氯碘羟喹抑制癫痫小鼠海马神经元凋亡的实验研究

目的研究氯碘羟喹对癫痫持续状态模型小鼠海马神经元凋亡的影响。方法 18只CD1小鼠随机分为3组:对照组(Con)给予腹腔注射生理盐水;癫痫持续状态组(SE)给予腹腔注射匹罗卡品(300mg/kg);氯碘羟喹治疗组(Cli)在腹腔注射匹罗卡品(300mg/kg)后30min给予腹腔注射氯碘羟喹(15mg/kg·d)。每天观察动物的行为学变化,于7d后取海马组织。应用尼氏染色和TUNEL染色检测氯碘羟喹对癫痫持续状态小鼠海马神经元凋亡的影响。结果癫痫持续状态组动物萎靡,自发性痫性发作频繁;氯碘羟喹治疗组动物萎靡状态明显改善,自发性痫性发作次数明显减少。尼氏染色和TUNEL染色发现,与癫痫持续状态组相比,氯碘羟喹治疗组能改善海马神经元的细胞损伤,降低凋亡阳性细胞百分比(<0.01)。结论氯碘羟喹能抑制癫痫持续状态小鼠海马神经元凋亡。     

干扰锌代谢对癫痫小鼠易感性、学习记忆和海马神经元损伤的影响研究

目的　研究氯碘羟喹预处理干扰锌代谢对癫痫小鼠的癫痫易感性、学习记忆和海马神经元损伤的影响。 方法　72只CD-1小鼠随机分为对照组、癫痫组和氯碘羟喹组。氯碘羟喹组腹腔注射氯碘羟喹10 mg·kg-1·d-1,对照组和癫痫组给予等量生理盐水。连续注射1周后,癫痫组和氯碘羟喹组腹腔注射匹罗卡品300 mg/kg建立癫痫模型,对照组予以等量生理盐水。在给予匹罗卡品后90 min内观察动物的癫痫发作率、潜伏期和发作级别;第7 天取材,利用金属自显影技术结合图像分析观察锌在海马的分布变化,尼氏染色观察海马神经元形态变化,酶联免疫吸附法检测血清和脑脊液中S-100β和神经元特异性烯醇化酶（neuronspecificenolase, NSE）蛋白的表达;1个月后利用Mirror水迷宫实验检测逃避潜伏期和目标象限停滞时间。 结果　与癫痫组相比,氯碘羟喹组的癫痫发作率和发作级别明显增高,潜伏期明显缩短;海马锌含量明显降低;神经元数量显著增多,损伤减轻;血清和脑脊液中的S-100β和NSE蛋白水平明显降低;逃避潜伏期缩短,目标象限停滞时间延长,P<0.01。 结论　氯碘羟喹能减轻锌在癫痫小鼠海马的聚集,提高癫痫易感性,抑制神经元的损伤,提高小鼠学习记忆功能。     

氯碘羟喹对脑缺血沙土鼠海马神经元的保护作用

目的研究金属螯合剂氯碘羟喹(Clioquinol,CQ)对沙土鼠全脑缺血再灌注后海马CA3区锥体细胞的保护作用。方法无创动脉夹夹持沙土鼠双侧颈总动脉制备脑缺血模型,腹腔注射CQ 3d,应用金属自显影技术检测CQ对沙土鼠海马游离锌离子的螯合作用,TUNEL和caspase-3原位杂交分析CQ对脑缺血沙土鼠海马神经元凋亡的影响。结果脑缺血CQ处理组沙土鼠海马金属自显影阳性反应明显低于脑缺血溶剂对照组,脑缺血CQ处理组沙土鼠海马TUNEL和caspase-3阳性细胞数量明显低于脑缺血溶剂对照组。结论 CQ对沙土鼠海马游离锌离子有明显的螯合作用,可能与其对脑缺血再灌注损伤的保护作用有关。     

锌螯合剂对匹罗卡品致痫小鼠行为学及海马神经元的影响

目的:研究锌螯合剂氯碘羟喹对匹罗卡品致痫小鼠行为学及海马神经元的影响。方法:将CD1小鼠随机分成3组,对照组小鼠腹腔注射等量的生理盐水;癫痫组小鼠腹腔注射匹罗卡品300 mg/kg;氯碘羟喹治疗组(治疗组)小鼠腹腔注射匹罗卡品300 mg/kg,30 min之后腹腔注射氯碘羟喹15 mg/kg。观察各组小鼠的癫痫发作次数。Morris水迷宫实验测定逃避潜伏期和目标象限停滞时间。应用尼氏染色计数海马神经元数量;利用免疫组织化学方法、免疫印迹结合图像分析技术检测凋亡基因caspase-3在各组小鼠海马的表达变化。结果:与对照组相比,其他2组小鼠的癫痫发作次数明显增多,发作级别明显增高;其中,治疗组小鼠的发作次数和发作级别均低于癫痫组。水迷宫实验结果显示,与对照组相比,其他2组小鼠的逃避潜伏期明显延长,目标象限停滞时间明显缩短;其中,治疗组的逃避潜伏期比癫痫组短,目标象限停滞时间比癫痫组长。其他2组小鼠海马神经元数量明显少于对照组;治疗组的海马神经元数量比癫痫组多。其他2组小鼠海马caspase-3表达明显高于对照组,阳性细胞数量增多,光密度增加;治疗组海马caspase-3的表达低于癫痫组,阳性细胞数量减少,光密度降低。结论:锌螯合剂氯碘羟喹能抑制癫痫发作,保护海马神经元,提高癫痫小鼠的学习记忆能力。     

锌对疼痛后学习记忆障碍小鼠海马神经元P53蛋白表达的影响

目的 探讨锌对第5腰椎（L5）脊神经结扎横切所致神经病理性疼痛（NPP）模型的学习记忆功能障碍及海马组织中P53表达的影响。方法 成年小鼠（C57/BL6）48只, 随机分为3组(n=16 ),对照组（con）,NPP组及高锌NPP组（Zn-NPP）。对照组仅暴露L5脊神经不结扎,NPP组施行L5脊神经左侧结扎横切（L L5-SNT）手术,Zn-NPP组施行左侧L5-SNT手术后饮用硫酸锌水溶液。3组术后第29 天进行Morris水迷宫实验测量小鼠空间学习记忆能力,水迷宫实验结束后,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,采用免疫组织化学及免疫印迹法检测各组P53表达。结果 Morris水迷宫实验中,NPP组 (21.03±12.08)m/s,Zn-NPP组(16.97±8.59)m/s及con组(8.74±3.61)m/s,隐藏平台潜伏期逐渐缩短(P< 0.05), 并穿过平台所在象限的时间及路径占总游泳时间和总路径的比例逐渐增加(P< 0.05)。流式细胞术检测结果显示,con组（1.88%）,Zn-NPP（16.12%）及NPP组（33.17%）凋亡率逐渐增多(P< 0.05)。免疫组织化学结果显示,con组,Zn-NPP组及NPP组的P53阳性表达吸光度值在CA1区分别为 27.42±7.08、37.52±10.58及53.31±9.26;CA3区分别为29.51±8.31、36.21±7.91及56.71±8.09。 免疫印迹结果显示,con组,Zn-NPP组及NPP组的P53表达吸光度值分别为 0.12±1.01、0.37±1.13和0.86±1.22,吸光度值逐渐增多(P< 0.05)。 结论 锌可改善NPP后小鼠学习记忆能力。     

戊四氮点燃癫痫大鼠学习记忆功能及海马神经元钙调素依赖性蛋白酶Ⅱ表达的变化

目的 观察戊四氮（PTZ）点燃癫痫对大鼠学习记忆功能的影响及海马神经元钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）表达的变化。方法 腹腔内连续注射PTZ制备点燃癫痫大鼠模型,用Morris水迷宫评测大鼠学习和记忆功能,用免疫组织化学技术观察海马神经元α-CaMKⅡ的表达。结果 与对照组大鼠比较,在Morris水迷宫试验中,PTZ组寻找平台的逃避潜伏期显著延长（P<0.05）,游泳距离显著增加（P<0.05）,穿越平台的次数及在平台象限的游泳距离的百分率显著减少（P<0.05）,搜索策略变差,同时伴有海马CA1、CA3区α-CaMKⅡ表达明显减少（P<0.05）。结论 PTZ点燃癫痫大鼠学习和记忆功能受损可能与海马CA1、CA3区α-CaMKⅡ表达减少有关。     

氯碘羟喹对小鼠海马苔藓纤维内游离锌离子螯合作用的研究

目的研究金属螯合剂氯碘羟喹（Clioquinol,CQ）对小鼠大脑海马苔藓纤维内游离锌离子的螯合作用。方法3月龄雄性C57BL／6小鼠42只,随机均分为3组：正常对照组,溶剂对照组,CQ组。CQ组和溶剂对照组腹腔注射药物2h后与正常对照组一起断头取脑,制备小鼠海马冰冻切片,应用N-（6-甲氧基-8-喹啉）-P-甲苯磺胺（TSQ）荧光探针技术和金属自显影技术检测各组小鼠大脑海马苔藓纤维游离锌离子的分布和含量。结果CQ处理组小鼠海马苔藓纤维的TSQ荧光强度在CA3区及齿状回均明显低于正常对照组和溶剂对照组（P〈0．01）,而两对照组之间无差别。CQ处理组小鼠大脑金属自显影阳性反应强度在皮层、海马CA3区、齿状回均明显低于正常对照组和溶剂对照组（P〈0．01）,而两对照组之间无差别。结论金属螯合剂CQ对小鼠大脑内游离锌离子有明显的螯合作用,提示CQ可能作为锌离子诱导的神经细胞死亡疾病（如脑缺血和阿尔茨海默病）的潜在治疗药物。     

阿米洛利对癫痫大鼠海马神经元损伤的保护作用

目的:探讨阿米洛利对癫痫(epilepsy)大鼠海马神经元损伤的保护作用及作用机制.方法:40只成年雄性SD大鼠随机分为对照组(control)、癫痫组(epilepsy)、左乙拉西坦治疗组(levetiracetam)和阿米洛利治疗组(amiloride),每组各10只.利用氯化锂-匹鲁卡品法建立癫痫大鼠模型,ami...     

七氟烷对新生大鼠学习记忆功能以及海马区凋亡的影响

目的:观察并探讨新生大鼠接受七氟烷麻醉后,生长至断乳期的学习记忆功能的变化以及海马区神经元细胞凋亡的变化。方法:健康6 ~8日龄新生SD大鼠100只,随机数字表法分成5组,每组20只：Ⅰ组大鼠吸入体积分数为3%的七氟烷以及25%氧气2 h;Ⅱ组大鼠仅吸入25%氧气2 h;Ⅲ组大鼠分别在出生后第6、7、8天接受一次体积分数为3%的七氟烷以及25%氧气2 h;Ⅳ组大鼠仅吸入3次25%氧气2 h;Ⅴ组大鼠仅放入麻醉箱,不做任何处理。麻醉后待大鼠生长至16 ~21 d时,采用Morris水迷宫实验检测大鼠的空间学习和记忆能力,并且取大鼠海马区检测caspase-3的表达,用TUNEL法观察海马区凋亡细胞的变化。结果：①Morris水迷宫实验显示16 ~21鼠生长至16 ~21 d时进行定向航行实验,与第Ⅳ组大鼠相比,第Ⅰ组大鼠的逃避潜伏期无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）;第Ⅲ组大鼠的逃避潜伏期明显延长,和其他组相比,差异均有统计学意义（P<0.05）;②在水迷宫的空间探索实验中,与第Ⅳ组相比,第Ⅰ组大鼠的穿越平台的次数无明显的变化;第Ⅲ组大鼠穿越平台的次数明显减少,并且较第Ⅰ组以及其他各组大鼠也显著减少,差异有统计学意义（P<0.05）;③第Ⅲ组大鼠的游泳速度明显慢于其他组别;④与第Ⅳ组大鼠比,Ⅰ组大鼠caspase-3的表达稍有增加,Ⅲ组大鼠caspase-3的表达明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。⑤仅接受一次七氟烷麻醉的大鼠海马区染色阳性的细胞稍有增加,而接受三次七氟烷麻醉的大鼠海马区染色阳性的细胞明显增加,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：新生6 ~8 d的大鼠接受三次七氟烷麻醉后,待其生长至16 ~21 d,其空间学习记忆能力明显受到影响,可能与海马区神经元细胞凋亡有关。     

大鼠海马结构在空间辨别性学习记忆时的突触形态可塑性的定量研究

目的　观察由空间辩别性学习记忆活动引致的大鼠海马结构的突触可塑性变化。方法　本研究继电子显微镜下 ,对空间辨别性学习记忆模型大鼠和对照大鼠海马结构内突触形态学的对比性观察之后 ,又对两组大鼠海马结构内突触复合体进行了体视学指标的测算。结果　模型组大鼠海马CA3区多形层内突触数密度 (77 81± 16 0 0 )个 / μm3、突触活性点膜面积 (0 0 37± 0 0 0 8) μm2 / μm3、突触小泡的数量 (16 9946 86± 195 92 5 8)个 / μm3、线粒体的体积 (1 70± 0 86 ) %和数密度 (8777 5 4± 2 0 2 0 32 )个 / μm3 均比对照组大鼠的大或多 ,对照组大鼠以上指标分别为 :(2 8 35± 1 31)个 / μm3、(0 0 15± 0 0 0 2 ) μm2 /μm3、(6 4380 2 7± 872 8 6 6 )个 / μm2 、(0 5 8± 0 35 ) %、(2 2 82 46± 72 7 6 9)个 / μm3,其差异有高度显著性 (P <0 0 1)。结论　正常生理活动也可引致神经发生突触可塑性变化 ;突触可塑性变化的形式不仅包括突触复合体各结构的增大同时包括突触数量增多 ;突触活性点膜面积增大 ;突触小泡的数量增多和体积增大 ;突触前膨大内线粒体数量增多和体积增大。     

孕酮抗氧化作用对去卵巢小鼠学习记忆能力的影响

目的观察孕酮与小鼠学习记忆功能的维持和改善是否存在相关性,并探讨其机制。方法60只雌性昆明小鼠随机分为5组,除SHAM组外,其余各组小鼠行双侧卵巢切除术。术后对各组小鼠分别腹腔注射不同剂量孕酮或生理盐水。Morris水迷宫测试训练检测各组小鼠学习记忆能力,随后取脑,检测海马组织的SOD、MDA含量及T-AOC。结果OVX组在若干个测试训练时段其空间学习记忆能力显著较差,而孕酮各剂量组表现较好。海马组织SOD含量:SHAM组和孕酮各计量组均显著较高(P<0.05);MDA含量:SHAM组和HP组显著较低(P<0.05);T-AOC:SHAM组和HP组显著增高(P<0.05)。结论雌、孕激素的缺乏会引起成年雌性小鼠学习记忆能力下降,孕酮的长期补充治疗可以通过组织抗氧化作用,抵抗脂质过氧化反应,提高组织的抗氧化能力,来缓解或改善小鼠学习记忆功能障碍。     

Aging effects on spatial tuning of hippocampal place cells in mice

One reason the electrophysiological correlates of hippocampal neurons are of interest is the possibility that they reflect their representational properties, presumably spatial/relational ones. Stable spatial representations, based on activity of ensembles of hippocampal place cells, initially develop through a series of short-episodic spatial tunings. Hence these short-episodic spatial tunings are important for understanding the establishment of stable place fields. Studies of age-related changes in place cell activities traditionally focus on place fields. In the present study, we characterized the short-episodic spatial tunings (1-min bins) of hippocampal CA1 place cells of freely moving mice in a familiar cylinder arena, and compared these functions in young and old mice. Spatial tuning was expressed by spatial selectivity, which we found fluctuated across a 16-min recording session in both young and old mice. High spatial selectivity, which is mainly due to the low firing of a place cell out of the place field in young mice, was significantly higher in old mice. The high firing rate out of the place field was the main factor contributing to significantly lower spatial selectivity in old mice. In addition, young mice showed a broad peak in the spatial selectivity between 4 and 10 min. In contrast old mice showed no peak in the spatial selectivity during this time period. The stability of place fields after a 24-h interval was also lower in old mice than in young mice. The low spatial tuning and unstable place fields suggest that a hippocampal-based spatial representation was impaired in the old mice. Furthermore, we speculate that the age-related impairment in hippocampal inhibition system may be involved in the impaired spatial representation of hippocampal CA1 place cells in old mice. Electronic Publication     

RACK1与小鼠空间学习记忆的相关性研究及自噬相关因子测定

目的:研究RAKC1与小鼠空间学习记忆的相关性,同时通过自噬相关因子的检测探索自噬在该相关性中所起作用。方法:通过侧脑室注射Aβ25-35(10μL,1mg·mL-1)诱导小鼠学习记忆障碍,通过Morris水迷宫评价小鼠的空间学习记忆能力,采用HE染色法观察小鼠海马神经元损伤情况,同时以Realtime RT-PCR及Western blotting法分别测定小鼠海马组织中RACK1的mRNA及蛋白水平并将二者分别与小鼠空间学习记忆能力进行相关性分析。进一步采用Realtime RT-PCR法检测Beclin1的mRNA水平,采用Western blotting法检测BECLIN1及LC3II/LC3I的蛋白水平,并将两种蛋白水平分别与RACK1蛋白水平进行相关性分析。结果:侧脑室注射Aβ25-35明显导致小鼠空间学习记忆障碍(P=0.021)及海马神经元的广泛损伤(P=0.003),同时小鼠海马RACK1mRNA和蛋白水平也显著降低(P=0.00,P=0.05),且二者分别与小鼠的空间学习记忆能力正相关(P=0.05,P=0.011)。进一步研究发现,Aβ25-35导致小鼠海马BECLIN1、LC3II/LC3I蛋白水平增高(P=0.00,P=0.01)同时这两种蛋白水平分别与RACK1蛋白水平呈负相关(P=0.021,P=0.005)。结论:小鼠RACK1蛋白水平与空间学习记忆过程正相关,可能通过负性调节自噬过程介导。     

气味对小鼠学习记忆能力及海马cAMP反应元件结合蛋白的影响

目的:探讨不同气味(苹果、香水、樟脑)对小鼠学习记忆能力及海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化的CREB(pCREB)的影响。方法:让小鼠在不同气味的环境下生活14d,在第7d开始方形水迷宫训练,3d后进行测试,连续测试5d。测试完后断髓处死动物,取出脑组织,用免疫组织化学染色观察海马pCREB和CREB表达情况,并进行图像分析。结果:樟脑组和香水组水迷宫的潜伏期较对照组延长,错误次数增多(P＜0.05)。免疫组化染色显示鼠海马CREB的磷酸化水平大大降低(P＜0.05),但对CREB的表达无明显影响。苹果组与对照组比各指标均无显著差异(P＞0.05)。结论:樟脑气味和香水气味对小鼠记忆能力有负面作用,且这种作用可能是通过降低CREB磷酸化水平而实现的。苹果气味对小鼠记忆能力无明显影响。     

神经细胞黏附分子在学习记忆减退大鼠海马中的表达

目的探讨神经黏附分子(NCAM)细胞在学习记忆减退对大鼠脑海马组织中的表达。方法20只雄性SD大鼠随机分成模型组和对照组。建立学习记忆减退模型鼠,4周后行Y迷宫检测和基底前脑胆碱能神经元免疫组织化学染色验证模型成立;并对海马CA1和CA3区进行免疫组织化学染色,观察NCAM含量的变化。结果Y迷宫检测显示模型组大鼠学习记忆能力较正常组明显下降,免疫组织化学染色表明模型组胆碱能神经元数和NCAM阳性数明显低于正常组(P<0.05)。结论学习记忆减退可降低大鼠脑海马组织NCAM表达。     

中药复方SMⅠ对拟老年痴呆小鼠学习记忆能力及海马BDNF表达的影响

目的：探讨中药复方SMⅠ对拟老年性痴呆（AD）小鼠学习记忆能力的影响及其机制。方法：用D-半乳糖腹腔注射62 d和三氯化铝灌胃106 d联合用药制备拟AD动物模型。从造模的第67 d开始，中药组灌胃给中药SMⅠ，连续40 d。给药结束后，通过方形水迷宫、逆转录聚合酶链反应来观察SMⅠ对拟AD模型小鼠学习记忆和脑内脑源性神经营养因子（BDNF）基因表达的影响。结果：SMⅠ可以缩短拟AD模型小鼠水迷宫测试的潜伏期(P<0.01), 减少其错误次数(P<0.05)，同时促进海马BDNF mRNA的表达(P<0.01)。结论：中药复方SMⅠ能提高D-半乳糖和AlCl3拟老年性痴呆小鼠学习记忆能力，其效果优于脑复康。SMⅠ促进学习记忆能力的作用可能与促进BDNF mRNA的表达有关。     

睡眠剥夺对吗啡成瘾小鼠学习记忆能力的影响

目的:观察睡眠剥夺对吗啡成瘾小鼠的空间学习记忆能力的影响。方法:ICR小鼠40只随机分为4组(n=10):生理盐水对照组、吗啡成瘾实验组、生理盐水+睡眠剥夺对照组、吗啡成瘾+睡眠剥夺实验组。小鼠递增注射吗啡7 d建立成瘾模型后,通过睡眠剥夺箱48 h建立睡眠剥夺模型,水迷宫实验观察其学习记忆的前后差异对比。结果:与单纯吗啡成瘾组及睡眠剥夺组相比,吗啡成瘾+睡眠剥夺组与睡眠剥夺小鼠水迷宫逃避潜伏期时间明显延长(P<0.05)。结论:睡眠剥夺加重吗啡成瘾ICR小鼠的学习记忆能力的损害作用。