白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的研究进展

目前的间接研究，趋向于肯定分泌型天冬氨酸蛋白酶在白念珠菌病发病中的作用。本文综述了近几年中此酶在分子特征，基因及其表达、分泌机制和致病机理等方面的文献报道。     

白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶的研究进展

目前的间接研究,趋向于肯定分泌型天冬氨酸蛋白酶在白念珠菌病发病中的作用。本文综述了近几年中此酶在分子特征、基因及其表达、分泌机制和致病机理等方面的文献报道。     

与白念珠菌黏附和侵入相关的毒力因子研究进展

白念珠菌是一种重要的人类致病真菌同时又能与人类共栖生存，有关其毒力因子的研究人们已经作了大量的工作。白念珠菌的毒力因子包括黏附因子、利于侵入的酶、酵母相和菌丝相之间的转换及表型转换等。主要综述了对白念珠菌有关黏附和侵入方面的毒力因子方面的研究进行。     

白念珠菌的毒力及其对氟康唑耐药性的相关性研究

目的:研究白念珠菌的毒力因子分泌性蛋白酶(SAP)活力与其对氟康唑耐药性形成之间的关系。方法:(1)将对氟康唑敏感的白念珠菌,培养在含氟康唑浓度逐渐增加的液体培养基中,体外诱导为氟康唑耐药株;(2)运用牛血清白蛋白培养基方法,分别测定了对氟康唑敏感和对氟康唑耐药的白念珠菌的分泌性蛋白酶活力。结果:(1)40株对氟康唑敏感的白念珠菌均在体外被成功地诱导为对氟康唑的耐药株;(2)耐药株的分泌性蛋白酶活力明显强于敏感株(P<0.001)。结论:白念珠菌的毒力因子分泌性蛋白酶活力增加与其对氟康唑耐药性的增加相一致。     

结缔组织病患者念珠菌深部定植的危险因素分析

目的 了解结缔组织病患者念珠菌深部定植的发生率及相关危险因素.方法 对153例结缔组织病患者和63例健康人的咽拭、中段尿、肛拭标本进行真菌培养,采用Logistic相关回归分析模型,对患者念珠菌深部定植的危险因素进行相关性分析.结果 患者组的念珠菌深部定植率35.29%显著高于健康人组7.94%,菌种分析以白念珠菌最常见.患者组血红细胞计数降低,尿蛋白增多,血清补体(CH50、C3、C4)水平降低,糖皮质激素使用每日均量较高以及广谱抗生素使用与结缔组织病患者念珠菌深部定植有显著相关性;而性别、年龄、身高、体质量、病程、有结缔组织病家族史、既往脏器损害、血白细胞及中性粒细胞计数低下、血小板计数低下、尿红细胞与白细胞异常增多、糖皮质激素使用总量与疗程、某些免疫抑制剂(环磷酰胺、硫唑嘌呤等)的使用、雷公藤的使用总量与疗程、窄谱抗生素的使用等与结缔组织病患者念珠菌深部定植无显著相关性.结论 结缔组织病患者念珠菌深部定植率显著高于健康人,控制相关危险因素将减少念珠菌深部定植的发生.     

白念珠菌的毒力研究——分泌性酸性蛋白酶活力的测定

目的：研究白念珠菌的毒力与分泌性酸性蛋白酶活力间的关系。方法：将分离自血液、鹅口疮、念珠菌性阴道炎及健康带菌者的白念珠菌接种于牛血清白蛋白培养基（BSA）上,经氨基黑染色,测量蛋白分解区。结果：来源于患者的白念珠菌分泌性酸性蛋白酶活力明显高于健康带菌者。结论：白念珠菌的毒力与其分泌性酸性蛋白酶活力呈正相关,且此方法可能应用于临床来鉴别白念珠菌的致病菌株及正常寄生于人体的菌株。     

pH值对白念珠菌分泌性蛋白酶产量的影响

随机选取20株白念珠菌,采用含不同pH值的牛血清白蛋白培养基(BSA)分别测定其分泌性蛋白酶产量,以研究pH值对白念珠菌分泌性蛋白酶产量的影响。pH值4.0时白念珠菌分泌性蛋白酶产量最高;pH值7.0时白念珠菌分泌性蛋白酶产量最低(P<0.01)。白念珠菌分泌性蛋白酶的产生与其生长培养基的pH值有关。     

检测白念珠菌芽管形成的新方法

白念珠菌(简称白念)为临床上最常见的条件致病真菌,约占临床分离酵母的80%～90%.快速、正确地鉴定白念显得尤为重要.常规的方法是米粉吐温琼脂观察其厚壁孢子形成及血清芽管试验.现介绍一种液体培养基能快速检测白念的芽管形成,并与传统常规方法作了比较,显示此法具有简单、快速、重复性好的优点.     

阴道念珠菌病患者体内白念珠菌抗氧化基因的表达

目的检测阴道念珠菌病患者体内感染状态下白念珠菌抗氧化基因的表达,初步了解抗氧化机制在阴道念珠菌病发病机制中的关系。方法选取7例阴道念珠菌病患者阴道分泌物分离株,培养鉴定为白念珠菌,选取PDA斜面培养3天(体外培养静止期)及临床阴道分泌物检体,用Trizol法提取总RNA反转录为cDNA后进行荧光定量PCR,检测体外培养静止期与体内检体抗氧化基因(CAT,SOD2,SOD5)及抗氧化转录因子(CaSkn7,CaHog1,CAP1)的基因表达情况,运用Ct值比较法进行表达量的相对定量分析。结果白念珠菌阴道病患者体内标本中CaSkn7,CAP1,SOD2,SOD5基因表达量比体外培养静止期少,分别为体外表达量的0.273,0.635,0.039,0.632;而CaHog1及CAT基因表达比体外培养静止期高,分别为体外表达量的3.5倍及1.67倍。经Wilcoxon检验,显示阴道分泌物标本中仅CaSkn7基因表达量较体外培养静止期低,差异有统计学意义P0.05,其余基因与体外培养静止期差异无统计学意义,P均0.05。结论白念珠菌黏膜感染状态下抗氧化相关的基因表达较少,抗氧化机制在念珠菌性阴道炎发病过程中作用不明显。     

白念珠菌的毒力研究——磷脂酶活力的测定

目前认为白念珠菌(白念)的侵袭性与菌株的磷脂酶活力有关,合此酶的菌株能通过分解细胞壁中的磷脂形成溶血磷脂,而后者能引起细胞膜的损害^[1].Bar-rett-Bee等^[2]发现,对颊上皮细胞具粘附功能的白念菌株,对鼠具侵袭力,同时磷脂酶活力高,而不具粘附功能的菌株则未能引起鼠的病变,而且磷脂酶活力也低,因此,不同临床菌株的磷脂酶活力值得研究。一、资料和方法1.菌株:分离自怀疑白念感染病例的临床菌株,经血清芽管试验证实为白念,共104株,其中来自血培养24株、尿培养27株、痰培养37株、伤口分泌物培养16株。每一菌株在沙堡葡萄糖琼脂(SDA)上接种不超过三代,以确保酶活力不改变。     

白念珠菌二相性与毒力关系的实验研究

目的　探讨白念珠菌二相性与毒力的关系。方法　分别将孢子相、菌丝相白念珠菌与人口腔颊黏膜细胞 (BEC)进行黏附试验 ,比较二相性白念珠菌对BEC的黏附率 ;分别用牛血清白蛋白培养基及卵黄培养基测定二相性白念珠菌的分泌性酸性蛋白酶与细胞外磷脂酶的活力 ;分别将二相性白念珠菌进行小鼠毒力实验。结果　菌丝相白念珠菌对BEC的黏附率显著高于孢子相 (P <0 .0 0 1) ;菌丝相白念珠菌分泌性酸性蛋白酶与细胞外磷脂酶的活力均显著高于孢子相 (P分别 <0 .0 0 1和 <0 .0 0 2 ) ;注射菌丝相白念珠菌的小鼠死亡率高于注射孢子相的小鼠 (P <0 .0 2 5 ) ,且平均存活期低于注射孢子相的小鼠 (P <0 .0 0 1)。结论　菌丝相白念珠菌的毒力强于孢子相。     

中国合肥与日本新两地白念珠菌分离株的生物学特性比较

目的由合肥、新两地 ,分别取白念珠菌分离株32株及36株 ,展开试验。旨在探索不同地区可能出现的差别。方法试验包括形态学(芽管、厚膜孢子)、生理学(碳源同化试验、蛋白酶、磷脂酶)及生物分型试验。结果形态学、生理学试验 ,两地的菌株均无显著性差异 ;但生物分型有区别———两地菌株除了唯一的型别(37734003)为共有外 ,其他8个型别均不相同。结论生物分型可作为流行病学调查工具     

白含珠菌体外粘附条件的探讨

以正交设计法，采用了正交表Ｌ８（４１×２４）研究了念珠菌对上皮细胞体外吸附的诸条件，包括４因素及２～４水平，分别比较各因素在不同水平下的吸附率。结果提示，促进吸附的最佳组合因素是：念珠菌菌相（Ｅ＝３４．２６），孵育１２小时（Ｄ＝３３．７０），念珠菌与细胞间比率为１：２００（Ｃ＝３４．８８）以及孵育温度在３７℃时（Ｂ＝３３．８６）。以４种物质孵育后均可抑制菌对细胞的抑制率，其中尤以甘草甜素的作用为最强。由此也提示了器官表面（如口腔，肠道）常驻的真菌的数量对念珠菌病的发病极为重要，如能服用一些中药，如甘草甜素将是可能控制发生念珠菌病的一种措施。     

白假丝酵母菌对氟康唑的敏感性及与其毒力的相关性

目的观察白假丝酵母菌对氟康唑的敏感性,并探讨其敏感性与毒力的相关性。方法对昆明医学院第二附属医院临床分离鉴定为白假丝酵母菌的124株菌株,根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制订的M27-A方案进行氟康唑药物敏感实验;并测定白假丝酵母菌氟康唑敏感组和耐药组的磷脂酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶的阳性率及活力。结果 124株白假丝酵母菌中68.55%对氟康唑敏感;白假丝酵母菌氟康唑敏感株和耐药株磷脂酶阳性率分别为26.67%和66.67%;二者分泌型天冬氨酸蛋白酶阳性率分别为33.33%和73.33%,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论昆明医学院第二附属医院院内白假丝酵母菌中,有68.55%菌株对氟康唑敏感;白假丝酵母菌耐药株的磷脂酶和分泌型天冬氨酸蛋白酶的阳性率及活力均明显高于敏感株,可认为白假丝酵母菌耐药株的毒力较敏感株强。     

抗白念珠菌芽管单抗MAb03.2C1-C2特异性及临床初步应用研究

目的分析抗白念珠菌芽管胞壁外膜抗原单克隆抗体MAb03.2C1-C2的特异性及其应用于实验室检测的可行性。方法用临床分离白念珠菌、致病非白念的念珠菌的孢子、菌丝及常见的酵母菌、细菌做抗原包被,用间接免疫荧光(IIF)方法,对单抗特异性进行分析。取临床口腔念珠菌病患者的真菌涂片菌丝阳性的标本,用IIF方法检测。结果MAb03.2C1-C2仅与白念珠菌芽管或菌丝特异性地结合,与白念珠菌的孢子不发生结合。13种非白念的念珠菌孢子和菌丝、新型隐球菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均不能与该单抗相结合。59例口腔念珠菌病真菌涂片IIF试验阳性的标本最终鉴定为白念珠菌(100%)。结论MAb03.2C1-C2对白念珠菌芽管有高度的特异性,并可用于口腔念珠菌病真菌涂片中白念珠菌的早期诊断。     

葡萄糖对白念珠菌芽管产生的影响

为观察体外葡萄糖含量对白念珠菌芽管形成的影响，制定合适的浓度。对经１８ｈ碳、氮饥饿试验的白念珠菌在含不同浓度的葡萄糖培养基中的芽管形成百分率、糖及氧的代谢状况、ｐＨ变化作了详细观察。结果显示最适宜白念珠菌产生芽管的葡萄糖浓度为１ｇ／Ｌ，此时氧及糖的消耗代谢率最大，同时反映白念珠菌的芽管产生严格依赖于葡萄糖含量     

耐氟康唑的白念珠菌对常见抗真菌药物的敏感性检测

目的测定耐氟康唑白念珠菌对常见抗真菌药物的敏感性,并探讨pH值对微量液基稀释法的影响。方法参照美国临床实验室标准研究所(CLSI)颁布的酵母菌抗真菌药物敏感性试验方案M27-A2,测定氟康唑(FLC)、伏立康唑(VOR)、伊曲康唑(ITC)、两性霉素B(AMB)和米卡芬净(MCFG)的最小抑菌浓度(MIC),并调整RPMI-1640液体培养基的pH值至4.5,测定FLC、VOR和ITC的MIC值。结果FLC的MIC值均>64μg/mL;VOR的MIC值,6株菌>16μg/mL,1株为2μg/mL,3株<1μg/mL;ITC的MIC值,7株≥1μg/mL,3株为0.25～0.5μg/mL;MCFG的MIC值为0.125～0.25μg/mL,AMB的MIC值为1～2μg/mL;使用pH值为4.5的RPMI-1640液体培养基,5种抗真菌药物的MIC值变化不明显。结论10株耐氟康唑的白念珠菌对MCFG均敏感,部分菌株对VOR和(或)ITC交叉耐药;部分耐FLC的白念珠菌对AMB的敏感度有所降低。降低RPMI-1640的pH值,可明显减少拖尾现象,但不影响药敏结果的判定。     

白念珠菌感染对小鼠皮肤Caspase-14表达及屏障功能的影响

目的：检测小鼠皮肤白念珠菌感染时半胱氨酸蛋白酶-14（Caspase-14）的表达,探讨其对皮肤屏障的影响。方法：检测小鼠对照组正常皮肤（C）、受损皮肤（A1）、外用乳酸的受损皮肤（A2）、外用Caspase抑制剂Z-VAD-FMK的受损皮肤（A3）和接种白念珠菌的受损皮肤（A4）在实验前后pH值及经表皮水分流失量（TEWL）的变化。同时分别采用real-time PCR及western blotting检测各组小鼠皮肤的Caspase-14的表达,并比较其差异。结果：C、A1、A2、A3、A4各组处理后即刻及处理后12h的pH值为5.46±0.10、6.82±0.09、5.38±0.12、6.79±0.17、6.65±0.13和5.50±0.11、6.18±0.14、5.76±0.19、6.42±0.26、5.73±0.21,处理后12hTEWL值为27.2±7.3、39.2±8.2、51.0±9.1、47.4±8.5、58.5±9.6。C、A1、A2、A3、A4各组Caspase-14的转录水平分别为1.00±0.07、6.51±0.48、2.92±0.18、7.63±0.27、3.66±0.31,蛋白表达水平分别为1.00±0.12、5.17±0.38、3.24±0.27、6.31±0.33、3.02±0.24,各组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：受损皮肤Caspase-14的表达较正常皮肤明显增高,Caspase-14对受损皮肤屏障功能恢复具有重要作用;而白念珠菌感染可能通过降低皮肤表面pH值,下调受损皮肤Caspase-14的表达,从而影响皮肤屏障功能的恢复。     

阴道乳酸杆菌对白念珠菌生长抑制的作用

目的比较外阴阴道念珠菌病患者与健康妇女阴道乳酸杆菌检出阳性率、菌种分布及产H2O2能力的异同,初步探讨阴道内不同乳酸杆菌对白念珠菌生长抑制能力的差异。方法采用生物化学的方法对乳酸杆菌进行鉴定,并将鉴定到种的乳酸杆菌接种在H2O2鉴定培养基,观察是否产H2O2;挑选健康组嗜酸乳酸杆菌、干酪乳酸杆菌、唾液乳酸杆菌、詹氏乳酸杆菌,用纸片法测其对白念珠菌抑菌圈直径。结果两组在乳酸杆菌阳性率及分布上差异无统计学意义(P0.05);患者组乳酸杆菌产H2O2阳性率明显低于健康组,差异有统计学意义(P0.05);四种乳酸杆菌分别对白念珠菌生长抑制作用强弱不同,其中嗜酸乳酸杆菌抑制白念珠菌生长作用最明显。结论外阴阴道念珠菌病患者阴道内乳酸杆菌阳性率及分布与健康者阴道内相似,但产H2O2乳酸杆菌减少;不同乳酸杆菌对念珠菌的生长抑制作用不同。     

白念珠菌粘附素的分离纯化及其在介导与宿主细胞粘附中的作用

目的　从分子水平探讨白念珠菌 (简称白念 )与宿主细胞的粘附机制。方法和结果　用非离子去垢剂辛基吡喃葡萄糖苷提取白念孢子壁蛋白质 ,然后制备纤连蛋白Sepharose 4B亲和柱 ,运用亲和层析技术从上述提取液中分离纯化纤连蛋白粘附素 ,在非还原状态进行十二烷基磺酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE) ,得到表观分子量 6 0 0 0 0和 10 5 0 0 0的二条蛋白带。为了弄清此蛋白在白念与宿主细胞粘附中的作用 ,把人颊粘膜上皮细胞与白念孢子共同振荡孵育 2小时 ,显微镜下测定上皮细胞表面粘附白念的数目 ,白念与上皮细胞的粘附百分率为 44 7± 6 2 8,上皮细胞经纤连蛋白粘附素预处理后 ,粘附百分率为 2 8 3± 6 18,P <0 0 1。结论　纤连蛋白粘附素介导了人颊粘膜上皮细胞与白念的粘附。