c-fos和神经营养因子在大鼠脑缺血再灌流时的神经元表达特点

为了观察脑缺血再灌流时 c-fos和神经营养因子在神经元表达的时空特点 ,探讨其在缺血性神经元损伤中的作用 ,本研究用阻塞 SD大鼠大脑中动脉 2 h、再灌流 0 .5～ 48h制成局灶性脑缺血模型 ,用免疫组化方法观察了 c-fos和神经营养因子转化生长因子、神经生长因子和胶质源性神经营养因子在神经元的表达特点。结果表明 ,c-fos和转化生长因子分布相似 ,正常组无 c-fos和转化生长因子阳性神经元 ;缺血再灌流 0 .5～ 48h阳性的神经元主要位于非大脑中动脉供血区 ,缺血区皮质、纹状体和视前区神经元为阴性。而实验各组对照侧皮质神经元中等阳性。神经生长因子、胶质源性神经营养因子在缺血脑组织的分布相似。正常组、假性手术组 ,皮质、嗅结节、丘脑和下丘脑等区的神经元神经生长因子、胶质源性神经营养因子免疫反应为弱阳性乃至强阳性 ;再灌流 0 .5 h,缺血区皮质弱阳性 ,缺血周边区中等阳性 ;再灌流 3～ 48h,神经生长因子、胶质源性神经营养因子强阳性的神经元主要位于非大脑中动脉供血区和缺血周边区。此外 ,对照侧皮质大量的神经元呈强阳性。结论 ,上述资料提示即早基因 c-fos和神经营养因子具有促进神经元存活的作用     

大鼠脑缺血再灌流时即早基因c-fos在脑组织表达的免疫组织化学研究

为了研究 c-fos在大鼠缺血性脑损伤中的作用 ,本研究利用阻塞大鼠大脑中动脉 2 h后再灌流 0 .5～ 48h制成的局灶性脑缺血模型 ,用免疫组织化学技术观察了 c-fos的表达特点。结果证明 ,正常组、假性手术组 c-fos在神经元的表达呈阴性或弱阳性 ;再灌流 0 .5～ 48h组 ,胞核呈强阳性 ( +++)的神经元主要位于非大脑中动脉供血区 ,而缺血中心区的皮质、纹状体和视前区呈阴性 ( -)。缺血周边区 ,神经元胞核呈弱阳性 ( +)。正常组未发现 c-fos阳性的胶质细胞 ,假性手术组脑实质内胶质细胞团和侧脑室壁的胶质细胞 c-fos呈强阳性 ,再灌流 3h组脑室壁及深层的室管膜下区和皮质浅层、髓质等处胶质细胞为阳性 ,再灌流2 4～ 48h组缺血周边区和脑实质内的巨噬细胞、活化小胶质细胞呈强阳性 ;再灌流 48h组 ,白质如胼胝体内大量的反应性星形胶质细胞呈强阳性。本文结果提示 ,脑缺血时 c-fos对神经元具有神经保护作用 ,并且这种保护作用可能与小胶质细胞和星形胶质细胞的活化有关     

骨髓基质细胞移植缺血性脑梗死大鼠后神经营养因子的表达

背景：骨髓基质细胞在适宜条件下可分化为神经元和星形胶质细胞,分泌可溶性分子促进神经元存活。 目的：观察骨髓基质细胞移植后缺血性脑梗死大鼠脑组织神经营养因子表达情况及其对神经功能的影响。 方法：改良的Longa栓线法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,1 h后再灌注,24 h后治疗组尾静脉注射3×106骨髓基质细胞,盐水对照组尾静脉注射1 mL生理盐水,空白对照组不进行注射。 结果与结论：在梗死后第7,14天治疗组的神经损伤评分明显低于对照组(P < 0.05);治疗组神经生长因子和脑源性神经营养因子表达在各时间点均高于对照组(P < 0.05)。结果显示静脉移植骨髓基质细胞可改善缺血性脑梗死大鼠神经功能,移植骨髓基质细胞后缺血脑组织中神经生长因子及脑源性神经营养因子表达促进了神经功能的恢复。     

脑外源性神经因子基因修饰神经干细胞对脑卒中的神经保护机制

背景：脑外源性神经因子-胶质源性神经营养因子对大脑神经元具有特异性的营养作用,是脑卒中治疗中重要的神经营养因子。 目的：探讨胶质源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞对大鼠脑卒中的神经保护作用机制。 方法：构建大鼠胶质源性神经营养因子基因pAdEasy-l-pAdTrackCMV重组体,并对新生大鼠皮质神经干细胞进行分离、培养。利用胶质源性神经营养因子基因重组腺病毒对神经干细胞进行转染,再将细胞悬液注射至暂时性(2 h)大脑中动脉缺血模型大鼠右侧脑室中,同时设单纯神经干细胞组和对照组进行对比。 结果与结论：与神经干细胞移植组比较,联合移植组再灌注2,3周的神经功能缺损评分,再灌注7 d脑缺血损伤面积均显著减小(P < 0.05);不同再灌注时间点缺血区域的神经干细胞数量神经干细胞移植组均显著少于联合移植组(P < 0.05)。再灌注7,14 d,两组Syn,PSD-95蛋白表达均高于对照组(P < 0.05),联合移植组升高较为明显。结果表明,利用经胶质源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞治疗大鼠脑卒中可以发挥出较好的神经保护作用,效果略优于单纯神经干细胞治疗。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

局灶性脑缺血大鼠顶叶皮质一氧化氮合酶表达与CT灌注成像

目的:观察重度局灶性脑缺血状态下大鼠顶叶皮质一氧化氮合酶(NOS)表达过程,探讨NOS阳性神经元表达与脑血流量的关系.方法:SD大鼠随机分为5组即正常对照组,假手术组,脑缺血1、6、24 h组.线栓法建立大鼠脑缺血模型,多排螺旋CT灌注成像测量脑血流量,采用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)法,观察脑血流量低于20%正常值时顶叶皮质NOS表达.结果:与对照组比较,缺血1 h组顶叶皮质NOS阳性神经元数量明显增多;与对照组及缺血1 h组比较,缺血6 h组顶叶皮质NOS阳性神经元数量明显下降;与对照组及缺血1 h组比较,缺血24 h组顶叶皮质NOS阳性神经元数量进一步减少并几乎消失,与脑缺血6 h组比较,无显著差异.当血流量仅轻度下降时,顶叶皮质NOS阳性神经元表达并无明显变化.结论:缺血侧脑血流量低于正常值20%时,顶叶皮质NOS阳性神经元在缺血1 h时显著增加,缺血6、 24 h急剧减少;缺血后NOS阳性神经元表达,不仅与缺血持续时间有关,还与缺血程度有关.     

脑缺血再灌注后脑内血红素氧合酶-1表达的时相变化

目的 :研究局灶性脑缺血再灌注时血红素氧合酶 1(HO 1)在脑内的表达及其作用。方法 :采用梗塞大鼠大脑中动脉制备脑缺血再灌注模型 ,对 66只大鼠脑缺血及缺血再灌注后不同时间点进行HO 1免疫组化及病理学研究 ,并用计算机图像分析技术计算HO 1表达的强弱。结果 :单纯缺血 1h后皮质及海马即有HO 1阳性神经元胶质细胞的表达 ,梗塞 1h再灌 0 .5hHO 1表达与单纯缺血基本相同。随着再灌注时间的延长 ,HO 1的表达逐渐增强 ,到再灌 12h时达最高 ,以后逐渐下降 ,再灌 7天后仍有HO 1表达。HO 1主要分布在灶周皮质、梗塞皮质区、梨状皮质内的神经元及胶质细胞 ,丘脑、下丘脑、海马齿状回的神经元。结论 :局灶性脑缺血再灌注时脑内HO 1表达变化 ,是脑组织对自身损伤的重要恢复机制之一。HO 1自身具有脑保护作用并通过其下游产物CO起作用     

力竭运动性猝死模型大鼠运动皮质Bax、Bcl-2及脑源性神经营养 因子的表达变化

    文章快速阅读： 文题释义： 运动性猝死：是运动员或体育锻炼者在运动中或运动后24 h内,有症状或无症状情况下的意外死亡,运动负荷是诱发运动性猝死的主要因素之一,并且猝死的危险性随负荷强度增高而增大,大强度运动下运动性猝死的发生机制尚不清楚,分析大强度运动下出现的运动性猝死案例有助于探索其发生机制。 脑源性神经营养因子：是主要在中枢神经系统内表达的具有神经营养作用的蛋白质,它是一种脑组织细胞保护因子,在海马体和脑皮质内含量最高。力竭运动时大脑的相对缺血缺氧诱导发生了两个相反的级联过程,一个是由基因表达调控的神经元细胞主动性的死亡过程;另一个则是受到损伤刺激的神经元通过上调脑源性神经营养因子的表达水平而产生的一种主动性的细胞保护过程,从而使细胞能够抵御运动性脑缺血缺氧引起的病理生理损伤而得以存活。摘要 背景：运动性猝死是运动实践中的常见现象,因偶发故其机制不明。 目的：观察运动性猝死大鼠的运动皮质细胞形态学改变、凋亡调控因子Bax、Bcl-2及脑源性神经营养因子的表达变化,探讨连续力竭性负重游泳训练中运动性猝死的发生及调控机制。 方法：130只雄性SD大鼠随机选7只为空白对照组,其余大鼠在疲劳造模后按36 h的训练周期、对大鼠进行连续力竭性负重游泳训练,并分别在6×36 h、9×36 h与12×36 h训练后随机处死7只大鼠分别记为连续力竭性负重游泳训练1,2,3组(力竭运动1,2,3组);将多次相同模型实验中、6×36 h后偶然出现在每次训练中或训练后24 h内的死亡大鼠(排除因呛水死亡)记为运动性猝死组(n=5)。采用苏木精-伊红染色观察大脑运动皮质细胞的形态结构变化,免疫组织化学染色检测Bax、Bcl-2蛋白及脑源性神经营养因子的阳性表达变化。 结果与结论：①与空白对照组相比,力竭运动1,2,3组和运动性猝死组的运动皮质细胞形态结构发生明显改变,Bax、Bcl-2蛋白及脑源性神经营养因子的阳性表达率明显增高(P < 0.05);②在力竭运动1,2,3组和运动性猝死组中Bax及Bcl-2蛋白呈递增趋势,Bcl-2蛋白表达增强程度高于Bax蛋白;而脑源性神经营养因子的表达呈先增加后降低的趋势;③结果表明,力竭运动组及运动性猝死组中运动皮质细胞内Bax、Bcl-2蛋白及脑源性神经营养因子的阳性表达的增强可能与运动皮质细胞的保护抑制机制有关;过度疲劳时运动皮质内脑源性神经营养因子表达的下降可能是诱发运动性猝死的原因之一。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程 ORCID: 0000-0001-5187-9404(阳仁均)     

改良的短暂局灶性大鼠脑缺血模型

SD成年雄性大鼠34只，用多聚-L-赖氨酸处理的尼龙线从大鼠颈总动插入，送至大脑中动脉以阻断大脑中动脉（MCA）的血液，造成MCA供血区缺血，2小时后将尼龙线头端退出到颈内动脉的颈段，制成短暂局灶性脑缺血模型。再灌流0．5-48小时后，观察了缺血的神经症状、脑组织TTC染色以及HE染色所显示的缺血灶和缺血的组织学特征。所有实验组均出现程度相同的各种神经症状，正常对照组、假性手术对照组和缺血组对照侧TTC染色为红色，缺血区为白色．并且位于同侧视前区、纹状体及大脑皮质，随再灌流时间的延长缺血区逐渐扩大．到24小时组，缺血区扩散为整个MCA供血区。3小时内神经元主要为急性期改变，HE染色神经元肿胀或收缩，6小时出现不可逆的神经元改变，48小时内视前区和纹状体现出凝固性坏死。这一模型操作简单，重复性好、敏感性高、反应一致，且易再灌流，因此是比较理想的短暂性局灶性脑缺血模型，可为临床中风的药物研究提供基本条件。     

碱性成纤维细胞生长因子对局灶性脑缺血大鼠脑组织C/EBP同源蛋白表达的影响

目的:研究大鼠脑缺血再灌注后对C/EBP同源蛋白(C/EBP homogous protein,CHOP)表达的影响,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元CHOP的调节作用及机制.方法:应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞2h再灌注损伤12 h,采用TUNEL法、免疫组织化学方法检测海马及皮质内神经元凋亡和CHOP的表达.结果:Sham组海马及皮质偶见凋亡细胞,皮质及海马神经元内少见CHOP免疫反应阳性细胞;I/R组海马及皮质神经元凋亡增加,缺血再灌注损伤后皮质及海马神经元内CHOP阳性表达高于假手术组.bFGF组海马及皮质神经元凋亡减少,皮质及海马神经元内CHOP表达较I/R组减少.结论:bFGF减少缺血神经元凋亡,抑制脑缺血诱导的CHOP表达,对脑缺血再灌注海马及皮质神经元具有保护作用.     

BDNF、NGF对体外长期培养的胚基底前脑胆碱能神经元的影响

本文探讨了脑源性神经营养因子、神经生长因子对体外长期培养的胚基底前脑胆碱能神经元是否具有延缓退变的作用。实验分为脑源性神经营养因子组、神经生长因子组、脑源性神经营养因子加神经生长因子组及单纯对照组。取孕 17d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 2 4孔培养板中 ,按分组加入含相应神经营养因子和不含神经营养因子的 DMEM培养液 ,分别于体外培养 12、18、2 4、3 0 d后进行乙酰胆碱酯酶组织化学反应。显微镜下计数各孔中乙酰胆碱酯酶阳性神经元数 ,每孔随机测量和计数 2 5个乙酰胆碱酯酶阳性神经元的平均胞体直径、发出的突起数和最长突起长度。数据用方差分析和 SNK检验进行统计学处理。结果显示 ,在培养的 4个时期 ,含脑源性神经营养因子组、神经生长因子组和脑源性神经营养因子加神经生长因子组的各项数据均明显地优于单纯对照组 ;脑源性神经营养因子加神经生长因子组的各项数据 ,特别是最长突起长度优于单独使用脑源性营养因子或神经生长因子组。提示 :脑源性神经营养因子和神经生长因子不仅对体外培养的胚胆碱能神经元发育生长具有促进作用 ,而且还可延缓体外长期培养的大鼠胚基底前脑胆碱能神经元的退变 ;两者的联合使用还可对延缓其退变具有协同作用     

BDNF、NGF对AD模型鼠脑移植区一氧化氮合酶阳性神经元发育生长的影响

用使君子酸（ＱＡ）损毁ＳＤ 大鼠左侧Ｍ ｅｙｎｅｒｔ基底大细胞核,制成老年性痴呆症（ＡＤ）模型。将同种鼠胚基底前脑制成的细胞悬液不加神经营养因子和分别加入脑源性神经营养因子（ＢＤＮＦ）、神经生长因子（ＮＧＦ）及ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ者植入ＡＤ 模型鼠额、顶叶皮质,隔日通过脑室灌注人工脑脊液和相应神经营养因子共７ 次。移植后４ 个月,取脑切片作Ｎｉｓｓｌ染色、ＮＡＤＰＨ ｄ和ＮＡＤＰＨ ｄ＋ ＡＣｈＥ 组化染色,计数移植区中ＮＯＳ阳性神经元数及其纤维在１６９００ μｍ ２ 网格中的交点数,并用ＭＩＡＳ ３００ 计算机图像分析系统对移植区中ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积进行处理。结果显示：给予神经营养因子的动物,移植区中的ＮＯＳ阳性神经元数、ＮＯＳ阳性纤维交点数和ＮＯＳ阳性神经元的细胞面积等形态学指标均较不给予神经营养因子的对照组为佳,而在应用神经营养因子的各组中又以ＢＤＮＦ＋ ＮＧＦ组为优,提示ＢＤＮＦ、ＮＧＦ能促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元的发育生长,ＢＤＮＦ与ＮＧＦ联合使用可发挥协同作用。本文对ＢＤＮＦ和ＮＧＦ促进移植区中ＮＯＳ阳性神经元发育生长的机制进行了探讨。     

NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质内CREB mRNA表达的影响

探讨外源性神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质内的cAMP反应元件结合蛋白(cyclicAMPresponseelementbindingprotein,CREB)mRNA表达的影响。用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,运用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质内CREBmRNA的表达。结果显示:缺血再灌注组缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREBmRNA阳性反应产物平均光密度(OD)比假手术组减少(P<0.05),NGF组CA1区和顶叶皮质内的CREBmRNA阳性产物平均光密度高于缺血再灌注组(P<0.05)。本研究结果提示NGF可以上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质缺血神经元CREBmRNA的表达,NGF对缺血神经元的保护作用可能通过激活CREB的转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现。     

短暂性脑缺血后再灌注大鼠丘脑C-jun mRNA表达及CGRP和NGF的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性脑缺血后再灌注大鼠丘脑c-jun mRNA表达的影响。方法在脑缺血后再灌注模型上,应用原位杂交结合显微图像分析方法检测c-jun mRNA表达。结果缺血组大鼠丘脑较假手术组c-jun mRNA表达显著增加(P<0.01),CGRP组和NGF组c-jun mRNA表达分别低于缺血组(P<0.05),CGRP+NGF合用组c-jun mRNA表达明显低于缺血组(P<0.01)和分别低于CGRP组和NGF组。结论CGRP和NGF分别抑制脑缺血后再灌注大鼠丘脑c-jun mRNA表达,二者联合应用对保护缺血神经元可能有协同作用。     

神经生长因子与降钙素基因相关肽减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化

为探讨外源性神经生长因子(NGF)和降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马神经元tau蛋白过度磷酸化的影响,用线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western Blotting和图像分析方法检测大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化程度和总tau蛋白表达,以及NGF与CGRP对tau蛋白过度磷酸化的影响。结果显示:缺血再灌注组同侧海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平和总tau蛋白明显升高(P<0.05);NGF组及CGRP组大鼠海马tau蛋白在Ser199/202位点磷酸化水平明显低于缺血再灌注组,总tau也下降(P<0.05);NGF与CGRP合用组海马tau蛋白磷酸化水平进一步降低,分别低于NGF组和CGRP组(P<0.05)。以上结果表明NGF及CGRP明显减轻局灶性脑缺血再灌注大鼠海马tau蛋白磷酸化程度,二者合用作用更强,降低缺血神经元tau蛋白磷酸化水平可能对缺血神经元起保护作用。     

慢性脑缺血大鼠大脑皮质中的神经生长因子表达

目的：研究慢性脑缺血时大鼠大脑皮质中神经生长因子（NGF）的表达变化,探讨缺血性脑损伤及修复机制。方法：永久性结扎Wistar大鼠双侧颈总动脉,取慢性脑缺血30、120d组。行为学测试,免疫组化ABC法染色,计数大鼠大脑皮质中的NGF阳性神经元数及测量平均灰度值。结果：大鼠慢性脑缺血时,大脑皮质中NGF的表达,第120d比第30d及对照组显著增强,而30d与对照组无显著性差异,同时伴有学习和记忆力下降。结论：慢性脑缺血时,NGF在大脑皮质中的表达将随时间逐渐增强,对坏死神经元起保护作用。     

C57black/6小鼠全脑缺血模型脑内Bax和Bcl-2的表达

本研究采用C57black/6小鼠制备全脑缺血模型,观察脑缺血后多个脑区Bax和Bcl-2基因的表达。双侧颈总动脉夹闭(bilateral common carotid artery occlusion,BCCAO)15min,造成全脑缺血,24h后取脑组织进行Bax和Bcl-2免疫组织化学染色。结果显示:Bax阳性细胞广泛分布在大脑皮层、丘脑和杏仁核,阳性产物主要位于胞质内。除丘脑外,其他各部位Bax阳性神经元的密度缺血组均显著高于假手术组(P<0.05);缺血组各区域细胞染色灰度值均显著低于假手术组(P<0.01)。Bcl-2阳性细胞在大脑皮层和丘脑均有表达,缺血组大脑皮层内Bcl-2阳性神经元的密度显著高于假手术组(P<0.05);缺血组各区域细胞染色灰度值均显著低于假手术组(P<0.01)。以上结果表明双侧颈总动脉夹闭法致C57black/6小鼠全脑缺血模型可致多脑区Bax和Bcl-2的广泛表达,提示Bax和Bcl-2可能介导了缺血所致的神经元损伤。     

CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织PKC表达的调节作用

目的　研究大鼠脑缺血再灌注后蛋白激酶C(proteinkinaseC ,PKC)在海马和顶叶皮质的表达 ,探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)和神经生长因子 (NGF)对脑组织缺血再灌注的保护作用及机制。方法　采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海马及皮质内PKC的表达。结果　大鼠缺血再灌注海马CA1区及顶叶皮质内PKC阳性产物平均灰度值较正常组低 (P <0 .0 5 ) ,注射CGRP或NGF后PKC阳性产物平均灰度值明显高于缺血再灌注组 (P <0 .0 1) ,二者联合应用时平均灰度值比单独应用高 (P <0 .0 1)。结论　CGRP及NGF参与缺血神经元PKC的调节 ,二者对缺血神经元有协同保护作用     

CGRP和NGF对全脑缺血再灌注大鼠脑组织Erk表达的调节作用

目的 :检测大鼠脑缺血再灌注后细胞外调节蛋白激酶 (Erk)的表达 ,探讨降钙素基因相关肽 (CGRP)和神经生长因子 (NGF)对脑组织的保护作用及机制。方法 :采用颈动脉负压分流法制作大鼠脑缺血再灌注模型 ,采用免疫组织化学SABC法及显微图像分析检测海马及皮质内Erk的表达。结果 :大鼠缺血再灌注海马及皮质内Erk免疫反应阳性产物较正常组增多 (P <0 .0 5 ) ,而注射CGRP或NGF后阳性产物明显高于缺血再灌注组 (P <0 .0 1 ) ,二者联合应用效果更加显著 (P <0 .0 5 )。结论 :CGRP及NGF参与缺血神经元Erk的调节 ,二者对缺血神经元有协同修复作用