Cyclins／DNA多参数流式细胞术分析细胞增殖

应用Ｃｙｃｌｉｎｓ／ＤＮＡ以参数流式细胞术,分析有丝分裂原刺激后的正常人外周血Ｔ淋巴细胞的细胞增殖（特别是Ｇ１期细胞增殖）,同时与Ｋｉ－６７／ＤＮＡ双参数法进行比较。结果表明,Ｃｙｃｌｉｎｓ／ＤＮＡ法比Ｋｉ－６７／ＤＮＡ法早２０ｈ发现增殖的淋巴细胞,有丝分裂原刺激后４８ｈ,Ｃｙｃｌｉｎｓ／ＤＮＡ法又经Ｋｉ－６７／ＤＮＡ法多检出２０％的增殖淋巴细胞。结论：Ｃｙｃｌｉｎｓ／ＤＮＡ双参数流式细胞术分析细     

葛根提取物对肝癌细胞增殖及细胞周期的作用

目的 :探讨中药葛根提取物的抗癌活性并试图建立一种筛选药物的方法。方法 :用MTT快速测定法及流式细胞仪分析法分析葛根提取物 (PR)对靶细胞人肝癌SMMC 772 1细胞的抗癌药效及细胞分裂周期各时象DNA变化。结果 :葛根提取物有比较强的抗癌活性 ,与阴性对照组相比差异非常显著 (P <0 .0 1) ,与丝裂霉素MMC联合用药抗癌活性显著增强 ,与单独用药组比差异非常显著 (P <0 .0 1)。流式细胞仪分析细胞分裂周期各时象DNA变化显示药物作用后S期细胞明显减少 ,增殖指数 (PI)降低 ,并可诱导凋亡峰 (AP峰 )。结论 :提示葛根提取物具有一定抗癌活性 ,并为建立筛选抗癌中药的方法提供一条新途径。     

Cyclins/DNA多参数流式细胞术分析细胞增殖

应用Ｃｙｃｌｉｎｓ／ＤＮＡ双参数流式细胞术,分析有丝分裂原刺激后的正常人外周血Ｔ淋巴细胞的细胞增殖（特别是Ｇ１期细胞增殖）,同时与Ｋｉ－６７／ＤＮＡ双参数法进行比较。结果表明,Ｃｙｃｌｉｎｓ／ＤＮＡ法比Ｋｉ－６７／ＤＮＡ法早２０ｈ发现增殖的淋巴细胞,有丝分裂原刺激后４８ｈ,Ｃｙｃｌｉｎｓ／ＤＮＡ法又比Ｋｉ－６７／ＤＮＡ法多检出２０％的增殖淋巴细胞。结论：Ｃｙｃｌｉｎｓ／ＤＮＡ双参数流式细胞术分析细胞增殖具可行性、实用性、科学性和全面性。     

LHRH类似物对体外培养肝癌细胞增殖阻抑作用的实验研究

目的 :探讨黄体素释放激素 (LHRH)类似物对肝癌细胞增殖的调节作用 ,为阐明LHRH在肝癌发病中的作用机制提供实验资料。　方法 :以体外培养的人肝癌细胞系hHCC和大鼠肝癌细胞系FSK 790 2为研究对象 ,用MTT试验检测LHRH类似物对这两种肝癌细胞生长的抑制作用 ;用流式细胞仪测定LHRH类似物作用后癌细胞的细胞周期变化 ;用免疫组化染色法检测PCNA和Bax蛋白表达以反映LHRH类似物对癌细胞增殖和程序性死亡指标的影响。　结果 :MTT试验表明 ,LHRH类似物可抑制hHCC和FSK 790 2的生长 ,并且这种作用呈时间和剂量依赖关系。LHRH类似物作用后 ,肝癌细胞中G1/G0 期细胞比率上升 ,S期细胞比率下降 ,说明细胞生长停滞。LHRH类似物可使癌细胞中PCNA免疫反应阳性细胞比率下降 (P <0 .0 5 ) ;而Bax阳性细胞比率增加 (P <0 .0 5 )。　结论 :LHRH类似物具有体外抑制肝癌细胞增殖的活性 ;Bax等促程序性死亡物质可能参与LHRH类似物对肝癌细胞增殖的抑制作用     

蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响

目的 观察蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响，探讨其抗肿瘤的可能作用环节。方法 以MTT法测定蜂毒素体外对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响，运用流式细胞术分析增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，并观察iv蜂毒素对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果蜂毒素对H22细胞的抑制作用随药物浓度增加而增强；蜂毒素作用于H22细胞后，细胞PCNA平均荧光强度低于对照组；iv蜂毒素对小鼠皮下H22肝癌细胞具有明显的抑制作用，抑瘤作用随浓度增加而增强。结论蜂毒素在体内外对小鼠肝癌H22细胞增殖均有明显的抑制作用，下调细胞PCNA表达可能是其作用环节之一。     

乙酰辅酶A羧化酶2通过调控细胞周期促进肝癌细胞增殖

目的 研究乙酰辅酶A羧化酶2（acetyl-co carboxylase 2,ACC2）对肝癌细胞增殖、迁移能力的影响以及其潜在的作用机制。方法 通过TCGA、GEO、CPTAC数据库对ACC2在肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）患者肝脏组织中的表达和预后价值进行分析。采用CRISPR-Cas9系统构建了ACC2敲低肝癌细胞系,观察肝癌细胞增殖、迁移能力以及细胞周期的变化,Western blot实验检测细胞周期相关蛋白的表达。结果 ACC2在肝癌组织中低表达（P<0.05）且与预后不良相关（P<0.05）。体外细胞功能学实验表明降低ACC2表达显著促进肝癌细胞增殖、迁移能力（P<0.05）。细胞周期流式分析显示敲低ACC2促进肝癌细胞周期G1/S期的转变（P<0.05）,细胞周期相关蛋白中CyclinE2和p21的表达降低,而CyclinA2和p-RB的表达升高。结论 ACC2可以促进肝癌细胞增殖和迁移的能力,对细胞增殖的促进作用是通过加速肝癌细胞周期G1向S期的转化实现的。     

加味玉屏风散对小鼠脾淋巴细胞增殖影响的流式细胞术分析

用流式细胞术分析了加味玉屏风散对小鼠脾淋巴细胞增殖周期中各时相分布及细胞增殖指数的影响,结果表明,本方具有促进淋巴细胞DNA合成,加快分裂增殖,延缓细胞衰老及增强免疫功能效应。     

流式细胞仪用于人白血病骨髓细胞增殖特性的分析

流式细胞仪用于人白血病骨髓细胞增殖特性的分析Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｃｅｌｌｓｏｆｌｅｕｋｅｍｉａｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ宫立众，张书模（第三军医大学大坪医院血液科）６３０...     

莪术油抑制小鼠HepA肝癌细胞增殖及其分子机制

目的 研究莪术油抑制小鼠HePA肝癌细胞增殖及其分子机制。方法 构建小鼠HePA肝癌模型,进行莪术油抑癌试验,并用免疫组化法检测不同组别间细胞增殖核抗原(RCNA)、视网膜母细胞瘤蛋白(RB蛋白)的表达,比较其变化,探讨莪术油抑制肝癌的分子机制。结果 莪术治疗组的瘤重、PCNA标记指数均低于生理盐水组、RB蛋白标记指数高于生理盐水组、且差异有非常显著性(P<0.01),而与5-FU组相比,3种指标的差异均无显著性(P>0.05)。结论 莪术油可能是通过上调RB蛋白的表达,抑制PCNA的阳性表达率,进而抑制肿瘤的生长。     

不同转移力瘤株对宿主NK细胞活性影响的动态观察

本文对两株荷瘤６１５小鼠的自然杀伤细胞（ＮＫ）活性及淋巴分裂原反应进行了动态观察。结果显示，同源但不同淋巴道转移力的两株瘤细胞免疫原性具有一定差异，且与其浸润，转移相关。     

两种不同染色法在流式细胞术中检测细胞周期的探讨

目的 比较碘化丙啶(PI)和4,6-联脒-2苯基吲哚(DAPI)两种不同染色方法在流式细胞术中对细胞周期检测的影响.方法 A549细胞分别采用PI和DAPI染色法进行染色,于染色后0和24h进行流式细胞仪检测细胞G0/G1期、S期和G2/M期的DNA含量,比较两种方法的测定结果,同时进行细胞计数,观察细胞浓度变化.结果 PI和DAPI法染色后0h上机测定,结果分别为:CV值(7.72±0.19)、(5.92±0.09),G0/G1期含量(69.63±1.16)％、(69.87±1.28)％,S期含量(24.53±0.47)％、(24.43±0.86)％,G2/M期含量(5.85±1.04)％、(5.72-0.65)％,两种方法检测细胞周期的结果基本一致(P＞0.05);染色后24h重新测定,结果分别为:CV值(8.82±0.05)、(6.09±0.30),G0/G1期含量(58.50±0.90)％、(70.47±0.81)％,S期含量(31.73±0.75)％、(23.67±0.45)％,G2/M期含量(9.51±0.47)％、(5.86±0.46)％,两种方法检测细胞周期的结果差异有统计学意义(P＜0.05).DAPI法染色后0和24h测定结果基本一致(P＞0.05),而PI法检测结果差异有统计学意义(P＜0.05).细胞计数结果显示,放置24hPI法细胞损耗为63.14％,DAPI法细胞损耗为12.50％,两种方法结果差异有统计学意义(P＜0.05).染色24h后PI法细胞开始崩解,镜下见较多的细胞碎片,而DAPI法细胞形态良好.结论 应用流式细胞术检测细胞周期,DAPI染色法优于PI染色法.     

药物诱导与耐药基因转染两种方法建立的人食管癌顺铂耐药细胞系的比较

目的比较药物诱导和耐药基因转染两种方法所建立的人食管癌顺铂耐药细胞系的不同特点。方法顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用法历时9个月建立食管癌耐药细胞系Ec9706/cDDP;同时采用脂质体转染法将人野生型DNA聚合酶β(polβ)的重组绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-AC3转染入食管癌细胞Ec9706,经G418筛选得到稳定转染细胞系Ec9706-AC3。荧光显微镜观察转染效果,普通倒置显微镜观察细胞形态变化。绘制生长曲线,计算群体倍增时间。RT-PCR方法检测细胞中polβmRNA的表达水平,MTT法测细胞对顺铂的敏感性,并观察冻存复苏、撤药培养对耐药性的影响。结果两种方法所获耐药细胞与亲本细胞相比形态无明显变化,polβmRNA表达均增加。Ec9706/cDDP耐药指数为15.70±1.16,冻存复苏对耐药指数影响不大,而撤药培养可使耐药性降低,细胞群体倍增时间延长;Ec9706-AC3细胞耐药指数为1.78±0.67,不受冻存复苏、撤药培养的影响,细胞群体倍增时间不变。结论用不同方法成功建立两种人食管癌顺铂耐药细胞,不同方法获得的耐药细胞生物学特性有所不同。     

Differential thymosin β10 expression levels and actin filament organization in tumor cell lines with different metastatic potential

Background To investigate the differential expression levels of thymosin [β10 (Tβ10) and the corresponding changes of actin filament organization in human tumor cell lines with different metastatic potential.Methods Four groups of nine human tumor cell lines with different metastatic potential were analyzed for the amount of Tβ10 mRNAs by Northern blot and for their peptide expression levels by immunohistochemistry. The filamentous actin (F-actin) was observed by staining of TRITC-phalloidin to detect changes in actin organization.Results In comparison with non-/weakly metastatic counterparts, Tβ10 was upregulated in highly metastatic human lung cancer, malignant melanoma and breast cancer cell lines. Staining of TRITC-phalloidin revealed less actin bundles, a fuzzy network of shorter filaments and some F-actin aggregates in the highly metastatic tumor cells. Meanwhile, the actin filaments were robust and orderly arranged in the non-/weakly metastatic cancer cell lines.Conclusion Tβ10 levels correlate positively with the metastatic capacity in human tumors currently examined. The increasing metastatic potential of tumor cells is accompanied by a loss of F-actin,poorly arranged actin skeleton organizations and presence of F-actin aggregates. There is a consistent correlation between the elevated Tβ10 expression and the disrupted actin skeleton.     

乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群初步研究

目的:检测不同乳腺癌细胞系中肿瘤干细胞相关亚群含量,并探讨使乳腺癌细胞系MCF-7中肿瘤干细胞相关亚群富集的方法.方法:利用流式细胞仪检测3种乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-435s中SP细胞(side population cells)比例及CD44 CD24-/low细胞比例.用Percoll不连续密度梯度法分离MCF-7细胞亚群,利用流式细胞仪筛选出SP细胞富集的亚群.用添加生长因子的无血清培养液培养MCF-7,检测其中CD44 CD24-/low细胞的比例.结果:MCF-7、MDA-MB-435s中SP细胞比例分别为3.61%和2.72%,MDA-MB-231中未检测到SP细胞.3种细胞系中CD44 CD24-/low细胞比例分别为0.87%、0.59%和94.04%.MCF-7经Percoll分选,D亚群SP细胞富集,比例高达25.23%.MCF-7中CD44 CD24-/low细胞比例随着无血清培养时间的增加而增加,3周时达29.35%.结论:SP检测与CD44 CD24-/low细胞检测是目前乳腺癌干细胞检测的两种常用方法,但两者在同一乳腺癌细胞系中的检测结果并不一致,两种方法均有一定的局限性.另外,Percoll分选或无血清培养均能使MCF-7中肿瘤干细胞相关亚群(SP细胞或CD44 CD24-/low细胞)富集.     

青蒿素对肝癌细胞株HepG2细胞增殖的影响

目的：探讨青蒿素对细胞株HepG2细胞增殖的影响。方法采用MTT法检测青蒿素对HepG2细胞作用后的增殖抑制率,流式细胞术检测药物作用HepG2后细胞周期及细胞凋亡的情况。结果80μmol／L的青蒿素对肝癌细胞株HepG2具有增殖抑制作用,其抑制率呈剂量、时间依赖效应,可使HepG2细胞周期阻滞于G0／S期,并诱导肝癌细胞发生凋亡。结论青蒿素能抑制肝癌HepG2细胞增殖。     

尼美舒利对人结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响

目的探讨尼美舒利对体外培养的结肠癌细胞生长及细胞周期分布的影响。方法以人结肠癌细胞株HT-29、HCT-116为对象,用体外药物敏感实验（MTT）法检测尼美舒利对肿瘤细胞的增殖抑制效应,流式细胞术检测肿瘤细胞周期分布变化情况。结果（1）尼美舒利对人结肠癌细胞株生长的抑制作用呈时间、剂量依赖性效应,且对HT-29细胞作用强于HCT-116细胞;（2）尼美舒利可改变结肠癌细胞株细胞周期的分布,明显降低增殖指数。结论尼美舒利可通过抑制COX2酶活性而抑制肿瘤细胞的分裂和增殖,诱导其凋亡,干预结肠癌的发展。     

Isolation and characterization of clonal cell lines with different metastatic capacity from hepato-carcinoma in mice

By means of soft agar colonization and limiting dilution, 5 clonal cells with different metastatic capacity, [one with high metastatic rate (78.6-89.4%), three moderate (33.3-66.6%) and one low (15-15.4%)], were separated from Hca-F25/L cell line. Their common features were: All clones metastasize to lymphatic system except a small percentage (1.88%) associated with lung metastasis; five clones as well as their parents all reacted with Keratin monoclonal antibody (HK2), which indicated the epithelial character with poor differentiation; Cells of each clone have highly identical karyotype. Five clone lines have similar marker chromosomes (M1, M2, M3, M4) with different stem line karyotypes. We also found different features of five cell lines in pathomorphological indicators and cell electrophoresis rate. Our results indicated that the Hca-F25/L strain is heterogeneous in phenotype and karyotype.     

早期非小细胞肺癌体部立体定向放疗基础和临床研究——不同照射剂量联合吉非替尼对肺癌细胞系H358的影响

目的：探讨不同剂量单纯照射及照射联合吉非替尼对非小细胞肺癌细胞系 H358存活率、增敏比及细胞凋亡、细胞周期的影响。方法体外培养肺腺癌细胞 H358分为空白对照组、单纯照射组、单纯吉非替尼（Iressa）组、照射＋Iressa组,照射剂量为0、2、4、6、8、12、16、20 Gy,药物浓度为1μmol/L。通过细胞克隆形成实验,观察4组 H358细胞存活情况,描绘细胞存活曲线;采用四噻唑比色试验（MTT）观察两组细胞生长受抑制情况,计算增敏比（SER）;运用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期。结果（1）随着照射剂量增加细胞存活分数减小,单纯照射组单次剂量达到20 Gy时,细胞克隆集落形成率为0,照射＋Iressa组单次剂量达到16 Gy时克隆集落形成率为0;（2）照射＋Iressa 组与单纯照射组相比,两组 OD 值差异有统计学意义（F剂量＝62．644,P ＜0．001,F药物＝233．572,P ＜0．001）,两组 OD值随着照射剂量的增高而减小,不同剂量之间 OD值差异有统计学意义（F未加药＝354．972,P＜0．001;F加药＝231．740,P ＜0．001）,两组细胞放射增敏比（SER）与药物显著相关（P ＜0．001）,照射＋Iressa组SER较单纯照射组明显增高;（3）随着照射剂量的增加,凋亡率增高（P ＜0．001）,H358细胞凋亡率与Iressa药物作用相关（P ＜0．001）,单纯Iressa作用后细胞周期阻滞主要出现在G0/G1期,照射＋Iressa组及单纯照射组主要出现G2/M期阻滞。结论增加单次照射剂量可降低 H358细胞存活率,细胞凋亡与 Iressa药物之间存在相关性,照射＋Iressa能够增加细胞凋亡率,照射前使用Iressa能够增强照射对细胞的放射敏感性。     

小鼠肝癌（HCa）两株克隆细胞系转移表型的比较

来自同一祖先的两株不同亚克隆细胞系Ｈｃａ－１６Ａ３－Ｆ（Ｆ）和ＨＣａ－Ａ２－Ｐ（Ｐ），在两种不同小鼠体内经不同途径接种所得的转移率和转移部位显示有差别：Ｃ３／ｈｅ小鼠皮下组，Ｆ呈现高淋巴道转移（８０．０％），而Ｐ未出现转移，Ｃ３Ｈ／ｈｅ小鼠尾静脉组，Ｆ在卵巢（２８．６％）和淋巴结（２８．６％）有较低的转移率，Ｐ权出现一例（１４．３％）卵巢转移，然而，在裸鼠体内却出现了异常的变化，Ｆ呈现高血道（肺脏７１．４％）转移而不出现淋巴道和其他部位转移，但Ｐ却出现高淋巴道转移（８５．７％）兼有低血道（肺脏２８．６％，卵巢１４．３％，肾脏２８．６％）转移。体内实验结果提示：ＨＣａ细胞中含有转移、浸润能力不同的亚群；Ｆ细胞在体内具有较强的浸润力与转移力，且有淋巴道转移的倾向；Ｐ细胞的浸润力和转移力则低于Ｆ细胞，但若给其提供适当的到达器官的通路，完全能形成实验性转移灶。Ｃ３Ｈ／ｈｅ小鼠也是ＨＣａ细胞生长和转移的理想宿主。