溶胶-凝胶生物活性玻璃对人牙髓细胞作用的研究

目的:研究溶胶-凝胶生物活性玻璃对人牙髓细胞增殖与碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的作用。方法:取人无龋前磨牙或第三磨牙的牙髓进行牙髓细胞原代培养,传至第4代作为实验用细胞。实验用生物活性玻璃包括溶胶-凝胶法制备的58S、纳米58S(Nano-58S)和传统熔融法制备的45S5。用含有1 g/L(mg/mL)的58S、Nano-58S和45S5浸提液的达尔伯克必需基本培养基(Dulbecco’s mimimum essential medium,DMEM)培养人牙髓细胞,对照组为不含生物活性玻璃的DMEM培养组。采用甲基噻唑基四唑溶液[(4,5-dimethylthiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium bromide,MTT]法于第1、3、5、7天测定细胞增殖,第14天检测细胞的ALP活性。结果:Nano-58S组的细胞增殖显著高于对照组,Nano-58S组和58S组的细胞ALP活性显著高于对照组(P<0.01);45S5组的细胞增殖(P<0.01)和ALP活性(P<0.05)显著低于对照组。结论:Nano-58S和58S溶胶-凝胶生物活性玻璃能够促进人牙髓细胞增殖和ALP活性,对人牙髓细胞具有良好的生物活性作用。     

两种牙科材料对人胚胎干细胞来源成纤维细胞的细胞毒性研究

目的:观察口腔常用材料氢氧化钙(calcium hydroxide,CH)和复合树脂对人胚胎干细胞来源成纤维细胞(embryo body fibroblasts-H9,EBf-H9)、原代培养人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)及小鼠成纤维细胞L929的细胞毒性,探讨使用EBf-H9评价牙科材料生物安全性的可行性。方法:诱导人胚胎干细胞(H9)分化为EBf-H9,原代培养hDPCs,并经免疫细胞化学染色鉴定。用细胞计试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)检测比较梯度浓度CH和复合树脂浸提液对EBf-H9、hDPCs和L929细胞的细胞毒性。结果:CH或复合树脂分别作用24 h和48 h(或72 h)之后,L929细胞的存活率显著低于EBf-H9和hDPCs(P<0.05),但EBf-H9和hDPCs的细胞存活率没有统计学差异(P>0.05)。结论:对于CH和复合树脂的毒性反应,L929细胞与hDPCs有较大差异,EBf-H9比L929细胞更接近hDPCs的反应,提示在牙科材料生物安全性评价中,人胚胎干细胞来源成纤维细胞具有替代现有细胞检测模型的潜力。     

复合树脂充填修复后牙牙髓反应及其原因分析

目的 观察分析活髓后牙龋洞用超强复合树脂充填修复后牙髓反应及其发生原因。方法 根据后牙龋一类窝洞的深度,将108颗患牙分为深层窝洞组（位于釉牙本质界下1～1．5mm,30颗牙）,中层窝洞组（位于釉牙本质界下0．5～1mm,46颗牙）,浅层窝洞组（位于釉牙本质界下〈0．5mm,32颗牙）。其中,深层窝洞用Dycal护髓,GIC垫底后用超强复合树脂充填修复,中层窝洞和浅层窝洞直接用复合树脂充填。充填修复后2周、1～2个月和12个月进行复查。结果深层窝洞组激发痛的发生率为66．67％,中层窝洞组为23．91％,浅层窝洞组为6．25％,三组比较差异有显著性（P〈0．005）。结论 复合树脂应用于活髓后牙深层窝洞的充填修复时,复合树脂中的未聚合单体、酸蚀、固化灯照射产生的热量和边缘微渗漏形成的细菌侵入等因素,均会引起不同程度的牙髓反应。     

华蟾毒精抗癌作用的体外研究

目的：了解中药成分华蟾毒精（cinobufagin,CBG)的体外抗癌活性及其主要作用机制。方法：采用流式细胞术检测华蟾毒精对体外培养的人肝癌细胞株SMMC－7721,人白血病细胞株HL－60的细胞毒作用,经透射电子显微镜观察CBG作用后培养的SMMC－7721及HL－60细胞超微结构的改变。结果：华蟾毒精有显的抗癌活性,对HL－60细胞的IC50为1．25ug.L^-1,对SMMC－7721细胞的IC50为2．72ug.L^-1,能非常显地减少HL－60,SMMC－7721细胞S期DNA含量及增值指数,诱导癌细胞凋亡,透射电镜观察显示：华蟾毒精作用后,可见成片的细胞坏死,细胞凋亡,内质网肿胀,线粒体肿大呈空泡样,溶酶体增多等细胞结构改变,结论：华蟾毒精有确切的抗癌作用,其作用产生的机制是多方面的,既能抑制癌细胞DNA的生物合成,又能诱导细胞凋亡。     

正常人结膜上皮细胞的体外培养及扫描电镜观察

人结膜上皮细胞不仅在体内只有较高的再生能力,而且在体外培养同样表现出较高的繁殖活性。细胞接种后4～5d即长成单层,紧密连接,细胞形态多为多边形,部分细胞显示类啤酒杯外观。细胞表面超微结构可见丰富的微绒毛,显示出旺盛的代谢及分泌功能,为体外研究药物毒理及药物筛选提供了一个良好模型的组织结构基础。     

CPP-ACP及氟促进脱矿牙骨质再矿化的体外实验

目的比较普通含氟牙膏、酪蛋白磷酸肽钙磷复合体（CPP—ACP）及含氟CPP—ACP（CPP—ACPF）促进脱矿牙骨质再矿化的效果。方法制备健康牙骨质块,开窗后脱矿液脱矿96h,分为空白对照组、普通含氟牙膏组、CPP—ACP组和CPP—ACPF组,每组10个样本,将实验药品按要求在牙骨质表面反复涂擦3min,流水冲洗5min,每天1次。28d后扫描电镜观察各组牙骨质表面形貌,通过能谱分析测定牙骨质表面的微区成分（Ca、P含量及Ca／P）,采用SPSS17．0统计软件对各组间Ca、P、Ca／P进行单因素方差分析。结果扫描电镜结果显示各组牙骨质表面形貌不同：与对照组相比,各实验组再矿化后均可见不同程度矿物质沉积,以CPP-ACPF组沉积物最厚。能谱分析结果显示各实验组钙磷含量均较对照组明显升高,各实验组之间的差别无统计学意义。结论CPP—ACP及CPP—ACPF均能促进脱矿牙骨质再矿化,CPPACP与氟可能具有协同抗龋作用。     

大鼠牙囊干细胞与珊瑚羟基磷灰石陶瓷生物相容性和成骨作用研究

目的 观察大鼠牙囊干细胞(rat dental follicle stem cells,rDFCs)在珊瑚羟基磷灰石生物玻璃陶瓷(coralline hydroxyapatite,CHA)上的附着增殖以及成骨因子表达情况,探索二者间生物相容性.方法 10只6d龄SD大鼠,雌雄各半,处死后剥离双侧下颌骨磨牙区牙囊组织,通过组织块酶消化法获得rDFCs,rDFCs与CHA体外复合培养,扫描电镜(SEM)观察rDFCs与CHA黏附增殖情况,RTPCR法测定rDFCs、rDFCs-CHA及rDFCs成骨诱导组黏附增殖5、7、9d成骨基因OPN、ALP、Osterix的表达.结果 SEM观察到rDFCs在CHA上能正常黏附、生长、增殖,4d时细胞开始相互接触,成片状黏附于CHA表面,7d时,细胞外基质已完全覆盖CHA表面.RT-PCR结果显示rDFCs与CHA共培养5、7、9d时,CHA促进了成骨基因OPN、ALP、Osterix的表达,rDFCs-CHA组与rDFCs组相比,Osterix基因表达:7d时前者是后者267倍;OPN基因表达:7d时是24.7倍,ALP基因表达:5d时rDFCs-CHA组是rDFCs组的3.1倍(P＜0.01).结论 CHA能促进rDFCs黏附、增殖、成骨分化及表达成骨因子,二者生物相容性良好.     

高免疫原性胶质瘤细胞疫苗体外抗瘤时靶细胞超微结构变化

目的观察高免疫原性人多形性胶质母细胞瘤（GBM）U251细胞疫苗体外诱发产生效应细胞杀伤靶细胞的超微结构变化。方法以500U／mL干扰素-γ（IFN-γ）诱导48h＋热43℃休克2h诱导膜型热休克蛋白70（HSP70）及主要组织相容性抗原复合体Ⅰ类分子（MHC-Ⅰ）双高表达,经丝裂霉素（MMC）灭活制成高免疫原性细胞疫苗。体外刺激健康捐献者外周血单个核细胞（PBMCs）作为效应细胞（MHC—HSP—CTL）,进行肿瘤特异性杀伤试验;MTT比色法检测其杀伤活性;透射电镜观察靶细胞受攻击后情况。结果MHC-HSP-CTL对野生型U251细胞特异性的杀瘤活性明显高于HSP70分子单高表达的细胞疫苗刺激组（HSP-CTL）、MHC-I类分子单高表达的细胞疫苗刺激组（MHC-CTL）以及野生型对照组（W-CTL）（P〈0．05）,透射电镜显示靶细胞受到攻击后出现不同程度凋亡样坏死和胀亡样坏死,胀亡样坏死细胞在高免疫原性细胞疫苗刺激的效应细胞组较多。结论介导细胞胀亡是高免疫原性即膜型HSP70和MHC-Ⅰ类分子双高表达疫苗的U251细胞疫苗一种重要主动特异性抗瘤机制。