慢性间歇性低氧对大鼠肠道菌群与血糖的影响研究

目的 探讨慢性间歇性低氧(CIH)对大鼠肠道菌群失调与血糖变化的影响。方法 选取30只健康雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为正常对照组(NC组)、CIH 4周组(CIH4组)、CIH 8周组(CIH8组),每组10只。分析大鼠肠道菌群种类及丰度表达,检测静脉血中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、脂多糖(LPS)、胰岛素(INS)、空腹血糖(FBG)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),观察胰腺及肠道组织病理学改变及核因子-κB(NF-κB)表达。结果 CIH4组、CIH8组大鼠FBG、LPS、HOMA-IR、TNF-α水平均高于NC组(P<0.05),且CIH8组变化更明显(P<0.05)。CIH8组大鼠INS水平均高于NC组、CIH4组(P<0.05),但NC组与CIH4组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CIH可导致肠道组织广泛黏膜糜烂,上皮细胞脱落,固有层广泛可见较多炎性细胞浸润;胰腺组织腺体杯状细胞消失,有的地方可见腺体脱落,残留基底组织。CIH8组大鼠胰腺和肠道组织中NF-κBp65表达高于NC组(P<0.05),其余组间比较差异均无统计学...     

慢性间歇低氧对大鼠肝fractalkine表达的影响

目的：利用大鼠模型观察慢性间歇低氧（chronic intermittenthypoxia,CIH）对肝的损伤以及对肝趋化因子fractalkine表达的影响,并探讨其可能的机制。方法：利用间歇低氧大鼠模型模拟阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征（obstructive sleep apnea-hypopnea syndrome,OSAHS）的CIH的病理生理过程。30只雄性Spraque—Dawley大鼠随机分为5％慢性间歇低氧组、s％慢性间歇低氧复氧组和正常对照组,每组10只。5％慢性间歇低氧组给予间歇性低氧处理3周,低氧频率均为20次／h,每次循环180s,8h／d;s％慢性间歇低氧复氧组给予间歇性低氧处理3周,低氧频率均为20次／h,每次循环180s,8h／d,3周后继续正常气体环境饲养3周。处死大鼠后采用HE染色法观察各组大鼠肝组织病理改变,免疫组织化学法比较各组大鼠肝fractalkine的表达水平。结果：1）与正常对照组相比,5％慢性间歇低氧组和5％慢性间歇低氧复氧组大鼠肝脂肪变程度及炎症反应均增加（均P〈0．01）;s％慢性间歇低氧复氧组大鼠肝损伤较5％慢性间歇低氧组显著减轻（P〈0．01）。2）与正常对照组相比,5％慢性间歇低氧组和5％慢性间歇低氧复氧组大鼠肝组织fractalkine表达均显著增强（均P〈O．01）;5％慢性间歇低氧复氧组较5％慢性间歇低氧组显著减弱（P〈0．01）。结论：CIH可诱导大鼠肝组织损伤及大鼠肝组织趋化因子fractalkine表达增加。     

慢性间歇低氧大鼠模型的建立和超声心动图评价

目的 使用程序低氧舱建立慢性间歇低氧(chronic intermittent hypoxia,CIH)大鼠模型,超声心动图评价大鼠心脏结构和功能改变.方法 16只大鼠随机分为2组,每组8只,分别为CIH组和对照组.CIH组大鼠置于程序低氧舱内,按程序设计予以每天8h,共35天的间歇低氧,每一低氧-复氧循环时间为1 m...     

肥胖大鼠骨骼肌AMPK表达及其与糖脂代谢的关系

目的 探讨肥胖大鼠骨骼肌组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的表达及其对糖脂代谢的影响.方法 将28只6周龄雄性SD大鼠随机分为普通饮食组(NC组,15只)和高脂饮食组(HF组,13只),分别测体重(BW)、血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)等指标.采用免疫印迹法测定各组大鼠骨骼肌中AMPK和磷酸化AMPK(p-AMPK)的水平.以p-AMPK/AMPK代表AMPK的活性.结果 与NC组大鼠相比,HF组大鼠的BW、FFA、TG、FPG、FINS均明显升高(P＜0.05),骨骼肌中AMPK表达降低,但差异无统计学意义(P＞0.05),p-AMPK表达及AMPK活性(p-AMPK/AMPK)降低显著(均P＜0.05).骨骼肌组织p-AMPK表达水平与FPG、FFA呈负相关(P＜0.05),AMPK活性与FPG、FFA、TG呈负相关(P＜0.05),与FINS无相关性.结论 高脂饮食诱导大鼠营养性肥胖,降低AMPK的活性,从而导致TG和TCH的合成增加,血糖升高,脂质在外周组织沉积增加.     

间歇低氧对大鼠肝脏细胞中同源性磷酸酶张力蛋白及磷酸化蛋白激酶B表达的影响

目的通过检测间歇低氧大鼠肝脏细胞中同源性磷酸酶张力蛋白（PTEN）及其下游信号分子磷酸化蛋白激酶B（p-AKT）的表达水平,探讨肝脏细胞PTEN、P-AKT在间歇低氧相关胰岛素抵抗中的作用。方法选取健康雄性SD大鼠24只,随机分成3组,即慢性间歇空气对照组（CIA组）、慢性间歇低氧4周组（CIH4组）和慢性间歇低氧8周组（CIH8组）。检测3组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、肝细胞中PTEN及p-AKT的表达,用胰岛素敏感指数（IsI）以及稳态模型胰岛素抵抗指数（HOMA—IR）系统评价胰岛素抵抗。以平均灰度值表示PTEN及p-AKT的蛋白表达量,灰度值越高表示蛋白质表达越少。结果与CIA组比较,CIH4组、CIH8组ISI下降有统计学意义（P〈0．05）,且CIH8组下降比CIH4组明显（P〈0．05）;CIH4组、CIH8组HOMA—IR升高有统计学意义（P〈0．05）,且CIH8组升高较CIH4组明显（P〈0．05）。与CIA组比较,CIH4组、CIH8组PTEN蛋白表达量升高有统计学意义（P〈0．05）;与CIH4组比较,CIH8组PTEN蛋白表达量升高亦有统计学意义（P〈0．05）。与CIA组比较,CIH4组、CIH8组p-AKT蛋白表达量下降有统计学意义（P〈0．05）;与CIH4组比较,CIH8组p-AKT蛋白表达量下降亦有统计学意义（P〈0．05）。间歇低氧大鼠肝细胞中PTEN的表达随着IsI的下降和HOMA—IR的升高有显著升高趋势,且随间歇低氧时间的延长而显著性增加;间歇低氧大鼠肝细胞中p-AKT随着IsI的下降和HOMA—IR的升高表达下降,且随着间歇低氧时间的延长而更加明显。结论慢性间歇低氧暴露使大鼠空腹血糖及胰岛素水平升高,发生胰岛素抵抗,并且随着间歇低氧暴露时间的延长,胰岛素抵抗程度加重。间歇低氧大鼠肝细胞PTEN蛋白表达增加,p-AKT蛋白表达减少,且与ISI、HOMA．IR具有明显的相关性,表明该蛋白可能在间歇低氧大鼠胰岛素抵抗的发生     

抗纤益心方通过AMPK/mTOR通路改善扩张型心肌病大鼠心功能的作用机制

目的探讨抗纤益心方通过腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对扩张型心肌病(DCM)大鼠心肌细胞自噬、心功能的影响及其机制。方法将60只Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,抗纤益心方高、低剂量组和卡托普利组,每组各12只。模型组、抗纤益心方组和卡托普利组经呋喃唑酮水溶液诱导扩张型心肌病模型,药物治疗8周。超声心动仪检测各组大鼠心脏左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、缩短分数(FS)、左室射血分数(LVEF)的变化;HE染色观察心肌细胞排列及形态;透射电镜观察线粒体超微结构及自噬;Western blot检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、Beclin1、p62与AMPK、mTOR表达及其磷酸化水平。结果与正常组比较,模型组LVESD和LVEDD增加,FS和EF降低;与模型组比较,抗纤益心方高剂量组和卡托普利组LVESD和LVEDD降低,FS和EF增加;模型组心肌细胞线粒体排列紊乱,局部肌丝断裂,线粒体肿胀伴空泡样变化,边界模糊不清,抗纤益心方高剂量治疗后线粒体超微结构的损伤改善;与正常组比较,模型组心肌LC3-II/LC3-I、Beclin1蛋白表达降低、p62表达升高;与模型组比较,抗纤益心方高剂量组和卡托普利组LC3-II/LC3-I、Beclin1蛋白表达增加,p62表达降低;与正常组比较,模型组p-AMPK/AMPK降低,p-mTOR/mTOR升高;与模型组相比,抗纤益心方高剂量组和卡托普利组p-AMPK/AMPK升高,p-mTOR/mTOR降低。结论抗纤益心方通过促进扩张型心肌病大鼠心肌细胞自噬,改善心脏功能,其作用机制可能与调控AMPK/mTOR通路有关。     

4周跑台运动对糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨4周跑台运动对糖尿病心肌缺血再灌注损伤(IRI)产生的影响以及通过AMPK-mTOR信号通路调节糖代谢。方法 6～8周龄雄性SD大鼠适应性喂养1周,禁食12 h后,一次性腹腔注射1%链脲佐菌素柠檬酸缓冲液60 mg/kg制备糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病+假手术组(DM+Sham组)、糖尿病+心肌缺血再灌注损伤组(DM+IRI组)、糖尿病+心肌缺血再灌注损伤+运动组(DM+IRI+E组),每组6只。DM+IRI+E组进行4周跑台运动训练。DM+IRI组和DM+IRI+E组大鼠予结扎左冠状动脉前降支30 min,恢复灌注120 min以制备心肌IRI模型;DM+Sham组大鼠只开胸,不结扎冠状动脉。比较三组大鼠空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素水平(FINS)、胰岛素敏感指数(ISI)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、心肌梗死面积、己糖激酶(HK)活性、心肌组织AMPK/mTOR表达水平。结果 DM+IRI组大鼠与DM+Sham组相比,CK-MB、cTnI、cTnT、心肌梗死面积明显增高(P<0.01或P<0.05)。与DM+IRI组相比,DM+IRI+E组FBG、FINS、HOME-IR、CK-MB、cTnI、cTnT、心肌梗死面积明显降低(P<0.01或P<0.05),ISI、HK活性、心肌组织AMPK、p-AMPK表达均明显升高(P<0.01或P<0.05),p-mTOR水平下降(P<0.05),mTOR水平有下降趋势(P>0.05)。结论 4周跑台运动可以通过AMPK-mTOR调控糖代谢、改善胰岛素抵抗发挥对糖尿病IRI心肌的保护作用。     

芹菜素通过AMPK/mTOR通路调控肺癌A549细胞自噬

目的 探讨芹菜素（APG）对肺癌A549细胞增殖及自噬的影响及其与AMPK/mTOR通路的关系。方法 体外培养肺癌A549细胞,采用CCK-8法检测不同浓度芹菜素处理A549细胞不同时间后对细胞增殖的影响。后续实验分为空白对照组(0 μmol/L APG),低、中、高浓度实验组和抑制剂组5组,采用MDC染色法检测各组对细胞自噬的影响,免疫印迹法检测自噬相关蛋白以及AMPK/mTOR通路相关蛋白表达情况。结果 芹菜素可显著抑制A549细胞增殖,且呈浓度依赖性（P<0.05）;20、40、80 μmol/L芹菜素组随作用时间延长,对A549细胞的增殖抑制率逐渐增加,呈时间依赖关系（P<0.05）。与空白对照组比较,实验组A549细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡数量及IOD值逐渐增加（P<0.05）,芹菜素可浓度依赖性上调LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值（P<0.05）,下调p-mTOR、p62蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值（P<0.05）。与高浓度实验组比较,抑制剂组细胞中含高亮点状荧光的自噬小泡减少,IOD值下降,LC3Ⅰ、LC3Ⅱ、p-AMPKα蛋白表达水平及p-AMPKα/AMPKα比值降低,而P62、p-mTOR蛋白表达水平及p-mTOR/mTOR比值升高（P<0.05）。结论 芹菜素能抑制肺癌A549细胞增殖,诱导其自噬,作用机制可能与AMPK/mTOR通路有关     

慢性间歇性缺氧对大鼠血糖及其胰岛B细胞超微结构的影响

目的:制作可应用于常压慢性间歇性缺氧(Chronic intermittent hypoxia,CIH)研究的动物模型,探讨CIH对大鼠血糖的影响及其胰岛B细胞超微结构变化的研究.方法:大鼠分别给予空气[对照组(Unhandled,control),UC组]、间断低氧4周(CIH组)及复氧4周[复氧组(Restore hypoxia),RH组]处理后测定各组大鼠血糖,胰岛素,C肽,计算胰岛素抵抗指数,同时用电镜观察胰腺B细胞超微结构变化.结果:与UC组、RH组比较,CIH组的血糖升高,存在胰岛素抵抗,胰腺B细胞超微结构发生轻微缺氧损伤改变,UC组和RH组无明显改变.结论:CIH致使大鼠胰岛B细胞损伤及功能紊乱,大鼠调节血糖功能降低,同时CIH组存在胰岛素抵抗,使血糖升高,RH能使其恢复正常.     

高脂饮食对大鼠肝脏组织AMPK表达及其活性的影响

目的 研究不同饮食模式对大鼠肝脏组织腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达及其活性的影响.方法 28只雄性sD大鼠适应性喂养1周后随机分为2组:普通对照组(NC组,n=15),高脂饮食组(HF组,n=13).NC组给予普通饲料,HF组给予高脂饲料.16周后分别测定体重(BW)、血清游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TCH)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)等指标.采用Westernblot方法检测两组大鼠肝脏组织中AMPKa和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α亚基(p-AMPKa)蛋白的水平.结果与NC组相比.HF组大鼠的体重、FFA、TG、FPG、FINS增高(均P<0.05).两组肝脏组织中AMPKα的蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05),但HF组肝脏组织中P-AMPKα的蛋白表达水平及AMPK活性降低(均P<0.05).结论 长期高脂饮食减少肝脏组织AMPKα蛋白的磷酸化和AMPK的活性.