HPLC指纹图谱和多成分定量结合化学模式识别法评价黔钩藤质量

目的 基于HPLC指纹图谱、多成分定量结合化学模式识别法评价黔钩藤质量。方法 从贵州中药材市场随机购买了18批钩藤饮片,采用HPLC法建立了18批钩藤饮片的指纹图谱;通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012年版）进行相似度评价,对其中5种生物碱进行了指认,并采用外标法和一测多评法进行了含量测定;采用SPSS 26.0统计软件进行聚类分析和主成分分析。结果 在钩藤饮片指纹图谱中,确定了共有峰28个,采用对照品指认了5个生物碱成分,分别为异去氢钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、钩藤碱和去氢毛钩藤碱,18批钩藤的相似度评价表明市场上钩藤的质量差异较大;聚类分析将18批钩藤饮片样品聚为3大类;主成分分析用5个主成分进行综合评价,其中8批钩藤饮片的综合得分大于1;采用一测多评法和外标法计算18批钩藤饮片中5种生物碱的含量,经GraphPad差异性分析表明,2种方法无显著性差异。结论 市场上钩藤质量差异较大,建立了检测5个生物碱成分的一测多评法和外标法,为完善钩藤质量评价提供参考。     

一测多评法同时测定钩藤中4种生物碱的含量

目的建立一测多评法测定钩藤中4种生物碱的含量。方法采用Gemini-NX C_(18)色谱柱(250cm×4.6 mm,5μm),以1%乙酸铵(A)-乙腈(B)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min~(-1),检测波长245 nm,柱温25℃,进样量10μL。结果以异钩藤碱为对照品,钩藤碱、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱分别用校正因子进行含量测定,并进行了方法学验证。一测多评法计算值与外标法实测值间无明显差异(RSD <1%)。结论所建立的一测多评法简便快捷,准确度高,适合钩藤中生物碱的含量测定。     

一测多评法测定天然辣椒碱中2种主要成分

目的建立以1种对照品同时测定天然辣椒碱中2种成分的质量评价方法。方法以辣椒辣素为对照,采用一测多评法,同时测定辣椒辣素和二氢辣椒辣素的含量。结果测得辣椒辣素与二氢辣椒辣素的相对校正因子为1.12,同时采用外标法和一测多评法测定样品中二氢辣椒辣素含量,采用t检验对二者测定值进行比较,二者之间无显著差异(P>0.05);以辣椒辣素的保留时间为1.00,计算得二氢辣椒辣素的相对保留时间为1.355,相对保留时间及保留时间差的RSD均小于5%。结论采用一测多评法,以辣椒辣素为对照,利用相对校正因子可实现同时测定辣椒辣素和二氢辣椒辣素的含量。     

一测多评法测定黄连须中的5种生物碱

目的 采用一测多评法同时测定黄连须中5种生物碱(盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱和盐酸巴马汀)的含量.方法 以盐酸小檗碱为内参物,采用HPLC法测定其与盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀的相对校正因子,利用该相对校正因子计算其他4种生物碱的含量;同时利用外标法测定5种生物碱的含量,比较两种测定方法的差异,验证一测多评法的可行性和准确性.结果 在线性范围内,盐酸小檗碱与盐酸药根碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀的相对校正因子分别为1.128、1.008、1.070、1.025,在不同实验条件下,相对校正因子的重复性良好,5种生物碱成分含量的计算值与实测值间无显著性差异.结论 一测多评法同时测定黄连须中5种生物碱的含量是可行的、准确的.     

一测多评法测定乌头类药材中生物碱

目的 建立一测多评法同时定量测定乌头类药材中6种乌头类生物碱.方法 采用高效液相色谱法同时测定乌头类药材中6种生物碱,以乌头碱为内参物,测定其与次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱的相对校正因子,利用乌头碱和相对校正因子对其他5种生物碱成分进行测定,同时利用外标法测定这6种成分,比较两种测定方法的差异,验证一测多评法的可行性和准确性.结果 在一定线性范围内,乌头碱与次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱和苯甲酰新乌头原碱的相对校正因子分别为0.780、1.008、0.836、0.907、0.987,在不同实验条件下相对校正因子重现性良好,不同乌头类药材中6种生物碱成分含量计算值与实测值间无显著性差异.结论 一测多评法在乌头类药材及制剂质量控制中应用是可行的、准确的.     

一测多评法同时测定制川乌中9种生物碱的含量

目的:建立一测多评法同时测定制川乌中9种乌头类生物碱含量.方法:采用高效液相色谱四级杆飞行时间串联质谱(HPLC-QTOF-MS)法.色谱柱为Agilent ZORBAX Extend-C18 RRHT(2.1 mm×50 mm,1.8μm);甲醇为流动相A,以水(含0.1%甲酸和2.5 mmol·L-1醋酸铵溶液)为流动相B,梯度洗脱;流速为0.21 mL·min-1;柱温为30℃.以乌头碱为内参物,测定次乌头碱、新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头原碱、次乌头原碱、新乌头原碱对于其的相对校正因子,并对相对校正因子进行重现性考察.利用相对校正因子计算其它8种生物碱成分的含量,同时利用外标法测定这9种成分,比较两种测定方法的差异,验证一测多评法的准确性和可行性.结果:建立QAMS法测定乌头类中药材9种生物碱的含量,其测定值与计算值无显著差异.结论:经方法学验证,本方法可用于制川乌药材中9种生物碱的含量测定.     

一测多评法测定华佗豆4种生物碱

目的 建立一测多评法检测华佗豆药材中4种生物碱的量。方法 以华佗豆碱乙为内标,建立华佗豆碱甲、碱丙、碱丁的相对校正因子,在考察相对校正因子的重现性后,进一步采用外标法与一测多评法所计算出的成分含量进行比较。结果 6批华佗豆药材中,各成分采用相对因子计算的量与采用外标法计算的结果无显著差异。结论 一测多评法操作简单、结果准确、可靠,可用于华佗豆4种生物碱的测定。     

一测多评法同步测定钩藤饮片中3种黄烷类成分的含量

目的 将一测多评分析方法应用于钩藤中黄烷类成分的含量测定,为钩藤饮片多指标质量评价奠定基础.方法 建立饮片中儿茶素与表儿茶素及原花青素B2的相对校正因子,通过对一测多评的计算值与外标法实测值进行比较,评价一测多评法对3种黄烷类成分含量测定的准确性和科学性.结果 在一定的线性范围内,常规的外标法对表儿茶素及原花青素B2的...     

一测多评法同时测定桔梗中3种桔梗皂苷的含量

目的 探索一测多评法应用于同时测定桔梗中3种桔梗皂苷含量的可行性。方法 采用HPLC-ELSD为检测手段,考察桔梗提取物在不同色谱系统和不同色谱柱上的色谱行为,确定3种待测成分的色谱峰定位方法。以桔梗皂苷D为内标,建立其与桔梗皂苷D₃、桔梗皂苷E的相对校正因子;通过外标法测定桔梗皂苷D的含量,并由建立的相对校正因子计算出其他2种桔梗皂苷的含量;将计算的结果与外标法测定结果相比较,以验证“一测多评”法在桔梗质量评价中的可行性。结果 方法重现性和耐用性良好,用于10批桔梗药材的含量测定,计算结果与外标法测定结果无显著差异。结论 一测多评法可用于同时测定桔梗中多种皂苷的含量。     

一测多评法同时测定祛痰止咳颗粒中7种成分的含量

建立同时测定祛痰止咳颗粒中芹菜素-7-葡萄糖醛酸、槲皮苷、芫根苷、木犀草素、芹菜素、羟基芫花素、芫花素7种成分含量的一测多评法。采用Agilent EC-C18 (150 mm×4.6 mm, 4μm)色谱柱,以甲醇-0.15%磷酸(梯度洗脱)为流动相,检测波长为338 nm,以芹菜素为内参物,分别建立6种成分的相对校正因子,并采用两点校正法结合相对保留时间法对各成分进行色谱峰定位。分别按一测多评法和外标法检测7种成分的含量,并进行比较。上述6种成分的相对校正因子分别为芹菜素-7-葡萄糖醛酸1.762 8、槲皮苷2.310 4、芫根苷1.898 4、木犀草素1.282 8、羟基芫花素1.191 3、芫花素1.066 9,在不同色谱条件下其相对校正因子的RSD均小于3%。采用两点校正法结合相对保留时间法能准确定位各成分色谱峰,预测保留时间与实际保留时间非常接近。10批样品一测多评计算结果与外标法测定结果之间的相对误差在-5%～5%。一测多评法操作简便,经济实用,结果准确,可应用于祛痰止咳颗粒中7个成分的含量测定。     

一测多评法测定不同丹参制剂中4个酚酸成分

目的 建立同时适用于5种丹参制剂（丹参片、复方丹参片、冠心丹参胶囊、心可舒片、双丹胶囊）中4个酚酸类成分一测多评的含量测定方法。方法 采用高效液相色谱法,以丹参素为内参物,建立原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B与丹参素的相对校正因子,比较相对保留值法和保留时间差法对成分定位的影响,并采用外标法验证结果的可靠性。结果 采用相对保留值法可对待测成分进行准确定位,所建立的相对校正因子耐用性良好,原儿茶醛、迷迭香酸、丹酚酸B相对于丹参素的相对保留值分别为1.894、5.379、6.599,相对校正因子分别为6.611、3.845、2.059,采用外标法验证结果无显著性差异。结论 该方法稳定、可靠,可为上述丹参制剂质量控制提供参考。     

Immunomodulating and antiviral activities of Uncaria tomentosa on human monocytes infected with Dengue Virus-2

Uncaria tomentosa (Willd.) DC., a large woody vine native to the Amazon and Central American rainforests has been used medicinally by indigenous peoples since ancient times and has scientifically proven immunomodulating, anti-inflammatory, cytotoxic and antioxidant activities. Several inflammatory mediators that are implicated in vascular permeability and shock are produced after Dengue Virus (DENV) infection by monocytes, the primary targets for virus replication. Here we assessed the immunoregulatory and antiviral activities from U. tomentosa-derived samples, which were tested in an in vitro DENV infection model. DENV-2 infected human monocytes were incubated with U. tomentosa hydro-alcoholic extract or either its pentacyclic oxindole alkaloid-enriched or non-alkaloid fractions. The antiviral activity was determined by viral antigen (DENV-Ag) detection in monocytes by flow cytometry. Our results demonstrated an in vitro inhibitory activity by both extract and alkaloidal fraction, reducing DENV-Ag+ cell rates in treated monocytes. A multiple microbead immunoassay was applied for cytokine determination (TNF-alpha, IFN-alpha, IL-6 and IL-10) in infected monocyte culture supernatants. The alkaloidal fraction induced a strong immunomodulation: TNF-alpha and IFN-alpha levels were significantly decreased and there was a tendency towards IL-10 modulation. We conclude that the alkaloidal fraction was the most effective in reducing monocyte infection rates and cytokine levels. The antiviral and immunomodulating in vitro effects from U. tomentosa pentacyclic oxindole alkaloids displayed novel properties regarding therapeutic procedures in Dengue Fever and might be further investigated as a promising candidate for clinical application.     

Involvement of 5-HT2 receptors in the antinociceptive effect of Uncaria tomentosa

Uncaria tomentosa (Willd.) DC (Rubiaceae) is a vine that grows in the Amazon rainforest. Its bark decoctions are used by Peruvian Indians to treat several diseases. Chemically, it consists mainly of oxindole alkaloids. An industrial fraction of U. tomentosa (UT fraction), containing 95% oxindole alkaloids, was used in this study in order to characterize its antinociceptive activity in chemical (acetic acid-induced abdominal writhing, formalin and capsaicin tests) and thermal (tail-flick and hot-plate tests) models of nociception in mice. UT fraction given by the i.p. route dose-dependently suppressed the behavioural response to the chemical stimuli in the models indicated and increased latencies in the thermal stimuli models. The antinociception caused by UT fraction in the formalin test was significantly attenuated by i.p. treatment of mice with ketanserin (5-HT2 receptor antagonist), but was not affected by naltrexone (opioid receptor antagonist), atropine (a nonselective muscarinic antagonist), l-arginine (precursor of nitric oxide), prazosin (alpha1-adrenoceptor antagonist), yohimbine (alpha2-adrenoceptor antagonist), and reserpine (a monoamine depleter). Together, these results indicate that UT fraction produces dose-related antinociception in several models of chemical and thermal pain through mechanisms that involve an interaction with 5-HT2 receptors.     

QAMS法测定消炎利胆片中穿心莲内酯类成分

目的：建立消炎利胆片中穿心莲内酯（AG）与脱水穿心莲内酯（DAG）的一测多评测定法(QAMS)。方法：用高效液相色谱(HPLC)法,测定DAG对AG的相对校正因子,测定5批消炎利胆片中2种成分的含量,比较计算值与测得值的差异。结果：5批样品中,一测多评法测定结果与外标法实测值基本一致。结论：所建立的一测多评法可靠,测定结果准确,可节约对照品,适用于消炎利胆片中AG与DAG的含量测定。     

一测多评法测定银杏叶胶囊中总黄酮醇苷的含量

目的:建立以一测多评法测定银杏叶胶囊中总黄酮醇苷含量的方法,并验证该方法在银杏叶胶囊中应用的准确性和科学性。方法:以槲皮素为指标,采用高效液相色谱法建立山柰素、异鼠李素与槲皮素之间的相对校正因子,并用该校正因子进行山柰素和异鼠李素的含量计算;分别采用外标法和一测多评法测定银杏叶胶囊中3种黄酮醇苷类成分的含量,并将一测多评法的计算值与外标法实测值进行比较。结果:12批药品一测多评法的计算结果与外标法的实测值之间没有显著性差异,试验所得的相对校正因子可信赖。结论:一测多评法可作为一种新的质量评价方法用于银杏叶胶囊中总黄酮醇苷的含量测定。     

Improved method for the determination of oxindole alkaloids in Uncaria tomentosa by high performance liquid chromatography

This Paper describes an improved HPLC method for the determination of pentacyclic oxindole alkaloids in Uncaria tomentosa (Cat's Claw). Six of the isomeric compounds could be baseline separated at room temperature within less than 30 min by using 3 microm C-18 column material and a mobile phase consisting of 10 mM phosphate buffer at pH 7.0 and acetonitrile. At a wavelength of 245 nm all standard compounds could be detected at concentrations as low as 0.63 microg/ml. Different samples of U. tomentosa bark and market products containing Cat's Claw were extracted with a modified procedure ensuring the integrity of the alkaloids and analyzed successfully. The results indicated accuracy and consistency of the new method, and showed variations in the total alkaloid content in products from 0.156 to 0.962%.