热休克蛋白47重组质粒对糖尿病大鼠皮肤创口愈合影响的实验研究

目的：初步研究热休克蛋白47（HSP47）重组质粒pTraeer—CMV—HSP47局部注射对糖尿病大鼠皮肤创口愈合的影响，探讨以HSP47质粒为摹础的基因治疗促进糖尿病皮肤创口愈合的可行性和有效性．方法：制备四氧嘧啶诱导的糖尿病大鼠皮肤创口愈合模型，创缘皮下局部注射HSP47重组质粒，观察其对皮肤创口愈合的影响，并用免疫组织化学、荧光定量RT—PCR、Western blotting检测创口愈合过程中HSP47和collagen Ⅰ的表达变化。结果：在糖尿病大鼠皮肤刨缘连续两次注射质粒后第3、6、9天．免疫组织化学、荧光定量RT-PCR和Western blotting检测证实，HSP47重组质粒组比对照组能显著增加创口中的HSP47和collagenⅠ的表达。结论：在糖尿病大鼠皮肤创口周围注射质粒pTracer—CMV—HSP47，能明显增强HSP47和coilagenⅠ的表达，有助于改善创口愈合，HSP47可能是促进糖尿病皮肤创口愈合的潜在治疗靶点。     

HSP47和TGFβ1在大鼠皮肤瘢痕形成中的作用

目的:探讨HSP47和TGFβ1在皮肤瘢痕形成中的作用,以及能否用HSP47反义寡核苷酸探针有效的抑制 皮肤创伤性瘢痕形成。方法:取SD大鼠背部正常皮肤组织分离培养,获得成纤维细胞。用10ng／ml的TGFβ1处 理后,用免疫组化SP法,免疫印记法和RT-PCR检测,TGFβ1对HSP47和Ⅰ型胶原表达水平的影响。将制作皮肤创 口的72只SD新生鼠分为3大组,每大组又各分2小组,共6组:W组,不注射核酸探针,作为对照;A组,2小组分 别注射HSP47和TGFβ1的反义核酸探针;S组,2小组分别注射HSP47和TGFβ1的正义核酸探针。每组分别有3 只鼠在创伤后第1、第3、第5和第7天被处死。切取创伤处皮肤,用免疫印记法Northern blot和Western blot检测皮 肤标本中HSP47和Ⅰ型胶原蛋白在成纤维细胞内的表达情况。结果:在使用TGFβ1处理后,皮肤组织中HSP47和 Ⅰ型胶原蛋白的表达都明显升高。HSP47和Ⅰ型胶原蛋白的表达都受到TGFβ1的调控,而同时HSP47可以调控Ⅰ 型胶原蛋白的表达。每日注射HSP47反义寡核苷酸探针(As-ODN)连续7d,能够有效的降低创口处皮肤中 HSP47和Ⅰ型胶原蛋白的表达。而每日注射TGFβ1反义核酸探针能够有效的降低创伤处TGFβ1、HSP47和Ⅰ型胶 原蛋白的表达,同时创口愈合过程中胶原纤维排列的紊乱程度减轻。结论:TGFβ1和HSP47在瘢痕形?     

大鼠热休克蛋白47真核表达载体的体外构建

目的:体外构建大鼠热休克蛋白47(47kDa heat shock protein,HSP47)的荧光真核表达载体,并检测其在鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3中的表达。方法:应用RT-PCR方法从大鼠肝脏中分离、扩增目的片断,双酶切定向克隆到真核表达载体pTracer-CMV中,构成重组质粒pTracer-CMV-HSP47,测序验证。通过脂质体介导质粒瞬时转染NIH/3T3细胞,Western blotting和免疫细胞化学检测HSP47及Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)的表达变化。结果:通过RT-PCR获得1.3kb的cDNA片断,测序发现除个别碱基差异外,其余cDNA序列与基因库(Genebank)中序列一致,且编码的氨基酸序列完全一致。转染后经Western blotting和免疫细胞化学检测证实HSP47和collagenⅠ表达明显增强。结论:本研究成功构建了大鼠HSP47荧光真核表达载体pTracer-CMV-HSP47,并能在NIH/3T3细胞中表达,同时证实HSP47能促进collagenⅠ的表达。     

口腔微生物与免疫学

一氧化氮合酶在兔下颌骨牵张成骨过程中的表达,感染根管中齿垢密螺旋体PCR检测及其与临床症状的关系,热休克蛋白47在糖尿病大鼠皮肤创口愈合过程中的表达,大鼠热休克蛋白47真核表达载体的体外构建,两种漂白方法对离体牙牙釉质表面粗糙度及菌斑粘附能力的研究,EDA蛋白对人牙乳头间充质细胞一般生物学活性及EGFR表达的影响.[编者按]     

siRNA对鼠成纤维细胞株中HSP47表达的抑制作用

目的:构建小鼠热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,及HSP47第一外显子克隆表达载体,观察其在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞株)中对HSP47基因表达的抑制作用。方法:针对小鼠HSP47的mRNA序列,在368、718位点分别设计两对21nt的,编码HSP47siRNA基因片断的寡核苷酸,退火成双链后将其连接到pSilencer1.0质粒的U6启动子下游,构建pSilencer-HSP47siRNA重组质粒;同时构建HSP47第一外显子重组质粒。经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染方法,转入NIH3T3细胞,用半定量RT-PCR法检测HSP47表达水平的变化。结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了siRNA真核表达载体及靶基因克隆表达载体。经脂质体转染NIH3T3细胞后,RT-PCR显示NIH3T3细胞中HSP47基因的mRNA表达水平明显降低,所构建的HSP47-siRNA基因的真核表达载体,成功地抑制了目的基因的表达。结论:构建的小鼠HSP47基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer-HSP47siRNA,在NIH3T3细胞中有效地发挥了对HSP47基因表达的干涉作用,从而提示HSP47特异的siRNA具有抑制皮肤瘢痕形成的潜力。     

长期心理应激对大鼠咬肌热休克蛋白70表达的影响

目的:探讨长期心理应激对大鼠咬肌热休克蛋白70 (heat shock protein 70, HSP70)表达的影响.方法:72 只雄性SD大鼠,随机分为3 组:空白对照组、足部电击组和心理应激组,采用免疫组化SP法和Western blotting法,检测应激1、3和5 周后大鼠咬肌中HSP70的表达.结果:各时间点对照组咬肌内HSP70表达无变化;与同时间点对照组比较,心理应激1 周和3 周时,心理应激组大鼠咬肌HSP70的表达无统计学差异(P>0.05);但5 周心理应激组大鼠咬肌HSP70的表达明显升高(P<0.05),且高于1 周和3 周应激组(P<0.05).结论:长期心理应激可以引起大鼠咬肌HSP70表达的增强.     

CGF与脂肪干细胞联合应用修复大鼠全层皮肤缺损的研究

目的:探讨以明胶海绵为支架材料,复合浓缩生长因子(concentrated growth factor,CGF)诱导的大鼠脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)得到的组织工程皮肤替代物,对大鼠全层皮肤缺损愈合的作用。方法:取健康雄性大鼠脂肪组织分离、培养并鉴定脂肪干细胞,观察CGF对其增殖、分化的影响。在健康雌性大鼠背部制造一直径3 cm全层皮肤缺损,其上覆盖复合脂肪干细胞的明胶海绵(A组)、无细胞的明胶海绵(B组)或不作处理单纯包扎(C组)。术后观察各组缺损的愈合情况,并于7、14、21 d及完全愈合后,取背部全层皮肤作组织学观察。结果:CGF能促进体外培养的ADSCs增殖;术后伤口渗出物、红肿等炎症反应A组相似文献   

碱性成纤维细胞生长因子和纤维连接蛋白在大鼠组织工程复合皮肤愈合中的表达

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和纤维连接蛋白(FN)在组织工程皮肤愈合过程中的作用。方法　以新生SD大鼠皮肤为原材料培养组织工程复合皮肤并将其移植到15只成年SD大鼠,第7、10、14、20、30天取标本,通过HE染色、免疫组织化学方法对移植后不同时间的组织工程复合皮肤进行检测,观察创面愈合过程中bFGF、 FN的表达变化及其与组织修复的关系。以做自体皮肤移植和正常Wistar大鼠做对照。结果　术后第10天时bFGF、 FN表达明显,术后第10天以前和第14天以后表达较弱。bFGF、FN在组织工程皮肤愈合过程中的变化与自体皮肤移植愈合过程相似。结论　在组织工程皮肤移植修复大鼠皮肤缺损中bFGF、FN有表达,促进了创伤愈合。     

牙周塞治剂对拔牙创周围组织影响的实验研究

目的    观察牙周塞治剂对拔牙创周围组织的影响。方法    本研究于2013年1月至2014年12月在南京军区福州总院比较医学科和福建医科大学口腔医学院中心实验室完成。60只3 ~ 4月龄SD雄性大鼠随机分为A、B两组,A组36只,B组24只。所有大鼠分别拔除双侧上颌第一磨牙,A组大鼠一侧创口不处理（A1组）,另一侧创口敷牙周塞治剂（A2组）;B组大鼠一侧创口填塞明胶海绵（B1组）,另一侧创口填塞明胶海绵后敷牙周塞治剂（B2组）。观察各组创口止血时间;于治疗后1、3、5、7 d后两组大鼠各处死6只,10、14 d后再处死A组大鼠各6只,观察拔牙创愈合情况;取上颌骨标本做病理切片观察,观察拔牙创周围组织的炎症情况。结果    A1组创口出血时间较其他3组（A2、B1、B2组）时间长。所有大鼠创口愈合良好,未见明显感染。病理观察结果：1、3和5 d后所有的大鼠创口周围均有炎症细胞浸润,7、10和14 d后基本未见炎症细胞;3 d后, A2组炎症重于其余3组（A1、B1、B2组）; 7 d后牙周塞治剂未脱落的创口炎症细胞浸润较已脱落创口明显。结论    拔牙创敷牙周塞治剂后能快速止血,7 d内不影响创口愈合,对拔牙创周围组织几无影响。     

混悬聚乳酸/磷酸三钙复合材料修复下颌骨缺损的实验研究

目的:观察PDLLA/TCP复合物修复大鼠下颌骨缺损的愈合过程,探讨该复合物作为下颌骨缺损修复替代材料的可行性.方法:在60只大鼠一侧下颌骨体部形成下颌骨缺损模型,并随机分为3组,每组20只.分别为PDLLA组,PDLLA/TCP组及空白对照组.其中空白对照组不植入任何物质.术后第2、4、8、12、16周分批处死各组大鼠,取下颌骨观察缺损部位愈合情况,并行X线检查、组织学切片观察.结果:创口观察显示术后第1周,各组大鼠伤口愈合良好,创周皮肤无红肿,无脓肿形成.术后第2周,空白组1例在手术部位出现炎性包块,后自行吸收,未形成瘘道.后期各组大鼠伤口均正常愈合.组织学观察显示PDLLA/TCP组和纯PDLLA组早期有大量纤维结缔组织形成和炎性细胞浸润,随后新生的纤维结缔组织将材料分隔成块状,缺损区出现大量新生骨岛,同时可见丰富的成纤维细胞和成骨细胞.PDLLA/TCP组新骨形成速度快于纯PDLLA组,空白组新骨形成数量明显少于各材料充填组.结论:PDLLA及PDLLA/TCP复合材料均有较强刺激成骨的作用,PDLLA/TCP复合材料修复骨缺损效果好于纯PDLLA,更适合用于下颌骨缺损修复.     

Collagen-binding heat shock protein HSP47 expression during healing of fetal skin wounds

Wounds in fetal animals are known to heal without scar formation, but the mechanism involved remains unclear. Scar tissue is characterized by disorganized collagen bundles. The 47-kDa heat shock protein (HSP47) is a molecular chaperone that specifically targets collagen processing. However, the role of HSP47 in scar formation is poorly understood. We studied the relation of HSP47 expression in skin to scar formation during fetal wound healing. Immunohistochemical analysis demonstrated HSP47-positive cells in the epidermal cell layer of fetal and neonatal rat skin and the absence of such cells in subcutaneous tissue. After induction of a wound on the back of fetal and neonatal rats, the message of collagen type I was increased only in neonatal skin but not in fetal skin. HSP47-positive cells consistently increased for 7 days after wound induction in neonatal rats. In contrast, HSP47-positive cells and HSP47 protein were unchanged in fetal rats. We conclude that the scarless healing of fetal skin wounds is related to lack of change in HSP47 expression. HSP47 may thus be an important determinant of scar formation during wound healing.     

Preferential recruitment of bone marrow-derived cells to rat palatal wounds but not to skin wounds

ObjectiveTo investigate the contribution of bone marrow-derived cells to oral mucosa wounds and skin wounds.BackgroundBone marrow-derived cells are known to contribute to wound healing, and are able to differentiate in many different tissue-specific cell types. As wound healing in oral mucosa generally proceeds faster and with less scarring than in skin, we compared the bone marrow contribution in these two tissues.DesignBone marrow cells from GFP-transgenic rats were transplanted to irradiated wild-type rats. After recovery, 4-mm wounds were made in the mucoperiosteum or the skin. Two weeks later, wound tissue with adjacent normal tissue was stained for GFP-positive cells, myofibroblasts (a-smooth muscle actin), activated fibroblasts (HSP47), and myeloid cells (CD68).ResultsThe fraction of GFP-positive cells in unwounded skin (19%) was larger than in unwounded mucoperiosteum (0.7%). Upon wounding, the fraction of GFP-positive cells in mucoperiosteum increased (8.1%), whilst it was unchanged in skin. About 7% of the myofibroblasts in both wounds were GFP-positive, 10% of the activated fibroblasts, and 25% of the myeloid cells.ConclusionsThe results indicate that bone marrow-derived cells are preferentially recruited to wounded oral mucosa but not to wounded skin. This might be related to the larger healing potential of oral mucosa.     

骨髓间充质干细胞促进皮肤创伤愈合及细胞因子在愈合过程表达研究

目的    探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs）促进皮肤创伤愈合作用及细胞因子在愈合过程中的表达变化。方法    本研究于2013年7月至2014年10月在沈阳万类生物技术实验室完成。体外分离、培养大鼠BMSCs,镜下观察细胞生长形态,取第3代BMSCs进行实验。流式细胞仪检测细胞表面标记物鉴定BMSCs。选择健康雄性SD大鼠48只,随机分成2组。于大鼠尾静脉注射PKH-26标记的BMSCs,1周后进行皮肤创伤模型制备,实验组于大鼠背部正中线划长3 cm的纵行切口,对照组不做创伤处理。荧光染色观察不同时间点正常皮肤及创面组织BMSCs数量、分布情况,HE染色观察不同时间点正常皮肤及创面组织病理变化情况。ELISA检测大鼠尾静脉血中不同时间点基质细胞衍生因子（SDF-1）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素（IL-1β）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、血小板衍生生长因子（PDGF）的含量变化。结果    镜下观察培养第三代的BMSCs细胞形态为均一梭形,贴壁生长。BMSCs移植能够加速创面愈合,ELISA结果显示,BMSCs移植后血清中SDF-1α、TNF-α、IL-1β、bFGF和PDGF的含量随着创伤愈合进程呈先上升后下降的趋势。结论    BMSCs能促进大鼠皮肤创伤愈合。     

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目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)促进皮肤创伤愈合作用及细胞因子在愈合过程中的表达变化。方法本研究于2013年7月至2014年10月在沈阳万类生物技术实验室完成。体外分离、培养大鼠BMSCs,镜下观察细胞生长形态,取第3代BMSCs进行实验。流式细胞仪检测细胞表面标记物鉴定BMSCs。选择健康雄性SD大鼠48只,随机分成2组。于大鼠尾静脉注射PKH-26标记的BMSCs,1周后进行皮肤创伤模型制备,实验组于大鼠背部正中线划长3 cm的纵行切口,对照组不做创伤处理。荧光染色观察不同时间点正常皮肤及创面组织BMSCs数量、分布情况,HE染色观察不同时间点正常皮肤及创面组织病理变化情况。ELISA检测大鼠尾静脉血中不同时间点基质细胞衍生因子(SDF-1)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-1β)、碱性成纤维细胞生长因子(b FGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)的含量变化。结果镜下观察培养第三代的BMSCs细胞形态为均一梭形,贴壁生长。BMSCs移植能够加速创面愈合,ELISA结果显示,BMSCs移植后血清中SDF-1α、TNF-α、IL-1β、b FGF和PDGF的含量随着创伤愈合进程呈先上升后下降的趋势。结论BMSCs能促进大鼠皮肤创伤愈合。     

PRF促进小鼠全层皮肤损伤修复的实验研究

目的:探讨富血小板纤维蛋白(PRF)对小鼠皮肤损伤的修复作用。方法:采用8~10周的Balb/C小鼠21只,将其分为3组,分别为皮肤缺损空白对照组,上市产品对照组(AD甲壳素),冻干异种PRF颗粒组,在背部制备1个1.5 cm圆形全层皮肤损伤创面。通过大体观察,测定伤口愈合时间和愈合率,并在第21天,取皮肤组织做病理切片,观察组织愈合情况。结果:伤后21 d,各组创面逐渐缩小,冻干异种PRF颗粒组创面面积明显小于其余各组(P＜0.01),并且愈合时间较其余各组短。结论:PRF可以明显促进创面愈合速度,提高愈合质量,为临床皮肤损伤修复提供新的治疗方法。     

富血小板血浆促进软组织损伤修复的实验研究

目的观察富血小板血浆（platelet-rich plasma,PRP）对犬软组织损伤的修复作用,探讨其促进软组织修复的机制。方法杂种犬4只,体重：18kg～24kg,雌雄不限。随机选择每只犬的一侧后腿的大腿内侧分别制作两个直径为4cm×3cm椭圆形创面和长度为3cm的直线伤口,深及皮下筋膜层,再随机选择一个椭圆形创面和直线伤口为实验创面,用PRP凝胶覆盖创面,对照组创面任其渗血在创面凝固,两组都用3M愈肤膜覆盖损伤处。分别于术后7天、14天、21天、28天通过大体观察和组织学观察对比两侧创伤愈合情况。结果术后7天,对照组创面少许肉芽组织生长,伤口周围有炎症反应;实验组创面清洁,有较多肉芽组织生长,伤口周围无明显炎症反应。术后7～28天,两组的椭圆形创面逐渐缩小,但实验组创面缩小明显并无明显瘢痕;实验直线伤口于术后14～21天完全愈合,无明显瘢痕,对照组可见到明显瘢痕。组织学观察：实验组创面愈合较快,至术后28天,形成比较成熟的皮肤组织,而对照组创面可见到较多瘢痕组织;实验组直线伤口术后14～21天即形成较成熟的皮肤组织,对照组直线形伤口于21～28天形成较成熟的皮肤组织,但瘢痕组织较多。结论 PRP能加快犬软组织损伤的愈合,并能减少瘢痕。     

Effect of low-dose electron radiation on rat skin wound healing

The aim of this study was to assess the effect of low-dose electron irradiation on morphological features of the wound healing process in rat skin. Surgical wounds were inflicted with a 2.3 x 1.4 cm template on 84 male rats that were assigned to 4 groups: IG1, immediately irradiated; IG2, irradiated 3 days after inflicting the wound; CG1 and CG2, control groups. Rats in IG1 and IG2 groups had their wounds exposed to 1 Gy of 6 MeV electron beam radiation, immediately after surgery and on the third postoperative day, respectively. Qualitative and histophotometric evaluations of tissue repair structures were carried out. Data were analyzed by ANOVA and Tukey's test (alpha = 0.05) and regression analysis. The repair process was delayed since the first sacrifice time in both irradiated groups, but in IG1, wound healing was closer to that of CG1; whereas in IG2, the delay was more pronounced. Based on the histological findings, it is possible to conclude that a low-dose of electron radiation delayed tissue repair in rat skin. The delay was longer in the skin irradiated 3 days after the beginning of tissue repair. However, the low-energy electron irradiation did not prevent wound healing.