HSP90抑制剂GA对人肝癌BEL7404细胞株凋亡作用的研究

目的：研究热休克蛋白90 (heat shock protein 90, hsp90）抑制剂格尔德霉素（geldanamycin,GA）对人肝癌细胞株BEL7404的凋亡作用,并探讨相关机制及意义。方法：体外培养BEL7404细胞株,以HSP90抑制剂GA作用处理;噻唑兰比色（MTT）法检测GA对BEL7404细胞株的增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色法及Annexin V-EGFP/PI双染法、透射电镜等方法研究GA对BEL7404细胞株的凋亡作用;流式细胞仪检测BEL7404细胞株的细胞周期变化。结果：HSP90抑制剂GA对BEL7404细胞株具有增殖抑制作用,呈时间剂量依赖关系;GA各剂量组（5 umol/L、10 umol/L、15 umol/L）作用24h凋亡率（%）分别为10.2±1.35、21.3±1.30、38.7±1.43,明显高于阴性对照组(6.31±0.82);流式细胞仪检测各剂量组GA均可使BEL7404细胞株细胞周期阻滞于G0/G1期。结论：通过抑制HSP90的功能,GA能明显抑制肝癌细胞增殖,促进肝癌细胞凋亡,使肝癌细胞周期阻滞于G0/G1期,其抗癌活性可能与其抑制HSP90的分子伴侣功能有关。     

蒿甲醚对K562细胞作用的体外实验研究

目的:探讨蒿甲醚对人慢性髓性白血病细胞K562体外增殖、细胞周期和凋亡的影响.方法:采用四甲基偶氮唑蓝(简称MTT)法测定不同浓度蒿甲醚对K562细胞生长抑制作用.计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术DNA含量分析检测蒿甲醚对K562细胞周期的影响,流式细胞仪TUNEL法检测蒿甲醚对K562细胞凋亡的作用.结果:蒿甲醚可以抑制K562细胞增殖,经药物作用24、48、72 h后,IC50分别为(32.27±0.15)、(27.48±0.08)、(25.00±0.37)μg/mL;流式细胞术DNA含量分析结果显示蒿甲醚作用后,G2/M期细胞增多;流式细胞术TUNEL法显示蒿甲醚作用后K562细胞凋亡率和坏死率均高于对照组.结论:蒿甲醚可以抑制人慢性髓性白血病细胞株K562细胞增殖、影响细胞周期、诱导肿瘤细胞的凋亡.     

甘草次酸诱导U266细胞凋亡及对Survivin表达的影响

本研究旨在观察甘草次酸(glycyrrhetinic acid,GA)对人骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及survivin表达的影响。用MTT法检测GA对U266细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测不同浓度GA作用于U266细胞后细胞凋亡,细胞周期的变化;扫描电子显微镜观察细胞凋亡的形态学变化;实时定量PCR检测GA对U266细胞survivin基因表达的影响。结果表明:GA对U266细胞有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为时间和浓度依赖性;GA可以诱导U266细胞凋亡;扫描电子显微镜下可见核仁染色质边集,凝聚成块;GA可以诱导U266细胞周期阻滞于G0/G1期,表现为G0/G1期细胞比例升高,而G2/M及S期细胞比例下降。GA可以下调U266细胞survivin基因的表达,下调作用与浓度呈正相关。结论 :CA能抑制U266细胞增殖,呈浓度和时间依赖性,诱导其凋亡,其作用机理可能与细胞周期阻滞于G0/G1期和下调survivin基因表达有关。     

HSP90抑制剂17-DMAG影响结肠癌SW620细胞生长的实验研究

目的研究热休克蛋白90(HSP90)新型抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞株SW620增殖及凋亡的影响,并对其机制作初步探讨。方法以不同浓度的17-DMAG作用于对数生长期的结肠癌SW620细胞,显微镜下观察细胞凋亡形态学变化;应用CCK8法检测其吸光度值,并计算细胞生长抑制率;以Annexin V-FITC和PI双染法检测各组细胞凋亡率的变化;采用流式细胞仪分析各组细胞的细胞周期变化。结果光学显微镜观察到17-DMAG药物处理组的细胞出现细胞凋亡现象。CCK8法显示17-DMAG对结肠癌SW620细胞株的生长增殖有抑制作用,并呈时间-剂量依赖性(P<0.05)。Annexin-FITC/PI双染色法检测结果显示17-DMAG浓度为1.0μmol/L、2.5μmol/L、5.0μmol/L的细胞凋亡率分别为30.03%、50.50%和77.23%,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。流式细胞仪细胞周期分析显示,经17-DMAG药物处理过的不同浓度的药物组与对照组比较,G0/G1期细胞比例显著上升,S期细胞比例下降,G2/M期细胞比例显著上升,有统计学差异(P<0.05);但各浓度17-DMAG药物组间比较,G0/G1期、S期、G2/M期细胞比例无明显变化,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HSP90抑制剂17-DMAG对结肠癌细胞SW620的生长增殖有明显的抑制作用,呈时间和剂量依赖性,并诱导其凋亡;同时,17-DMAG影响SW620细胞的周期,但这种影响与17-DMAG的浓度无关。     

HSP70反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌细胞HO-8910生长凋亡的影响

目的 探讨热休克蛋白70(HSP70)反义脱氧寡核苷酸(ASODN)对体外培养的人卵巢癌细胞株HO-8910生长和凋亡的影响.方法 取对数生长期HO-8910人卵巢癌细胞,与不同终浓度(5、10.15和20μmol/L)的HSP70 ASODN及正义脱氧寡核苷酸(SODN)共同孵育.四甲基偶氮唑蓝光吸收法(MTT)检测细胞增殖情况;流式细胞仪分析细胞DNA含量及细胞周期动力学改变.结果 MTT检测表明HSP70 ASODN能够抑制HO-8910细胞增殖,且一定范围内呈浓度、时间依赖性.流式细胞仪检测分析可见亚二倍体峰,凋亡指数(AI)随HSP70 ASODN浓度升高而升高,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞周期分析提示HSP70 ASODN使细胞停滞于G1/G0期,S期细胞逐渐减少,G2/M期无明显变化.结论 HSP70 ASODN可抑制卵巢癌细胞HO-8910生长并可诱导凋亡.     

大黄素对人红白血病细胞株HEL作用的研究

本研究探讨大黄素(emodin)对人红白血病细胞株HEL增殖的抑制作用及其诱导凋亡的机制.应用MTT比色法检测大黄素对细胞增殖的抑制作用,AO/EB荧光染色法观察大黄素作用后细胞形态的变化,流式细胞术检测大黄素对细胞周期和凋亡的影响,Western blot法检测凋亡相关蛋白表达的变化.结果显示,大黄素能有效抑制HEL细胞的增殖,且呈浓度依赖性(r=0.995),作用48小时的IC50约为4.19 μmol/L.AO/EB荧光染色法发现,大黄素作用后24小时HEL细胞发生凋亡,胞核呈致密浓染或碎片并发出黄绿色荧光;流式细胞术检测显示大黄素作用后24和48小时细胞的凋亡率分别为(27.35±1.68)％和(58.49±1.55)％,与空白对照组相比,大黄素作用后G0/G1期细胞比例增多,S期细胞比例减少(p ＜0.01);Akt蛋白的表达未见明显变化(p＞0.05),P-Akt、P-GSK3B和HSP70蛋白的表达下调(p＜0.05).结论:大黄素能显著抑制HEL细胞的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与P-Akt、P-GSK3β和HSP70蛋白的表达下调有关.     

一定浓度下三氧化二砷对T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株增殖的影响

背景:近年来有将三氧化二砷试用于T细胞肿瘤的有效报道,但未见其治疗机制的相关研究.目的:检测三氧化二砷对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞的抑制增殖、诱导凋亡及细胞周期的影响.方法:分别采用MTT、PI单标记流式细胞术和TUNEL法检测2,5,10 μmol/L的三氧化二砷干预24,48,72 h,对人皮肤T细胞淋巴瘤Hut-78细胞株抑制增殖、诱导凋亡和细胞周期的影响,及其凋亡相关基因bcl-2及血管内皮细胞生长因子基因表达的变化.结果与结论:在一定的浓度范围内,三氧化二砷对Hut-78细胞存在增殖抑制作用,其增殖抑制作用在一定程度上可能与下调血管内皮细胞生长因子基因的表达有关,同时还存在一定的细胞毒作用;三氧化二砷可诱导Hut-78细胞发生凋亡,凋亡机制主要发生在G2~M期,其凋亡作用可能与下调bcl-2基因表达有关.三氧化二砷对Hut-78细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用呈时间剂量依赖性.     

醋酸棉酚对人鼻咽癌细胞凋亡的影响及其作用机制探讨

目的:研究醋酸棉酚(gossypol acetic acid,GAA)对人鼻咽癌细胞系CNE2体外增殖的影响,初步探讨其作用机制。方法:采用MTT法检测GAA对CNE2细胞的增殖抑制作用,Hoechst 33342/PI荧光染色观察细胞核的形态变化,流式细胞仪分析细胞周期的分布、凋亡率以及凋亡相关基因蛋白的表达情况。结果:GAA对CNE2细胞具有显著的增殖抑制作用并且呈剂量、时间依赖性,Hoechst 33342/PI荧光染色可观察到明显核固缩、染色质凝集等细胞凋亡现象;流式细胞仪检测发现细胞被阻滞于G0/G1期,G2/M期和S期细胞相对减少并出现典型的"亚二倍体峰",凋亡相关基因Bcl-2表达下调,而Bax表达则相对上调。结论:GAA能够抑制人鼻咽癌细胞系CNE2的增殖,促进其凋亡,其作用机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax而实现的。     

HSP90抑制剂17-DMAG对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响

目的:探讨热休克蛋白90(HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖及凋亡的影响。方法:收集Jurkat细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡。结果:不同浓度17-DMAG作用于Jurkat细胞48 h后,HSP90 mRNA表达明显减少,且呈剂量依赖性(r=0.9530,P0.01);17-DMAG处理Jurkat细胞48 h的IC50为3.17μmol/L,作用于Jurkat细胞后抑制Jurkat细胞增殖(r=0.9903,P0.01),促进Jurkat细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.9876,P0.01)。结论:HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的增殖并诱导其凋亡。     

HSP70反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌细胞HO-8910生长凋亡的影响

目的探讨热休克蛋白70(HSP70)反义脱氧寡核苷酸(ASODN)对体外培养的人卵巢癌细胞株HO-8910生长和凋亡的影响。方法取对数生长期HO-8910人卵巢癌细胞,与不同终浓度(5、10、15和20μmol/L)的HSP70 ASODN及正义脱氧寡核苷酸(SODN)共同孵育。四甲基偶氮唑蓝光吸收法(MTT)检测细胞增殖情况;流式细胞仪分析细胞DNA含量及细胞周期动力学改变。结果MTT检测表明HSP70 ASODN能够抑制HO-8910细胞增殖,且一定范围内呈浓度、时间依赖性。流式细胞仪检测分析可见亚二倍体峰,凋亡指数(AI)随HSP70 ASODN浓度升高而升高,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞周期分析提示HSP70 ASODN使细胞停滞于G1/G0期,S期细胞逐渐减少,G2/M期无明显变化。结论HSP70 ASODN可抑制卵巢癌细胞HO-8910生长并可诱导凋亡。     

Effect of 5-fluorouracil, mitoxantrone, methotrexate, and vincristine on the antibacterial activity of ceftriaxone, ceftazidime, cefotiam, piperacillin, and netilmicin

Using the checkerboard agar dilution technique, antibacterial activity and in vitro interactions of 4 antineoplastic agents and 5 antimicrobial drugs were examined against 56 strains of 7 bacterial species. 5-fluorouracil was found to inhibit all strains of Staphylococcus aureus and of Staphylococcus epidermidis at a concentration of 0.8 micrograms/ml or less. 84% of all gram-negative strains were inhibited synergistically when 5-fluorouracil was combined with beta-lactam antibiotics. Methotrexate and cefotiam were antagonistic in 42% of all combinations, especially when tested against Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae.     

Susceptibilities of non-Pseudomonas aeruginosa gram-negative nonfermentative rods to ciprofloxacin, ofloxacin, levofloxacin, D-ofloxacin, sparfloxacin, ceftazidime, piperacillin, piperacillin-tazobactam, trimethoprim-sulfamethoxazole, and imipenem.

Agar dilution MICs of 10 agents against 410 non-Pseudomonas aeruginosa gram-negative nonfermentative rods were determined. MICs at which 50 and 90% of the isolates were inhibited, respectively, were as follows (in micrograms per milliliter): sparfloxacin, 0.5 and 8.0; levofloxacin, 1.0 and 8.0; ciprofloxacin, 2.0 and 32.0; ofloxacin, 2.0 and 32.0; D-ofloxacin, 32.0 and > 64.0; ceftazidime, 8.0 and 64.0; piperacillin with or without tazobactam, 16.0 and > 64.0; trimethoprim-sulfamethoxazole, 0.5 and > 64.0; imipenem, 2.0 and > 64.0. With the exception of those for Stenotrophomonas maltophilia, Burkholderia cepacia, and Alcaligenes faecalis-A. odorans, agar dilution MICs for all strains tested were within 1 dilution of inhibitory (bacteriostatic) levels as determined by time-kill methodology.     

Comparative ototoxicity of ribostamycin, dactimicin, dibekacin, kanamycin, amikacin, tobramycin, gentamicin, sisomicin and netilmicin in the inner ear of guinea pigs

Nine aminoglycoside antibiotics, ribostamycin (RSM), dactimicin (DAC), dibekacin (DKB), kanamycin (KM), amikacin (AMK), netilmicin (NTL), tobramycin (TOB), gentamicin (GM) and sisomicin (SISO) were administered intramuscularly to guinea pigs for 4 weeks, and ototoxicity and drug concentration in the inner ear fluid were determined. RSM and DAC showed the weakest ototoxicity against the cochlea and vestibular organs. AMK and KM were more toxic to cochlea than vestibular organs. DKB, TOM, GM and SISO were equally toxic to vestibular organs and cochlea. NTL was more toxic to vestibular organs than cochlea. As judged from the pinna reflex response and hair cell damage in the cochlea, the order of auditory toxicity was the following: SISO greater than GM greater than TOB greater than AMK greater than DKB greater than KM greater than NTL, DAC RSM, whereas the vestibular toxicity was in the following order: SISO greater than GM greater than DKB greater than TOB greater than NTL greater than AMK greater than KM greater than DAC, RSM. RSM, causing the weakest ototoxicity, showed a low drug concentration in the inner ear fluid, while GM, causing severe ototoxicity, showed the highest drug level under the same conditions.     

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Zimmermann PG. Philadelphia: Hanley & Belfus, 2002, 243 pp, ISBN 1-56053-529-6.