索拉非尼对Hela细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:本实验研究索拉非尼对Hela细胞相关活性的影响,为该药物的临床应用提供理论依据.方法:我们通过MTT实验和Edu增殖实验研究索拉非尼对Hela细胞增殖能力的影响,分别通过划痕实验以及Transwell小室侵袭实验研究索拉非尼作用后Hela细胞迁移能力和侵袭能力的变化.结果:在MTT实验中5、10和20 μmol/L索拉非尼刺激48小时后Hela细胞的OD值均显著小于对照组(P<0.05).10 μmol/L药物刺激后Hela细胞的Edu阳性数量和比例均显著小于对照组(P<0.05).在细胞划痕实验中,药物组细胞的迁移能力显著减弱,空白划痕两侧的距离显著大于对照组(P<0.05).在Transwell小室侵袭实验中,药物组单个视野内的细胞数量显著少于对照组(P<0.01).结论:索拉非尼可以抑制Hela细胞增殖、迁移和侵袭能力,是一种对抗宫颈癌细胞活性的潜在药物.     

UBE2C对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的:研究泛素结合酶E2C（ubiquitin-conjugating enzyme E2C,UBE2C）在宫颈癌细胞中的表达情况,并明确UBE2C对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法:首先查阅GEPIA数据库,了解UBE2C在宫颈癌中的表达;其次通过qRT-PCR和Western blotting 法明确UBE2C在宫颈癌HeLa细胞及正常宫颈上皮细胞End1/E6E7中表达差异,然后分别构建si-UBE2C及si-NC转染宫颈癌HeLa细胞,检测转染后细胞中 UBE2C mRNA和蛋白表达;最后采用CCK-8 实验、细胞划痕实验及Transwell实验检测转染后细胞的增殖、迁移和侵袭能力的变化,并鉴定UBE2C下游靶基因PTEN、P-p53的表达情况。结果:UBE2C在宫颈癌中高表达,能够促进宫颈癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力,并下调抑癌基因PTEN、P-p53的表达。结论:UBE2C能够加重宫颈癌细胞恶性表型;UBE2C可能作为宫颈癌诊断及治疗的判定指标之一。     

PTEN C末端对鼻咽癌细胞迁移及增殖能力的影响

目的:研究PTEN C末端对鼻咽癌细胞迁移及增殖能力的影响。方法:采用荧光定量PCR实验检测PTEN mRNA在鼻咽癌细胞株HONE1、SUNE1、CNE1、CNE2、5-8F和鼻咽上皮细胞NP69中的表达情况。选择5-8F和HONE1细胞,用含有TGF-β1(5 ng/mL)的RPMI 1640培养基进行细胞培养,分别瞬时转染阴性对照(NC)、PTEN WT(野生型)和缺乏C末端结构的PTEN 1-353(突变体)质粒,并采用Western blot实验验证转染效率。转染成功后48 h,分别采用Transwell实验、CCK-8法细胞增殖实验检测PTEN WT和PTEN 1-353对鼻咽癌细胞株5-8F和HONE1细胞迁移、增殖的影响。结果:与NP69细胞相比,PTEN mRNA在鼻咽癌细胞中的表达水平明显降低(P<0.01)。与转染NC组比较,PTEN WT和PTEN 1-353均可以抑制TGF-β1诱导的鼻咽癌细胞的迁移(P<0.01),但此二组之间差异无统计学意义(P>0.05);PTEN WT和PTEN 1-353均可抑制TGF-β1诱导的鼻咽癌细胞增殖(P<0.05),且相比于PTEN WT,PTEN 1-353对鼻咽癌细胞增殖的抑制能力降低(P<0.01)。结论:PTEN C末端未参与鼻咽癌细胞的迁移过程,但可能与鼻咽癌细胞的增殖有关。     

miRNA-451在宫颈癌中的表达及对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡影响的作用机制研究

目的 探讨miRNA-451在宫颈癌中的表达及对宫颈癌Hela细胞增殖与凋亡影响的作用机制.方法 取60例宫颈癌患者的宫颈癌组织和相应的癌旁正常组织,定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miRNA-451的相对表达量,分析其与宫颈癌患者临床特征的关系.将宫颈癌Hela细胞随机分为miRNA-451-mimics...     

Glypican-3过表达对A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨glypican-3对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用glypican-3 cDNA瞬时转染A549细胞,Western blot方法检测转染前后glypican-3在A549细胞中的表达水平,分别采用MTT、流式和Transwell小室研究glypican-3 cDNA对A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用。结果转染后glypican-3在A549细胞中表达上调,细胞增殖和迁移能力增强,细胞凋亡率降低（均P〈0.05）。结论 A549细胞中glypican-3过表达促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,可能对A549细胞的生长和存活具有重要作用。     

沉默TUG1对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭的影响

目的:研究长非编码RNA牛磺酸上调基因1(Taurine-upregulated gene 1,TUG1)对宫颈癌Hela细胞增殖、凋亡、侵袭的影响.方法:通过RNA干涉技术沉默Hela细胞中TUG1的表达,通过荧光实时定量PCR(RT-QPCR)检测Hela细胞中TUG1的沉默效果;MTT法检测沉默TUG1对Hela细胞增殖的影响,流式细胞术检测TUG1对Hela细胞凋亡的影响,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果:TUG1-siRNA可有效沉默TUG1在Hela细胞的表达,沉默Hela细胞中TUG1的表达可以明显抑制Hela细胞的增殖及侵袭能力,而促进Hela细胞的凋亡能力.结论:TUG1在宫颈癌的进展及转移中发挥着重要作用.     

转染血管内皮生长因子C反义寡核苷酸对子宫颈癌Hela细胞增生和凋亡的影响

目的体外研究脂质体介导转染血管内皮生长因子C（VEGF—C）反义寡核苷酸（VEGF—C,ASODN）对子宫颈癌Hela细胞增生和凋亡的影响。方法实验组将VEGF—CASODN（优化筛选）用脂质体导人Hela细胞,设正义（SODN）和空白对照组进行比较。用荧光显微镜观察转染率,MTT比色法检测细胞增生,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期变化,RT—PCR、Western blotting法检测VEGF—C mRNA和蛋白的表达。结果经脂质体介导可成功将VEGF—C反义核酸转染至子宫颈癌Hela细胞;细胞的增生受到明显抑制,G2／M期细胞比例增多,转染作用48h时凋亡率最高,达（19．39±1．81）％;VEGF—C在mRNA和蛋白水平的表达均明显减少,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论体外转染VEGF—CASODN可在mRNA和蛋白水平下调Hela细胞VEGF—C的表达,阻滞并同步化细胞周期,抑制细胞增生,诱导细胞凋亡。     

转染血管内皮生长因子C反义寡核苷酸对子宫颈癌Hela细胞增生和凋亡的影响

Objective To explore effect on the proliferation and apoptosis of Hela cells in vitro by using vascular endothelial growth factor-C(VEGF-C) antisense oligonucleotides (ASODN). Methods VEGF-C ASODN was transfected into Hela cells by liposome-mediated; the cells transfected with the oligodeoxynuclecotide (SODN) and saline were used as control groups. The efficiency of transfection was detected by fluorescence microscope. The inhibitive rate of cell growth was detected with MTT methods. Apoptosis and cell cycle were evaluated using FCM. The mRNA expression of VEGF-C was determined by RT-PCR, and the expression of VEGF-C was determined by western blotting. Results VEGF-C ASODN had been transfected into Hela cells by liposome-mediated. The index of apoptosis after transfection 48 h was (19.39±1.81)%. G2/M phase cell increased after transfection, meanwhile the expression of VEGF-C degraded on the level of mRNA and protein (P<0.05). Conclusion Transfeeted with VEGF-C ASODN could down-regulate the expression of VEGF on the level of mRNA and protein, block the cell circle, inhibit cell proliferation and induce apoptosis in Hela cells in vitro.     

Ectopic expression of methionine aminopeptidase-2 causes cell transformation and stimulates proliferation

Methionine aminopeptidase-2 (MetAP2) processes N-terminal methionine from nascent cellular proteins. Inhibition of MetAP2 has been shown to block angiogenesis and suppress tumor growth in preclinical tumor models. However, the biological role of MetAP2 in cancer is not well understood. We examined the effect of three distinct chemical classes of MetAP2 inhibitors on the growth of a panel of human cancer cells in vitro. All MetAP2 inhibitors caused inhibition of tumor cell growth in both anchorage-dependent and, particularly, in anchorage-independent manner. These data prompted us to examine the possible roles of MetAP2 in cancers. Ectopic expression of MetAP2 in NIH-3T3 cells caused transformation, evidenced by the formation of foci in monolayer culture and growth of large colonies in soft agar. Overexpression of MetAP2 in an immortalized bronchial epithelial cell line NL20 accelerated growth. These phenotypes induced by the overexpression of MetAP2 were reversed by the treatment with MetAP2 inhibitors, indicating that the catalytic function of MetAP2 was essential. Accordingly, overexpression of a catalytically inactive MetAP2 resulted in growth retardation of HT1080 tumor cells, suggesting a dominant-negative role of the inactive MetAP2 mutant. Finally, we analysed the expression of MetAP2 in patient cancer samples by immunohistochemistry. Moderate-to-high staining was identified in the majority of breast, colon, lung, ovarian and prostate carcinomas examined. These data suggest that MetAP2 plays an important role in tumor cell growth and may contribute to tumorigenesis.     

未知基因KH的真核表达载体构建及其对细胞增殖的影响

目的 构建未知基因KH的开放阅读框架(KH-ORF)的真核表达体系,初步探讨未知基因KH对细胞增殖的影响。方法 采用DNA重组技术构建KH-ORF的表达载体pCI-neo-KH-ORF,通过脂质体法转染COS-7细胞和K562细胞,RT-PCR检测目的基因的表达。采用流式细胞术检测：KH-ORF对COS-7细胞和K562细胞周期的影响,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测KH-ORF对COS-7细胞增殖速度的影响,生长曲线与乳酸脱氢酶(LDH)活性测定检测KH-ORF对K562细胞增殖速度的影响。结果 (1)KH-ORF在COS-7细胞与K562细胞中获得表达。(2)KH-ORF对COS-7细胞的细胞周期与增殖速度无明显影响。(3)流式细胞术检测显示,KH-ORF使K562／pCi-KH-ORF细胞周期中S期细胞增多;生长曲线显示,KH-ORF促进K562／pCI-KH-ORF细胞增殖;LDH活性测定结果表明,K562／pCI-KH-ORF细胞LDH比活性上升,高于对照组细胞。结论 KH基因可能是一个与K562细胞增殖有关的白血病未知基因。     

CyclinG2抑制肿瘤细胞增殖的研究

背景与目的:周期蛋白(cyclin)是调节细胞周期活动的重要蛋白质,是细胞增殖的正调节因子。CyclinG2可能不同于其它周期蛋白,其表达可被DNA损伤和抑癌基因VHL诱导,对细胞增殖可能起负性调节作用。此外,我们在对口腔鳞癌进行基因表达谱研究时发现,癌组织中cyclinG2表达降低。本研究的目的是为了弄清cyclinG2表达究竟是促进还是抑制肿瘤细胞体外增殖。方法:应用RT-PCR扩增获得cyclinG2基因cDNA,将其插入到真核表达载体pIRESneo的BamHI和BstXI酶切位点处,获得重组表达质粒,命名为pIRES-G2。通过脂质体介导将pIRES-G2转染肿瘤细胞系HeLa,经G418筛选2周,观察细胞集落形成情况并计数形成的集落数。结果:实验组集落的数量显著少于对照组,而且所形成的集落大小也明显比对照组小,细胞皱缩、形态不规则,胞质内颗粒增多、出现空泡。pIRESneo空载体对照组的集落数为76.7±24.8;实验组的集落数为18±10.4,占对照组的23.4%。结论:CyclinG2基因高表达对HeLa细胞的体外增殖和生长有显著抑制作用。     

C10orf99在皮肤基底细胞癌中的表达及意义

目的:研究C10orf99在皮肤基底细胞癌中的表达及其意义.方法:应用免疫组化SP法检测32例皮肤基底细胞癌组织和20例正常皮肤组织中C10orf99的表达情况.结果:在正常皮肤组织中,C10orf99的阳性表达率为80.00％,而在皮肤基底细胞癌皮损中其表达明显下降,阳性表达率为9.38％,两组C10orf99的阳性表达率及表达强度差异均有统计学意义(P ＜0.001).结论:C10orf99在皮肤基底细胞癌中的表达明显低于正常皮肤组织,C10orf99的异常表达可能在基底细胞癌的发生发展过程中起作用.     

三七总皂苷抑制Hela细胞增殖的实验研究

目的:研究三七总皂苷(PNS)抑制宫颈癌Hela细胞增殖的可能机制。方法:MTT法检测不同浓度PNS作用于Hela细胞24、48和72hHela细胞增殖率;检测PNS作用于Hela细胞24h荧光素酶报告基因(LUC)的变化;蛋白质印迹法检测200μg/mL PNS作用于Hela细胞4E-BP1、S6K1、mTOR及其磷酸化水平变化;ELISA法检测PNS作用于Hela细胞24hVEGF的变化。结果:PNS可以明显抑制Hela细胞生长,随时间延长及PNS剂量增加抑制率明显增高;LUC相对光单位值(RLU值)明显低于对照组,其S6K1、4E-BP1、mTOR蛋白表达及其磷酸化水平均明显降低,200μg/mL PNS作用于Hela细胞24h后其VEGF表达明显降低,差异均有统计学意义,P值均<0.01。结论:PNS能抑制Hela细胞增殖,其机制可能是PNS阻断mTOR信号通路,降低mRNA翻译效率,抑制蛋白质翻译起始复合物形成,从而抑制Hela细胞增殖。     

Anxa5真核表达质粒构建及其对小鼠肝癌Hca—P细胞增殖影响观察

目的：构建pcDNA3。1-V5／HisB—Anxa5真核表达质粒,获得膜联蛋白A5（AnnexinA5,Anxa5）表达稳定上调的小鼠肝癌Hca—P细胞株,探究Anxa5上调对Hca—P增殖的影响。方法：利用RT—PCR扩增小鼠全长Anxa5编码序列,将其克隆到pcDNA3．1-V5／HisB载体中,并将构建的pcDNA3．1-V5／HisB-Anxa5表达质粒转入Hca—P细胞。采用（;418筛选及有限稀释法获得单克隆细胞株,观察细胞形态变化。蛋白质印迹法分析Anxa5表达情况,CCK-8法检测相应Hca—P细胞的增殖能力。结果：酶切及测序结果显示,pMD R 18-T—Anxa5克隆质粒和pcDNA3．1-V5／HisB-Anxa5表达质粒构建成功;获得了Anxa5表达稳定上调的单克隆细胞株;与正常Hca-P比较,Anxa5蛋白在pcDNA3．1一V5／HisB-Anxa5-Hca-P单克隆细胞中上调了59．5％,P一0．016;pcDNA3．1-V5／HisB～Anxa5-Hca—P增殖显著加快,P=0．002。结论：成功构建了Anxa5真核表达质粒并获得Anxa5表达稳定上调的小鼠肝癌Hca—P细胞株,Anxa5上调对Hca—P细胞的增殖具有促进作用,为后续研究提供实验基础。     

miR-502对宫颈癌Hela细胞增殖和转移的影响

目的 探讨miR-502对宫颈癌患者预后及其对宫颈癌Hela细胞增殖和转移的影响。方法 通过数据库分析miR-502表达与宫颈癌患者临床病理特征的关系及其对预后的影响。在Hela细胞中过表达miR-502-3p后,采用CCK-8检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。结果 数据库分析结果显示,高表达miR-502的宫颈癌患者总生存期更长,但与TNM分期无明显相关性。CCK-8检测结果显示,miR-502-3p类似物组细胞增殖率低于miR-502-3p抑制剂组[(78.82±1.41)% vs (124.06±7.72)%,P<0.05];Transwell 实验检测结果显示,miR-502-3p类似物组细胞迁移率较miR-502-3p抑制剂组低[(85.39±7.19)% vs (121.17±8.20)%,P<0.05],细胞侵袭率亦较低[(85.32±7.12)% vs (117.13±7.37)%,P<0.05]。结论 高表达miR-502的宫颈癌患者预后较好,可能与其抑制宫颈癌细胞增殖和转移有关。     

人类促红细胞生成素的生物学特性及对细胞增生的影响

随着重组人类促红细胞生成素（rhEPO）的问世及临床应用,为肿瘤相关性贫血的治疗提供了一条新途径。目前的临床研究证实了rhEPO作为输血的替代疗法对肿瘤相关性贫血治疗的有效性和安全性,但是人们却很少注意到rhEPO是否对肿瘤细胞本身的生物学特性产生一定影响,这直接关系到其在治疗肿瘤相关性贫血中的价值,因此,rhEPO对肿瘤细胞有无增生作用目前已成为关注的焦点。