食管鳞状细胞癌组织Bin1基因启动子甲基化状态及其临床意义

目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer,ESCC)患者的食管鳞癌组织、癌旁组织中Bin1基因启动子甲基化状态及其mRNA的表达及其临床意义.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别检测58例经病理证实的ESCC患者的食管鳞癌组织、癌旁组织中Bin1基因mRNA的表达情况;用甲基化特异性PCR(MSP)检测上述食管鳞癌组织中Bin1基因启动子甲基化状态,比较ESCC患者Bin1甲基化状态与临床病理分期的关系.结果:ESCC组织中Bin1基因启动子甲基化率明显高于癌旁组织(58.62％ vs 25.86％,x2=12.76,P＜0.01),Bin1甲基化状态与患者TNM分期、肿瘤侵润深度、分化程度、淋巴结转移相关(均P ＜0.05).ESCC组织中Bin1 mRNA的表达水平明显低于癌旁组织[(0.78 ±0.05) vs (1.03±0.03),t=9.643,P＜0.01)];发生Bin1甲基化的组织中Bin1 mRNA表达水平明显低于未发生甲基化的组织[(0.68±0.04) vs (0.85±0.07),t=2.476,P＜0.05].结论:Bin1基因启动子区甲基化状态可能与ESCC的发生密切相关,它是ESCC中Bin1 mRNA低表达或缺失的机制之一,且与ESCC进展和淋巴结转移有关.     

miR-6803和PPP6R1在食管鳞状细胞癌组织和细胞中的表达及其甲基化状态与患者临床病理特征的关系

目的:探讨微小RNA-6803(miR-6803)及其宿主基因蛋白磷酸酶6调节亚单位1(protein phosphatase 6 regulation subunit 1,PPP6R1)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达和PPP6R1基因启动子区甲基化状态及其在ESCC发生及发展中的作用.方法:采用2013年至2014年间河北医科大学第四医院生物标本库的72例ESCC手术患者癌组织及对应的癌旁组织标本,用实时荧光定量PCR法检测miR-6803和PPP6R1在ESCC组织及其癌旁组织和DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理前后的ESCC细胞株TE1、TE13、Eca109、T.TN、Kyse170中的表达水平.用甲基化特异性PCR(MSP)法检测ESCC细胞系和组织及其癌旁组织中PPP6R1的甲基化状态,分析其与患者临床病理特征的关系.结果:ESCC组织中miR-6803和PPP6R1的表达水平显著低于癌旁组织(0.318±0.156,0.408±0.177 vs 1.000±0.001,均P＜0.05),miR-6803表达水平与淋巴结转移、组织分化程度及TNM分期密切相关(均P＜0.05);PPP6R1表达水平与TNM分期和组织学分化程度密切相关(均P＜0.05).ESCC组织中miR-6803和PPP6R1基因的表达具有显著相关性(P＜0.05).ESCC组织中PPP6R1的启动子区甲基化率显著高于癌旁组织(56.94％ vs 36.11％,P＜0.05),并与TNM分期和组织学分化程度密切相关(均P＜0.05),miR-6803-和PPP6R1基因的低表达与PPP6R1启动子区甲基化明显相关(P＜0.05).经5-Aza-dC处理后,5种ESCC细胞中miR-6803和PPP6R1的表达均升高,并且TE1、TE13、Kyse170细胞中PPP6R1基因甲基化程度降低,非甲基化程度增加,其余2种细胞中PPP6R1基因均表现为非甲基化状态.结论:miR-6803及其宿主基因PPP6R1的低表达可能与ESCC的发生发展密切相关,其启动子区甲基化可能是miR-6803和PPP6R1表达沉默的机制之一.     

宫颈癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化对其表达水平的影响及临床意义

目的 研究宫颈癌组织中RAS相关区域家族1A基因(RASSF1A)启动子甲基化水平和RASSF1A基因mRNA表达水平,分析其与宫颈癌临床病理参数的关系及临床意义.方法 收集40例宫颈癌组织及相应癌旁组织,采用巢式特异性甲基化方法检测RASSF1A基因启动子甲基化水平,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌和癌旁组织中RASSF1A基因mRNA表达水平.结果 宫颈癌组织中RASSF1A基因mRNA表达水平(0.26±0.05)显著低于癌旁组织(0.28±0.03),差异有统计学意义(t=2.27,P=0.026);宫颈癌组织中RASSF1A基因启动子区的甲基化率(0.71%±0.04%)显著高于癌旁组织(0.66%±0.03%),差异有统计学意义(t=6.78,P=0.000);RASSF1A基因mRNA表达水平与病理分化程度(t=3.31,P=0.002)、国际妇产科联合会(FIGO)分期(t=2.13,P=0.040)、淋巴结转移(t=2.56,P=0.015)、浸润深度(t=2.93,P=0.006)有关;RASSF1A基因启动子区的甲基化水平与病理分化程度(t=2.08,P=0.045)、FIGO分期(t=2.66,P=0.011)、淋巴转移(t=2.22,P=0.033)、浸润深度(t=2.12,P=0.041)有关.结论 宫颈癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化和RASSF1A基因mRNA的表达水平与宫颈癌的恶性程度相关,RASSF1A基因甲基化水平有望成为宫颈癌转移风险的重要指标.     

贲门腺癌中转化生长因子βⅡ型受体基因启动子区高甲基化及其与TGF-β1表达的相关性分析

目的:探讨贲门腺癌中转化生长因子-βⅡ型受体(transforming growth factor-beta receptor type 2,TGFBR2)基因启动子区的甲基化状态及其与TGF-β1蛋白表达之间的相关性.方法:分别应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)、RT-PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织中TGFBR2基因启动子区甲基化情况、TGFBR2 mRNA和蛋白表达情况,并应用免疫组织化学法检测相应组织中TGF-β1的蛋白表达情况.结果: TGFBR2基因在贲门腺癌组织中甲基化率为47.3%(52/110),显著高于癌旁正常组织(P<0.01);Ⅲ期和Ⅳ期贲门癌患者中TGFBR2基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05);TGFBR2基因在高、中、低分化的贲门癌组织中甲基化率差异亦有统计学意义(P<0.05).贲门癌组织中TGFBR2 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05)且与其甲基化状态之间有明显的相关性(P<0.01).TGF-β1在贲门癌组织中的表达(65.5%)明显升高,与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.01),且随着肿瘤分期的增高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高(P<0.05).TGFBR2和TGF-β1蛋白在贲门腺癌中的表达呈明显的负相关(P<0.05).结论:TGFBR2受体基因启动子区的高甲基化及其TGF-β1的过表达可能均参与了贲门腺癌的发生发展过程.TGFBR2基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一.     

肝细胞癌ASC基因启动子区甲基化及其mRNA表达研究

目的:探讨肝细胞肝癌(HCC)ASC基因启动子区甲基化与mRNA表达及其临床病理特征的关系.方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和实时荧光定量PCR技术,检测58例肝细胞癌及其相应癌旁组织、15例肝硬化肝组织、5例慢性病毒性肝炎肝组织和5例正常肝组织中ASC基因启动子区甲基化状态及其mRNA的表达水平.结果:58例肝细胞癌组织中有40例(69.0%)发生ASC基因启动子区甲基化,其相应癌旁组织中有27例(46.6%)发生该基因启动子区甲基化,而在肝硬化、肝炎和正常肝组织中均未检测到该基因启动子区甲基化.ASC基因在肝细胞癌组织中甲基化频率高于其相应癌旁组织(P=0.015).ASC基因启动子区甲基化与肿瘤直径(P=0.001)、生长方式(P=0.003)以及国际抗癌联盟第6版TNM(TNM6)分期(P=0.001)有关.以ASC基因在正常肝组织中的表达量为参照,58例肝细胞癌组织中有33例出现ASC基因mRNA低表达或表达缺失,其相应癌旁组织中有14例出现低表达或表达缺失,而在肝硬化及肝炎肝组织中ASC基因mRNA均呈正常表达.与癌旁组织相比,肝细胞癌组织中ASC基因mRNA表达明显下调(P<0.05).在发生ASC基因启动子区甲基化的40例肝细胞癌组织中有26例出现mRNA低表达.结论:ASC基因启动子区甲基化是肝细胞癌中的频发事件,可能在肝细胞癌的进展中起重要作用.     

包含氧化还原酶的WW结构域基因甲基化与食管鳞状细胞癌的关系

目的：研究食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）包含氧化还原酶的WW结构域（WW domain containing oxidoreductase,WWOX）基因启动子甲基化及mRNA的表达与ESCC发生发展的关系。方法：采用改进的甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）和RT-PCR技术检测69例ESCC组织及48例相应癌旁正常组织中WWOX基因的DNA甲基化和mRNA表达情况。结果：ESCC组织中WWOX基因启动子的甲基化发生率为26.1%（18/69）,显著高于癌旁正常组织4.2%（2/48）（P=0.002）;Ⅲ、Ⅳ期食管癌患者中WWOX基因甲基化发生率（43.3%,13/30）显著高于Ⅰ、Ⅱ期（12.8%,5/39）（P=0.004）;低分化癌组的甲基化发生率（33.3%,4/12）高于高分化（20.0%,3/15）和中分化组（26.2%,11/42）,但其差异均无统计学意义（P〉0.05）。ESCC组织中WWOX基因mRNA的相对表达量比相应癌旁正常组织低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。ESCC组织中WWOXmRNA的相对表达量与临床病理因素无明显相关关系（P〉0.05）。结论：WWOX基因启动子甲基化可能与ESCC的形成和进展有关。     

食管鳞癌中DACT2基因表达及甲基化状态研究

[目的]检测食管鳞状细胞癌(ESCC)中DACT2基因表达及启动子区甲基化状态,探讨DACT2基因在食管鳞癌发生发展中的作用.[方法]分别应用逆转录—聚合酶链反应(RTPCR)以及甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-dC)处理前后的食管癌细胞系(TE1、TE13、T.Tn、Eca109)以及食管鳞癌组织及相应癌旁组织中DACT2 mRNA表达情况及启动子区甲基化状态.[结果]经5-aza-dC处理后4种食管癌细胞系中DACT2基因的表达均增高.4种未经5-aza-dC处理的食管癌细胞系中DACT2基因呈高甲基化状态.应用5-aza-dC处理后,DACT2基因在4种细胞系中均呈非甲基化状态.DACT2基因在食管鳞癌组织中的表达显著低于癌旁组织(0.66±0.53 vs 0.95±0.64,t=-2.43,P=0.018),并与淋巴结转移密切相关(t=-2.030,P=0.048).食管鳞癌组织中DACT2基因的启动子区甲基化率显著高于癌旁组织(50.0％ vs 21.1％,x2=9.439,P=0.002),并与TNM分期、组织学分化程度和淋巴结转移密切相关(P均＜0.05).发生DACT2基因甲基化的食管鳞癌组织中DACT2基因的表达量显著低于未发生甲基化的食管鳞癌组织(0.46±0.32 vs 0.78±0.61,t=-2.341,P=0.023).[结论]DA CT2基因在食管鳞癌中的异常低表达与食管鳞癌的发生、发展密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一.     

PCNA、EGFR、TGFβRⅠ和TGFβRⅡ在胃癌组织中表达的临床意义

目的:通过检测胃癌和癌旁组织中的增殖细胞核抗原(PCNA)、表皮生长因子受体(EGFR)、转化生长因子βⅠ型和Ⅱ型受体(TGFβR Ⅰ和TGFβRⅡ),探讨表达的临床意义.方法:采用免疫组织化学SP法检测38例手术切除的胃癌实质组织和癌远侧切端正常胃组织中PCNA、EGFR、TGFβRⅠ和TGFβRⅡ的表达.分析采用t检验、x2检验和精确概率法.结果:胃癌组织与癌旁正常组织比较,PCNA标记指数和EGFR阳性率升高,TGFβR Ⅰ和TGFβRⅡ的阳性率降低,差异有显著性(P＜0.05);经统计学处理,有浆膜外侵者PCNA的标记指数高于无浆膜外侵者,有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者,差异有显著性(P＜0.05);EGFR的表达升高,TGFβR Ⅰ和TGFβRⅡ的表达降低,但统计学处理差异没有显著性(P＞0.05).结论:PCNA、EGFR的高表达和TGFβR Ⅰ、TGFβRⅡ的低表达可能与胃癌的发生及其恶性进展有关.     

食管鳞状细胞癌中CDH1基因启动子区甲基化状态与β-catenin异质表达的相关性

目的:研究食管鳞状细胞癌(Esophageal Squamous Cell Cancer,ESCC)中CDH1(cadherin 1)基因的甲基化状态,探讨其与Wnt中心因子β-catenin表达及与食管鳞癌发生的关系.方法:应用甲基化特异性PCR(MSP)及RT-PCR的方法检测91例食管鳞癌中CDH1基因的甲基化状态及其mRNA表达情况,应用免疫组织化学的方法检测β-catenin蛋白的表达情况,并分析与临床病理参数间的关系.结果:在91例食管鳞癌中,有72例CDH1基因发生了甲基化,甲基化率为79.1%,明显高于癌旁非肿瘤组织(P＜0.01);癌组织中CDH1基因的高甲基化与肿瘤患者的临床分期相关,与病理分级无关;癌组织中该基因mRNA的阳性表达率42.9%,明显低于癌旁非肿瘤组织(97.8%,P＜0.01);癌及癌旁组织中β-catenin蛋白的异质表达率分别为89.0%和24.2%,差异均有统计学意义(P＜0.01):癌组织中CDH1基因mRNA表达及β-catenin蛋白的异质表达均与该基因的甲基化状态明显相关(P＜0.05).结论:CDH1基因启动子区甲基化在食管鳞癌中频繁发生,该基因的高甲基化状态可能是引起食管鳞癌发生的分子机制之一,并有可能通过Wnt/β-catenin信号传导通路发挥作用.     

肺鳞癌组织中TβRⅡ、Smad7的表达及其相关性

[目的]评价转化生长因子βⅡ型受体（TβRⅡ）及Smad7在肺鳞癌组织中表达及其相关性。[方法]用Western blot法检测18例肺鳞癌癌组织及癌旁组织中TβRⅡ和Smad7的表达。[结果]TβRⅡ在癌组织的表达为癌旁组织的0.73倍（P〈0.05）,Smad7在癌组织表达是癌旁组织的3.6倍（P〈0.05）。肺鳞癌组织Smad7和TβRⅡ表达呈负相关（r=-0.9173,P〈0.05）。[结论]TβRⅡ低表达及Smad7过表达与肺鳞癌的发生密切相关。     

长链非编码RNA XLOC_002319在食管鳞癌中表达及其甲基化状态

目的:通过检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)中长链非编码RNA XLOC_002319(long non-colding RNA XLOC_002319,lncRNA XLOC_002319)基因的表达及其甲基化状态,探讨XLOC_002319基因在ESCC发生及发展中的作用.方法:分别应用RT-PCR以及甲基化特异性PCR(methylation specific PCR,MSP)的方法检测DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine,5-aza-dC)处理前后的食管癌细胞株(TE1、TE13、Yes-2、Eca109和T.TN)、ESCC组织以及癌旁正常组织、食管上皮内瘤变(esophageal intraepithelial neoplasia,EIN)组织中XLOC_002319基因的表达和甲基化状态.结果:未经5-aza-dC处理的5种食管癌细胞中XLOC_002319基因的表达均呈阴性或弱阳性,经5-azadC的5种食管癌细胞中XLOC_002319基因的表达均增高.5株食管癌细胞在5-aza-dC处理前表现为XLOC_002319高甲基化状态,处理后,Eca109和T.TN细胞系中XLOC_002319基因甲基化程度降低,其余3株细胞系中XLOC_002319基因均表现为非甲基化状态.XLOC_002319基因在ESCC组织中的表达显著低于食管上皮内瘤变组织和癌旁正常组织(P＜0.01),并与组织学分化程度和TNM分期密切相关(P＜0.05).ESCC组织中XLOC_002319基因启动子区甲基化率为63.75％ (51/80),显著高于食管上皮内瘤变组织和癌旁正常组织(P＜0.01),并与淋巴结转移、组织学分化程度和TNM分期密切相关(P＜0.05).发生XLOC_002319基因甲基化的ESCC组织中XLOC_002319基因表达显著低于未发生甲基化的ESCC组织(P＜0.01).结论:XLOC_002319基因在ESCC中的低表达可能与ESCC的发生密切相关,且其启动子区甲基化可能是导致其表达沉默的机制之一.     

肝细胞肝癌上皮型钙黏素基因表达和启动子甲基化研究

目的 探讨上皮型钙黏素(E-cad)基因表达和启动子CpG岛甲基化与肝细胞肝癌(HCC)的关系.方法 用甲基化特异性PCR技术检测36例HCC肿瘤组织及其癌旁非肿瘤组织中,E-cad基因启动子CpG岛甲基化状况,E-cad mRNA表达用RT-PCR技术检测.结果 癌旁组织中E-cad mRNA表达水平显著高于肿瘤组织(P<0.001),Ⅲ～Ⅳ期肿瘤组织中的表达水平显著低于Ⅰ～Ⅱ期肿瘤(P=0.025),较大肿瘤(>5 cm)组织中的表达水平显著低于较小肿瘤(P=0.035),包膜完整的肿瘤组织中E-cad mRNA表达水平显著高于包膜不完整的肿瘤(P=0.001);E-cad基因在HCC肿瘤组织中的甲基化率显著高于癌旁组织(P=0.035),在包膜完整的肿瘤中的甲基化率显著低于包膜不完整的肿瘤(P=0.015);E-cad甲基化阳性的肿瘤组织中,其mRNA表达水平显著低于E-cad非甲基化阳性的肿瘤(P<0.000).结论 E-cad基因表达下降可能与HCC进展相关,其启动子甲基化是该基因表达下降的重要原因之一.     

IGFBP3基因在食管鳞状细胞癌中的表达及甲基化状态

目的：检测食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell cancer, ESCC)中胰岛素样生长因子结合蛋白3(insulin-like growth factor binding protein 3, IGFBP3)基因的表达情况及甲基化状态,探讨其与ESCC发生发展的关系。方法：收集河北医科大学第四医院2008至2011年间的82例ESCC手术患者的ESCC原发灶组织及癌旁正常黏膜组织。RT-PCR及甲基化特异性-PCR(methylation specific-PCR, MSP)的方法分别检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-aza-2′-deoxycitydine, 5-Aza-dC)处理前后的ESCC细胞系(TE1、TE13、YES-2、T.TN、Eca109)及82例ESCC及相应癌旁组织中 IGFBP3 基因mRNA表达水平及甲基化状态,应用免疫组织化学方法检测IGFBP3在ESCC组织中的蛋白表达情况,并分析 IGFBP3 基因甲基化状态与其表达水平之间的关系。 结果： 在ESCC细胞株TE1、TE13、YES-2、T.TN、Eca109中, IGFBP3 基因mRNA均呈阴性或弱阳性表达,用5-Aza-dC培养处理后,其mRNA表达水平均呈现不同程度的增高（P＜0.05）;MSP检测结果显示,在ESCC细胞株TE1、TE13、T.Tn、Yes-2中 IGFBP3基因均呈高甲基化状态。在ESCC组织中 IGFBP3 mRNA表达显著低于癌旁组织\[（0.15±0.07）vs（0.88±0.32）,P＜0.01\],且IGFBP3蛋白在癌组织中的表达阳性率显著低于癌旁组织\[29.3%（24/82）vs 84.1%（69/82）,P＜0.01\],并与TNM分期密切相关（P＜0.05）;IGFBP3基因在ESCC组织中的甲基率为68.3%（56/82）,明显高于癌旁组织的15.9%（13/82）（P＜0.01）;IGFBP3基因在Ⅲ和Ⅳ期肿瘤组织中的甲基化率明显高于Ⅰ和Ⅱ期肿瘤组织（P＜0.05）,而该基因的甲基化率与肿瘤患者的组织学分级无相关性（P> 0.05）。IGFBP3基因甲基化状态与其表达之间有明显的相关性(P＜0.05)。结论： ESCC组织及细胞株中IGFBP3基因呈高甲基化状态,该基因的甲基化可能导致其表达下调,并有可能是ESCC的发生机制之一。     

NDRG2基因在贲门腺癌中的甲基化状态及表达

目的： 探讨贲门腺癌(GCA)中NDRG2(N-myc downstream-regulated gene 2)基因启动子区的甲基化状态,并分析其甲基化与表达之间的相关性。方法：应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测97例贲门腺癌组织及相应癌旁组织中NDRG2基因的甲基化状态,应用RT-PCR和免疫组织化学方法检测97例贲门腺癌组织及相应癌旁组织中NDRG2的mRNA和蛋白表达情况。结果：NDRG2基因启动子区在贲门腺癌组织中的甲基化率(49.5%)显著高于癌旁正常组织(5.1%)(P<0.05),且Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中NDRG2基因甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者,低分化组中NDRG2基因发生甲基化的比率显著高于高中分化组。贲门腺癌组织中NDRG2 mRNA表达水平显著低于癌旁正常组织(P<0.05)。贲门腺癌组织中NDRG2蛋白表达阳性率为44.3%(43/97),显著低于相应癌旁正常组织的蛋白表达94.8%(92/97)(P<0.01),且贲门腺癌组织中NDRG2蛋白表达缺失与其启动子区的甲基化有明显的相关性(r=-0.510,P<0.01)。结论：NDRG2基因启动子区的高甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌中此基因表达降低的机制之一。     

食管鳞状细胞癌中Smad4基因CpG岛甲基化状态分析

目的：探讨食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）中Smad4（mothers against decapentaplegic homolog 4）基因启动子区及第一外显子区的CpG岛甲基化状态及其与Smad4蛋白、TGF-β1蛋白表达之间的相关性。方法：128例ESCC组织标本采集自河北医科大学第四医院2004-2008年的手术病例,每例患者均取癌旁正常黏膜组织作对照。分别应用甲基化特异性PCR（methylmion specific PCR,MSP）、RT-PCR和免疫组织化学法检测ESCC组织及相应癌旁组织中Smad4基因CpG岛的甲基化情况、Smad4 mRNA和Smad4蛋白表达情况,应用免疫组织化学法检测TGF-β1的蛋白表达情况。结果：ESCC组织中Smad4基因启动子区CpG岛甲基化率为5.5%（7/128）,第一外显子5′非翻译区CpG岛甲基化率为305%（39/128）;相应癌旁正常黏膜组织均未检测到这两个位点的甲基化（P<0.05）;ESCC组织中Smad4甲基化率显著高于癌旁正常组织（P<005）。ESCC组织中Smad4 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织（P<0.05）,且与Smad4甲基化相关。TGF-β1蛋白在ESCC组织中的表达率（66.4%）显著高于相应癌旁正常组织（21.9%,P<0.01）,且随ESCC分期的增高和分化程度的降低而升高（P<0.05）。Smad4和TGF-β1蛋白在ESCC中的表达呈明显的负相关（P<0.01)。结论: Smad4基因CpG岛甲基化及TGF-β1的过表达可能是ESCC发生机制之一,其中Smad4基因第一外显子5′非翻译区CpG岛比启动子区CpG岛更易发生甲基化,从而导致Smad4基因沉默。     

RASSF7在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的：检测食管鳞癌 (esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中Ras相关区域家族7（Ras-association domain family 7,RASSF7）的mRNA、蛋白表达情况及甲基化状态,探究RASSF7基因在ESCC发生发展中的作用。方法：分别应用RT - PCR 及甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction ,MSP)的方法检测DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-aza-2’-deoxycitydine, 5-aza-dC）处理前后的4株食管癌细胞系（TE13、T.Tn、YES-2、Ec109）和69例ESCC组织及其癌旁组织中RASSF7 mRNA表达水平及甲基化状态,应用免疫组织化学方法检测69例ESCC组织及相应癌旁组织中RASSF7的蛋白表达。结果：RASSF7基因在TE13、T.Tn、YES-2细胞系中表达阳性,在Ec109食管癌细胞系中表达缺失,经5-aza-dC处理后,RASSF7在TE13、T.Tn、YES-2中表达下调,在Ec109中表达阳性。5-aza-dC处理前后4株食管癌细胞系中均未检测到RASSF7的甲基化。ESCC组织中RASSF7的mRNA相对表达量（0.63?0.08 vs 0.42?0.20,P<0.01）与蛋白表达阳性率[56（81.2%） vs 37（53.6%）,P<0.01]均显著高于相应癌旁组织,且均与患者的淋巴结转移情况及分化程度有关（P<0.05或P<0.01）,与TNM分期、年龄和性别无关（均P＞0.05）。ESCC组织和相应癌旁组织中均未检测到RASSF7的甲基化。结论：4株食管癌细胞系、肿瘤组织和癌旁组织中RASSF7基因的表达差异与RASSF7本身甲基化状态无关,ESCC组织中RASSF7的高表达可能参与了ESCC的发生及转移。     

肝癌组织中雌激素受体基因启动子甲基化及临床研究

目的：研究原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中ER基因启动子甲基化修饰与临床病理特征间的关系,同时观察5-杂氮胞苷对ER mRNA表达的影响.方法：分别采用MSP和RT-PCR方法检测30例HCC及癌旁组织中ER基因启动子甲基化修饰状况及ER mRNA的表达状况,并用5-杂氮胞苷处理肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2.结果：30例HCC组织中ER启动子甲基化修饰阳性率为60.0% （18/30）,而30例癌旁组织中ER基因启动子甲基化修饰阳性率为30.0%（9/30）,两者差异有统计学意义,χ^2=5.46,P= 0.037.30例HCC组织中ER mRNA阳性表达12例（40.0%）,其中甲基化组织和未甲基化组织中ER mRNA表达率分别为22.2%和66.7%.ER启动子甲基化修饰与mRNA表达呈负性相关,χ^2=5.93,P=0.024.同时,ER启动子区甲基化修饰与肝癌患者血清AFP含量增高呈正相关,χ^2=12.13,P=0.001.细胞培养结果提示低浓度的5-杂氮胞苷可诱导肝癌细胞系ER mRNA重新表达.结论：肝癌组织中ER启动子甲基化修饰是个频繁事件,因此沉默ER基因的表达有可能促进肝癌的发展.     

贲门腺癌中TSP1启动子区高甲基化与TGF-β1表达的相关性分析

目的:探讨贲门腺癌中凝血酶敏感蛋白1(thrombospondin1,TSP1)基因的甲基化状态及其与转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)蛋白表达之间的相关性.方法:分别应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)、RT-PCR和免疫组织化学法检测贲门腺癌组织及相应癌旁组织的TSP1基因甲基化、mRNA和蛋白表达情况,应用免疫组织化学法检测对应组织中TGF-β1蛋白表达情况.结果: 96例贲门腺癌组织中有34例发生了TSP1基因甲基化,甲基化发生率为35.4%,显著高于癌旁正常组织(P<0.001).Ⅲ期和Ⅳ期贲门腺癌患者中TSP1基因发生甲基化的比率显著高于Ⅰ期和Ⅱ期患者(P<0.05).贲门腺癌组织中TSP1 mRNA及蛋白表达显著低于癌旁正常组织(P<0.05),且与其甲基化状态之间有明显相关性.TGF-β1蛋白在贲门癌腺组织中的表达明显升高,96例贲门癌腺组织中有50例(52.1%)表达阳性,与相应癌旁正常组织相比差异有统计学意义(P<0.001);且随肿瘤分期的升高和肿瘤分化程度的降低,TGF-β1的阳性表达率明显升高(P<0.05).TSP1基因在贲门腺癌中的高甲基化与TGF-β1蛋白表达之间有明显的相关性(P<0.05).结论:TSP1基因启动子区高甲基化和TGF-β1蛋白过表达可能参与了贲门腺癌的发生、发展过程,TSP1基因启动子区发生甲基化导致的基因沉默可能是贲门腺癌发生的机制之一.