 h尿蛋白、血糖、血清肌酸酐（SCr）和尿素氮（BUN），电镜及Masson染色检测肾组织病变及纤维化变化；ELISA检测细胞中IL-6、IL-1β、Ⅰ型胶原（CollagenⅠ）、TGF-...     

微小RNA-98-5p靶向Kruppel样转录因子9对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

目的 探讨微小RNA（miR)-98-5p靶向Kruppel样转录因子9(KLF9)对大鼠心肌缺血/再灌注（MI/R）损伤的保护作用。 方法 50只大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-98-5p agomir组、agomir-NC组及miR-98-5p agomir+pcDNA-3. 1-KLF9组,每组10只。通过冠状动脉结扎法建立MI/R注模型。HE染色观察心肌组织病理情况;TUNEL检测心肌组织细胞凋亡情况;ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;Real-time PCR检测心肌组织miR-98-5p、KLF9 mRNA表达水平;Western blotting检测心肌组织KLF9、Bax和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-98-5p与KLF9的关系。 结果 与假手术组相比,模型组大鼠心肌细胞排列较乱,出现坏死;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量均升高,心肌组织miR-98-5p表达水平下降,KLF9 mRNA和蛋白及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达均升高（P<0.05）。过表达miR-98-5p后,大鼠心肌细胞排列较为整齐,心肌细胞坏死减少;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均下降（P＜0.05）。双荧光素酶报告实验结果验证KLF9是miR-98-5p的靶基因。过表达KLF9逆转了miR-98-5p agomir对心肌损伤大鼠产生的作用。 结论 MiR-98-5p靶向KLF9改善MI/R大鼠心肌损伤,其机制可能与miR-98-5p调控JAK2/STAT3信号通路抑制心肌细胞凋亡相关。     

侧脑室注射miR-7通过EGFR/STAT3途径抑制大鼠脑出血后脑损伤

目的观察微小RNA-7(miR-7)对大鼠脑出血后脑损伤的影响,并探讨其分子机制。方法选取75只SD大鼠,以Ⅶ型胶原酶注入苍白球构建脑出血模型,随机分为对照组、miR-7激动剂(miR-7 agomir)组、miR-7激动剂对照(agomir control)组、miR-7拮抗剂(miR-7 antagomir)组和miR-7拮抗剂对照(antagomir control)组,每组15只。造模后第2天通过侧脑室分别注射10μL的生理盐水、miR-7 agomir、agomir control、miR-7 antagomir、antagomir control,造模后第7天进行神经功能评分,然后处死动物,取出脑组织,HE染色观察脑组织病理改变,干湿重法测定脑组织含水量,荧光实时定量PCR检测血肿周围脑组织中miR-7、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和表皮生长因子受体(EGFR)表达,Western blot法分析血肿周围脑组织中GFAP、EGFR、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)水平。生物信息学预测miR-7与EGFR的靶向结合情况,构建野生型荧光素酶报告基因载体及相应的突变载体,与miR-7模拟物(mimic)共转染HEK293T细胞,检测荧光素酶活性。结果与对照组相比,miR-7 agomir明显增加血肿周围脑组织miR-7水平,减轻脑组织病理损害,减少神经功能评分和脑组织含水量,并降低血肿周围脑组织GFAP、EGFR表达水平及p-STAT3/STAT3比值;miR-7 antagomir的作用则相反。相应阴性对照物对上述指标无影响。生物信息学分析发现EGFR的3'-非翻译区存在miR-7结合位点,而且miR-7 mimic明显降低野生型EGFR荧光素酶活性,但对突变型无影响。结论 miR-7通过抑制EGFR/STAT3信号通路拮抗星形胶质细胞活化,从而减轻大鼠脑出血后脑损伤。     

miR-129-5p调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的机制研究

目的 研究微小RNA-129-5p(miR-129-5p)靶向调控Wnt5a抑制胆囊癌细胞增殖和转移能力的作用及机制。方法 采用RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD和正常胆管上皮细胞系HIBEpic中miR-129-5p的表达水平。选择miR-129-5p表达较低的胆囊癌细胞进行miR-129-5p mimic转染,分为对照组(NC组)和miR-129-5p过表达组(miR-129-5p mimic组),采用MTT实验检测各组细胞的增殖能力,Transwell实验检测各组细胞的转移能力。Targetscan7.1预测软件及双荧光素酶报道基因试验检测miR-129-5p对Wnt5a基因的靶向调控作用。RT-PCR检测胆囊癌细胞NOZ、SGC-996、GBC-SD及NC组、miR-129-5p mimic组中Wnt5a mRNA的表达水平。胆囊癌细胞分为NC组、miR-129-5p mimic组、miR-129-5p过表达与Wnt5a敲减质粒共转染组(miR-129-5p mimic+sh-Wnt5a组)和miR-129-5p过表达与Wnt5a过表达质粒共转染组(...     

lncRNA NEAT1促进脓毒症诱导肝细胞损伤和炎症反应的机制研究

目的 基于lncRNA NEAT1调控的miR-129-5p/TLR4信号轴探讨脓毒症诱导的肝细胞损伤和炎症反应机制。方法 收集15例脓毒症患者外周血（脓毒症组）和15例健康者外周血（健康组）用于检测基因表达。体外实验使用小鼠正常肝细胞株NCTC1469,并用脂多糖（LPS）建立体外脓毒症模型（LPS组）,将LPS刺激下转染mimic NC、mimic、siNC或siNEAT1质粒载体的细胞分别命名为LPS+mimic NC组、LPS+mimic组、LPS+siNC组或LPS+siNEAT1组,将LPS、siNEAT1、TLR4重组蛋白或LPS、mimic、TLR4重组蛋白联合处理的细胞命名为LPS+siNEAT1+TLR4组或LPS+mimic+TLR4组,而对照组不作处理。分别用qPCR和ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-1β的mRNA和蛋白表达水平。TUNEL实验检测细胞的凋亡率。双荧光素酶报告基因分析法检测lncRNA NEAT1/miR-129-5p和miR-129-5p/TLR4的结合。Western blot检测细胞中TLR4的表达。结果 在体内实验中,与健康组比...     

熊果酸通过抑制TLR4/NF-κB通路以及Caspase-3蛋白的表达对慢阻塞疾病大鼠的影响

目的探究熊果酸(UA)通过Toll样受体//核转录因子κB(TLR4/NF-κB)通路对慢阻塞疾病(COPD大鼠Caspase-3蛋白表达的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、COPD组、COPD+UA组和COPD+EVP4593组。通过烟雾暴露+脂多糖建立COPD模型。比较各组大鼠肺功能、肺组织苏木精-伊红(HE)染色情况。检测和比较各组大鼠血清炎性因子和TLR4、NF-κB p65和Caspase-3蛋白表达水平。结果建模后COPD组大鼠的FEV0.3%/FVC和MMEF均显著低于对照组(P0.01),的COPD+UA组和COPD+EVP4593组FEV0.3%/FVC和MMEF显著高于COPD组(P0.01)。COPD组肺泡结构紊乱,肺泡间隙明显增厚,肺组织浸润大量炎症细胞,间质出血出现充血和出血改变。COPD组和COPD+EVP4593组的肺泡结构较正常,炎症浸润很少。COPD组的血清炎性因子显著升高(P0.01),COPD+UA组和COPD+EVP4593组的TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著低于COPD组(P0.01)。COPD组的TLR4、NF-κB p65和Caspase-3蛋白水平显著升高,COPD+UA组和COPD+EVP4593组的TLR4、NF-κB p65和Caspase-3蛋白水平显著低于COPD组(P0.01)。结论 UA可能通过抑制TLR4/NF-κB通路,减少炎性因子的表达和Caspase-3蛋白的水平,减少COPD大鼠肺损伤,保护肺功能。     

miR-27a-3p通过阻断Wnt3a/β-catenin途径抑制大鼠肺纤维化

目的探讨微小RNA-27a-3p(miR-27a-3p)对博莱霉素A5所致大鼠肺纤维化(PF)的影响及分子机制。方法雄性SD大鼠45只,随机分为对照组、miR-27a-3p激动剂(miR-27a-3p agomir)组和miR-27a-3p拮抗剂(miR-27a-3p antagomir)组,每组15只。经气管内注入博莱霉素A5建立PF模型,给药后次日分别予生理盐水、miR-27a-3p agomir、miR-27a-3p antagomir尾静脉注射,每3 d注射1次,共9次。第28天收集血液,ELISA检测血清1型前胶原蛋白羧基端前肽(P1CP)和3型前胶原蛋白氨基端前肽(P3NP)水平;处死大鼠,取肺组织,HE染色和Masson染色评价PF病变程度,实时荧光定量PCR检测miR-27a-3p、1型胶原蛋白(Col1)、Col3的mRNA水平,Western blot法检测Col1、Col3、Wnt3a、β联蛋白(β-catenin)的蛋白水平。结果miR-27a-3p agomir处理明显增加肺组织miR-27a-3p表达,miR-27a-3p antagomir则降低miR-27a-3p表达,提示miR-27a-3pagomir/antagomir转染效率较高。与对照组相比,miR-27a-3p agomir显著减轻大鼠肺泡炎症和PF程度,而miR-27a-3p antagomir则明显加重大鼠肺泡炎症和PF程度。miR-27a-3p agomir组血清P1CP、P3NP水平降低、下调肺组织Col1、Col3、Wnt3a、β-catenin水平,miR-27a-3p antagomir组则作用相反。结论 miR-27a-3p通过抑制Wnt3a/β-catenin信号通路,下调Col1、Col3表达,发挥抗PF作用。     

miR-155-5p靶向下调SOCS1减轻脂多糖诱导的SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞炎症损伤

目的 探讨微小RNA-155-5p(miR-155-5p)对脂多糖(LPS)诱导SH-SY5Y人神经母细胞瘤细胞神经炎症损伤的影响。方法 采用人SH-SY5Y细胞，设立miR-155-5p过表达及其阴性对照(miR-155-5p mimic组、mimic-NC组)和miR-155-5p低表达及其阴性对照(miR-155-5p inhibitor组、inhibitor-NC组),将LPS处理上述各组转染成功细胞24 h,并设置未转染SH-SY5Y细胞的对照组和LPS处理组(LPS组)。噻唑蓝(MTT)法检测SH-SY5Y细胞活性，流式细胞术检测细胞凋亡率，反转录PCR法检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6和IL-10 mRNA水平和miR-155-5p表达，Western blot法检测细胞裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、磷酸化核因子κB p65/核因子κB p65(p-NF-κB p65/NF-κB p65)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p3...     

miR-296-5p 靶向 PLK1 调控 PI3K/ AKT 通路诱导骨肉瘤细胞中的自噬并抑制上皮-间质转化

目的 探讨 miR-296-5p 靶向 PLK1 对骨肉瘤 (osteosarcoma, OS) 细胞自噬及抑制上皮-间质转化 (EMT) 的作用机制。 方法 qRT-PCR 检测 miR-296-5p 在 OS 细胞中的表达。 采用生物信息学分析预测 miR-296-5p 的靶基因, 验证 miR-296-5p 对靶基因 PLK1 的直接靶向调控; 细胞转染构建 miR-296-5p 过表达 和干扰细胞, CCK-8、 克隆形成、 Transwell 小室、 流式、 蛋白免疫印迹实验检测 miR-296-5p 的不同表达对 U2OS 细胞中 PTBP1 表达水平及细胞增殖、 侵袭、 凋亡、 自噬及 EMT 的影响。 结果 与对照组比较, miR-296-5p 在 OS 中表达降低, 而 PLK1 则升高 (P< 0. 05); 与 miR-NC 组比较, mimic 组的克隆形成率、 侵袭 细胞数目及 PTBP1、 p62、 N-cadherin、 Vimentin、 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT 水平降低, 细胞凋亡率、 Beclin-1、 LC3-Ⅱ/ Ⅰ、 E-cadherin 水平升高 (P< 0. 05); 与 PLK1 组比较, PLK1 + mimic 组的克隆形成率、 侵袭 细胞数目及 PTBP1、 p62、 N-cadherin、 Vimentin、 p-PI3K/ PI3K、 p-AKT/ AKT 水平降低, 细胞凋亡率、 Beclin-1、 LC3-Ⅱ/ Ⅰ、 E-cadherin 水平升高 (P< 0. 05)。 结论 miR-296-5p 可能能够靶向 PLK1 调控 PI3K/ AKT 通路诱导 OS 细胞中的自噬并抑制 EMT。     

miR-454-3p靶向TCF-4对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨miR-454-3p与TCF-4的靶向关系,以及对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡和迁移的影响。方法 miR-454-3p mimic和(或)pLV-TCF-4转染GRC-1细胞后,采用qRT-PCR法检测miR-454-3p和TCF-4 mRNA水平;Western blot法检测TCF-4蛋白的表达;双荧光素酶报告实验验证miR-454-3p与TCF-4的靶向关系;MTT法检测细胞增殖情况;Hoechst染色检测细胞凋亡;划痕实验检测细胞迁移能力;体外侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果 miR-454-3p mimic抑制TCF-4 mRNA和蛋白的表达;pLV-TCF-4缓解miR-454-3p对TCF-4蛋白表达的抑制作用。miR-454-3p mimic与TCF-4野生型报告载体共转,荧光素酶活性降低;与TCF-4突变型报告载体共转后,荧光素酶活性无明显变化。与GRC-1组相比,miR-454-3p mimic转染到GRC-1细胞后,细胞增殖倍数明显降低(P0.01),细胞凋亡率由(5.08±1.21)%增加到(23.12±1.82)%,伤口愈合率由(58.43±6.32)%降低到(32.15±5.16)%,侵袭细胞数目由113.54±9.27减少至51.21±6.03;共转染miR-454-3p mimic和pLV-TCF-4后,能够逆转上述改变。结论 miR-454-3p可通过靶向TCF-4抑制人肾癌细胞GRC-1的增殖和迁移,诱导细胞凋亡。     

miR-17-5p调控PTEN对大鼠中动脉阻塞的神经保护作用研究

目的探究microRNA-17-5p(miR-17-5p)在中动脉阻塞(MCAO)中的神经保护作用及其可能机制。方法将60只清洁级雄性SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、模型组(MCAO组)、MCAO+mimic组、MCAO+inhibitor组和MCAO+BPV组,每组12只。采用线栓法建立MCAO大鼠模型。建模24 h后,检测大鼠神经功能和脑组织含水量;HE染色观察大鼠脑组织病理学损伤;TUNEL染色检测大鼠脑组织神经元细胞凋亡情况;RT-PCR检测miR-17-5p和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源蛋白(PTEN)的mRNA表达水平,预测两者是否存在连续的结合位点;Western blot检测脑组织通路蛋白磷酸化水平。结果MCAO+mimic组和MCAO+BPV组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、PTEN的mRNA和蛋白表达水平均低于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05);MCAO+mimic组和MCAO+BPV组脑组织病理学损伤明显改善,miR-17-5p和PTEN存在连续结合位点,而这2组的miR-17-5p表达水平、AKT和mTOR磷酸化水平高于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05);MCAO+inhibitor组神经功能评分、脑组织含水量、神经细胞凋亡率、PTEN的mRNA和蛋白表达水平高于MCAO组,差异有统计学意义(P<0.05);MCAO+inhibitor组脑组织病理学损伤加重,同时AKT和mTOR磷酸化水平低于MCAO组。结论miR-17-5p表达上调对MCAO大鼠神经具有保护作用,其功能发挥可能与介导调控PTEN信号通路相关。     

miR-138-5p 靶向缺氧诱导因子对人肾癌细胞GRC-1 生长、侵袭和迁移 的影响

目的:本研究旨在探索miR-138-5p对人肾癌细胞GRC-1增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响。方法:GRC-1细胞机分为5组:对照(GRC-1)组、mimic-scramble组、miR-138 mimic组、HIF-1α过表达(pc-HIF-1α)组和共转染(mimic+pc-HIF-1α)组。荧光素酶实验确定miR-138-5p与HIF-1α的靶向关系。实时定量PCR检测miR-138-5p的表达及HIF-1α的mRNA水平。蛋白印迹检测HIF-1α的蛋白水平。CCK-8检测细胞增殖。流式细胞术分析细胞凋亡。Transwell检测细胞侵袭能力。划痕实验分析细胞迁移能力。结果:荧光素酶实验表明miR-138-5p可靶向HIF-1α。miR-138 mimic组miR-138表达高于对照组(P0. 01)。同时,miR-138 mimic组HIF-1α的mRNA水平低于对照组(P0. 01)。miR-138 mimic组HIF-1α的蛋白水平低于对照组(P0. 01)。与对照组相比,pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白水平上升(P0. 01)。mimic+pc-HIF-1α组HIF-1α的蛋白水平低于pc-HIF-1α组(P0. 01)。miR-138 mimic组细胞增殖倍数低于对照组(P0. 01)。与对照组相比,pc-HIF-1α组细胞增殖倍数升高(P0. 01)。mimic+pc-HIF-1α组细胞增殖倍数低于pc-HIF-1α组(P0. 01)。miR-138 mimic组细胞凋亡率高于对照组(P0. 01)。与对照组相比,pc-HIF-1α组细胞凋亡率下降(P0. 01)。mimic+pc-HIF-1α组细胞凋亡率高于pc-HIF-1α组(P0. 01)。miR-138 mimic组细胞侵袭和迁移能力低于对照组(P0. 01)。与对照组相比,pc-HIF-1α组细胞侵袭和迁移能力增加(P0. 01)。mimic+pc-HIF-1α组细胞侵袭和迁移能力低于pc-HIF-1α组(P0. 01)。结论:miR-138-5p靶向HIF-1α可减弱人肾癌GRC-1细胞增殖、侵袭和迁移,增强细胞凋亡。     

LncRNA MINCR靶向miR-223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法 将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡率；ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平；生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系；Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较，细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、...     

miR-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因PD-L1参与卵巢癌增殖和侵袭的机制研究

目的探究微小RNA(microRNA,miR)-195-5p通过靶向STAT3调控免疫抑制基因程序性死亡受体-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)参与卵巢癌增殖和侵袭的机制。方法通过双荧光素酶报告基因检测方法验证miR-195-5p靶向STAT3。将卵巢癌细胞系SKOV-3分为4组:对照组、mimic组、mimic+STAT3组和STAT3组。通过质粒转染技术过表达miR-195-5p和STAT3。qPCR和Western blot检测RNA或蛋白的表达水平。分别通过CCK-8法、Transwell实验检测各组的细胞活力、侵袭能力。通过荷瘤裸鼠实验在体内验证过表达miR-195-5p对肿瘤生长、STAT3和PD-L1的影响。结果 miR-195-5p直接靶向STAT3。过表达miR-195-5p抑制STAT3 mRNA和蛋白的表达水平(P0.05),过表达STAT3显著逆转miR-195-5p对STAT3的抑制作用(P0.05)。Mimic组的细胞活力和细胞迁移能力显著低于对照组(P0.05),STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于对照组(P0.05),并且mimic+STAT3组的细胞活力和细胞迁移能力显著高于mimic组(P0.05)。荷瘤裸鼠实验显示miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤体积和质量均显著低于对照组(P0.05)。miR-195-5p组荷瘤裸鼠的肿瘤组织中STAT3和PD-L1蛋白水平显著低于对照组(P0.05)。结论 miR-195-5p可通过靶向STAT3抑制PD-L1的表达并抑制卵巢癌细胞生长、侵袭和免疫抑制反应。