四例中国青少年的成人起病型糖尿病2型家系的临床与分子遗传学研究

目的探讨中国青少年的成人起病型糖尿病2型（MODY2）患者的临床特点和分子遗传学特征。方法对2013年2月至8月北京协和医院诊断的4例MODY2家系患者的临床特点及实验室检查资料进行系统性分析并抽提相关家系成员的基因组DNA,聚合酶链式反应（PCR）扩增后进行葡萄糖激酶（GCK）基因直接测序。结果在4例家系中共诊断10例GCK基因突变引起的糖尿病和糖调节受损患者。在8例有临床资料的患者中,高血糖的诊断年龄为5．3～44．0岁,查体是主要发现形式,所有患者血甘油三酯水平均正常或低于正常下限。4个家系的GCK基因检测发现2个新突变c．749G〉A（R250H）和C．781G〉C（G261R）和2个已报突变e．127C〉T（R43C）和c．571C〉T（R191W）。结论中国MODY2患者临床表现多样,GCK基因C．749G〉A突变可能是MODY2的致病原因。     

母系遗传糖尿病线粒体基因突变的观察

采用PCR-RFLP、DNA直接测序技术对14个有明确母系遗传史的糖尿病家系进行线粒体基因筛查。结果14例先证者及对照组均未检出A3243G等3个线粒体基因突变位点。家系成员发现携带G3316A突变，T3394C突变，三例均为健康携带者。结论G3316A突变、T3394C突变不是糖尿病的独立致病因素。     

先天性QT延长综合征亚型JLN综合征的基因突变研究

目的　对一先天性QT延长综合征亚型JLN综合征 (JLNS)家系进行基因突变检测 ,以期发现中国人特有的JLNS突变。方法　采用聚合酶链反应及直接测序法对一JLNS家系进行KCNQ1及KCNE1的基因检测。结果　在先证者及其姐姐的KCNQ1基因的第 1 5外显子发现一错义突变 :2 0 37(G→A)、G6 4 3S ,还有另一突变是KCNQ1基因外显子 2a的第 2 2 7位核苷酸C被T代替 ,其编码的苏氨酸被异亮氨酸所代替。而这两突变分别来自其表型正常的父母亲。结论　JLNS可由KCNQ1基因上复合的杂合突变所引起。在中国QT延长综合征患者中发现两个JLNS的新的突变。     

以肝肿大为主要表现的Ⅰa型糖原累积病家系研究分析

目的对一个以肝肿大为主要表现的Ⅰa型糖原累积病（GSD 1a）家系进行基因突变研究和分析。方法收集GSDⅠa患者家系资料和亲属外周血标本，PCR法扩增葡萄糖-6-磷酸酶（G-6-Pase）基因的5个外显子，并测序比对基因序列的变化。结果结合临床表现、肝组织学检查及家系分析，患者诊断明确。基因结构分析显示，患者p6-Pase基因5号外显子密码727G→T／1071C→A（A331E）复合突变。在其父辈家系中存在5号外显子727G→T杂合子突变，导致剪切点突变；其母辈家系中存在5号外显子1071C→A杂合子突变，导致第331位密码子编码的A转变为E。结论患者的祖父及外祖母为首发突变者。727G→T／1071C→A（A331E）复合突变是该家系发病的分子生物学基础。     

新突变致复合杂合子家族性高胆固醇血症家系的基因检测

目的对临床诊断为遗传性高胆固醇血症纯合子患者所在家系成员的相关基因进行突变检测和分析,探讨该病的分子诊断方法和发病的可能分子机制。方法以该家系中3代共6人的基因组DNA为模板,用PCR对低密度脂蛋白受体（LDLR）基因的全部18个外显子和启动子以及载脂蛋白B-100（Apo B-100）基因3500-3531区域进行扩增,琼脂糖凝胶电泳鉴定后对PCR产物直接测序。测序结果与Gene Bank中该基因的正常序列对比找出突变,结合该家系成员临床表型证实突变。结果在ApoB-100的3500-3531区域未发现突变,而在先证者LDLR基因的第4外显子发现新的点突变685delA杂合性腺嘌呤缺失和386A〉G杂合错义突变,其父存在685delA杂合性腺嘌呤缺失,其母存在386A〉G杂合错义突变。结论证实家系先证者是存在LDLR突变的复合杂合子,发现的新的LDLR基因突变位点386A〉G和685delA分别来源于父系和母系的遗传,可能是该家系发病的分子基础。     

线粒体基因突变糖尿病一家系分析

目的 探讨糖尿病(DM)家系中的线粒体基因突变位点.方法 采用PCR、DNA直接测序技术,对9例临床疑似线粒体基因突变DM家系进行线粒体基因突变高发区域tRNALeu(UUR)基因检测.结果 该家系发现与DM发病有关的突变位点均位于nt3243A→G,且家系中大部分患者伴有消瘦、耳聋、β细胞功能低下、发病年龄低的特点.结论 线粒体tRNALeu(UUR)基因3243位点A→G突变可导致DM和耳聋.     

Gilbert综合征患者血UGT1A1基因检测及临床意义

目的 观察Gilbert综合征（GS）患者血UGT1A1基因遗传变异情况,并探讨其意义.方法 采用Sanger 双脱氧链终止法对4例GS患者（包括1家系）进行外周血UGT1A1基因检测,检测内容包括UGT1A1基因的启动子TATA盒、c-3279位点及全部5个外显子核酸序列.结果 1例UGT1A1第5号外显子存在Tyr486Asp纯合突变;1例UGT1A1启动子TATA盒TA插入杂合变异,且c-3279T＞G杂合突变;1例UGT1 A1基因无遗传变异;1例家系中先证者为UGT1A1启动子TATA盒TA插入纯合变异,患者父亲、母亲为A（TA）6TAA/A （TA） 7TAA杂合基因型.结论 GS属染色体隐性遗传疾病,其UGT1A1基因遗传变异包括启动子TATA盒TA插入变异、c-3279T＞G以及外显子碱基突变,在GS诊断中有重要意义.     

用变性高效液相色谱检测和脱氧核糖核酸测序方法对三个肥厚型心肌病家系β肌球蛋白重链基因突变的分析结果

目的:研究家族性肥厚型心肌病(HCM)的主要致病基因β肌球蛋白重链(MYH7)基因突变情况.方法:用变性高效液相色谱(DHPLC)检测和脱氧核糖核酸(DNA)测序方法对三个肥厚型心肌病家系成员的MYH7基因8、14外显子及附近上下游序列进行检测分析;另选正常对照者50例.结果:三个家系其中一个家系发现MYH7基因14外显子中存在Thr441Met突变,外显子8也存在一个点突变.另外两个家系均存在外显子8的C到T的突变,但表型不一.其中一个家系还存在内含子13和19的多态位点.此外,三个家系MYH7基因第3外显子均发现同义突变.结论:MYH7基因在肥厚型心肌病家系中具有较高的突变率.运用变性高效液相色谱技术,能够快速有效的进行基因突变筛查.     

一个扩张型心肌病伴房室传导阻滞家系SCN5A基因的突变研究

目的研究一个扩张型心肌病伴房室传导阻滞家系中心脏钠离子通道基因（voltagegated sodium channel type V,SCN5A）的遗传突变或多态位点。方法应用聚合酶链反应结合DNA直接测序技术对该家系的23位直系成员进行SCN5A基因编码区全部28个外显子的检测;对于新发现的变异位点筛查133名无血缘关系的正常人作为对照。结果在该家系中共检测到4个遗传变异,分别为c．87G〉A（A29A）,C．731T〉C（1244T）,C．3578G〉A（R1193Q）和c．5457T〉C（D1819D．）。其中c．731T〉C（1244T）为新发现的遗传变异,位于第7外显子,碱基的变异导致氨基酸第244位由苏氨酸代替异亮氨酸。家系中有4名成员携带1244T,但是133名健康对照者中未发现该变异。结论在一个扩张型心肌病伴房室传导阻滞家系中发现了SCN5A基因的新遗传变异。     

宫颈癌患者HPV基因型分布及HPV52编码基因突变情况分析北大核心CSCD

目的研究本地区宫颈癌患者HPV感染基因型分布特征和HPV52型E6、E7区基因突变情况,为防治宫颈癌提供依据。方法收集本院就诊169例宫颈癌患者样本并进行检测分型。采用PCR热扩增,检测HPV52型E6、E7区基因突变情况。结果169例宫颈癌患者按年龄划分≤30岁、30~40岁、40~50岁、50~60岁、60~70岁和70岁以上分别为3、23、59、58、21和5例。从样本中共计分离出217株HPV病毒,HPV16型105株、HPV18型35株、HPV31型7株、HPV33型9株、HPV35型1株、HPV39型4株、HPV45型1株、HPV51型4株、HPV52型17株、HPV56型3株、HPV58型23株、HPV59型3株、HPV66型3株、HPV68型1株和HPV82型1株。134例患者是单一感染;29例患者双重HPV感染,5例患者三种HPV类型病毒同时感染,1例患者四种HPV类型病毒同时感染。HPV52型E6蛋白编码基因突变情况:单一突变9株,双重突变1株,三重突变1株,四重突变3株。共有14个碱基发生替代,分别为:C114T、C140G、A204G、A232G、G233T、A264T、T272G、G350T、G356A、A379G、T415C、T417A、G425C、G502C和A524G。HPV52型E7蛋白编码基因突变情况:单一突变3株,双重突变3株,三重突变3株,四重突变3株,六重突变1株。共有16个碱基发生替代,具体情况分别为:A577 C、G592 T、A599 G、C611 G、G655 A、G657 A、C662 T、A 690 T、C714 T、T739 A、G742 A、C747 T、C751 T、G 775 A、T 789 A和A 801 G。结论HPV16、18、52、58型是主要基因型,40~60岁是HPV感染高发人群。多数患者携带的HPV52型E6、E7区域的基因存在基因突变,应加强对HPV感染和变异情况监测。     

组织非特异性碱性磷酸酶基因突变与低磷酸酶血症：2个新突变位点

目的：对2例低磷酸酶血症（HPP）患者及家系进行分析和基因突变检测,拓展国人HPP致病基因库,探讨HPP的致病机制。方法对HPP家系先证者和其父母进行生化指标[血常规、肝肾功能、碱性磷酸酶（ALP）、甲状旁腺素（PTH）、钙、磷等]和骨密度检测。同时对所有研究对象进行alkaline phospatase,live/bone/kidney（ALPL）基因全部12个外显子和外显子内含子交界区直接测序。结果来自家系1的先证者为36岁成年男性,身高131.0cm,体重35.0kg。X线提示多发性胸腰椎骨折和骨盆畸形,生化检测示血清ALP27U/L。测序发现ALPL基因6号外显子532位杂合突变（c.532T＞C）,致ALPL成熟多肽中酪氨酸被组氨酸替代。该先证者母亲身高140.5cm,体重39.5kg,血清ALP30U/L,基因测序证明也是该杂合突变携带者。来自家系2的先证者5岁,其外祖父母为近亲结婚。该患儿身高100.0cm,体重18kg。血清ALP55U/L[低于同龄儿童正常范围（＜10岁）75～344U/L],牙齿发育不良并脱落,有左股骨中下端骨折史。测序发现该患儿存在ALPL基因2个错义突变,其中9号外显子c.871G＞A突变。4号外显子269位突变（c.269A＞G）是一个新的错义突变,该突变导致成熟ALPL多肽中天冬氨酸被甘氨酸所替代。该患儿母亲亦是4号外显子c.269A＞G错义突变携带者,但其生化指标正常,无骨骼和牙齿异常。结论ALPL基因6号外显子c.532T＞C突变和4号外显子c.269A＞G突变是以往未曾报道过的新错义突变,为上述2例HPP患者致病基因。     

Mutation prevalence among 51 unrelated Spanish patients with Gaucher disease: identification of 11 novel mutations.

Gaucher disease is an autosomal recessive disorder caused by mutations in the lysosomal beta-glucocerebrosidase (GBA) gene. Gaucher disease is a very heterogeneous entity due to the large number of different mutations existing in the GBA gene, resulting in a defective protein whose impaired activity is the cause of the disease. We present a mutation analysis of the GBA gene in 51 unrelated Spanish Gaucher disease patients together with clinical findings. Two common mutations, c.1226A>G (N370S) and c.1448T>C (L444P), were determined by restriction enzyme digestion after PCR amplification of genomic DNA. The remaining alleles were screened by amplifying the entire GBA gene followed by nested PCR and SSCP analysis under four different conditions. The c.1226A>G (N370S) and c.1448T>C (L444P) mutations were common, accounting for 56 alleles (55%) and 16 alleles (15%), respectively. In addition, 25 different mutations were found, 11 of which are described here for the first time: c.(-203)A>G, c.160G>A (V15M), c.256C>T (R47X), c.445-2a>g (IVS4-2a>g), c.485T>C (M123T), c.914C>T (P266L), c.953delT, c.1124T>C (L336P), c.1207A>C (S364R), c.1214delG,C, and c.1510delT,C,T (465delSer). Two mutations, S364R and P266L, were associated with neuronopathic forms of Gaucher disease: S364R mutation in heterozygosity with the L444P mutation and the P266L mutation in a homozygous state. Two type 1 patients were found to be carriers of two mutations in the same allele (genotypes [N370S] + [E326K + N188S] and [N370S] + [IVS4-2a>g+c.(-203)A>G]). This study allowed us to identify 100% of mutant alleles, and therefore we conclude that the method used to screen for mutations in the GBA gene is very reliable and there is a broad spectrum of mutations in the GBA gene in the Spanish population.     

Hereditary angioedema in Japan: genetic analysis of 13 unrelated cases

IntroductionThe molecular bases and clinical features of hereditary angioedema (HAE) have not been systematically documented in Japan or in other Asian countries. Thus, the authors researched the genetic and clinical characteristics of Japanese patients with HAE.MethodsThe authors analyzed the CIINH gene for mutations in 13 unrelated Japanese patients with HAE by means of the polymerase chain reaction and nucleotide sequencing. In addition, the authors searched the literature from January 1969 to October 2010 on Japanese patients with HAE.ResultsSeven of the mutations found were novel, including 4 missense mutations (8728T>G, 8831C>A, 16661T>G and 16885C>A), 2 frameshift mutations (2281_2350del70, 14158delT) and 1 large deletion (at least 1 kb-length deletion including exon 4), whereas 6 mutations had previously been reported in European populations.ConclusionsThe genetic and clinical characteristics in Japanese patients with HAE may be similar to those in Western patients although our sample size is small and the authors identified 7 novel mutations.     

脂联素基因SNPs＋45T＞G和SNPs＋276G＞T与老年非糖尿病冠心病的相关性

目的探讨老年人脂联素基因SNPs＋45T〉G和SNPs＋276G〉T与老年非糖尿病冠心病的相关性。方法选择2005年11月至2009年12月人住我院心血管内科病房,行冠状动脉造影、年龄≥65岁的非糖尿病患者688例,根据冠状动脉造影结果分为冠心病组396例和对照组292例。采用聚合酶链式反应／连接酶检测反应方法检测多态性位点。结果SNPs＋45T〉G基因表型为突变型GG者发生冠心病的危险性较TT型者显著增加（OR=2．65,P〈0．01）;SNPs＋276G〉T基因表型为GG型者发生冠心病的危险性较TT型者显著增加（OR=2．36,P〈0．01）;杂合子GT型者发生冠心病的危险陛也较TT型者显著增加（OR=1．66,P〈0．05）。logistic回归分析显示,SNPs＋45T〉G基因表型为GG型,SNPs＋276G〉T基因表型为GG和GT型是冠心病发病独立的危险因素。SNPs＋45T〉G和SNPs＋276G〉T位点存在连锁不平衡,脂联素基因SNPs＋45T〉G基因表型为突变型GG型者SNPs＋276G〉T基因表型均为GG型,而SNPs＋276G〉T基因表型为突变型TT型者SNPs＋45T〉G基因表型均为TT型,即GGGG基因表型和TTTT基因表型,且SNPs＋45T〉G和SNPs＋276G〉T位点基因表型为GGGG型者发生冠心病的危险性显著高于TTTT型者（OR=4．77,P〈0．01）。结论在老年非糖尿病者中,脂联素基因SNPs＋45T〉G基因表型为GG型者和SNPs＋276G〉T基因表型为GG或GT型者可能是冠心病的易感人群。     

局部细胞中HPVl6基因表达量及突变与其宫颈持续感染的关系

目的探讨宫颈脱落细胞中人乳头瘤病毒（HPV）16基因的表达量及突变与其宫颈持续感染的关系。方法选取96例HPVl6感染患者,其中33例宫颈脱落细胞HPVl6持续阳性（持续感染组）,63例6个月后复查转为阴性（非持续感染组）。采用半定量PCR技术检测两组（宫颈脱落细胞中）HPVl6E5、E6、E7及长控制区（LCR）基因表达量,基因测序法检测HPVl6E5、E6、E7及LCR基因突变。结果持续感染组HP~16E5、E6、E7、LCR基因表达量分别为0．20±0．02、0．30±0．02、0．19±0．01、0．53±0．02,非持续感染组分别为0．17±0．02、0．27±0．03、0．16±O．06、0．504-0．04,两组比较P均〉0．05。持续感染组与非持续感染组3978A→c（144L）位点突变例数分别为33、63例,4041A→G（165V）位点突变例数分别为33、63例,4076A—T（同义突变）位点突变例数分别为28、31例;两组4076A→T突变例数比较,P〈0．01。持续感染组与非持续感染组E6基因178T→G（D25E）位点突变例数分别为10、4例,两组比较,P〈0．05;持续感染组与非持续感染组E7基因647A→G（N29S）与846T→c（同义突变）联合突变例数分别为9、8例,两组比较,P〉0．05;持续感染组与非持续感染组7761c→T位点突变例数分别为33、63例,P〉0．05;7727A→c位点突变例数分别为14、4例,两组比较,P〈0．01。结论宫颈脱落细胞中HPVl6基因表达量与持续性感染无密切关系,HPVl6E5、E6、LCR基因突变与宫颈持续性感染有关,其中HPVl6E54076A→T（同义突变）、E6178T→G（D25E）与LCR7727A→c突变点可能是导致HPVl6持续感染的关键突变位点。     

2型糖尿病人群CDKN2A／B基因多态性与冠心病风险的相关性研究

目的观察T2DM人群细胞周期蛋白依赖激酶抑制基因2A／B（CDKN2A／B）基因多态性是否与冠心病风险相关,以早期筛查DM人群中冠心病的高危人群。方法对我院因胸痛症状行冠脉造影或冠脉CT检查的T2DM患者,根据冠脉造影或冠脉CT结果分为冠心病组及非冠心病组。冠心病组共220例,非冠心病组共89例。根据Hapmap数据库选取CDKN2A／B共7个单倍型标记的单核苷酸多态性（SNP）：CDKN2Ars2811708（G〉T）、rs3088440（A〉G）和rs3731239（C〉T）,CDKN2Brs3217986（A〉C）、rs1063192（C〉T）、rs2285327（A〉G）和rs3217992（A〉G）。对所有个体进行PCR扩增并通过RFLP或基因测序方法读取个体的基因型。结果在T2DM人群中,冠心病组中cDKN2Ars2811708的次要等位基因T频率（26．4％）显著高于非冠心病组（17．4％）（P〈0．05）,基因型分布在两组问存在显著性差异（P〈0．05）,G／T基因型携带者较G／G基因型携带者发生冠心病的风险显著增加（P（0．05）,在校正心血管其他风险因素（如性别、年龄、BMI、DM病程、高血压病病史、脂代谢异常病史、吸烟史）后,这种相关性仍然存在（P〈0．01）。结论T2DM人群中,CDKN2A／B基因单核苷酸多态性可能与冠心病的风险相关。     

MUTYH基因多态性与大肠癌的关系

目的探讨MUTYH基因多态性与大肠癌之间的关系。方法应用测序技术、变性高效液相色谱（DHPLC）对200例大肠癌患者及400名正常对照者的MUTYH基因6个外显子区域进行变异筛查。结果在3个外显子区域筛查出突变或变异。Exon14区域为错义突变,即Exon14＋74T〉A,p．V463E。Exon 10区域变异位于Intron10-2A〉G,病例组变异者的平均年龄高于对照组（P〈0．01）。Exon 1区域的变异位点是Exon1-316G〉A、Exon1-292G〉A和Intron1＋11C〉T,病例组变异危险性是对照组的10．23倍。结论MUTYH多态性可能会导致结直肠癌的发生。没有筛查到高加索人群中最常见的Exon 7区域的变异,显示出人种间变异的差异性。     

国人确诊及疑似Brugada综合征患者SCN5A基因变异筛查

目的探讨国人Brugada综合征(BrS)患者及疑似者中SCN5A基因变异情况。方法对5例确诊和12例疑似BrS患者及部分家属进行临床分析并随访,用直接测序法检测SCN5A基因多态/突变情况。结果在1例确诊者中发现R1913C错义突变;在17例患者中共发现10种单核苷酸多态性(SNPs)位点,分别为G87A、703+130G>A、1141-3C>A、A1673G、G3578A、3840+73G>A、4245+81G>T、4245+82A>G、4299+53T>C、T5457C。其中在1例疑似患者中发现的位点4245+81G>T为首次报道。结论首次在BrS患者中发现R1913C突变;同时在一例疑似患者中发现了1种新SNP4245+81G>T。