4-硝基喹啉-1-氧化物诱导小鼠食管鳞状细胞癌模型的研究进展

食管鳞状细胞癌(ESCC)是最常见的恶性肿瘤之一,预后较差。4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)是一种水溶性的喹啉衍生物,在体内可以成功诱导鳞状上皮细胞癌的产生。建立并优化4NQO诱导小鼠ESCC形成的实验方法可以为ESCC研究提供更适宜的原位模型。     

黑色素肿瘤抗原基因-1、3在直肠癌的表达及其意义

 目的　检测黑色素肿瘤抗原基因-1、3（MAGE-1、MAGE-3）在直肠癌中的表达,探讨其与直肠癌临床病理的关系及其在直肠癌免疫治疗中的应用价值。方法　采用RT-PCR法,对33例直肠癌患者的癌组织及其相应的癌旁组织和手术切缘（乙状结肠端）以及3例直肠息肉标本（无瘤）的MAGE-1、MAGE-3的表达情况进行检测,并对RT-PCR扩增产物中的目的基因片段进行DNA测序验证。结果　33例直肠癌组织中,MAGE-1基因的表达阳性率为30.30 %（10／33）,MAGE-3基因的表达阳性率为42.42 %（14／33）,MAGE-1、MAGE-3均表达的阳性率为21.21 %（7／33）,至少表达其中一种的阳性率为51.51 %;在癌旁组织和手术切缘组织中,MAGE-1基因的表达阳性率均为12.12 %（4／33）,MAGE-3基因的表达阳性率分别为18.18 %（6／33）、15.15 %（5／33）;3例直肠息肉标本未见MAGE-1、MAGE-3表达。肿瘤组织MAGE-1、MAGE-3基因表达阳性率均显著高于癌旁组织和手术切缘组织（P < 0.05）;而与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型、Duke分期及淋巴结转移无关（P > 0.05）。结论　基于MAGE-1、MAGE-3基因在直肠癌中的高表达率,MAGE-1、MAGE-3表     

稳定表达人MAGE-1基因小鼠黑色素瘤细胞系的建立

目的:构建真核表达载体,并在小鼠黑色素瘤B16细胞中稳定表达。方法:用PCR方法扩增质粒pUC19-MAGE-1中目的基因MAGE-1,连接到真核表达载体pCDNA3.1中,构建真核表达pCDNA3.1-MAGE-1,脂质体法转染小鼠黑色素瘤B16细胞。G418筛选阳性克隆(B16-MAGE-1),用RT-PCR和Western blot检测阳性克隆中mRNA和蛋白质的表达;分别以2×105个B16细胞和B16-MAGE-1接种于C57BL/6小鼠右侧背部皮下,观察B16-MAGE-1细胞的致瘤能力。结果:用PT-PCR与Western bolt分别在B16-MAGE-1细胞中检测到人MAGE-1基因的mNRA和蛋白质的表达,两组共20只小鼠均皮下成瘤,且肿瘤大小没有明显差异。结论:成功构建了真核表达载体pCDNA3.1-MAGE-1,获得了稳定表达人MAGE-1基因的小鼠黑色素瘤B16细胞系,并保持很好的致瘤能力,为研究MAGE家族在肿瘤免疫治疗中的应用奠定了基础。     

4-1BBL联合Hsp70-肿瘤抗原肽抑制小鼠黑色素瘤肺转移

背景与目的正调节性共刺激分子表达偏低是肿瘤逃避机体免疫系统攻击的重要原因之一,增加这些分子的表达是促进抗肿瘤免疫的研究热点。小鼠黑色素瘤B16-F1细胞株是弱免疫原性癌细胞株。本研究旨在观察4-1BBL联合Hsp70-抗原肽对小鼠黑色素瘤肺转移的抑制作用,并探讨其机制。方法建立小鼠黑色素瘤肺转移模型,Hsp70-B16抗原肽小鼠皮下免疫,同时从尾静脉注射4-1BBL表达质粒p4-1BBL。于接种后第17天,解剖小鼠取肺组织,解剖显微镜下计数黑色素瘤肺转移结节的数目,并检测小鼠部分免疫学指标及肝、肾功能。结果4-1BBL联合Hsp70-B16抗原肽治疗组小鼠黑色素瘤肺转移结节数降至50±8,明显少于二者单独治疗组的500±80和450±40;联合治疗组小鼠血清IL-2和IFN-γ的分泌水平分别增加了4倍和3倍,与对照组相比均存在显著性差异(P<0.01);单独应用4-1BBL基因或与Hsp70-B16抗原肽联合应用对小鼠肝、肾的功能均无明显影响。结论表达4-1BBL联合应用Hsp70-B16抗原肽主要通过增强外周T淋巴细胞功能活性而有效抑制小鼠黑色素瘤肺转移。     

协同刺激分子B7-H4在小鼠食管癌前病变中的表达

目的：研究协同刺激分子B7同系物4（B7-H4）在小鼠食管癌前病变中的表达变化,探讨其在食管鳞状细胞癌发生中的作用。方法：133只C57BL/6小鼠,分为对照组42只和诱癌组91只。诱癌组小鼠采用饮水法给予50 μg/mL 4-硝基喹啉-1-氧化物（4NQO）15周,诱导小鼠食管癌前病变。通过苏木素-伊红（HE）染色法评价食管组织病理变化;免疫组化和Western blot检测B7-H4蛋白在食管组织中的表达,Western blot检测B7-H4蛋白在小鼠血清中的表达。结果：从16~28周,4NQO诱癌组小鼠食管组织出现肉眼可见的增厚、凸起、肿块等病理改变。HE染色结果显示,小鼠食管组织癌前病变级别与诱癌时间呈正相关（r=0.55,P < 0.01）。另外,B7-H4在食管组织的表达水平与食管癌前病变级别呈正相关（r=0.57,P < 0.01）。与对照组相比,第26周和第28周诱癌组小鼠食管组织B7-H4蛋白表达显著升高（P < 0.05或P < 0.01）。与正常小鼠相比,高级别上皮内瘤变小鼠血清B7-H4蛋白浓度显著升高（P < 0.05）。结论：小鼠食管癌前病变进程中,B7-H4蛋白在血清和食管组织中表达上调,B7-H4可能参与了食管癌前病变的进程。     

腺病毒转染黑色素瘤抗原基因3的树突状细胞疫苗抗胃癌的免疫效应

目的 研究趋化因子巨噬细胞炎症蛋白1α(MIP-1α)动员的树突状细胞(DC),经黑色素瘤抗原基因3(MAGE-3)腺病毒转染后对胃癌细胞的免疫效应.方法 615小鼠尾静脉注射MIP-1α,分选得到B220-CD11c+细胞,加入细胞因子连续培养,检测其细胞表面标志和混合淋巴细胞反应(MLR).收集培养后的B220-CD11c+细胞,加入编码MAGE-3的重组腺病毒进行转染,制备表达肿瘤抗原的DC疫苗,以荷载小鼠前胃癌(MFC)全肿瘤细胞抗原制备的DC疫苗作为阳性对照.采用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法,榆测活化的T淋巴细胞在体外对MFC细胞的杀伤作用.采用酶联免疫吸附试验(ELISA),检测γ干扰素(INF-γ)的分泌情况.DC疫苗皮下注射MFC荷瘤小鼠,观察小鼠瘤体生长情况和存活时间.结果 MIP-1α注射后,外周血中B220-CD11c+细胞明显升高.新鲜分离的B220-CD11c+细胞在体外经过细胞因子诱导分化后具有典型的DC表面标志,并在MLR中具有极强的刺激T淋巴细胞增殖的能力.腺病毒转染MAGE-3的DC激活的T淋巴细胞表现出对MFC细胞的特异性杀伤作用,产牛高水平的INF-γ[(1460.00±16.82)ps/ml].实验组荷瘤小鼠接受DC疫苗治疗后,肿瘤牛长缓慢,观察至MFC细胞接种后的第27天,其肿瘤体积仅为(3.46±1.12)cm3;实验组小鼠的肿瘤体积与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.01).实验组小鼠存活时间明显延长,与对照组之间的差异有统计学意义(P<0.01).结论 注射趋化因子MIP-1α可快速动员并诱导分化为成熟DC.肿瘤抗原基因MAGE-3经腺病毒转染制备的DC疫苗,在体外可以诱导出针对胃癌细胞的特异性杀伤作用,在体内对MFC荷瘤小鼠有明显的免疫治疗作用.     

胃癌和癌旁黏膜中ST—4—39抗原表达的研究

目的 检测胃癌和癌旁黏膜中ST-4-39抗原的表达,并探讨其表达与胃癌生物学特性的关系。方法 标本包括10例正常黏膜、20例肠化生黏膜、45例癌旁不典型增生黏膜和79例胃癌组织。采用S-P法免疫组织化学技术检测各种组织中ST-4-39抗原的表达。结果 胃癌中ST-4-39抗原阳性率为68.4％(54/79),高于不典型增生组的48.9％(22/45,P<0.05)和肠上皮化生组的30.0％(6/20,P<0.01),胃正常黏膜和肉瘤中ST-4-39抗原呈阴性表达。ST-4-39抗原表达阳性率与肿瘤大小、大体分型和浆膜侵犯无关(P>0.05)。而与癌分化程度、淋巴结状态和Lauren分型相关(P<0.05)。结论 ST-4-39抗原可作为一种新的肿瘤标志物,用于胃癌和癌前病变的研究。检测ST-4-39抗原的表达对评价胃癌的早期发生、发展和预后是有价值的。     

黑色素瘤抗原基因在胃癌组织中表达的研究

目的 :探讨黑色素瘤抗原 (MAGE)基因在胃癌组织中的表达 ,为应用MAGE基因产物对胃癌患者进行特异性抗肿瘤免疫治疗提供理论依据。方法 :用逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 30例胃癌组织及相应癌旁组织中MAGE 1、MAGE 2和MAGE 3基因的表达。结果 :30例胃癌组织标本MAGE 1、MAGE 2和MAGE 3基因的表达率分别为 4 6 7%、30 0 %和 36 7% ,有 2 0例至少表达其中 1种基因 ,而相应的癌旁组织均不表达MAGE。结论 :MAGE基因在胃癌组织中有较高的表达率 ,其编码蛋白有望作为疫苗用于胃癌患者的免疫治疗     

4-硝基喹啉-1-氧化物诱导食管鳞状细胞癌发生的研究进展

食管鳞状细胞癌(ESCC)是一种常见且预后较差的恶性肿瘤,其发病机制尚未完全明确。建立ESCC模型,研究ESCC发病机制,对于降低ESCC的发病率和病死率具有重要意义。4-硝基喹啉-1-氧化物(4NQO)是一种肿瘤诱导剂,已广泛用于口腔癌的研究,而在ESCC研究中的应用还较少。因此,本文就4NQO体内代谢特点、诱导ESCC模型及诱癌机制的相关文献进行综述,以期为食管癌的防治提供一些新的研究线索。     

MAGE-1与人HSP70融合基因真核表达载体的构建及在小鼠黑色素瘤细胞内的表达

目的:构建MAGE-1(melanomaantigen1)与人HSP70(heatshockprotein70)融合基因的真核表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70,并观察在小鼠黑色素瘤细胞内的表达,为肿瘤DNA疫苗研究奠定基础。方法:HSP70基因经酶切后连入真核表达载体PIRES2-EGFP,再通过PCR方法扩增MAGE-1基因,测序后插入PIRES2-EGFP-HSP70中HSP70基因的5'端,构建了MAGE-1与人HSP70融合基因表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70。结果:扩增了MAGE-1基因,测序结果表明与GenBank公布的序列一致,成功地构建了PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70真核表达载体。结论:成功地构建MAGE-1与人HSP70融合基因的真核表达载体PIRES2-EGFP-MAGE-1-HSP70,并在小鼠黑色素瘤细胞系稳定表达,为进一步DNA肿瘤疫苗研究提供了实验基础。     

喉鳞癌组织MAGEA1和MAGEA3蛋白表达及其生物学意义的研究

目的:检测黑色素瘤抗原基因MAGEA1和MAGEA3在喉鳞癌组织中的表达,探讨其作为喉癌免疫治疗靶标的可行性及其与喉癌生物学行为的关系。方法:采用免疫组化PV9000两步法检测69例喉鳞癌原发灶及其常规病理报告为阳性的121枚颈淋巴结中MAGEA1和MAGEA3的表达,同时采用蛋白质印迹法检测其在喉癌标本的癌中心区(TC),癌周0.5和1.0 cm及9例喉正常黏膜组织中的表达,并结合临床病理资料进行分析。结果:69例喉鳞癌组织中,MAGEA1蛋白的阳性表达率为58.0%(40/69),MAGEA3蛋白的阳性表达率为29.0%(20/69)。两种蛋白在癌中心区,癌周0.5和1.0 cm区中的表达逐渐下降(P<0.05),9例喉正常黏膜组织中无表达。MAGEA1和MAGEA3表达与肿瘤的T分期无关(P>0.05),MAGEA1蛋白的表达与病理分级相关(P<0.05),伴淋巴结转移的患者MAGEA3的表达率高于未转移者(P<0.05),颈转移淋巴结中两种蛋白的表达均下调。结论:MAGEA1和MAGEA3在喉鳞癌组织中特异高表达,可能以某种方式参与了喉癌的发生、发展,是进行喉癌免疫治疗的理想靶分子之一。     

An orthotopic nude mouse model of oral tongue squamous cell carcinoma.

PURPOSE: Despite advances in our understanding, prevention, and treatment of head and neck squamous cell carcinoma (SCC), the 5-year survival rates for patients remain low. This poor prognosis for head and neck SCC and SCC of the oral tongue (SCCOT) in particular reflects a limited understanding of the mechanisms of local and regional metastasis, which accounts for a majority of deaths. To analyze the molecular and cellular mechanisms of metastasis, we have developed an orthotopic nude mouse model of SCCOT. EXPERIMENTAL DESIGN: Nude mice were injected submucosally in the tongue or subcutis with human squamous cell carcinoma of the oral cavity cell lines Tu159, Tu167, and MDA1986. The mice were necropsied and examined for the presence of primary tumors, and regional and systemic metastases. RESULTS: For all three of the squamous cell carcinoma of the oral cavity cell lines, tumors developed more readily in the orthotopic site, the tongue, than in the ectopic subcutis. MDA1986 cells were highly tumorigenic, particularly at the orthotopic site, with as few as 5 x 10(3) cells producing tumors in all of the mice. In contrast, s.c. tumor formation required at least 1 x 10(5) cells. The tumorigenicity observed between those mice given submucosal inoculation and those mice given s.c. inoculation (P < 0.0001). Regional metastases initially occurred in <10% of mice. To generate tumor lines of increased metastatic potential, regional metastases were isolated from cervical lymph nodes after the development of orthotopic tongue tumors. Serial passage of these lymph nodes resulted in a cell line more metastatic than its parental line. When injected into the tongues of mice, these cells metastasized to regional lymph nodes in 30% of mice and to the lungs in 20%. CONCLUSIONS: In this orthotopic murine model, oral tongue cancer recapitulates the behavior of human SCCOT, allowing for detailed studies of its biology and therapy.     

Neoangiogenesis and squamous cell carcinoma of the tongue

The relationship between neoangiogenesis and prognosis was investigated in 51 patients with surgically resected squamous carcinomas of the tongue. Twenty-six patients had lymph node metastases treated by radical neck dissection. Potential methodological sources of variation in vascular counts were examined. Vessels were immunolabeled for CD34, and the vessel counts (VC)--as well as the vessel counts adjusted for tumor area (VV)--were obtained in the most vascular parts of the carcinomas. Vascular hot spots were distributed throughout the carcinomas. The VC per hot spot increased with increasing size of carcinoma, and was higher in the resected carcinoma than in the diagnostic biopsy in four of eight cases. VC was not related to the growth pattern of the carcinoma or to metastasis, but patients with nodal metastases tended to have a lower VV than those with no metastases (p = 0.049). The tumor-specific survival of the whole group was 59%, and patients with nodal metastases had a shorter survival than those without metastases (p = 0.008). Cox's proportional hazards model demonstrated that carcinomas with a low VC tended to have a good prognosis (p = 0.023). The results from this relatively small series of cases support the hypothesis that some measures of neoangiogenesis are independent predictors of the spread and prognosis of lingual carcinomas. The variations in methodology among different studies currently preclude an accurate assessment of the prognostic significance of neoangiogenesis.     

microRNA在舌鳞状细胞癌中的研究进展

舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma,TSCC)是一种常见于颌面部恶性程度较高的肿瘤,其发病机制较为复杂,具有较高的恶性程度,复发和转移常导致其预后较差。研究发现,microRNA表达谱可以作为可靠稳定的生物学指标,对肿瘤进行早期诊断和预后判断。本文依据最近该领域研究进展就microRNA的特点,与肿瘤的关系以及在舌鳞状细胞癌中的研究作一综述。     

舌鳞状细胞癌的第二原发癌

目的评价口腔舌鳞状细胞癌中第二原发癌的发生及预后.方法回顾性分析1975～2000年329例口腔鳞状细胞癌患者的临床资料,生存患者的最短随诊时间为36个月.结果28例患者发生29个第二原发癌,其发生率为8.5%(28/329),其中包括2个同时第二原发癌(6.9%)、27个异时第二原发癌(93.1%).自舌癌确诊到异时第二原发癌确诊的平均时间为101(17～266)个月.23(79%)个第二原发癌发生于上气消化道,而食管是最常见的发生部位.发生于Ⅰ期病变9(11.8%)例、Ⅱ期病变10(10.8%)例、Ⅲ期病变9(6.7%)例,无一例发生于Ⅳ期病变,在临床分期之间,第二原发癌的发生率无明显区别.发生于T1病变11(13.4%)例、T2病变17(8.9%)例,无一例发生于T3和T4病变,在T1和T2病变间,第二原发癌的发生率无明显区别.在随诊期间,9例患者生存,19例患者死亡,其中死于第二原发癌14例.结论口腔舌鳞状细胞癌的第二原发癌并非不常见,食管为最常见的发生部位.第二原发癌易于发生在舌癌的早期病变,其预后较差.