冬凌草甲素对Nalm-6细胞的增殖抑制作用及其作用机制

目的:探讨冬凌草甲素(oridonin, ORI)对淋巴细胞白血病Nalm-6细胞的增殖抑制作用及其作用机制.方法:以不同浓度的ORI(0～48 μmol/L)作用于体外培养的Nalm-6细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡时的DNA梯状条带,应用透射电镜观察细胞形态学的变化,用蛋白质印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose) polymerase)]表达水平的变化,并对凋亡调节蛋白Bax及Bcl-2的表达水平进行检测.结果: ＞16 μmol/L的ORI可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系,药物作用48 h后在琼脂糖凝胶电泳上可见明显的DNA梯状条带.蛋白质印迹法检测结果表明,Caspase-3被活化出现相对分子质量20×103的亚单位,同时PARP被裂解出现相对分子质量89×103的亚单位片段.同时,药物作用48 h后凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达水平明显降低,而促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高.结论:ORI能显著抑制Nalm-6细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,通过激活Caspase-3以及降低Bcl-2、升高Bax的表达水平是ORI诱导细胞发生凋亡的重要作用机制;这些结果表明ORI是一种潜在的抗白血病药物.     

冬凌草甲素对THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的 探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病THP-1细胞的诱导凋亡作用及其作用机制.方法 以不同浓度的冬凌草甲素(16～56 μmol/L)作用于体外培养的THP-1细胞0、24、48及72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,Hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡时的形态学变化,用免疫印迹法(Western Blotting)检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶PARP[(poly(ADP-ribose)polymerase)]表达水平的变化.结果 32 μmol/L以上的冬凌草甲素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量效与时效关系,在Hoechst 33258荧光染色后,细胞出现核浓缩及核碎裂等典型的凋亡特征.Western Blotting检测结果表明,Caspase-3被活化出现相对分子质量为20×103的裂解片段,PARP被裂解后出现相对分子质量为89×103的亚单位片段.结论 冬凌草甲素能显著抑制THP-1细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,通过激活Caspase-3途径可能是冬凌草甲素诱导细胞发生凋亡的重要作用机制;这为冬凌草甲素用于白血病的辅助治疗提供了有力的实验依据.     

曲古抑菌素A诱导HL-60细胞凋亡机制的研究

目的:探讨曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的机制.方法:采用MTT方法检测TSA对HL-60细胞增殖的影响.流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达.结果:0.1μmol/L的TSA可明显抑制细胞增殖,P<0.01;0.05 μmol/L的TSA可使细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05),但0.1 μmol/L的TSA才能引起细胞凋亡(P<0.01);经0.1 μmol/L的TSA作用12 h后,Bax、Caspase-9和Caspase-3基因表达明显升高,P<0.01.结论:TSA诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达.     

硼替佐米体外抑制耐全反式维甲酸白血病细胞株NB_4-R2的增殖

  目的　探讨硼替佐米（Bortezomib）在体外对耐全反式维甲酸（ATRA）的急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4-R2增殖、凋亡的影响,为用Bortezomib治疗耐ATRA的APL提供新的理论依据。方法　体外用不同浓度的Bortezomib处理NB4-R2细胞株48 h后,用四甲基偶氮唑蓝染色法（MTT）观察细胞增殖活力、Hoechst33342染色法观察细胞凋亡形态、流式细胞术检测细胞凋亡百分率以及Western blotting蛋白印迹检测剪切多聚ADP-核糖聚合酶（cleaved PARP）和Caspase-3凋亡蛋白的表达水平。结果　体外Bortezomib能明显抑制NB4-R2细胞增殖,在质量浓度1～5 μg／L的范围内,细胞的抑制作用和Bortezomib浓度呈剂量依赖关系,当质量浓度为5 μg／L时,细胞增殖抑制率可达74.9 %;在质量浓度1～5 μg／L的Bortezomib范围内,NB4-R2细胞增殖受抑主要表现为细胞凋亡增加,凋亡百分率可达78.7 %,且以晚期凋亡为主;Western blotting证实Bortezomib处理后的NB4-R2细胞中,cleaved PARP和Caspase-3蛋白表达明显增强。结论　体外Bortezomib可通过诱导细胞凋亡来抑制NB4-R2细胞的增殖。     

过氧化物酶体增生物激活受体γ激动剂对Raji细胞的增生抑制作用及其机制

目的探讨过氧化物酶体增生物激活受体γ（PPARγ）激动剂曲格列酮（TGZ）对白血病Raji细胞的增生抑制作用及其作用机制。方法以不同浓度的TGZ（0—60μmol／L）作用于体外培养的Raji细胞24、48、72h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡时的DNA梯状条带,并应用免疫印迹法（Western Blotting）检测凋亡调节蛋白Bax、bcl-2及Survivin的变化。结果20μmol／L以上的TGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量效与时效关系,药物作用72h后在琼脂糖凝胶电泳上可见明显的DNA梯状条带。Western Blotting检测结果表明,药物作用48h后凋亡抑制蛋白bcl-2及Survivin的表达水平明显降低,而促凋亡蛋白Bax的表达水平显著升高。结论PPAR1激动剂TGZ能显著抑制Raji细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低bcl-2、Survivin及升高Bax的表达水平是TGZ诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

槲皮素抑制磷脂酰肌醇-3激酶/Akt通路的体外抗肿瘤作用研究

 　目的　研究槲皮素对白血病NB4细胞的抗肿瘤效应和磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）／Akt、bcl-2及Bax在槲皮素诱导NB4细胞凋亡中的作用,探讨其可能的作用机制。方法　采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖活性,Hoechst 33258荧光染色及流式细胞术观察槲皮素对NB4细胞凋亡的影响,Western blot检测槲皮素对NB4细胞相关蛋白的表达变化,激光共聚焦显微技术检测细胞凋亡时Akt的胞核、胞质分布变化。结果　槲皮素（20～160 μmol／L）能明显抑制NB4细胞增殖,具有剂量-时间依赖性。20、40、80 μmol／L槲皮素作用24 h后,其总凋亡率分别为（9.25±0.11）%、（20.83±2.10）%、（41.43±2.90）%,与空白对照组的（2.17±1.12）%比较差异有统计学意义（t值分别为4.14、6.56、7.02,P＜0.05）,细胞凋亡呈剂量依赖性并伴随明显的凋亡细胞形态学改变,而槲皮素的凋亡诱导效应可能与其诱导NB4细胞周期阻滞于G2／M期有关。槲皮素对PI3K／Akt表达水平显著降低,导致凋亡抑制因子bc1-2表达受阻,同时Bax表达增加,但对总Akt蛋白没有明显影响,Akt在胞核表达减少,胞质表达增多,与空白对照相比差异具有统计学意义（F＝15.12,P＜0.05）。结论　槲皮素能够通过多条信号途径促进白血病NB4细胞发生凋亡,发挥较强的抗白血病效应,因而PI3K／Akt通道有望成为白血病诊治的新靶标。     

雷公藤红素对人早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究雷公藤红素对人早幼粒细胞白血病细胞系NB4的抑制作用和诱导凋亡作用以及对SU-MO依赖性特异泛素E3连接酶(RNF4)mRNA表达水平的影响.方法:用不同浓度的雷公藤红素处理NB4细胞,测定细胞生长曲线;CCK-8试剂盒检测细胞存活率;Annexin V/PI双染、荧光显微镜观察、流式细胞仪检测细胞凋亡情况;实时定量PCR检测RNF4 mRNA表达.结果:雷公藤红素能够显著抑制NB4细胞的增殖,雷公藤红素对NB4细胞处理48h的细胞半数抑制浓度为0.854±0.035 μmol/L;0.5 μmol/L和1μmol/L雷公藤红素处理NB4细胞48小时后均发生明显的细胞凋亡;0.1μmol/L雷公藤红素可使NB4细胞中的RNF4mRNA水平上调约60％.结论:雷公藤红素对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞有明显的抗增殖和促凋亡作用,可能通过与RNF4相关的信号通路达到抗白血病作用,这为临床应用雷公藤红素治疗急性早幼粒细胞白血病提供了实验依据.     

丹参酮ⅡA抑制髓系白血病细胞株增殖及诱导凋亡的研究

目的 探讨丹参酮ⅡA（TanⅡA）对髓系白血病细胞株NB4、K562、THP-1增殖抑制作用及促凋亡作用.方法 将不同浓度TanⅡA与NB4、K562、THP-1细胞共培养24、48、72 h,以柔红霉素为阳性对照,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测TanⅡA对白血病细胞株的增殖抑制作用,AnnexinV-FITC/PI流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,紫外分光光度法检测Caspase-3蛋白表达.结果 TanⅡA作用24、48、72 h对NB4细胞的IC50值分别为24.11、9.60、7.28 μmol/L,对K562细胞IC50值分别为31.75、11.88、6.81 μmol/L,对THP-1细胞IC50值分别为111.10、32.82、11.82 μmol/L.流式细胞术检测结果显示：与空白对照组相比,TanⅡA与各白血病细胞株作用48 h后,细胞凋亡明显增加,G1期细胞数增加,Caspase-3蛋白表达显著升高（P＜0.05）.结论 TanⅡA对白血病细胞具有增殖抑制与促凋亡作用,其作用强度从高到低依次为NB4、K562、THP-1细胞.其抗癌作用机制可能与阻滞细胞于G1期,上调Caspase-3表达有关.     

N-马来酰-L-缬氨酸酯姜黄素诱导胃癌MGC-803细胞凋亡的机制

目的研究N-来酰-L-缬氨酸酯姜黄素(MVC)诱导人胃癌MGC-803细胞凋亡的分子机制。方法采用MTT法检测MVC对肿瘤细胞的生长抑制作用;Hoechst 33342/PI核荧光双染色法检测细胞凋亡的改变;运用Western blot技术检测参与细胞凋亡相关基因的蛋白表达。结果20 μmol/L MVC可明显抑制MGC-803细胞生长,48 h IC50值为126 μmol/L;20 μmol/L MVC可诱导MGC-803细胞凋亡;MVC作用后,增加了促凋亡蛋白Bax的表达,抑制了凋亡蛋白Bcl-2 的表达,提高了Caspase-3活性。结论MVC可通过Bcl-2介导的线粒体途径诱导MGC-803 细胞凋亡。     

地塞米松诱导CEM细胞凋亡过程中Survivin和Caspase-3基因表达的研究

目的探讨地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导CEM细胞凋亡过程中生存素(Sur-vivin)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)基因表达。方法台盼蓝拒染法测定细胞活力,绘制增殖曲线;流式细胞仪解析DEX诱导CEM细胞凋亡;Westernblot检测Survivin和Caspase-3蛋白表达;RT-PCR检测Survivin基因表达。结果1)DEX以时间、剂量依赖方式抑制CEM细胞增殖。0.1~10μmol/LDEX于48h开始明显抑制CEM细胞的生长。24、48、72h抑制细胞增殖50%的药物浓度分别为9.8、0.9和0.4μmol/L。2)随DEX剂量增大亚二倍体细胞百分数逐渐增加。5μmol/LDEX处理12~48h,亚二倍体细胞从14.9%升至46.2%;3)5μmol/LDEX处理12~72h,Survivin蛋白从54.6%下调至9.7%;SurvivinmRNA从76.4%(6h)降至18.3%(72h);4)DEX作用12h之内只能检测到非激活状态的procaspase-3,处理24h后出现17×103活性亚基,直至72h。结论DEX诱导CEM细胞凋亡时下调Survivin基因表达,活化Caspase-3。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。     

胰头癌手术切除可能性的术前评价

目的通过总结胰头癌病人的临床表现和影象学检查结果来评价手术切除的可能性。方法总结32例胰头癌病人的临床表现和CT、磁共振（MRI）检查结果,判断肿瘤是否已发生邻近浸润或远处转移,以此来评价其手术切除的可能性。结果在22例作CT检查的病例中,判断正确的为17例,准确率为77．3%。作MR检查9例,全部判断正确,准确率为100%。结论某些特殊的临床表现和CT、MR检查对判断肿瘤是否发生邻近浸润或转移有较大价值,为术前评价手术切除的可能性提供依据。