miR-30a-5p对肺癌细胞增殖与迁移的影响及其机制

研究miR-30a-5p 对非小细胞肺癌（NSCLC）增殖和迁移的影响,并探讨其调控机制。方法NSCLC A549细胞系分成两组,miR-30a-5p组和对照组,分别转染miR-30a-5p mimics和microRNA scramble,MTT实验及细胞划痕实验分别测定两组细胞增殖和迁移能力,实时聚合酶链反应（real time-PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别测定两组泛素蛋白连接酶（UBE3C）mRNA 和蛋白质表达水平。结果培养48 h后,miR-30a-5p 组相对活细胞百分比低于对照组[（203.7±16.8）% vs（330.4±20.7）%（p =0.000）];培养72 h后,miR-30a-5p组相对活细胞百分比（258±30.2）%,对照组相对活细胞百分比（403.4±28.4）%,miR-30a-5p组相对活细胞百分比低于对照组（p =0.001）。细胞划痕实验示：miR-30a-5p组划痕愈合率为（23.2±2.7）%,对照组划痕愈合率为（89.2±4.8）%,miR-30a-5p 组划痕愈合率低于对照组（p =0.000）。real time-PCR显示,miR-30a-5p 组UBE3C mRNA 表达水平为（0.15±0.02）,对照组UBE3C mRNA 表达水平为（1.03±0.09）,miR-30a-5p组UBE3C mRNA表达水平低于对照组（p =0.000）;Western blot显示,miR-30a-5p组UBE3C 蛋白表达水平为（1.57±0.26）,对照组UBE3C 蛋白表达水平为（5.32±0.42）,miR-30a-5p 组UBE3C 蛋白表达水平低于对照组（p =0.000）。结论miR-30a-5p抑制NSCLC 增殖和迁移,其机制与下调UBE3C表达有关。     

miR-155-5p对急性髓系白血病细胞凋亡的影响及可能机制

目的: 探讨miR-155-5p对急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）细胞凋亡的影响及可能机制。方法: 收集43例AML患者和21例缺铁性贫血患者的骨髓单个核细胞（bone marrow mononuclear cells, BMMNC）,qRT-PCR法检测两组细胞miR 155 5p和Bcl 2 mRNA表达水平。AML细胞转染miR 155 5p类似物或抑制剂后,CCK 8法检测经不同浓度阿糖胞苷作用后AML细胞的活性,流式细胞术检测经阿糖胞苷（0.16 μg/mL）作用后AML细胞的凋亡情况。通过qRT PCR和蛋白质印迹法分别检测AML细胞转染miR-155-5p抑制剂后NF-κB、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平。结果： AML患者较缺铁性贫血患者BMMNC的miR 155 5p（t=4.688, P=0.002）和Bcl-2 mRNA（t=4.066, P=0.014）的表达水平明显升高。CCK 8和流式细胞术检测结果显示,转染miR 155 5p类似物的AML细胞经阿糖胞苷处理后细胞活性增高,凋亡明显减少;相反,转染miR-155-5p抑制剂组细胞活性降低,凋亡明显增多（P均<0.01）。qRT-PCR和蛋白质印迹结果显示,转染miR 155 5p抑制剂后AML细胞NF κB、Bcl-2表达水平降低。结论： miR-155-5p可能通过上调NF-κB、Bcl-2的表达抑制AML细胞凋亡。     

circRNA＿MYLK靶向miR-92a-3p调控急性B淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡

目的:探讨环状RNA＿MYLK(circRNA＿MYLK)对急性淋巴细胞白血病细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:选取四川大学华西医院收治的56例急性淋巴细胞白血病患者为研究组,同时选取45例健康志愿者为对照组。取两组骨髓样本后分离单个核细胞,并通过流式细胞仪分选B淋巴细胞;qRT-PCR法检测单个核细胞中circRNA＿MYLK、微小RNA-92a-3p(miR-92a-3p)表达量;Pearson法分析急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞中circRNA＿MYLK与miR-92a-3p相关性。体外培养人急性淋巴细胞白血病细胞系(SUP-B15、NALM-6、BALL-1)和正常B淋巴细胞,并将si-NC、si-circRNA＿MYLK、anti-miR-NC、anti-miR-92a-3p、miR-NC、miR-92a-3pmimic、si-circRNA＿MYLK和anti-miR-NC、si-circRNA＿MYLK和anti-miR-92a-3p转染至SUP-B15细胞;qRT-PCR法检测circRNA＿MYLK、miR-92a-3p表达量;CCK-8检测细胞增殖能力;...     

miR-125a-3p介导DUSP1信号通路对急性髓系白血病细胞化疗敏感度的影响

目的:分析沉默微小RNA-125a-3p(miR-125a-3p)介导双特异性磷酸酶1(DUSP1)信号通路对急性髓系白血病细胞化疗敏感性的影响。方法:购买人急性白血病细胞株进行培养,分为空白组、耐药组、沉默组、过表达组。检测每组细胞增殖、细胞凋亡、细胞DUSP1信号通路蛋白表达情况,并分析其作用机制。结果:与耐药组相比,沉默组miR-125a-3p表达量降低,过表达组miR-125a-3p表达量升高(均P<0.05),与沉默组相比,过表达组miR-125a-3p表达量升高(P<0.05),说明miR-125a-3p转染成功。与耐药组相比,沉默组细胞增殖抑制率、凋亡率降低,过表达组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(均P<0.05);与沉默组相比,过表达组细胞增殖抑制率、凋亡率升高(均P<0.05)。与耐药组相比,沉默组化疗敏感性降低,过表达组化疗敏感性升高(均P<0.05),与沉默组相比,过表达组化疗敏感性升高(P<0.05)。与耐药组相比,沉默组DUSP1蛋白表达量升高,p38、MAPK蛋白表达量降低,过表达组DUSP1蛋白表达量降低,p38、MAPK表达量升高(P<0.05);与沉默组相比,过表达组DUSP1蛋白表达量降低,p38、MAPK表达量升高(均P<0.05)。结论:过表达miR-125a-3p可抑制急性髓性白血病细胞凋亡、促进增殖、增强敏感性,其作用机制可能与DUSP1信号通路被激活相关。     

miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的探讨miR-125a-5p对胰腺癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法荧光定量PCR检测胰腺癌组织中miR-125a-5p的表达水平,细胞计数试剂盒-8检测下调miR-125a-5p水平对胰腺癌细胞生长的影响,流式细胞术检测下调miR-125a-5p表达水平对胰腺癌细胞周期和凋亡的影响,软琼脂集落形成实验评价miR-125a-5p在胰腺癌细胞恶性转化过程中的作用。结果 miR-125a-5p在胰腺癌组织的表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。下调miR-125a-5p表达水平后,胰腺癌细胞系Panc-1和MIA Pa Ca-2的生长受到抑制(P<0.05),早期凋亡率分别增加13.6%和11.0%(P<0.05),细胞集落数目分别下降27.3%和27.8%(P<0.05),Panc-1细胞S期细胞百分比降低11.8%(P<0.05)。结论 miR-125a-5p在胰腺癌组织中高表达,下调miR-125a-5p表达水平使胰腺癌细胞生长受到抑制,集落形成能力下降,细胞周期受到阻滞,凋亡比例增加,提示miR-125a-5p在胰腺癌中发挥癌基因的作用。     

miR-216a-5p靶向作用于PAK2对膀胱癌细胞增殖和凋亡影响的体外研究

目的 探讨miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中表达及调控p21活化蛋白激酶2（PAK2）基因对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-216a-5p在正常膀胱细胞系SV-HUC-1及膀胱癌细胞系5637、J82、T24和EJ中的表达,选取其中两种表达miR-216a-5p最少的5637和J82为对象,实验分两组：对照组（转染miR-NC）、实验组（转染miR-216a-5p）。利用qRT-PCR法检测PAK2 mRNA的表达。Western blot法检测PAK2、p-Akt和p-ERK蛋白的表达。Cell Counting Kit-8（CCK-8）实验和克隆形成实验检测膀胱癌细胞活力和增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 miR-216a-5p在膀胱癌细胞系中的表达量均低。实验组PAK2基因mRNA及其蛋自的表达明显降低,PAK2 mRNA在5637细胞中对照组和实验组表达量分别为1.01±0.15和0.40±0.11（P<0.01）,在J82细胞中对照组和实验组表达量分别为1.00±0.09和0.56±0.14（P<0.01）。p-Akt和p-ERK蛋白表达显著降低。实验组细胞活力明显被抑制,增殖能力明显降低。实验组细胞凋亡显著增加（P<0.01）。结论 miR-216a-5p在多种膀胱癌细胞系中呈低表达,可在体外靶向抑制PAK2基因,抑制膀胱癌细胞系5637和J82的增殖能力,促进细胞凋亡,可能成为具有膀胱癌生物治疗意义的靶标分子。     

调控circCORO1C/miR-642a-5p/HOXC6轴对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨circCORO1C/miR-642a-5p/HOXC6轴对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:(1)收集2020年12月至2021年2月收治的43例乳腺癌患者癌及其癌旁正常组织标本,分别采用qRT-PCR、Western blot法检测circCORO1C、miR-642a-5p、HOXC6蛋白表达量。(2)采用双荧光素酶报告实验验证circCORO1C与miR-642a-5p、miR-642a-5p与HOXC6 mRNA的靶向关系。(3)取MDA-MB-231细胞,采用脂质体转染法分2组分别转染sh-NC、sh-circCOROC1;另取MDA-MB-231细胞分别转染miR-NC、miR-642a-5p mimic。转染48 h后,CCK-8法检测细胞增殖能力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率,qRT-PCR法检测circCORO1C、miR-642a-5p的表达,Western blot法检测HOXC6、pro-caspase3、Cleaved-caspase3蛋白的表达。结果:(1)与癌旁正常组织比较,乳腺癌组织中circCORO1C、HOXC6...     

miR-181a-5p和BACH2表达对白血病CCRF-CEM细胞凋亡和侵袭的影响

目的：探讨微小RNA-181a-5p(miR-181a-5p)靶向BTB与CNC同源基因2 (BACH2对急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞凋亡和侵袭的调控作用,并阐明其作用机制。方法：体外构建BACH2过表达重组质粒(overExpBACH2)、miR-181a-5p inhibitor和inhibitor-NC,转染人ALL T淋巴细胞CCRF-CEM,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法和免疫荧光染色检测转染效果。将CCRF-CEM细胞分为对照组、 inhibitor-NC组、 miR-181a-5pinhibitor组、 BACH2过表达(overExpBACH2)组、 miR-181a-5pinhibitor+空载体(EV)组和miR-181a-5pinhibitor+overExpBACH2组。CCK-8法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测G2期细胞百分率和细胞凋亡率。Western blotting法检测各组细胞中细胞周期蛋白D3 (CyclinD3)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3 (Caspase-3...     

LncRNA SNHG7靶向调节miR-146a-5p对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和细胞凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因7(lncRNASNHG7)对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响及其分子机制.方法:培养人正常胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞NCI-N87、Hs-746T、NCI-SNU-16;将si-NC、si-SNHG7分别转染至 NCI-N87细胞中,记为 si-NC 组、si...     

LncRNA XIST通过miR-193a-3p/RSF1轴对骨肉瘤细胞增殖和迁移的作用研究

目的 研究长链非编码RNA X染色体失活特异转录本(lncRNA XIST)通过miR-193a-3p/重构剪切因子1(RSF1)轴对骨肉瘤细胞增殖、迁移的作用.方法 收集2017年9月至2018年12月滨州医学院烟台附属医院30例行骨肉瘤切除术获得的癌组织和癌旁组织,RT-qPCR检测癌组织和癌旁组织中lncRNA XIS T m RN A表达.采用脂质体转染法将sh-lncRN A XIS T重组质粒、空载质粒分别转至对数期生长的骨肉瘤HOS细胞,另取未做任何处理的HOS细胞为空白组.稳定转染48 h后,CCK-8法检测各组细胞培养24、48、72 h时的吸光度(A)值,划痕实验检测培养24 h时细胞的融合距离,荧光素酶报告基因实验检测LncRNA XIST、miR-193a-3p与RSF1之间的作用关系,RT-qPCR检测lncRNA XIST、miR-193a-3p、RSF1 mRNA表达,Western blot检测RSF1蛋白表达.结果 骨肉瘤组织中lncRNA XIST mRNA表达明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05).空白组、空载组及实验组A值随转染时间的延长而升高,差异有统计学意义(P<0.05).与空白组和空载组比较,实验组培养24、48、72 h后A值降低,融合距离缩短,lncRNA XIST、RSF1 mRNA表达降低,miR-193a-3p mRNA表达升高,RSF1蛋白表达降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 敲降ln-cRNA XIST可抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移能力,可能通过miR-193a-3p/RSF1轴发挥作用.     

miR-27a-3p调控XIAP表达对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-27a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的T-ALL Jurkat细胞分为未转染组(未处理)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p模拟物),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-27a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)蛋白表达水平,比色法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-27a-3p和XIAP的靶向关系.结果 与未转染组或miR-NC组比较,miR-27a-3p组细胞中miR-27a-3p表达水平、细胞凋亡率、细胞中Bax表达水平和caspase-3活性均明显升高,而细胞增殖活力和细胞中Bcl-2、XIA P蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);miR-NC组和未转染组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).DLR实验证实miR-27a-3p可与XIAP靶向结合.结论 miR-27a-3p可抑制T-ALL Jurkat细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控XIA P表达有关.     

miR-27a-3p调控XIAP表达对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨微小RNA(miR)-27a-3p对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的T-ALL Jurkat细胞分为未转染组(未处理)、miR-NC组(转染阴性对照miR-NC)和miR-27a-3p组(转染miR-27a-3p模拟物),采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞中miR-27a-3p表达水平,噻唑蓝(M T T)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和X染色体连锁的凋亡抑制基因(XIAP)蛋白表达水平,比色法检测细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3活性,双荧光素酶报告基因(DLR)实验检测miR-27a-3p和XIAP的靶向关系.结果 与未转染组或miR-NC组比较,miR-27a-3p组细胞中miR-27a-3p表达水平、细胞凋亡率、细胞中Bax表达水平和caspase-3活性均明显升高,而细胞增殖活力和细胞中Bcl-2、XIA P蛋白表达水平均明显降低(P<0.05);miR-NC组和未转染组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05).DLR实验证实miR-27a-3p可与XIAP靶向结合.结论 miR-27a-3p可抑制T-ALL Jurkat细胞增殖并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与靶向调控XIA P表达有关.     

苍耳亭通过调控LOXL1-AS1/miR-520d-5p轴对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨苍耳亭对白血病细胞的抗癌作用及其机制是否与调控长链非编码RNA（lncRNA）类赖氨酰氧化酶1反义RNA1（LOXL1-AS1）和微小RNA（miR）-520d-5p表达有关。方法 按转染细胞分组：对照组、苍耳亭6 μmol/L组、苍耳亭20 μmol/L组、苍耳亭60 μmol/L组、si-NC组、si-LOXL1-AS1组、苍耳亭+pcDNA-LOXL1-AS1组;采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡。实时定量PCR（RT-qPCR）检测LOXL1-AS1和miR-520d-5p表达;蛋白质印迹法检测B细胞淋巴瘤（Bcl）-2和Bcl相关x蛋白（Bax）蛋白表达。分别转染LOXL1-AS1小干扰RNA、LOXL1-AS1过表达载体至K-562细胞中,通过CCK-8法、流式细胞术、蛋白质印迹法分析干扰LOXL1-AS1表达或过表达LOXL1-AS1联合苍耳亭对K-562细胞增殖、凋亡以及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。双荧光素酶报告实验分析LOXL1-AS1和miR-520d-5p相互作用。结果 苍耳亭处理后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高（均P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达、LOXL1-AS1表达显著降低（均P＜0.05）。干扰LOXL1-AS1表达后K-562细胞增殖抑制率、凋亡率、Bax蛋白表达、miR-520d-5p表达显著升高（均P＜0.05）,Bcl-2蛋白表达显著降低（P＜0.05）。过表达LOXL1-AS1明显减弱苍耳亭处理对K-562细胞细胞增殖、凋亡以及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。LOXL1-AS1与miR-520d-5p直接结合。结论 苍耳亭可抑制白血病细胞增殖,诱导其凋亡,其机制可能与抑制LOXL1-AS1/miR-520d-5p轴有关。     

circVRK1/miR-18b-5p轴调控结直肠癌细胞增殖、迁移和凋亡

目的 探讨circVRK1/miR-18b-5p轴对结直肠癌细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应检测53例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中circ VRK1和miR-18b-5p表达。体外培养结直肠癌LoVo细胞,双荧光素酶报告基因实验验证circVRK1与miR-18b-5p的调控关系。分别转染pcDNA-circVRK1、miR-18b-5pinhibitor,或共转染pcDNA-circVRK1与miR-18b-5p mimic至LoVo细胞,采用CCK-8法、克隆形成实验、划痕实验、流式细胞术、蛋白质印迹法分别检测细胞增殖、迁移、凋亡、蛋白（cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2）表达。结果 结直肠癌组织中的circVRK1表达量显著低于癌旁组织（P<0.05）,miR-18b-5p表达量显著高于癌旁组织（P<0.05）。circ VRK1可靶向结合miR-18b-5p,且过表达circVRK1抑制LoVo细胞中miR-18b-5p的表达。过表达circVRK1或敲减miR-18b-5p后,LoVo细胞的抑制率、凋亡率、cleaved...     

miR-181b-5p调节EGR1/BIM通路对ALL细胞增殖、凋亡和迁移的影响

探讨miR-181b-5p在急性淋巴细胞白血病（ALL）中的作用及其潜在的分子机制。方法 采用qRT-PCR检测四川大学华西医院2019年1月—2021年1月80例ALL患者miR-181b-5p和早期生长反应因子1（EGR1） mRNA的表达水平。分别使用miR-181b-5p模拟物、miR-181b-5p抑制物或（和）EGR1过表达质粒转染人ALL细胞系NALM-6细胞。采用MTT、流式细胞仪和划痕愈合实验检测miR-181b-5p对细胞增殖、凋亡和迁移的影响。通过双荧光素酶验证miR-181b-5p和EGR1的相互作用关系。Western blot检测细胞中EGR1蛋白和细胞增殖、凋亡和迁移相关蛋白的表达水平。结果 miR-181b-5p在ALL中表达显著上调,EGR1表达下调（P＜0.05）。抑制miR-181b-5p不仅抑制细胞增殖、迁移,诱导细胞凋亡,而且上调EGR1和BIM蛋白表达（P＜0.05）;上调miR-181b-5p则具有与之相反的效果（P＜0.05）。EGR1是ALL细胞中miR-181b-5p的靶基因（P＜0.05）。miR-181b-5p过表达可明显削弱EGR1过表达对ALL细胞增殖、凋亡和迁移的影响（P＜0.05）。结论 抑制miR-181b-5p可通过靶向上调EGR1和BIM表达在ALL中抑制细胞增殖和迁移,促进细胞凋亡