EGFR过表达对子宫内膜癌细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨表皮生长因子受体(EGFR)过表达对子宫内膜癌细胞上皮间质转化(EMT)的影响。方法:选取子宫内膜癌Ishikawa及KLE细胞株,利用脂质体将携带EGFR基因的质粒转染到Ishikawa细胞株建立EGFR过表达的Ishikawa细胞株,应用RT-PCR、Western blot检测上述3种细胞中EMT相关指标E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin的表达量。结果:低分化、高侵袭性的KLE细胞中EGFR呈高表达,且KLE细胞中上皮标志物E-cadherin和α-catenin的蛋白表达量均低于Ishikawa细胞(P<0.01),间质标志物N-cadherin和Vimentin的蛋白表达量则高于Ishikawa细胞(P<0.01),EGFR过表达处理后,Ishikawa细胞E-cadherin、α-catenin mRNA及蛋白表达量均显著降低(P<0.01),N-cadherin、Vimentin mRNA及蛋白表达量则显著升高(P<0.01)。结论:EGFR过表达引起子宫内膜癌细胞发生上皮间质转化。     

RANKL对人子宫内膜癌细胞上皮间质转化的影响

目的:探讨RANKL对人子宫内膜癌细胞转移和上皮间质转化的影响。方法:体外构建针对细胞核因子κB受体活化因子(RANK)的过表达质粒载体(p IRES2-3FLAG-EGFP-RANK),脂质体法转染人子宫内膜癌HEC-1A细胞株,形成HEC-1ARANK细胞(过表达质粒组),并与HEC-1A~Control细胞(空白质粒组)相对照。给予1μg/ml可溶性细胞因子sRANKL处理后,细胞划痕试验检测细胞迁移能力,CCK-8试验检测细胞的增殖能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot技术分别检测EMT相关指标E-cadherin、N-cadherin及Vimentin mRNA及蛋白的表达变化。结果:经1μg/ml sRANKL刺激后,HEC-1ARANK细胞迁移能力增强(P0.01),增殖效应没有明显改变(P0.05),上皮性标记物E-cadherin mRNA及蛋白的表达水平下降,间质性标记物N-cadherin、Vimentin mRNA及蛋白的表达水平显著上调(P0.01)。结论:RANKL可通过诱导HEC-1A细胞发生上皮间质转化促进子宫内膜癌的转移。     

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞上皮间质转化诱导作用的研究

目的:研究17β-雌二醇(17β-E2)对子宫内膜癌细胞发生上皮间质转化的诱导作用。方法:用17β-E2处理Ishikawa和HEC-1A细胞后,Western blot法检测两种细胞中E-cad、N-cad和Vimentin蛋白的表达。结果:经10-8mol/L E2作用后,Ishikawa细胞中的E-cad蛋白表达减少(P0.05),N-cad、Vimentin蛋白增加(P0.05);其他浓度作用前后,各蛋白表达无明显变化(P0.05)。经不同浓度E2作用后,HEC-1A细胞中E-cad、Ncad、Vimentin蛋白均无明显变化。结论:17β-E2仅在特定浓度下存在诱导ER阳性子宫内膜癌细胞Ishikawa发生上皮间质转化的作用。     

EGFR抑制剂AG1478对子宫内膜癌细胞上皮-间质转化的影响

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对子宫内膜癌细胞增殖和上皮-间质转化的影响。方法:蛋白印迹法检测子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白E-cadherin、α-catenin,间质标记蛋白N-cadherin、vimentin及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平。MTT法检测不同浓度AG1478对子宫内膜癌细胞的增殖抑制作用。蛋白印迹法检测AG1478对子宫内膜癌细胞E-cadherin、α-catenin,N-cadherin、vimentin及MMP-9、MMP-2蛋白表达水平的影响。体外迁移实验检测AG1478对子宫内膜癌细胞迁移能力的影响。结果:(1)EGFR过表达可下调子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白并上调间质标记蛋白及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平(P<0.05)。(2)AG1478对两种子宫内膜癌细胞均有增殖抑制作用,以经转染稳定过表达EGFR的Ishikawa细胞更为敏感(P<0.05)。(3)AG1478上调子宫内膜癌细胞上皮标记蛋白并下调间质标记蛋白及MMP-9、MMP-2蛋白的表达水平,以转染EGFR的Ishikawa细胞变化更为显著(P<0.05)。(4)AG1478可减弱子宫内膜癌细胞的迁移能力,以过表达EGFR的Ishikawa细胞更为明显(P<0.05)。结论:EGFR抑制剂AG1478可有效地抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮-间质转化。     

上皮-间质转化在子宫内膜异位症发病机制中的作用

子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是一种育龄期妇女常见的慢性炎症性、雌激素依赖性疾病,严重影响着广大女性的身心健康及生活质量。虽然目前已提出各种病因学说,但其起源仍不清楚。近年研究发现,上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)可能在EMs的发生发展中起重要作用。EMT是指上皮细胞失去极性和紧密连接,从而获得间质细胞的侵袭和运动能力的过程,这些改变也被认为是EMs病变最初建立的先决条件。然而,目前还没有确切的研究表明EMs中发生哪种类型的EMT。此外,缺氧和雌激素刺激信号可以通过不同的途径激活EMs中EMT过程,同时这些途径涉及许多细胞因子及信号转导通路,最终导致细胞增殖和迁移。本文对在EMs发生发展过程中参与的EMT类型、刺激信号、细胞因子及信号转导通路进行综述,以期为发现EMs临床诊疗提供新的思路。     

针对VEGF基因的小分子干扰RNA对子宫内膜癌细胞VEGF基因表达及增殖的影响

RNA干扰（RNA interference，RNAi）是新近发现的一种重要的转录后基因沉默现象，RNAi技术已成为基因功能研究中不可缺少的工具，为治疗病毒感染、肿瘤带来了新的希望。子宫内膜癌是一种严重影响妇女身心健康的恶性肿瘤。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是迄今鉴定出来的最重要的血管生成因子，其在恶性肿瘤的发生、发展及预后中具有极其重要的地位，[第一段]     

CircSLC6A6调节miR-125a-5p/PUM2轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响

目的:探讨环状溶质载体家族6成员6(CircSLC6A6)调节微小RNA分子miR-125a-5p/pumilio同源物2(PUM2)轴对子宫内膜癌细胞增殖、凋亡和上皮间质转化的影响。方法:以实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)实验检测体外培养的人子宫内膜上皮细胞与人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A、KLE、Ishikawa中CircSLC6A6、miR-125a-5p与PUM2的表达。将体外培养的人子宫内膜癌细胞HEC-1-A随机分为5组：对照组、CircSLC6A6敲低组(转染CircSLC6A6 siRNA质粒)、miR-125a-5p抑制组(转染miR-125a-5p抑制剂)、阴性对照组(转染空载质粒和miR-125a-5p抑制阴性对照)、共转染(转染CircSLC6A6 siRNA质粒+miR-125a-5p抑制剂)组。以CCK-8法及细胞克隆实验、Hoechst 33258染色及流式细胞实验、以划痕实验及Transwell实验检测各组HEC-1-A细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况；以qRT-PCR实验检测各组HEC-1-A细胞miRv125a-5p及PUM2 mRNA表达...     

上皮-间质转化在子宫腺肌病中作用的研究进展

子宫腺肌病(ADS)是子宫内膜腺体及间质侵入子宫肌层导致的以子宫局灶或弥漫性增大为主要改变的良性疾病,其具体发病机制尚不清楚。目前多数研究者认为ADS是基底层内膜细胞增生、侵入到肌层间质的结果。在上皮-间质转化(EMT)过程中,上皮细胞失去细胞极性,细胞间紧密连接和黏附连接减弱,获得了浸润性和游走迁移能力,成为具有间质细胞功能和特性的细胞。EMT在肿瘤形成中赋予细胞迁移、浸润的能力,而ADS发生、发展过程中子宫内膜细胞侵入肌层的生物学行为与之非常相似。已有研究表明EMT在ADS形成中具有重要作用。目前ADS的临床治疗面临较多的挑战,因此阐明ADS的发生机制是寻求临床早期预防、治疗ADS有效方法的关键。     

上皮间质转化在子宫内膜异位症发病机制中的研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是一种良性病变,却具有恶性肿瘤的侵袭转移潜质。近年研究表明,上皮间质转化(EMT)在肿瘤的侵袭转移过程中发挥着重要的作用,但其在EMs形成过程中是否起着同样的作用,尚不清楚。本文现就EMT在EMs发病机制中的研究进展做一综述。     

Bcl—2基因及其在子宫内膜增生和子宫内膜癌中的表达

Ｂｃｌ－２基因的主要生物学功能为延长期细胞寿命并增加细胞对多种凋亡刺激因素的抗性,Ｂｃｌ－２基因在正常子宫内膜中的表达随月经周期发生变化,而且与雌,孕激素受体变化有关,与卵巢激素间存在着直接或间接的关系,因此,Ｂｃｌ－２基因可能通过凋亡机制调节月经周期中子宫内膜转变和子宫出血,Ｂｃｌ－２基因在子宫内膜增生（无不典型增生）中的表达较强,而在子宫内膜不典型增生中的表达下降,在子宫内膜癌中的表达可能与其     

下调microRNA-205表达对人子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖和侵袭的作用

目的:探讨下调microRNA-205(miR-205)表达对人子宫内膜样腺癌细胞系Ishika-wa增殖和侵袭的作用及可能的机制。方法:将miR-205抑制剂(miR-205 inhibitor)瞬时转染Ishikawa细胞,下调miR-205的表达;应用实时荧光定量PCR方法(qRT-PCR)检测miR-205的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力。qRT-PCR和Western blot分别检测miR-205的预测靶基因ESRRG mRNA和蛋白表达水平。应用双荧光素酶分析方法鉴定miR-205和ESRRG 3'UTR的表达调节关系。结果:miR-205在Ishikawa细胞中呈高表达;转染miR-205 inhibitor的Ishikawa细胞中,miR-205表达降低了86.9%,细胞增殖和侵袭能力下降,同时细胞ESRRG mRNA和蛋白表达升高;miR-205通过直接与ESRRG mR-NA 3'UTR结合负调节其表达。结论:下调miR-205表达可抑制Ishikawa细胞增殖、侵袭能力;miR-205的生物效应可能与调节潜在抑癌基因ESRRG有关。     

子宫内膜癌bcl-2癌基因的持续性表达及其临床意义

目的：研究子宫内膜癌ｂｃｌ－２癌基因的表达及其临床意义。方法：采用免疫组化ＡＢＣ法检测增生期、分泌期、单纯型增生、复合型增生及不典型增生子宫内膜共２６份，子宫内膜癌４９例的ｂｃｌ－２癌基因蛋白表达及雌、孕激素受体（ＥＲ、ＰＲ）的表达。结果：正常增生期子宫内膜、增生的子宫内膜存在ｂｃｌ－２的表达，与ＥＲ相关，分泌期子宫内膜ｂｃｌ－２表达下降；４９例子宫内膜癌中２６例ｂｃｌ－２表达阳性，占５３％，２９例ＥＲ表达阳性，占５９％，２５例ＰＲ表达阳性，占５１％。７２％ｂｃｌ－２表达阳性者ＥＲ阳性，７５％ｂｃｌ－２表达阴性者ＥＲ阴性（Ｐ＜０．０１）。６８％ｂｃｌ－２表达阳性者ＰＲ阳性，６２％ｂｃｌ－２阴性者ＰＲ阴性（Ｐ＜０．０５）。子宫内膜癌Ｇ１、Ｇ２级ｂｃｌ－２的表达率为６６％，显著高于Ｇ３级者（２１％）（Ｐ＜０．０５）。ｂｃｌ－２的表达与肌层浸润、手术分期无关，ｂｃｌ－２表达阳性及阴性者生存率统计差异无显著性。结论：子宫内膜ｂｃｌ－２的持续性表达与卵巢激素相互作用可能在子宫内膜癌发生、发展中起作用     

LncRNA TUG1 promotes the migration and invasion in type I endometrial carcinoma cells by regulating E–N cadherin switch

ObjectiveAccumulating evidence has demonstrated that lncRNA Taurine-upregulated gene 1 (TUG1) plays an important role in regulation of cell morphology, migration, proliferation and apoptosis. Our aim was to evaluate the oncogenic role of TUG1 in type I Endometrial Carcinoma (EC) and explore the precise mechanism of TUG1 involved in tumor progression.Materials and methodsThe GSE17025 data set was used to analyze the correlation of TUG1 expression with type I EC patients’ prognosis. Furthermore, TUG1 expression profiles were measured by qRT-PCR from carcinoma tissues and adjacent nonneoplastic tissues (NNT) of 105 type I EC patients. The regulation of epithelial–mesenchymal transition (EMT) related molecules, p-AKT and AKT by TUG1 knockdown was investigated using Western blot analysis; meanwhile, the oncogenic roles of TUG1 were evaluated using cell viability and transwell migration/invasion assay in Hec-1-A and Ishikawa cell lines.ResultsFirstly, we observed a significant association between higher TUG1 expression and lower survival rate in type I EC patients using the GSE17025 data set. A significant elevation of TUG1 levels was confirmed in type I EC tissues compared with NNT in the 105 type I EC patients, and high expression of TUG1 was associated with lymph vascular space invasion (LVSI) and lymph node metastasis (LNM). Subsequently, TUG1 knockdown could remarkably inhibit the Hec-1-A and Ishikawa cell invasion and migration in the functional experiment. Furthermore, our results showed that the protein levels of E-cadherin increased and N-cadherin decreased significantly, while β-catenin and Vimentin were not significantly altered upon TUG1 silencing in both Hec-1-A and Ishikawa cells. Finally, we found the p-AKT and AKT protein levels, and the rate of p-AKT/t-AKT has a tendency to be down-regulate in Hec-1-A cells, while the AKT pathway was not change significantly in Ishikawa cells after TUG1 knockdown.ConclusionCollectively, our data reveal that TUG1 might be regarded as an oncogenic molecule that promotes type I EC cells metastasis leading to tumor progression, at least partially, by regulating E–N cadherin switch and the AKT pathway.     

子宫内膜癌细胞中孕激素受体的多因素调节

目的　通过体外实验研究雌激素、孕激素、胰岛素 /胰岛素样生长因子Ⅰ (Insulin -likegrowthfactorⅠ ,IGF -Ⅰ )对内膜癌细胞中孕激素受体 (Progesteronereceptor,PR )亚型表达的调节 ,探讨内膜癌细胞中PR亚型表达的意义。方法　体外培养高分化子宫内膜癌细胞Ishikawa ,按实验目的分别加入雌激素、孕激素、雌激素孕激素联合、胰岛素及IGF -Ⅰ刺激 2 4h、 4 8h后 ,采用Westernblot方法测定各个条件下内膜癌细胞中两种孕激素受体亚型的表达。结果　内膜癌细胞Ishikawa在自然状态下 ,PR -A和PR -B均阳性表达 ;细胞经血清限制后 ,总PR及两种亚型都明显下调。雌激素可以上调细胞中PR -A和PR -B表达水平 ,但在高血清时明显。孕激素单独或雌、孕激素联合应用在 4 8h时都可以降低Ishikawa细胞中PR表达。胰岛素 /IGF -Ⅰ在 2 4h时可以上调PR -B水平 ,4 8h时此上调作用消失。结论　①雌激素对PR的上调作用与血清浓度有关 ,血清中可能含有雌激素作用所需要的某些因子 ;②孕激素对内膜癌细胞Ishikawa中PR有下调作用 ;③胰岛素 /IGF -Ⅰ可以上调内膜癌细胞中PR表达 ,主要是PR -B表达 ,但此作用持续时间短     

Impact of laparoscopy on the biological behavior and gene expression of endometrial adenocarcinoma cells

The current study investigated the effect of laparoscopy on the biological behavior and gene expression of endometrial adenocarcinoma cells. Totally, 40 patients with stage I endometrial adenocarcinoma and 20 patients with benign uterine diseases were enrolled in this study. For patients with endometrial adenocarcinoma, laparoscopy was performed in 20 cases and laparotomy was carried out in the other 20 cases. Total laparoscopic hysterectomy was performed in patients with benign diseases. Cell apoptotic rate and the gene expression of N-myc, Fas, metastasis-associated protein 1 (MTA1), and nm23-H1 were determined in the normal and cancerous endometrial tissues both preoperatively and postoperatively. For endometrial adenocarcinoma cells, laparoscopy, instead of laparotomy, promoted the apoptosis of endometrial adenocarcinoma cells, down-regulated the expression of apoptosis suppressor gene N-myc and metastasis-promoting gene MTA1, up-regulated the expression of apoptosis-promoting gene Fas and metastasis suppressor gene nm23-H1. However, laparoscopy did not affect the apoptotic rate and gene expression in normal endometrial cells. Laparoscopy may be used as a safe and effective intervention for endometrial cancer.