IRF-4 binding protein promotes resistance of human salivary adenoid cystic carcinoma cells to taxol

目的 探讨IBP对SACC细胞抗紫杉醇凋亡能力的影响及其机制.方法 将ACC2转染IBP组和空白对照组各自根据不同紫杉醇浓度分成5组,紫杉醇作用72h后,MTT法检测在紫杉醇作用下IBP对SACC细胞增殖的影响;通过微管蛋白Tubulin免疫荧光染色,观察紫杉醇作用前后ACC2细胞微管的变化及IBP与微管的关系.结果 IBP使ACC2细胞对紫杉醇产生一定程度的耐药,在5μg/ml的紫杉醇浓度下最为明显;紫杉醇开始作用后,ACC2-C1细胞的微管点状聚集成团,而ACC2-C1/IBP细胞的微管则出现明显的紊乱、断裂,IBP能促进微管的解聚;IBP所发的绿色荧光与微管的红色荧光糅合在一起呈黄色,IBP与微管存在一定程度的共定位.结论 IBP促进SACC细胞对紫杉醇耐药.     

紫杉醇对涎腺腺样囊性癌实验性肺转移的抑制作用

目的 观察紫杉醇对人高转移性涎腺腺样囊性癌细胞(ACC-M)在裸鼠体内肺转移的抑制作用.方法 22只裸鼠,尾静脉注射接种ACC-M细胞建立实验性肺转移模型,随机分为紫杉醇组和对照组.紫杉醇组于接种肿瘤细胞后第2天起腹腔注射紫杉醇10 mg/kg,3 d注射1次,共10次;对照组同期腹腔注射等量溶剂.接种6周后处死实验动物.观察发生肿瘤肺转移的裸鼠数目,称体质量;解剖裸鼠肺脏,称质量;记录肺转移灶数目.结果 对照组和紫杉醇组相比,肺转移率100%vs 54.54%,肺转移结节数(28.64±10.69)vs(15.17±4.83),转移肺湿质量(0.702±0.044)g vs(0.524±0.046)g,2组比较差别均有统计学意义(P＜0.05).结论 紫杉醇对ACC-M细胞肺转移具有明显抑制作用.     

紫杉醇对人腺样囊性癌细胞ACC—2体外辐射增敏作用

目的 经体外实验评价紫杉醇对人腺样囊性癌细胞ACC-2的辐射增敏作用，初步阐明其机制。方法 用克隆形成法检测不同时间-浓度条件紫杉醇和／或放射作用后的人腺样囊性癌细胞ACC-2细胞存活分数，计算辐射增敏率(SER)。用流式细胞仪分析不同时间-浓度条件下紫杉醇对细胞周期和细胞凋亡的影响。结果 紫杉醇对ACC-2细胞具有体外增殖抑制作用。10，100，1000nmol/L紫杉醇作用24h后SER分别为1.29，1．66和1．23。细胞暴露于紫杉醇后发生G2／M期阻滞，紫杉醇作用时间和浓度越高，G2／M期细胞比率也越高。100，1000mol/L紫杉醇作用24h后G2／M期细胞比率明显升高。10nmol/L紫杉醇作用24h细胞凋亡率为20．7％。结论 一定条件下紫杉醇对人腺样囊性癌细胞ACC-2有体外辐射增敏作用。紫杉醇的辐射增敏作用可能是一个多机制事件，紫杉醇的G2／M期阻滞作用和诱导细胞凋亡作用在其中起重要作用。     

紫杉醇联合肿瘤坏死因子α对腺样囊性癌细胞的抑制作用

目的:探讨人肿瘤坏死因子α(TNF-α)联合紫杉醇对人腺样囊性癌细胞系SACC-83的抑制增殖作用及与细胞凋亡的关系,为化疗与生物治疗联合应用治疗腺样囊性癌提供实验依据。方法:将人腺样囊性癌细胞系SACC-83和对照组原代培养鼠肺成纤维细胞根据不同药物浓度分为9组,药物作用72 h。3H-TDR法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期改变;透射电镜观察凋亡细胞形态变化。结果:联合用药组的细胞增殖抑制率显著高于单独用药组(P<0.05)。L929细胞各组的细胞增殖抑制率显著低于SACC-83细胞(P<0.05)。结论:TNF-α联合紫杉醇对SACC-83细胞增殖的抑制作用以及诱导凋亡具有协同作用。     

Tip30联合紫杉醇对腺样囊性癌细胞生长抑制的实验研究

目的:观察抑癌基因Tip30联合紫杉醇抑制腺样囊性癌细胞ACC-2生长及特征性细胞核DNA变化.方法:待检ACC-2细胞分为4组:紫杉醇组、转基因组、紫杉醇 转基因组、空白对照组,采用MTT法检测细胞增殖率;DNA片段分析检测DNA裂解.结果:不同处理组检测结果分析显示,紫杉醇 Tip30组ACC-2细胞生长明显受到抑制,DNA裂解片段最为明显;单项处理组细胞生长亦受到抑制;对照组细胞生长未受影响.结论:Tip30联合紫杉醇可显著抑制ACC-2细胞生长,出现特征性DNA ladder现象.     

人涎腺腺样囊性癌细胞株转化生长因子α的研究

转化生长因子α(Transforming Growth Factor α,TGFα)是由50个氨基酸组成,分子量为6 KD的多肽生长因子,它与细胞的转化及癌瘤细胞的恶性生长关系密切。在人、鼠等多种癌瘤组织及转化细胞的培养液中均有TGFα的存在。但对于涎腺常见的恶性肿瘤——涎腺腺样囊性癌中TGFα却未见报道。为了探讨涎腺腺样囊性癌与TGFα的关系,并进一步确定我国首次建立的人涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞株的生物学特性,本实验应用放射免疫方法和斑点杂交技术对SACC-83细胞的TGF_α表达进行了研究。     

CDH4对涎腺腺样囊性癌细胞侵袭力的影响

目的探讨CDH4对涎腺腺样囊性癌(SACC)细胞侵袭和转移能力的影响。方法以人SACC高转移细胞株SACC-M为研究对象,利用CDH4小分子干扰RNA对CDH4基因进行沉默,Western blot检测转染前后CDH4蛋白的表达变化,体外侵袭实验比较细胞侵袭能力的变化,体外迁移运动实验比较细胞运动能力的改变。结果 CDH4siRNA明显下调CDH4基因的表达。CDH4表达下调后,SACC-M细胞体外侵袭能力显著降低,体外迁移运动能力明显降低。结论 CDH4可以明显地促进SACC细胞的体外侵袭和迁移运动,提示CDH4可能在SACC的恶性进展中起着重要作用。     

CDH12对涎腺腺样囊性癌细胞侵袭能力的影响

 目的探讨CDH12基因对涎腺腺样囊性癌细胞（SACC）侵袭能力的影响。方法应用巢式RT-PCR法从涎腺腺样囊性癌高转移细胞株SACC-M的总RNA中扩增出CDH12cDNA;应用AdEasyTMXL 腺病毒载体系统构建含人CDH12基因的重组腺病毒表达载体;转染SACC-M细胞后,采用Western blot 检测CDH12蛋白分子的表达,采用侵袭小室法检测CDH12对SACC-M细胞侵袭能力的影响。结果CDH12基因重组腺病毒及空腺病毒经鉴定正确;Western blot检测发现, CDH12基因重组腺病毒转染细胞（Ad-CDH12/SACC-M）组CDH12的表达水平明显高于空腺病毒载体转染（Ad0/SACC-M）对照组;与Ad0/SACC-M 组相比,AdCDH12/SACC-M组细胞的侵袭能力明显高于Ad0/SACC-M组（ P<0.01）。结论CDH12能够促进涎腺腺样囊性癌细胞的体外侵袭能力,提示该基因在涎腺腺样囊性癌的侵袭转移中可能具有重要意义。     

紫杉醇联合肿瘤坏死因子α诱导腺样囊性癌细胞凋亡的体外研究

目的探讨人肿瘤坏死因子-α(TNF-α)联合紫杉醇对人腺样囊性癌细胞系SACC-83的抑制增殖作用、作用机制以及与细胞凋亡的关系,为化疗与生物治疗联合应用治疗腺样囊性癌提供实验依据。方法将人腺样囊性癌细胞系SACC-83和对照组原代培养鼠肺成纤维细胞根据不同药物浓度分为9组,药物作用72 h。MTT法检测细胞增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期改变;观察凋亡细胞形态变化。结果联合用药组的细胞增殖抑制率显著高于单独用药组(P<0.05)。L929细胞各组的细胞增殖抑制率显著低于SACC-83细胞(P<0.05)。结论TNF-α联合紫杉醇对SACC-83细胞增殖的抑制作用以及诱导凋亡具有协同作用。     

金环蛇毒体外对人类小涎腺腺样囊性癌细胞的抑制作用

目的:研究金环蛇(BANDED KRAIT)蛇毒体外抗人类小涎腺腺样囊性癌(NACC)细胞活性.方法:以不同浓度的金环蛇毒作用于NACC细胞,应用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤化疗药物敏感试验法(ATP-TCA法)测定细胞的增殖状态;应用细胞形态学分析细胞凋亡.结果:实验显示金环蛇毒对体外培养的NACC细胞有明显的抑制作用,与浓度和作用时间呈正比.HE染色观察到金环蛇毒作用NACC细胞后其形态发生改变.结论:金环蛇毒能抑制NACC细胞增殖并诱导其凋亡.     

IRF-4结合蛋白对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖的抑制作用

目的 探讨IRF-4结合蛋白(IRF-4 binding protein,IBP)对人涎腺腺样囊性癌细胞增殖的影响.方法 用免疫组化(S-P法)染色技术对27例人涎腺腺样囊性癌组织和20例正常涎腺组织标本进行IBP表达的检测和分析.用脂质体法转染IBP过表达及空白对照载体至人腺样囊性癌细胞株ACC2,G418筛选后建立...     

一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白多克隆抗体制备

目的 获得一个新的高保守自身免疫反应相关分子IRF-4结合蛋白(IRF-4-binding protein,IBP)的高效价特异性多克隆抗体.方法 通过生物信息学分析选择IBP特异片段(1228～1893 bp),目的 片段cDNA插入pET32a和pGEX-KG原核表达载体,分别转化B1221感受态细菌,IPTG诱导表达后组合应用阴离子交换层析、His、GST亲和层析技术获得免疫原(pET32a/IBP融合蛋白)及检测原(pGEX-KG/IBP融合蛋白).HPLC鉴定纯度.利用改良快速免疫法获得兔抗IBP多克隆抗血清,井经蛋白A柱纯化,非特异性扰体吸收.间接ELISA检测抗体滴度、Western blot和免疫组化实验检测抗体特异性.结果 表达并纯化的pET32a/IBP融合蛋白纯度达92%,pGEX-KG/IBP融合蛋门纯度达87%.IBP多克隆抗体滴度达1:51 200,能特异地和内源性IBP结合.结论 成功表达并纯化了 IBP融合蛋白,制备了高滴度、高特异性的抗IBP多克隆抗体.     

趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株中的表达

目的:观察趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)肺高、低转移细胞株中的表达,探讨趋化因子受体CXCR4表达在ACC肺侵袭转移中的作用.方法:选取ACC肺高转移细胞株(ACC-M)和低转移细胞株(ACC-2)以及舌癌-8113细胞株(Tca-8113),分别应用单克隆抗体免疫荧光标记流式细胞术和Western印迹检测CXCR4在上述3种细胞中的表达.结果:3种细胞表面均有CXCR4受体的表达,其中ACC肺高转移细胞株ACC-M表达阳性率为(77.32±6.96)%,显著高于肺低转移细胞株ACC-2的(35.32±6.71)%和舌癌Tca-8113细胞株的(33.82±5.56)%,(P<0.05).Western印迹结果证实3种细胞株均有特征性的蛋白质表达条带,其中ACC-M的蛋白质表达条带最为显著.结论:趋化因子受体CXCR4在ACC肺高转移细胞株中高表达,提示CXCR4可能与ACC嗜肺转移的生物学特性有关.     

增殖细胞核抗原及P53蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达

目的：对涎腺腺样囊性癌(ACC)中增殖细胞核抗原(PCNA)和P53蛋白的表达及分布特点进行分析。方法：采用免疫组织化学ABC方法对36例ACC进行了研究。ACC按病理形态分为筛孔型、腺管型和实体型。结果：PCNA阳性表达率为77．78％，其中筛孔型69．23％，腺管型78．95％，实体型为100％。P53蛋白表达的阳性率为36．11％，其中筛孔型为30．77％，腺管型为26．32％，实体型为100％。结论：PCNA表达指数与染色强度可作为评价腺样囊性癌恶性程度的生物学指标，P53基因突变可能在腺样囊性癌的发生发展中具有一定作用，其对癌细胞的增殖具有促进作用。     

腺样囊性癌SACC-83细胞对雪旺氏细胞的促生长作用

目的:观察在体外共培养中腺样囊性癌细胞对由坐骨神经生长出的雪旺氏细胞的影响。方法:将腺样囊性癌细胞、舌癌细胞及成纤维细胞分别与小鼠坐骨神经共培养,制备细胞玻片并行S100免疫组化染色实验。结果:腺样囊性癌细胞可促进由坐骨神经长出的雪旺氏细胞增生;经S100免疫组化染色,阳性为雪旺细胞;阴性为成纤维细胞。结论:坐骨神经与腺样囊性癌细胞共培养可促进雪旺氏细胞增生。     

蛋白激酶CK2-β在腺样囊性癌细胞中的活化

目的：探讨蛋白激酶CK2-β在涎腺腺样囊性癌肺转移（SACC-LM）细胞中的活性变化和表达及其与肺转移的关系。方法：利用激酶活性测定法检测蛋白激酶CK2-β在SACC-LM和对照组SACC-83细胞核及细胞质中的活性；采用RT—PCR方法检测蛋白激酶CK2-β被不同浓度抑制剂DRB处理后nm23-HI的mRNA表达。结果：SACC-LM细胞蛋白激酶CK2-β具有较高的活性，其在细胞核中的活性高于在细胞质中的活性；随着蛋白激酶CK2-β被抑制程度的提高，nm23-H1的表达增加。结论：蛋白激酶CK2-β的活性和表达与SACC-LM呈正相关。     

阻断黏着斑激酶表达对涎腺腺样囊性癌细胞侵袭的影响

目的:研究阻断黏着斑激酶(FAK)的表达对涎腺腺样囊性癌肺高转移性细胞系(SACC-LM)侵袭的影响,并探讨其相关机制.方法:选取处于对数生长期的SACC-LM细胞随机分为空白对照组、DMSO溶媒组和Genistein组,应用Transwell小室通过平均穿膜细胞数观察Genistein 对SACC-LM细胞侵袭的影响...     

CDH12基因siRNA对涎腺腺样囊性癌细胞侵袭力的影响

目的:探讨钙粘素12(Cadherin 12,CDH12)对涎腺腺样囊性癌(Salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞侵袭和转移能力的影响.方法:以人涎腺腺样囊性癌高转移细胞株(Salivary adenoid cystic carcinoma cell line with hi...