HBV体外感染人胎肝细胞的鉴定方法研究

目的通过HBV体外感染22周龄原代培养人胎肝细胞,比较常用检测指标的敏感性和特异性.方法利用HBV阳性血清感染体外培养的原代人胎肝细胞.应用ELISA法检测培养上清中的HBsAg和HBeAg,免疫组化法检测细胞核中的HBcAg,荧光定量PCR法检测上清和细胞中HBV DNA,巢式PCR法检测细胞中cccDNA.结果胎肝细胞核中的HBcAg于感染后第2天出现阳性,培养上清和细胞中HBVDNA定量自第4天起检出,上清中HBsAg和HBeAg于第5～6天出现阳性;细胞中HBV cccDNA自第8～9天出现阳性.结论HBV在原代培养人22周龄的胎肝细胞中能够稳定复制和表达,各种检测指标的灵敏性和特异性不一,免疫组化法检测细胞核中的HBcAg敏感性好,特异性可.     

人肝癌细胞系7721与原代人胎肝细胞用于体外培养HCV的对比研究

目的 研究丙型肝炎病毒（HCV）在体外培养原代人胎肝细胞和人肝癌细胞系7721中复制和表达的异同,探讨HCV体外培养条件。方法 原代人胎肝细胞系7721分别与HCV感染血清共孵育后,用逆转录-聚合酶链反应、原位杂交、免疫组化检测细胞和培养上清中的HCV RNA和抗原表达。结果 从孵育的2～3天,即可在细胞内和/或培养上清中间断地检出HCV RNA（其中HCV在7721细胞株中的复制至少可达66d,HCV在 人胎肝细胞中的复制持续25d）;HCV抗原可在感染细胞内得到稳定表达,感染细胞内存在HCV负链RNA杂交信号,且多位于细胞浆。结论 两种肝细胞对HCV易感,尤其是7721细胞可以稳定地支持HCV体外复制,可用于HCV体外长期培养的靶细胞。     

人胎肝细胞移植治疗重症肝炎的初步研究

应用人胎肝细胞移植,治疗8例重症肝炎患者,共输注47次。结果6例存活,初步讨论胎肝细胞移植的作用机理。     

HBV感染培养人胎肝细胞后差异应答基因的初步分离和鉴定

目的:建立培养人胎肝细胞感染HBV后差异应答基因的消减文库,并从中克隆鉴定出新的应答基因.方法:分别从HBV感染及未感染的胎肝细胞中提取总RNA,用SMART PCR技术合成全长双链cDNA,经RsaⅠ酶切后将感染细胞的cDNA分为两组,分别衔接两个不同的接头,再与未感染细胞的cDNA进行两轮抑制性杂交及两轮抑制性PCR,将产物与T/A载体连接构建成消减cDNA文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,挑取克隆进行筛选排除假阳性,再行序列分析,鉴定胎肝细胞感染HBV后的差异应答基因.结果:成功构建高效消减的HBV感染胎肝细胞cDNA文库,得到158个白色的克隆,随机选择了128个克隆经PCR扩增获得含有明确单一目的片断的克隆99个,长约100～400 bp,经筛选后得到70个克隆,测序表明有16个差异表达的基因,其中可能的新基因有5个.结论:用抑制性消减杂交技术成功建立了HBV感染培养人胎肝细胞的消减cDNA文库,为进一步大规模筛选HBV感染后的应答基因奠定了基础,初步筛选出的新基因片断为进一步研究宫内感染的分子机制提供了依据.     

人胎肝细胞体外感染丙型肝炎病毒的定位研究

为了证实人胎肝细胞在体外与丙型肝炎病毒（HCV）阳性血清共培养24h是否能感染HCV病毒而作定位研究。采用透射电镜、免疫电镜的手段对于HCV阳性血清共培养的人胎肝细胞中病毒样颗粒进行定位研究，以测定细胞内是否有HCV。结果发现在透视电镜下人胎肝细胞胞浆中有很多病毒样颗粒，直径约45nm。通过免疫电镜进一步证实在人胎肝细胞中这些病毒样颗粒含有HCV基因表达产物NS3及NS5。此外，人胎肝细胞在体外与HCV阳性血清共培养24h并经多次洗涤后的培养上清加入到新鲜分离 的正常人胎肝细胞培养基中继续培养，可以得出上述相同的结果。这些结果表明人胎肝细胞在体外培养情况下可以感染HCV，并且感染了HCV了人胎肝细胞可以产生具有传染性的HCV颗粒分泌到培养液中。     

人胎肝细胞体外感染丙型肝炎病毒的定位研究

为了证实人胎肝细胞在体外与丙型肝炎病毒（HCV）阳性血清共培养24h是否能感染HCV病毒而作定位研究。采用透射电镜、免疫电镜的手段对于HCV阳性血清共培养的人胎肝细胞中病毒样颗粒进行定位研究,以测定细胞内是否有HCV。结果发现在透视电镜下人胎肝细胞胞浆中有很多病毒样颗粒,直径约45nm。通过免疫电镜进一步证实在人胎肝细胞中这些病毒样颗粒含有HCV基因表达产物NS3及NS5。此外,人胎肝细胞在体外与HCV阳性血清共培养24h并经多次洗涤后的培养上清加入到新鲜分离的正常人胎肝细胞培养基中继续培养,可以得出上述相同的结果。这些结果表明人胎肝细胞在体外培养情况下可以感染HCV,并且感染了HCV的人胎肝细胞可以产生具有传染性的HCV颗粒分泌到培养液中。     

HBV,HCV,HDV感染与HCC发生的关系

ＨＢＶ、ＨＣＶ、ＨＤＶ感染与ＨＣＣ发生的关系微生物学教研室曲波综述程志审校肝细胞癌（ＨＣＣ）是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一，广泛存在于世界各地，高发地区是非洲东南部和东南亚地区。在我国ＨＣＣ占各种癌症病死率的第３位，占全世界肝癌年死亡总数的４５％〔...     

人胎肝细胞悬液输注对重型肝炎患者血浆氨基酸谱的影响

为探讨输注人胎肝细胞悬液(h-FLCS)治疗重肝的机制,我们观察了17例重肝输注h-FLCS前后血浆氨基酸水平、某些蛋白含量和肝功能的变化。发现无论是否合并肝性脑病,h-FLCS输注对患者BCAA、AAA水平和支/芳比值均无显著影响。输注后1~3天,蛋氨酸水平显著下降,谷氨酸和丝氨酸水平显著升高,PTa、PA和Fn均于输注后1~5天内显著升高,10天后逐渐降至输注前的水平。实验提示,h-FLCS输注确有短暂改善肝功能作用,但不能调整重肝的支/芳比值。     

小儿HBV携带者与HCV—HDV重叠感染研究

目的：探讨小儿HBV携带重叠HCV、HDV复制干扰作用。方法：对136例小儿HBV携带同时进行了抗－HCV、HD－Ag、抗HD、HBV－DNA的检测。结果：发现136例受检中HBV与HCV、HBV与HDV二种病毒重叠感染22例（16．17％），HBV与HCV、HDV3种病毒重叠感染2例（1．47％）。HCV重叠HBV感染容易发生在HBV－DNA阴性及抗－HBe阳性中，结论：小儿HBV携带中存在HCV、HDV重叠感染。重叠HCV感染对HBV复制有明显抑制作用，而重叠HDV对HBV干扰作用不明显。     

丁型肝炎病人肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA表达及关系

目的：探讨丁型肝炎病人肝组织中ＨＤＡｇ与ＨＢｓＡｇ／ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达及关系。方法：应用免疫组化双重染色和原位杂交,检测７９例丁型肝炎病人肝组织ＨＤＡｇ、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ和ＨＢＶＤＮＡ表达,以５２例乙型肝炎作对照。结果：丁型肝炎ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ检出率（８１％、７１％）较乙型肝炎（９４％、９２％）低（Ｐ〈０．０５或０．０１）。ＨＤＡｇ以肝细胞核表达为主,ＨＢｓＡｇ以肝细胞浆表达     

HGV与HBV及HCV在瑶族人群中的感染研究

目的 了解广东瑶族人群庚型肝炎病毒(HGV)感染状况,探讨HGV感染与输血相关肝炎病毒HBV、HCV感染关系.方法 采用ELISA法分别检测血清中抗-HGV IgG、HBsAg和抗-HCV.结果 1 056例血清中检出抗-HGV IgG阳性95例,阳性感染率为9.00％,男性阳性检出率为9.40％,女性阳性检出率为8.63％,男女性别之间差异无统计学意义(x=0.189,P＞0.05).抗-HGV IgG阳性检出率随年龄增大而增高,但各年龄组之间差异无统计学意义(x2=0.437,P＞0.05).抗-HGV IgG+HBsAg、抗-HGV IgG+抗-HCV、抗-HGV IgG+HBsAg+抗-HCV的重叠感染率分别为23.16％、4.55％和4.55％,差异有统计学意义(x2=21.815,P＜0.05).结论 广东瑶族人群存在较高的HGV感染率,HBsAg及抗-HCV均存在HGV重叠感染.     

乙型肝炎病毒感染原代培养人绒毛膜滋养层细胞的实验研究

目的探讨原代培养的人绒毛膜滋养层细胞感染乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）的可能性及规律。方法采用胰酶/DNA酶序贯消化及Percoll密度梯度离心分离纯化人绒毛膜滋养层细胞后,采用血清直接感染法进行滋养层细胞的HBV感染,同时通过与对正常成人肝细胞株L02细胞的HBV感染后及转染HBV的肝癌细胞株（HepG2.2.15）的传代培养比较,实时荧光定量PCR检测培养上清的HBV DNA;并用透射电镜观察HBV感染后滋养层细胞的超微结构改变及其在滋养层细胞中的定位。结果原代培养的滋养层细胞感染HBV后释放至培养上清中的HBV DNA于感染后48-72h达高峰,而L02细胞则于感染后12-24h达高峰,HepG2.2.15细胞株感染后则一直攀升。透射电镜观察HBV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒,主要定位于细胞核周。结论HBV可以感染滋养层细胞,定位于核周并导致滋养层细胞的超微结构改变。     

A study on the Appearance of HBV DNA in the Liver and Serum of Patients with HDV/HBV Infection

The appearance of HBV DNA in the liver and serum of 15 patients with hepatitisB conifected with HDV was observed and compared with that of 13 HDV-negative cases.Itwas found that HBsAg titer was lower than or equal to 1:4 in 8 HDV-positive patients,inwhom it was temporally negative in 5,and negative during the,two-day hospitalization in 1.No similar result could be observed in the HDV-negative cases.The detection rate of HBVDNA in both the HDV positive and negative groups was 20.0％ (3/15) and 25％ (3.12) in se-rum,and 46.7％ (7/15) and 61.5％ (8/13) in the liver rcspectively.There was no signif-icant statistical difference between the 2 groups.The HBV DNA grains detected with in situ hybridization,with biotinylated HBV DNAprobe were demonstrated in the sparse type of distribution in 3 cases and lightly stained in 2.Itis believed that HBV DNA replication activity might be suppressed by HDV.However activeHRV DNA replication was also present in some HDV-positive patients and HBV DNA was posi-tive in both the liver and serum in 3 such patients.It was concluded that the difference of the detection rate of HBV DNA in HDV-positivepatients might be related to the different stages of HDV infection.     

乙型肝炎病毒携带者丁型肝炎病毒混合感染的血清流行病学调查

报道171例HBsAg携带者丁型肝炎病毒(简称HDV)混合感染情况。HDAg及抗-HD检测均用ELISA法,171例血清HDAg阳性者为4例,抗-HD阳性者为4例,总的混合感染率为4％。儿童和成年人的混合感染率无明显差异,单独感染和混合感染时,HBV感染指标无明显差异。     

HBV阳性血清体外感染HepG2细胞的实验研究

目的 :建立HBV阳性血清体外感染HepG2细胞的实验方法 .方法 :培养HepG2细胞传至 6孔板中 1 2h后 ,加2 0mL·L-1 DMSO继续孵育 1 2h .而后进行HBV阳性血清体外感染HepG2的实验 .感染组用HBV阳性血清 ,阴性对照组用HBV阴性血清 ,空白对照组用DMEM培养基 .实验开始后HepG2细胞在 2 0mL·L-1 DMSO的浓度下继续孵育 2 4h ,而后用PBS清洗 ,洗 8次 ,PBS洗后每隔 1 2h收集一次细胞培养上清 .ELISA检测细胞培养上清中的HBsAg.PCR检测细胞培养上清和HepG2细胞中的HBVDNA .结果 :HBV阳性血清感染组 ,在PBS洗后 1 2h的细胞培养上清中ELISA检测到HBsAg阳性 (A =0 .8) .PCR检测显示HBV阳性血清感染组细胞培养上清和HepG2细胞中HBVDNA阳性 ,阴性对照组和空白对照组HBVDNA阴性 .结论 :在一定条件下用HBV阳性血清进行HBV感染体外培养的HepG2细胞是可行的     

凉山州HIV与HBV、HCV、TP重叠感染状况分析

目的 研究HIV合并HBV、HCV、TP感染的现状及其特点,为HIV/AIDS的防控和治疗提供科学依据.方法 采用ELISA法,对406例HIV阳性血清进行HBV、HCV、TP检测,比较不同性别及年龄HIV感染者HBV、HCV、TP感染率.结果 406例HIV感染者合并感染HBV的有68例（16.7%）,感染HCV有210例（51.7%）,感染TP有69（17.0%）.同时感染HBV/HCV的有34例（8.41%）,感染HBV/TP的有6例（1.5%）,感染HCV/TP的有28例（6.9%）,同时感染HBV/HCV/TP的有4例（0.93%）.结论 治疗HIV应注意HCV、HBV、TP的多重感染治疗,并加强HIV、HCV、HBV、TP感染者健康教育.     

肝癌与HBV感染的关系

目的　探讨肝癌与HBV感染的关系。　方法　对 771例原发性肝癌病人及同期 794例其他消化道恶性肿瘤病人的血清HBV标记进行回顾性对比分析。　结果　发现肝癌组HBV -M阳性 72 6例 ( 94.16% ) ,非肝癌组HBV -M阳性 13 8例 ( 17.3 8% ) ,有显著差异 (P <0 .0 1)。HBV模式中 ,肝癌组HBV -M以“小三阳”( 1-4 -5 )为主 ,占全部肝癌病人的 67% ( 5 17/771) ,明显高于非肝癌组“小三阳”的 13 .5 1% ( 10 7/794)。　结论　原发性肝癌的发生与HBV有着非常密切的关系 ,而HBV与肝细胞的整合及不同的HBV基因型可能是其发生癌变的重要病理生理学基础。