X射线照射对人鼻咽癌细胞株MDR1及P-gp表达影响的研究

目的:探讨X射线照射前后鼻咽癌CNE-1细胞多药耐药基因(MDR1)及其糖蛋白(P-gp)的表达随时间变化情况,及其照射与鼻咽癌细胞多药耐药的关系.方法:对CNE-1细胞进行X射线照射.利用RT-PCR检测照射前后细胞MDR1的表达;Western blotting检测照射前后P-gp的表达;MTT法检测照射前后顺铂对细胞的半数抑制率.结果:MTT法检测照射前CNE-1细胞的IC28和35天的IG50值均比照射前增高,其值分别为(1.56±0.10)、(2.41±0.11)、(3.24±0.13)、(2.65±0.09)和(1.83±0.15)μg/mL; RT-PCR检测照射前CNE-1细胞MDR1的半定量值为0.47±0.02,照射后第7、14、21、28和35天MDR1的表达比照射前明显增高,其值分别为0.63±0.02、0.86±0.05、0.75±0.07、0.57±0.03和0.58±0.04;Western blotting检测照射前CNE-1细胞P-gp的半定量值为15.55±1.02,照射后第14、21天比照射前明显增高,其值分别为23.29±1.83、28.98V2.14.结论:X射线照射可引起CNE-1细胞MDR1及P-gp表达增强,同时CNE-1细胞对顺铂产生抵抗.     

X射线诱导人鼻咽癌细胞耐药基因表达变化的观察

目的:检测X射线照射前后鼻咽癌CNE-1细胞多药耐药基因(MDR1)、P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关基因(MRP)及其相关蛋白(MRP)的表达随时间变化的情况。方法:对CNE-1细胞进行X射线照射,总剂量20Gy。利用MTT法检测照射前后顺铂(DDP)对细胞的半数抑制率(IC50),RT-PCR、蛋白质印迹法分别检测照射前和照射第7、14、21、28、35天细胞的MDR1、MRP基因及P-gp、MRP蛋白的表达。结果:照射前CNE-1细胞的IC50值为(1.11±0.05)μg/mL,照射开始第7、14、21、28和35天的IC50值均比照射前增高,P<0.05。照射前CNE-1细胞MDR1和MRP的半定量值分别为0.47±0.02和0.41±0.02,照射开始第7、14、21、28和35天MDR1和MRP的表达比照射前明显增高,P<0.05。照射前CNE-1细胞P-gp和MRP的半定量值分别为15.55±1.02和55.48±1.91,照射开始第14、21、28和35天P-gp表达比照射前明显增高,第7、14、21、28和35天MRP表达比照射前明显增高,P<0.05。结论:CNE-1细胞X射线照射后...     

辐射对人鼻咽鳞癌CNE1细胞系HIF-1α及MDR1表达影响的研究

目的:建立辐射诱导的人鼻咽鳞癌CNE1/R细胞系,检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和多药耐药基因(MDR1)及P-糖蛋白(P-gp)的表达.方法:采用直线加速器对体外培养进入指数增长期的CNE1细胞进行外照射,输出剂量率2Gy/min,2 Gy/次,隔日1次,3次/周,累积总剂量50 Gy,取照射完成后培养21 d的细胞进行检测;以来照射CNE1细胞作为对照.利用RT-PCR检测照射前后HIF-1α及MDR1 mRNA的表达;蛋白质印迹法检测照射前后细胞HIF-1α及P-gp蛋白的表达.结果:RT-PCR法检测结果显示,未照射组与照射组鼻咽鳞癌细胞系CNE1中HIF-1α mRNA的半定量值分别为0.23±0.02和0.37±0.04 (t=5.42,P=0.01),MDR1 mRNA的半定量值分别为0.17±0.01和0.54±0.04(t=15.54,P=0.00),照射组较未照射组明显增高,P＜0.05;蛋白印迹法检测结果显示,未照射组与照射组鼻咽鳞癌细胞系CNE1中HIF-1α蛋白的半定量值分别为0.05±0.01和0.08±0.01(t=3.67,P=0.02),P-gp蛋白分别为0.01±0.01和0.04±0.01(t=3.67,P=0.02),照射组较未照射组明显增高,P＜0.05.结论:照射组人鼻咽鳞癌CNE1细胞系中HIF-1α和MDR1基因/P-gp蛋白表达均增高,提示核转录因子HIF-1α可能促进细胞内MDR1/P-gp的表达.     

X射线照射对鼻咽癌细胞多药耐药基因表达影响初步研究

目的 RT-PCR法研究累积高剂量X射线照射后多药耐药基因MDR1 mRNA表达随时间的变化趋势,并且探讨Bcl-2、MMP7与MDR1的关系.方法 选取人鼻咽鳞癌CNE1细胞系进行体外培养及X射线照射,累积剂量50 Gy.分别收集CNE1细胞和X射线照后得到的CNE1R细胞,利用MTT法检测CNE1、CNE1R细胞对顺铂的耐药性;RT-PCR技术检测MDR1 mRNA的表达.选取CNE1和MDR1 mRNA表达最高的一组CNE1R细胞检测Bcl-2、MMP7 mRNA的表达情况.结果 CNE1R细胞对顺铂产生耐药性.RT-PCR检测CNE1细胞MDR1 mRNA半定量灰度值为0.47±0.04,照射50 Gy后1、7、21、28、35、42、49 d的CNE1R细胞MDR1 mRNA半定量灰度值均高于CNE1细胞,分别为0.67±0.06(t=-5.44,P=0.003)、0.70±0.01(t=-5.90,P=0.002)、0.73±0.01(t=-6.45,P=0.001)、0.67±0.03(t=-3.97,P=0.011)、0.65±0.01(t=-4.43,P=0.007)、0.62±0.05(t=-2.64,P=0.046)、0.62±0.02(t=-3.34,P=0.021).RT-PCR法检测CNE1细胞和CNE1R细胞中Bcl-2 mRNA表达半定量灰度值不同,分别为0.55±0.02和1.05±0.04(t=-9.93,P=0.000);MMP7 mRNA表达半定量灰度值也不同,分别为0.51±0.01和0.82±0.02(t=-8.51,P=0.000).结论 X射线累积照射50 Gy后CNE1R细胞内MDR1基因表达高于照前CNE1细胞,可能与Bcl-2、MMP7基因表达的同步变化有关.     

X线照射对人鼻咽癌细胞株耐药基因及其蛋白表达的影响

[目的]检测X射线照射前后鼻咽癌CNE-1细胞多药耐药基因(MDR1)及其编码产物P糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白基因(MRP基因)及其编码产物多药耐药相关蛋白(MRP)的表达随时间变化的情况。[方法]对CNE-1细胞进行X射线照射,总剂量10Gy/(5d·5f)。利用RT-PCR检测照射前、照射开始后第7、14、21、28和35d细胞的MDR1、MRP基因的表达;Westernblotting检测照射前后P-gp、MRP的表达;MTT法检测照射前后顺铂(DDP)对细胞的半数抑制率(IC50)。[结果]CNE-1细胞X射线照射前MDR1、MRP基因、P-gp和MRP呈弱表达;照射后35d内耐药基因及蛋白表达均显著增高(P<0.05)。[结论]CNE-1细胞X射线照射后耐药基因(MDR1、MRP)及其蛋白(P-gp、MRP)表达显著增强,同时CNE-1细胞对顺铂产生抵抗。     

高剂量X射线对人鼻咽鳞癌CNE1细胞株HIF-1α表达影响的研究

目的:探讨高剂量X射线照射前后低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人鼻咽鳞癌CNE1细胞株中的表达情况。方法:体外培养人鼻咽鳞癌CNE1细胞株,待细胞进入对数生长期后行6MV X射线照射,照射方法为2Gy/次,隔日1次,共25次,累积剂量50Gy,收集照射前后细胞采用免疫荧光染色、RT-PCR和蛋白质印迹法检测高剂量X线照射前后CNE1细胞株中HIF-1α基因及其蛋白的表达。结果:照射前后HIF-1α基因的表达的半定量值分别为0.23±0.02和0.37±0.04,t=-5.422,P=0.006;其蛋白的表达的半定量值分别为0.05±0.01和0.08±0.01,t=-3.674,P=0.021;X线照射50Gy后HIF-1α在CNE1细胞中的表达比照前明显增高,P<0.05;共聚焦显微镜观察到X线照射50Gy后的CNE1细胞中绿色荧光强度高于照射前。结论:X射线照射可以引起HIF-1α在CNE1细胞中表达升高。     

高剂量X射线照射对人鼻咽癌CNE-1细胞生物学特性影响的研究

目的:分别以照射前的人鼻咽鳞癌CNE1细胞和高剂量X射线(50 Gy)照射后的CNE-1细胞为研究对象,探讨高剂量X射线照射后的CNE-1细胞的某些生物学特性的变化.方法:采用细胞毒实验(SRB法)检测两组细胞在化疗药物作用下的IC50值,RT-PCR测两组细胞MDR-1基因,共聚焦显微镜测P-gp蛋白,对比两组细胞的耐药性;MTT法测定两组细胞生长曲线,共聚焦显微镜检测Ki-67蛋白,比较两组细胞的生长增殖能力;采用细胞黏附实验比较两组细胞的黏附性,RT-PCR检测两组细胞PECAM-1基因的表达,探讨PECAM-1和细胞黏附的相关性.结果:照射后CNE-1细胞在多柔比星作用下的IC50值是照射前细胞的1.8倍(P=0.004),在紫杉醇作用下的IC50值是照射前细胞的5.3倍(P=0.003),两组细胞MDR-1基因半定量值分别为0.17±0.01和0.34±0.04(P=0.002),照射后细胞P-gp蛋白高表达于照射前细胞;在对数生长期时,照射后细胞生长快于照射前细胞,且其Ki-67蛋白表达高于照射前细胞;照射后细胞在各时间点的黏附率都明显高于照射前细胞,两组数值比较差异有统计学意义,P＜0.05;照射前后两组细胞PECAM-1基因的半定量值分别为0.40±0.02和0.51±0.01,P=0.002.结论:高剂量X射线照射后的CNE-1细胞产生耐药性;生长增殖能力及黏附特性高于照射前细胞,PECAM-1基因也高表达,Ki-67及PECAM-1均可能参与耐药.     

高剂量X射线对人鼻咽鳞癌ONE1细胞株HIF-1a表达影响的研究

目的：探讨高剂量X射线照射前后低氧诱导因子-1a（HIF-1a）在人鼻咽鳞癌CNE1细胞株中的表达情况。方法：体外培养人鼻咽鳞癌CNE1细胞株,待细胞进入对数生长期后行6MVX射线照射,照射方法为2Gy／次,隔日1次,共25次,累积剂量50Gy,收集照射前后细胞采用免疫荧光染色、RT—PCR和蛋白质印迹法检测高剂量X线照射前后CNE1细胞株中HIF-1a基因及其蛋白的表达。结果：照射前后HIF-1a基因的表达的半定量值分别为0．23±0．02和0．37±0．04,t=-5．422,P=0．006;其蛋白的表达的半定量值分剐为0．05±0．01和0．08±0．01,t=-3．674,P=0．021;X线照射50Gy后HIF-1a在CNE1细胞中的表达比照前明显增高,P〈0．05;共聚焦显微镜观察到X线照射50Gy后的CNE1细胞中绿色荧光强度高于照射前。结论：X射线照射可以引起HIF-1a在CNE1细胞中表达升高。     

沉默CtBP1基因逆转人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的多药耐药性

目的:探讨短发夹式RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰羧基末端结合蛋白1(C-terminal-binding proteins 1,CtBP1)基因表达是否可以逆转多药耐药基因1(multidrug resistant gene 1,MDR1)介导的人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)的多药耐药性.方法:采用脂质体转染法将特异性的shRNA1和shRNA2及非特异性的shRNAHK质粒转染入人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中,RT-PCR法检测各组细胞MDR1基因表达水平,Western印迹法检测各组细胞P糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)的表达,MTT法测定各组细胞对多柔比星的敏感性变化.结果:RT-PCR结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞中MDR1基因被抑制,基因表达抑制率约50%;Western印迹结果显示,shRNA1组和shRNA2组细胞P-gp蛋白的表达水平显著降低;MTT检测发现,shRNA转染48和72 h时shRNA1组和shRNA2组细胞对多柔比星的敏感性增加(P<0.01).结论:沉默CtBP1基因可抑制人子宫内膜癌耐药细胞株B-MD-C1(ADR+/+)中MDR1基因和P-gp蛋白的表达,降低细胞的耐药性.     

非小细胞肺癌P-gp、LRP、MRP和GST-π表达及其临床意义

目的:探讨P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药蛋白(LRP)、多药耐药相关蛋白(MRP)和谷光甘肽转移酶(GST-π)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其临床意义.方法:应用免疫组织化学S-P技术对86例治疗前非小细胞肺癌组织标本进行P-gp、LRP、MRP和GST-π表达的检测.结果: LRP和MRP在肺腺癌、鳞癌中的表达阳性率分别为77.78%、51.22%和80.00%、53.66%;LRP和MRP在不同组织类型中的表达有显著性差异(均P<0.05).P-gp和GST-π在肺腺癌和鳞癌中的表达阳性率分别为73.33% 、60.98%和80.00%、70.73%;P-gp和GST-π在不同组织类型中的表达无显著性差异(均P>0.05).所测4种耐药基因除P-gp外其余3种在中高分化和低分化组间表达阳性率有显著性差异(均P<0.01);4种耐药基因在TNM各分期中表达阳性率无显著性差异(均P>0.05).在肺腺癌和肺鳞癌中同时有2种、3种或4种耐药基因协同表达的阳性率分别为46.67%和34.15%、31.11%和24.39%、20.00%和17.07%,在肺腺癌和肺鳞癌中耐药基因共表达在各类型间无显著性差异(均P>0.05).结论:在非小细胞肺癌组织中存在不同程度的耐药,肺腺癌原发耐药高于肺鳞癌,其耐药是多途径多基因参与的过程.联合检测P-gp、LRP、MRP和GST-π耐药相关基因的表达,对化疗药物的选择及预后的评价具有重要的临床意义.