维生素E琥珀酸酯联合他莫昔芬抑制乳腺癌细胞增殖

目的:检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合他莫昔芬(tamoxifen)对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,并分析调控Fas/FasL系统表达在抑制乳腺癌细胞增殖中的作用。方法:人乳腺癌细胞MCF-7(ER阳性)和MDA-MB-435(ER阴性)以VES联合他莫昔芬作用24和48 h,VES浓度为10和20μg/mL,他莫昔芬的浓度分别为1、5和10μmol/L。以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞周期和细胞表面Fas/FasL表达的变化。结果:VES联合他莫昔芬对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用。药物联合作用后,乳腺癌细胞表现为明显的G0/G1期阻滞,MCF-7和MDA-MB-435细胞的凋亡率分别由(3.30±0.2)%和(4.88±0.9)%升高至(25.61±2.7)%和(23.33±1.1)%,流式细胞仪提示,MCF-7和MDA-MB-435细胞表面的Fas分别由50.07和46.29升高至116.72和136.68;FasL分别由51.85和57.43升高至146.82和127.90。结论:VES联合他莫昔芬对乳腺癌细胞具有显著的抑制作用,其机制可能与细胞表面Fas和FasL表达上调有关。     

γ-干扰素增强他莫昔芬抗乳腺癌作用的体外研究

研究γ-干扰素（γ-IFN）对他莫昔芬（TAM）抗乳腺癌细胞的增强作用。方法：在体外培养条件下，分别或联合应用γ-干扰素、TAM或雌二醇（E2）作用于雌激素受体（estrogen receptor，ER）阳性的MCF-7和ER阴性的MDA-MB-231人乳腺癌细胞株，用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞仪检测细胞周期分布，DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：TAM能抑制ER阳性和阴性的乳腺癌细胞的生长，阻滞细胞周期于GO／G1期，并可诱导细胞凋亡；相同浓度条件下，TAM对ER阳性乳腺癌细胞的抑制作用强于对ER阴性的乳腺癌细胞。同时，TAM能拈抗外源性雌激素对MCF-7细胞的促生长作用，而对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用与雌激素的存在与否无关。γ-干扰素预处理细胞24h后，TAM抗乳腺癌细胞的作用增强。结论：体外条件下，TAM有抗ER阳性和阴性乳腺癌细胞作用，作用机制是通过影响细胞周期，诱导细胞凋亡，γ-干扰素能加强TAM的抗乳腺癌作用。     

雌激素受体β及其剪切变异体与乳腺癌他莫昔芬耐药的关系

目的探讨雌激素受体（ER）亚型（ERβ）及其剪切变异体（ERβcx）的表达与乳腺癌他莫昔芬耐药的关系。方法 （1）对乳腺癌他莫西芬敏感MCF-7细胞和他莫西芬耐药MCF-7细胞进行培养,利用去甲基化物5-氮杂胞苷（5-Aza-2-deoxycytidine,5-AZA-CdR）去甲基化的作用,对MCF-7细胞进行药物处理获得MCF-75-AZA-CdR细胞,采用Western blot方法检测3组细胞中ERβ和ERβcx蛋白的表达。（2）取对数生长期生长良好的乳腺癌MCF-7细胞株,按2.5×103细胞/孔接种于96孔细胞培养板板中,实验组分为他莫细芬处理的MCF-7细胞（MCF-7＋TAM组）和MCF-75-AZA-CdR细胞（MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组）,对照组为MCF-7细胞,采用MTT比色法,观察3组细胞的增殖情况。统计学分析采用单因素方差分析和重复测量方差分析。结果 （1）ERβ蛋白在他莫西芬敏感MCF-7细胞中的表达高于他莫西芬耐药的MCF-7细胞,两组细胞间差异有显著的统计学意义（P=0.000）;ERβcx蛋白表达在两组之间差异无统计学意义（P=0.366）。MCF-75-AZA-CdR细胞ERβ和ERβcx蛋白表达均高于他莫西芬敏感MCF-7细胞和他莫西芬敏耐药MCF-7细胞（P均=0.000）。（2）与对照组MCF-7细胞相比,他莫西芬明显降低了MCF-7＋TAM组和MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组的细胞增值速度并抑制细胞生长;且他莫西芬抑制细胞增殖作用MCF-75-AZA-CdR细胞＋TAM组强于MCF-7＋TAM组（P=0.000）。结论 ERβ蛋白在他莫西芬敏感MCF-7细胞中的表达高。MCF-75-AZA-CdR细胞中ERβ和ERβcx蛋白的表达均高。他莫西芬抑制细胞增殖作用在他莫西芬处理的MCF-75-AZA-CdR细胞中强     

Toremifene诱导MCF-7/ADR细胞凋亡的研究

目的研究Toremifene体外诱导乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR凋亡和凋亡相关基因Fas、FasL、p53和Caspase-3表达的关系.方法以不同浓度Toremifene(0.24μg/ml、2.4μg/ml、24μg/ml)诱导MCF-7/ADR细胞凋亡;以MTT法观察不同处理浓度的Toremifene对MCF-7/ADR细胞DNA合成活性的影响;以免疫组化检测Fas、FasL、p53和Caspase-3蛋白表达.结果不同浓度Toremifene处理的MCF-7/ADR细胞出现DNA合成活性下降,抑制强度与浓度有关(P＜0.05);Fas、FasL、p53和Caspase-3蛋白呈上调表达.结论Toremifene能诱导细胞凋亡;增加Fas、FasL、p53和Caspase-3基因表达;并且与启动Caspase-3凋亡信号和p53直接介导的凋亡有关.     

PS341对他莫昔芬诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡影响及其机制的探讨

目的:研究蛋白酶体抑制剂PS341是否可增强他莫昔芬(TAM)诱导的乳腺癌细胞凋亡,并探讨可能的机制。方法:采用MTT方法测定细胞活力,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹法检测Caspase-8的活化,PARP的裂解及死亡受体Fas蛋白的表达。结果:TAM以时间及浓度依赖的方式抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖,24及48h的IC50分别为25和6μmol/L,25μmol/L的TAM处理24h可诱导21.9%的MCF-7细胞发生凋亡,10nmol/L的PS341预处理后给予25μmol/L的TAM处理24h细胞凋亡增至34.6%,PS341与TAM均可轻微上调Fas的表达水平,两药联合应用后可显著上调Fas的表达水平,并明显增强线粒体外凋亡通路的活性。结论:PS341与TAM联合应用可通过上调Fas的表达水平,增强TAM诱导的乳腺癌MCF-7细胞凋亡。     

基因转染LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞凋亡的影响

目的：探讨基因转染人源抗菌肽LL-37/hCAP-18对人乳腺癌细胞MCF-7增殖、凋亡的影响。方法：将含人LL-37/hCAP-18的真核表达质粒瞬时转染人MCF-7细胞,48h后,MTT比色检测MCF-7细胞的增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞周期及凋亡,细胞免疫组化染色检测MCF-7细胞中Bax、Bcl-2的表达。结果：重组基因瞬时转染MCF-7细胞48h后,与各对照组相比,肿瘤细胞的生长增殖受到显著抑制（P〈0.05）;转染重组基因组肿瘤细胞凋亡率显著高于各对照组（P〈0.05）,但细胞周期无明显变化;与对照组相比,转染重组基因pEGFP-c1-LL-37的MCF-7细胞中Bcl-2表达显著下降（P〈0.05）,Bax由阴性表达转为表达明显升高。结论：LL-37/hCAP-18可以通过上调促凋亡因子Bax、下调抗凋亡因子Bcl-2诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖。     

绿色荧光蛋白基因标记的人乳腺癌细胞株MCF7-pAcGFP体外生长特性的研究

目的 研究增强型绿色荧光蛋白(pAcGFP)标记的人乳腺癌细胞株MCF7-pAcGFP的生长特性。方法 应用Fugene HD Transfection Reagent转染MCF-7细胞,经G418筛选获得稳定表达pAcGFP的MCF-7细胞系。采用MTT方法检测MCF7-pAcGFP的增殖能力,采用流式细胞仪检测细胞周期,同时采用Western blot方法检测11种蛋白的表达情况。结果 稳定表达pAcGFP的乳腺癌细胞株MCF7-pAcGFP的生长曲线和细胞周期分布与未转染前相似(P＞0.05),Cyclin D1、p27、Fas、FasL、Bcl-2、Bax、Akt、p-Akt(Ser473)、p-Akt(Thr308)、ERK以及p-ERK在两种细胞中表达情况无差别。结论 与亲本细胞相比,MCF7-pAcGFP细胞株的生长特性并没有发生改变,为构建理想的动物模型来研究乳腺癌生长机制奠定了基础。     

获得性他莫昔芬耐受MCF-7细胞膜受体的变化及格列卫的逆转作用

目的：探讨耐受他莫昔芬(TAM)的MCF-7细胞膜受体等的变化及格列卫对耐药的逆转作用。方法：MTY法检测TAM对E2、EGF、Insulin刺激的MCF-7增殖的抑制作用；流式细胞术检测与10^-7mol／LTAM孵育8周、16周后的MCF-7细胞ER、PR、EGFR及VEGF的变化，MTY法检测格列卫对耐药的逆转作用。结果：TAM抑制E2、EGF、Insulin刺激的MCF-7增殖；耐受TAM的MCF-7ER、PR表达率由父代的93％、91％下降为41％、36％，EGFR由10％上升为39％，VEGF由36％下降至30％，对EGF刺激的增殖更敏感，格列卫可增强TAM的生长抑制作用。结论：耐受TAM的MCF-7细胞ER、PR表达下降，EGFR表达升高，EGF／EGFR刺激的细胞增殖作用增强，格列卫可能作为对TAM获得性耐药后逆转用药方案或贯序用药方案。     

青蒿琥酯对人乳腺癌MCF-7/TAM细胞的抑制作用

[目的]探讨青蒿琥酯抑制耐三苯氧胺人乳腺癌细胞MCF-7/TAM的增殖及其机制。[方法]采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色分析法、流式细胞术、免疫细胞化学法技术检测青蒿琥酯作用于MCF-7/TAM细胞后的抑制率、凋亡率、细胞周期及Bcl-2表达变化。[结果]青蒿琥酯对MCF-7/TAM细胞有明显的抑制作用,呈浓度和时间依赖性。作用48h后能诱导细胞凋亡,细胞周期被阻滞于G1、G2期（P〈0.05）。青蒿琥酯处理组Bcl-2表达减弱（P〈0.01）。[结论]青蒿琥酯可抑制MCF-7/TAM细胞的增殖,并诱导其凋亡。