冬凌草甲素逆转多药耐药细胞系K562/A02耐药性的研究

目的：探讨冬凌草甲素对多药耐药细胞系K562／A02耐药性的逆转作用。方法：以柔红霉素（DNR）和高三尖杉酯碱（HHT）联合不同浓度的冬凌草甲素处理K562／A02及敏感细胞系K562／S，以四唑盐比色法（MTT）检测两种化疗药物的半数抑制浓度（IC50），以流式细胞仪检测P170蛋白的表达与细胞内DNR的浓度。结果：冬凌草甲素可明显减小K562／A02细胞对DNR，HHT的IC50，降低耐药倍数，下调P170蛋白的表达，增高细胞内DNR的浓度，而对K562／S细胞无显著影响。结论：冬凌草甲素可逆转药细胞系K562／A02的耐药性，是一种很有希望的抗白血病中药。     

环孢菌素A、汉防己甲素及两者联合逆转K562／A02细胞的多药耐药

目的：探讨环孢菌素A（CsA）、汉防己甲素（Tet）及两者联合应用对人白血病耐药细胞系K562／A02多药耐药的逆转作用。方法：采用M1Tr法测定柔红霉素（DNR）对细胞的半数抑制量（IC50），流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞内DNR浓度。结果：DNR对K562细胞和K562／A02细胞IC50分别为0．27和21．22mg·L^-1；CsA（1mg·L^-1）及Tet（0．1mg·L^-1）单独和联合处理K562／A02后，DNR的IC50分别为7．83、5．32和2．32mg·L^-1；CsA和Tet对DNR作用K562的IC50无明显影响；K562／A02细胞48h凋亡率为2．19％，DNR（1mg·L^-1）作用K562／A02细胞凋亡率为2．70％，CsA和Tet单独及联合处理后凋亡率分别为10．27％、17．64％和52．79％；两药处理后细胞内化疗药物DNR浓度亦明显增加。结论：CsA及Tet均可逆转耐药，且联合作用逆转效果更强。     

人参皂苷单体Rb1对多药耐药细胞系K562／HHT细胞内柔红霉素浓度的影响

目的：探讨中药钙离子通道拮抗剂人参皂甙单体Rb1对白血病多药耐药细胞系（K562／HHT）细胞内柔红霉素浓度的影响。方法：细胞内柔红霉素浓度荧光测定法、细胞P－GP表达常规APAAP测定法、mdrl基因表达RT－PCR测定法等实验方法,探讨Rb1的逆转机理。结果：Rb1作用后K562／HHT细胞内DNR浓度增加（P＜0．01）。结论：K562／HHT是一种以P－GP介导的多药耐药细胞系,检测显示K562／HHT P－GP表达阳性率100％,并有很强的mdrl基因表达,提示Rb1通过抑制PGP外排药物功能,提高细胞内药物浓度,是Rbl逆转耐药作用的主要机理。     

去甲氧柔红霉素治疗急性白血病临床研究

4-去甲氧基柔红（Idarubicin,IDA）为柔红霉素（DNR）的类似物。与其它直环类药物比较细胞摄入量高,与DNA的结合力强,导致DNA链断裂。故认为具有较DNA更强的抗白血病作用,且心脏毒性小。自1993年9月一1998年7月我们采用以IDA为主组成的联合化疗方案共治疗急性白血病33例,慢性粒细胞白血病（CML）急性变3例,报告如下：1．病例和方法1．1病例：初发和复发急性白血病（AL）33例。男20例,女13例．年龄9岁一61岁,中位年龄41岁。急性淋巴细胞白血病（ALL）7例,其中初发5例,复发2例。FAB分型L;3例,＼3树人1例。急性非淋巴…     

不同浓度硼替佐米对K562／DNR细胞株NF—κB，IκB及P-gp表达的影响

目的：观察不同浓度硼替佐米（商品名万珂,PS-341）对柔红霉素（DNR）诱导的K562耐药细胞株（K562／DNR）核因子-κB（NF—κB）、抑制蛋白κB（IκB）及P-糖蛋白（P—gp）表达的影响,探讨PS-341逆转耐药的分子机制．方法：四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法（MTT法）进行耐药细胞株和PS-341细胞毒性的判定．以100mg／LDNR单用或联合应用0．4,4,40μg／LPS-341作用于K562／DNR36h,检测各组NF-κB,IκB及P—gp表达情况,并测定NF—κB活性,检测各组细胞凋亡率．结果：与阴性对照组相比,DNR可诱导NF—κB表达上调、IκB表达下调、P-gp表达上调;加用PS-341可显著抑制NF—κB表达,同时使IκB表达增加、P—gp表达下降,上述作用随PS-341浓度增加而增强．NF—κB活性（％）检测示：DNR组为25．9±2．5,DNR＋0．4μg／LPS-341组为20．3±2．0,DNR＋4μg／LPS-341组为6．1±2．5,DNR＋40μg/LPS-341组为4．6±1．6,加入PS-341后,NF—κB活性受抑,该作用随PS．341浓度增加而增强．细胞凋亡率（％）检测结果示：DNR组为22．5±4．6,DNR＋0．4μg／LPS-341组为31．0±5．2,DNR＋4μg／LPS-341组为43．6±7．7,DNR＋40μg/LPS．341组为56．0±9．3,加入PS-341后可提高DNR引起的细胞凋亡率,该作用随PS-341浓度的增加而增强．结论：PS-341可逆转白血病细胞耐药,该作用呈浓度依赖性．     

柔红霉素诱导Jurkat细胞凋亡、抑制增殖与bcl-2、PCNA表达变化的关系

目的探讨柔红霉素（DNR）在体外诱导Jurkat细胞凋亡的情况并探讨其与细胞表达凋亡相关蛋白改变的关系。方法Annexin V／PI双标流式细胞仪（FCM）检测DNR诱导Jurkat细胞的凋亡作用,用免疫细胞化学观察相关蛋白表达水平的变化。结果当DNR为0．1～2．0μmol／L浓度范围时,作用一定时间后Jurkat细胞发生的凋亡率随药物浓度的增加与作用时间的延长而升高。但药物浓度超过2．0μmol／L,或2．0μmol／L作用48h后Jurkat细胞出现凋亡率下降,细胞大部分死亡。0．5μmol／L DNR作用于Jurkat细胞24h后,细胞中bcl-2、PCNA蛋白表达水平降低。结论一定浓度的DNR在体外可诱导Jurkat细胞凋亡,药物浓度达5．0μmol／L时细胞大部分死亡。本实验条件下DNR体外诱导Jurkat发生凋亡的机制可能是通过抑制bcl-2、PCNA蛋白的表达实现。     

异搏定影响足叶乙甙和柔红霉素对白血病细胞和正常骨髓细胞毒性的研究

本文探讨了异搏定对足叶乙甙和柔红霉素在白血病细胞以及正常骨髓细胞毒性的影响。足叶乙甙抗白血病细胞的作用大于抗正常骨髓细胞（至少２倍）；相反，柔红霉素对白血病细胞和正常骨髓细胞的毒性无明显差异。异搏定（２５～１００μｍ／Ｌ）存在时，足叶乙甙对肿瘤细胞以及正常细胞的毒性均增强；柔红霉素对肿瘤细胞的作用也增强，但对正常细胞影响较小。这一差异可能与两种抗癌药在细胞内不同分布有关，有待进一步研究     

bcl-2 shRNA-3增强急性原代白血病细胞对柔红霉素敏感性的研究

目的 研究以bcl-2基因为靶标的短发夹RNA-3(shRNA-3)对急性原代白血病细胞存活和细胞对柔红霉素(DNR)敏感性的影响.方法 将shRNA～3转入急性原代白血病细胞并与柔红霉素联合培养,于24、48和72 h,用锥虫蓝拒染法计数活细胞,用免疫组织化学法检测白血病细胞bcl-2和P-糖蛋白(p-gp)的表达.结果 shRNA-3能明显降低原代白血病细胞存活,以shRNA-3联合DNR作用最显著,在72 h内活细胞数由2.0×105/mL下降到0.8X105/mL,并能显著抑制bcl-2和P-gP的表达,与单用DNR组相比,bcl-2蛋白表达率由(47.21±7.26)%下降到(27.82±8.25)%(P＜0.05),P-gP表达率由(24.28±5.60)%下降到(16.34±4.15)%(P＜0.05).结论 shRNA-3能增强急性原代白血细胞对柔红霉素的敏感性.     

五味子乙素对MRP介导的肿瘤多药耐药逆转作用的研究

目的探讨五味子乙素（SchB）对表达MRP1的肿瘤耐药细胞株的逆转耐药作用及相关机制。方法噻唑蓝（MTT）法测定不同浓度SchB对柔红霉素（DNR）抑制HL60／ADR生长及同一浓度SchB对不同化疗药物抑制HL60／ADR和HLJ60/MRP细胞生长的影响；流式细胞仪检测SchB作用前后，HL60／ADR和HLJ60/MRP细胞内化疗药物DNR和MRP1特异性底物CFDA积聚的变化。结果4～25μM Sch B作用范围内浓度依赖性下降，逆转倍数显著上升；SchB可有效降低HL60／ADR、HL60／MRP对DNR、长春新碱（VCR）和VP16的IC50，逆转倍数2倍到20倍不等；SchB能够增加DNR和MRP1特异性底物CFDA在细胞内的积聚。结论SchB对同一细胞MDR的逆转与浓度相关，在一定浓度范围内，依浓度增加而增加；SchB可以逆转不同化疗药物对MRP1介导的耐药，其逆转机制与增加化疗药物的积聚能力有关。     

异搏定影响足叶乙甙和柔红霉素对白血病细胞和正常骨髓细胞？…

本文探讨了异搏定对足叶乙甙和柔红霉素在白血病细胞以及正常骨髓细胞毒性的影响。足叶惭甙抗白血病细胞的作用大于抗正常骨髓细胞（至少２倍）；相反、柔红霉素对白血病细胞和正常髓髓细胞的毒性无明显差异，异搏定（２．５￣１０．０μｍ／Ｌ）存在时，足叶乙甙对肿瘤细胞以及正常细胞的毒性均增强；柔红霉素对肿瘤细胞和也增强，但对正常细胞影响较小。这一差异可能与两种抗癌药在细胞内不同分布有关，有待进一步研究。     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

细胞培养技术的研究进展

随着现代科学的发展,体外细胞培养技术已成为多个领域必不可少的研究工具,并且其新技术和方法也在不断涌现。本文就细胞培养技术的发展、支架材料以及细胞培养的影响因素作一综述。     

EPCs在MSCs向肝样细胞转化中作用的初步探讨

目的：探讨内皮前体细胞(endothelial precursor cells, EPCs)在间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)向肝样细胞转化中的作用。方法：分离培养SD大鼠MSCs和EPCs,取第3代MSCs向肝样细胞转化培养,培养过EPCs的无血清及因子的培养基(endothelial progenitor cell-conditioned medium, EPCs-CM)、无血清的α-最低必需培养基(alpha minimal essential medium, α-MEM)分别与肝细胞转化培养基按1∶1比例配置,作为实验组和模型对照组,正常α-MEM培养基为空白对照组,分别观察细胞形态及数量变化;在培养3、5、7、9 d时应用免疫荧光检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein, AFP)、清蛋白(albumin, ALB)的表达。结果：空白对照组MSCs形态无明显变化;实验组与模型对照组细胞均出现肝样细胞形态。空白对照组未见AFP、ALB表达,模型对照组和实验组在3、5、7、9 d AFP、ALB表达水平均增高,其中实验组比模型对照组AFP、ALB水平增高明显。结论：EPCs在MSCs向肝样细胞转化中可能起一定的促进作用。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

新生豚鼠神经干细胞的分离培养、鉴定及标记

目的 从新生豚鼠海马中分离培养神经干细胞，为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋的实验研究创造条件。方法 分离新生豚鼠海马组织，用含碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）无血清培养技术培养神经干细胞，免疫组化技术检测其巢蛋白（Nestin）的表达。采用荧光染料DAPI标记神经干细胞。结果 从新生豚鼠海马组织分离出的细胞中可获得呈集落样生长的神经干细胞团，并能表达Nestin；荧光染料的标记效率可达93．4％，细胞传代8次后荧光亮度仍无明显衰减。结论 从新生豚鼠海马分离的细胞具有明显的增殖能力，荧光染料的标记可获得较高的标记效率，可作为神经干细胞移植治疗感音神经性耳聋实验研究的供体细胞。     

睾丸支持细胞与骨髓间充质干细胞共培养的初步研究

目的 观察睾丸支持细胞(sertoli cells,SCs)与骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)共培养时SCs对MSCs扩增的影响. 方法 取雄性SD大鼠睾丸,分离出SCs,取SD大鼠,分离出骨髓MSCs,将两种细胞用"三明治"式的方法共培养7 d. 结果 共培养组的MSCs前四天生长较对照组快,第5天无明显差异,第6和第7天细胞数量迅速减少. 结论 在体外共培养的早期,SCs可以显著促进MSCs的生长,但在后期则反而抑制MSCs的生长,具体原因有待进一步研究.     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .