二甲双胍通过下调IL-6抑制卵巢癌肿瘤相关成纤维细胞活性的研究

目的:探讨二甲双胍对卵巢癌肿瘤相关成纤维细胞(CAF)活性的影响,以及可能的调控机制。方法:RT-PCR法检测二甲双胍作用于SKOV3细胞系及原代CAF后炎症因子(IL-6、OPN、IL-1b、COX-2、Cyr61)mRNA水平变化;将MRC5于SKOV3-CM(condition medium)培养7~10天得到活化的MRC5即MRC5-CAF,原代CAF及MRC5-CAF经免疫荧光鉴定α-SMA表达;Western blot检测上述炎症因子蛋白水平。在TCGA数据库557例卵巢癌中验证炎症因子与CAF属性相关基因的相关性。免疫荧光验证活化的MRC5中二甲双胍对α-SMA及IL-6表达的影响。在MRC5-CAF细胞系中进一步验证了二甲双胍或IL-6对CAF属性相关基因的影响。增殖实验和Transwell实验比较二甲双胍或IL-6对MRC5-CAF促进SKOV3增殖及迁移能力的影响。胶原回缩试验比较二甲双胍或IL-6对MRC5-CAF收缩细胞外基质ECM的影响。结果:二甲双胍下调CAF中炎症因子尤其是IL-6,同时下调CAF中α-SMA水平。TCGA数据库中IL-6 mRna与CAF属性相关基因(FAP、PDGFRB、FN1、COLL6A6)呈显著正相关(P0.0001);二甲双胍、IL-6共刺激组较IL-6组,STAT3通路和α-SMA下调;二甲双胍能逆转IL-6对卵巢癌CAF促肿瘤增殖转移及收缩胶原的能力。结论:卵巢癌中IL-6可能参与维持了间质CAF细胞活性和间质属性,二甲双胍可能通过下调CAF中IL-6/P-STAT3通路从而抑制卵巢癌CAF对肿瘤细胞的支持作用。     

siRNA阻断PRKCι表达对人卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵袭的影响

目的:探讨PRKCι在卵巢癌迁移和侵袭中的作用。方法:生物信息学分析PRKCι在卵巢癌中的表达,Real-time PCR和Western blot法检测卵巢癌细胞株中PRKCι的表达情况,设计针对PRKCι的siRNA并转染SKOV3卵巢癌细胞,观察转染后SKOV3细胞中PRKCι基因表达情况,以及SKOV3细胞的迁移、侵袭能力的变化,并检测PRKCι基因敲减后其下游转移相关效应分子MMP10的表达。结果:PRKCι在卵巢癌芯片(TCGA和GDS3592)中的表达与正常卵巢组织比较,表达差异>2倍(P<0.0001和P=0.0078)。与HOSE细胞相比,ES2、CAOV3、OVCAR3、SKOV3、A2780卵巢癌细胞株中存在PRKCιmRNA和蛋白水平的高表达,其中SKOV3细胞中PRKCι表达水平最高。PRKCι特异性的siRNA-1和siRNA-2均能有效抑制SKOV3细胞中PRKCιmRNA和蛋白表达,mRNA水平抑制效率分别为(80.5±10.23)%、(74.6±12.48)%(P<0.01),在蛋白水平抑制效率分别为(71.37±11.34)%、(68.22±12.19)%(P<0.05)。细胞划痕实验显示,PRKCιsiRNA明显降低了SKOV3细胞的迁移能力,抑制效率分别为(54.31±12.87)%、(45.25±14.02)%(P<0.05);Transwell实验显示,PRKCιsiRNA明显降低了SKOV3细胞的侵袭能力,分别降低了57.48%和38.38%(P<0.05);PRKCιsiRNA明显抑制了转移相关效应分子MMP10在mRNA和蛋白水平表达,mRNA水平分别下调(56.76±13.83)%、(52.99±14.38)%(P<0.05),蛋白水平分别下调(35.65±9.10)%、(37.14±14.26)%(P<0.05)。结论:PRKCι在卵巢癌中高表达,是参与卵巢癌转移的重要基因,可能作为抑制卵巢癌转移的新的靶向分子。     

三氧化二砷对人卵巢癌SKOV3细胞侵袭转移能力的影响

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人卵巢癌细胞系SKOV3细胞侵袭转移能力及其对尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)及尿激酶受体(uPAR)表达的影响。方法:采用0.5μmol/L、1μmol/L、2μmol/L 3种浓度的As2O3处理人卵巢癌SKOV3细胞,48h后收集细胞,采用Transwell检测细胞的侵袭转移能力,实时定量PCR及免疫细胞化学方法检测uPA、uPAR mRNA及蛋白表达的变化。结果:经不同浓度As2O3处理的细胞,穿过模拟基底膜的数目逐步减少,As2O3明显抑制SKOV3细胞的侵袭转移能力(P<0.05);细胞uPA及uPARmRNA及蛋白表达水平与对照组相比显著降低(P<0.05),其表达水平随着药物浓度的增加而降低。结论:As2O3可抑制卵巢癌细胞的侵袭转移能力,其机制可能与抑制uPA、uPAR的表达有关。     

MTA1基因表达与子宫颈癌细胞侵袭转移的关系

目的：探讨MTA1基因表达与宫颈癌细胞侵袭转移的关系。方法将真核细胞表达载体pcDNA3质粒、MTA1基因表达载体pcDNA3-MTA1质粒、MTA1基因RNA干扰载体pSilencer3.1-MTA1-siRNA质粒稳定转染宫颈癌细胞株CaSki细胞（分别命名为对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组）,逆转录(RT) -PCR技术和蛋白印迹法检测CaSki细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及平板集落形成实验检测CaSki细胞的增殖情况,划痕实验、穿膜实验检测CaSki细胞的迁移能力,基质黏附实验检测CaSki细胞的黏附能力,细胞侵袭实验检测CaSki细胞的侵袭能力,流式细胞仪检测CaSki细胞的细胞周期比例。将3组CaSki细胞接种于裸鼠腋下,观察其在裸鼠体内的生长情况。结果 MTA1组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显高于对照组,而MTA1 -siRNA组细胞中MTA1 mRNA和蛋白的表达强度均明显低于对照组。MTT比色法检测显示,与对照组比较,自第2天起,MTA1组细胞的生长速度加快,而MTA1-siRNA组细胞的生长速度减慢,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);平板集落形成实验显示,对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组的克隆数分别为( 133±6)、(169±10)和(57±5)个,MTA1组明显多于对照组（P＜0.05）,而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。划痕实验显示,MTA1组细胞的迁移能力明显增强,而MTA1 -siRNA组细胞的迁移能力明显减弱;穿膜实验显示,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组穿膜细胞数分别为( 153±17)、( 247±38)和(82±10)个,MTA1组明显多于对照组(P＜0.05),而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。基质黏附实验显示,孵育90 min时,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的黏附率分别为(69.3±3.6)％、(80.4±5.6)％、(39.2±7.4)％,MTA1组明显高于对照组(P＜0.05),而MTA1 -siRNA组明显低于对照组（P＜0.05）。细胞侵袭实验显示,对照组、MTA1组、MTA1 -siRNA组穿膜细胞数分别为(231±19)、(354±36)和(76±7)个,MTA1组明显多于对照组(P＜0.05),而MTA1-siRNA组明显少于对照组(P＜0.05)。流式细胞仪检测显示,对照组、MTA1组、MTA1-siRNA组细胞的G1、S、G2期细胞比例分别比较,差异均无统计学意义(P＞0.05)。裸鼠接种CaSki细胞30d后,对照组、MTA1组、MTA 1-siRNA组裸鼠肿瘤体积分别为(519 ±236)、(2245±780)、(111±65) mm3,肿瘤质量分别为(0.41 ±0.19)、(2.10±0.39)、(0.11±0.08)g,MTA1组均明显高于对照组(P＜0.05),而MTA1 -siRNA组均明显低于对照组(P＜0.05)。结论MTA1基因促进宫颈癌细胞的侵袭转移,沉默MTA1基因表达能使宫颈癌细胞生长减慢,细胞侵袭及转移能力下降,从而逆转宫颈癌细胞的恶性表型,为进一步研究MTA1基因的作用机制以及应用RNA干扰技术进行以MTA1基因为靶点的治疗打下了一定的基础。     

MicroRNA-126对卵巢癌细胞SKOV3迁移和侵袭能力的影响

目的:探讨microRNA-126(miR-126)对卵巢癌细胞株SKOV3迁移和侵袭能力的影响,及其对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)体外血管形成能力的影响。方法:利用脂质体瞬时转染miR-126 mimics、mimics NC于SKOV3细胞。Real-time PCR法检测卵巢癌组织及转染前后SKOV3细胞中miR-126的表达,Tanswell小室检测SKOV3细胞的迁移和侵袭情况。分离培养原代HUVECs,利用三维小管形成实验检测HUVECs体外血管形成情况。结果:卵巢癌组织中miR-126的相对表达量(0.29±0.38)显著低于正常卵巢上皮组织(1.18±0.47)(P<0.01)。miR-126 mimics组SKOV3细胞的miR-126相对表达量(5.15±1.00)显著高于未处理组(1.07±0.27)、NC组(0.99±0.20)。转染后,SKOV3细胞的迁移和侵袭能力均显著降低,但HUVECs三维成管数无显著变化。结论:miR-126表达上调能抑制卵巢癌细胞SKOV3的体外迁移和侵袭能力,miR-126低表达可能与卵巢癌的疾病进展有关。     

PRMT5对卵巢癌细胞增殖及侵袭转移能力的影响

目的:研究精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)对卵巢癌A2780及SKOV3细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨其可能机制。方法:设计并体外合成靶向PRMT5的siRNA序列(si P)及阴性对照序列(si C),分别转染卵巢癌细胞A2780、SKOV3。Brd U掺入实验检测细胞增殖能力;Transwell小室技术检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot法检测PRMT5降调后E-cadherin蛋白表达变化。结果:转染si P后,卵巢癌细胞中PRMT5表达明显降低。A2780细胞中,si P组的Brd U阳性率明显低于si C组[(11.7±1.5)%vs(33.3±1.5)%,P0.001];SKOV3细胞中,si P组的Brd U阳性率明显低于si C组[(18.0±2.0)%vs(35.3±1.5)%,P0.001]。A2780和SKOV3细胞中,si P组的迁移和侵袭细胞数均显著少于si C组和N组,差异均有统计学意义(P0.001)。Western blot法显示,转染后72h,si P组中E-cadherin蛋白表达明显上调。结论:PRMT5参与了卵巢癌细胞的生长增殖和迁移侵袭的过程,干扰其表达能显著减慢细胞的增殖,减弱其迁移和侵袭能力。PRMT5可能通过调控E-cadherin表达参与卵巢癌细胞的迁移和侵袭过程。     

NDRG2对卵巢癌迁移和侵袭能力的影响3

目的:研究N-myc下游调节基因2(NDRG2)对卵巢癌迁移和侵袭能力的影响。方法:首先应用qRT-PCR实验检测NDRG2在正常卵巢组织和卵巢癌组织中的表达水平。再应用划痕实验和transwell小室实验检测NDRG2对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响。最后检测NDRG2对SKOV3细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的影响。结果:在卵巢癌组织中NDRG2的表达水平明显低于正常卵巢组织。NDRG2的表达水平可以影响卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,NDRG2减少MMP-2和MMP-9的表达水平。结论:NDRG2在卵巢癌中作为一个抑癌基因可以影响癌症的侵袭和转移。     

NDRG2对卵巢癌迁移和侵袭能力的影响

目的:研究N-myc下游调节基因2(NDRG2)对卵巢癌迁移和侵袭能力的影响。方法:首先应用qRT-PCR实验检测NDRG2在正常卵巢组织和卵巢癌组织中的表达水平。再应用划痕实验和transwell小室实验检测NDRG2对卵巢癌细胞侵袭和迁移能力的影响。最后检测NDRG2对SKOV3细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的影响。结果:在卵巢癌组织中NDRG2的表达水平明显低于正常卵巢组织。NDRG2的表达水平可以影响卵巢癌细胞的侵袭和迁移能力,NDRG2减少MMP-2和MMP-9的表达水平。结论:NDRG2在卵巢癌中作为一个抑癌基因可以影响癌症的侵袭和转移。     

间皮素对卵巢上皮性癌细胞生长、粘附和侵袭能力的影响

目的:探讨环境间皮素对卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞增殖能力及侵袭粘附能力的影响。方法:用含不同浓度间皮素蛋白的1640培养基培养卵巢癌SKOV3和OVCAR3细胞,培养至12,24,36,48h,利用MTT和平板克隆形成实验测定其增殖情况;粘附试验测定细胞粘附能力、Transwell小室体外细胞转移侵袭装置测定SKOV3和OVCAR3的迁移、侵袭能力的改变。结果:间皮素可增强细胞的生长增殖能力,影响卵巢癌细胞的体外粘附、迁移和侵袭能力,间皮素干预组的细胞粘附率、迁移率和侵袭率高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:间皮素增强卵巢癌细胞的生长增殖能力及粘附、迁移和侵袭能力。     

卵巢上皮性癌细胞中E钙黏素基因的甲基化状态及去甲基化的意义

目的 研究卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中E钙黏素(E-cad)基因启动子区5'二核苷酸胞嘧啶(5'CpG)岛的甲基化状态,观察DNA甲基转移酶抑制剂--5-杂氮脱氧胞苷(5-Aza-CdR)去甲基化后对卵巢癌细胞的生长、侵袭以及E-cad蛋白表达的影响.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测卵巢癌细胞系ES-2、3AO及SKOV3细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛的甲基化状态.以不同浓度(分别为0.1、110、10.0μmoL/L)的5-Aza-CdR处理卵巢癌细胞后,电镜下观察细胞形态的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长情况,蛋白印迹法检测细胞中E-cad蛋白表达的变化,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 MSP技术检测显示,ES-2及SKOV3细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛呈高度甲基化状态和非甲基化状态,3AO细胞中E-cad基因启动子区5'CpG岛仪呈非甲基化状态.经不同浓度(分别为0.1、1.0、10.0 μmol/L)的5-Aza-CdR处理后,ES-2及SKOV3细胞的体积变小,皱缩,核/质比例缩小,核分裂象减少,随着药物浓度的增高,此种趋势逐渐明显;ES-2和SKOV3细胞中E-cad蛋白相对表达水平分别为0.274、0.320、0.398和0.415、0.507、0.638,均明显高于对照细胞(分别为0.131和0.342,P＜0.01);ES-2和SKOV3细胞穿膜细胞数分别为(88.8±2.5)、(60.7±2.4)、(36.1±3.0)个和(88.2±2.1)、(60.5±2.2)、(36.2±3.0)个,均明显低于对照细胞[分别为(121.9±2.3)、(97.6±2.7)个,P＜0.01].结论 启动子区5'CpG岛的高度甲基化是卵巢癌细胞中E-cad基因异常表达的重要机制之一,5-Aza-CdR能通过降低E-cad基因启动子区5'cpG岛的甲基化而恢复其在卵巢癌细胞中的表达,抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭.     

miR-101通过调节p-ERK1/2蛋白表达对SKOV3/DDP细胞行为活性的影响

目的:探讨miR-101表达对上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP行为活性的影响及相关作用机制。方法:上调SKOV3/DDP细胞中miR-101表达水平。RT-PCR法检测SKOV3/DDP细胞中miR-101 mRNA表达水平,CCK-8检测SKOV3/DDP细胞的顺铂敏感性,划痕实验检测SKOV3/DDP细胞的迁移力,Transwell实验检测SKOV3/DDP细胞侵袭力,Annexin V-FITC/PI流式细胞实验检测SKOV3/DDP细胞凋亡率,Western blot法检测SKOV3/DDP细胞p-ERK1/2、波形蛋白(Vimentin)、钙粘蛋白E(E-cadherin)及Caspase-3蛋白表达水平。结果:与各对照组比较,miR-101组SKOV3/DDP细胞miR-101mRNA表达水平明显升高(P0.05),顺铂敏感性明显增加,IC50显著降低(P0.05);划痕距离明显增宽(P0.05),透膜细胞数显著减少(P0.05);细胞凋亡率显著增高(P0.05),p-ERK1/2及Vimentin蛋白表达水平降低(P0.05),E-cadherin及Caspase-3表达水平显著升高(P0.05)。结论:高表达的miR-101可抑制SKOV3/DDP细胞中p-ERK1/2蛋白表达,同时抑制细胞行为活性,促进顺铂诱导的细胞凋亡。     

TGF-β1调节miR-99家族对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的:探讨TGF-β1通过调节miR-99家族各miRNA对卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭行为的影响。方法:TGF-β1、miR-99家族各miRNA模拟物、miR-99家族各miRNA抑制物分别刺激或转染卵巢癌细胞系A2780及SKOV3。实时荧光定量PCR检测miR-99家族各miRNA表达水平。CCK-8法检测细胞增殖能力。划痕实验检测细胞迁移能力。Transwell检测细胞侵袭及迁移能力。结果:与空白对照组比较,TGF-β1处理组卵巢癌细胞中miR-99家族各miRNA表达上调(P0.01),卵巢癌细胞增殖、迁移及侵袭能力明显增强(P0.05);miR-99家族各miRNA模拟物转染组细胞增殖减弱(P0.05),迁移及侵袭能力增强(P0.05);miR-99家族各miRNA抑制物转染组细胞增殖增强(P0.05),迁移及侵袭能力减弱(P0.05)。结论:TGF-β1可通过调节miR-99家族表达水平促进卵巢癌细胞系A2780及SKOV3的增殖、迁移及侵袭能力,TGF-β1及miR-99家族表达水平可能作为卵巢癌恶性程度预测及预后判断的参考指标。     

GNAS-AS1靶向miR-2116-3 p基因表达调控卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制研究

目的:探讨GNAS-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法:RT-qPCR法检测正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中GNAS-AS1和miR-2116-3 p表达水平.以SKOV3细胞为研究对象,分别转染GNAS-AS1小干扰RNA、mi...     

卵巢上皮性癌淋巴结转移相关差异表达蛋白内质网氨基肽酶1的表达及意义

目的 从基因转录及蛋白表达的水平检测内质网氨基肽酶1(ERAP1)在卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞、组织中的表达,探讨其与卵巢癌转移的关系.方法 应用实时荧光定量PCR技术、蛋白印迹法检测在卵巢癌淋巴结非定向转移细胞系(SKOV3)与淋巴结定向高转移细胞系(SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4)中ERAP1 mRNA和蛋白的表达情况;并应用免疫组化方法在人卵巢癌原发灶与相应的淋巴结转移灶、裸鼠卵巢癌移植瘤原发灶与相应的淋巴结转移灶中对ERAP1的蛋白表达进行验证.结果 SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4细胞中ERAP1 mRNA和蛋白的表达呈下降趋势(分别为0.118±0.012、0.031±0.003、0.028±0.003、0.016±0.005;0.91±0.33、0.09±0.03、0.10±0.04、0.05±0.04),其中,SKOV3细胞中ERAP1 mRNA和蛋白的表达显著高于SKOV3-pm2、SKOV3-pm3、SKOV3-pm4细胞,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).ERAP1蛋白在人卵巢痛原发灶(184±14)和相应的淋巴结转移灶、裸鼠卵巢癌移植瘤原发灶(143±22)和相应的淋巴结转移灶(97±12)中的表达均呈下降趋势,分别比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 卵巢癌中ERAP1表达的下降或缺失与淋巴结转移有关.     

表没食子酸酯诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡及机制的研究

目的：探讨表没食子酸酯（EGCG）对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法：SKOV3细胞分为4组,即阴性对照组（以正常培养液培养）、EGCG低浓度组（1 μmol/L EGCG）、EGCG中浓度组（10 μmol/L EGCG）和EGCG高浓度组（100 μmol/L EGCG）。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率,Hoechs染色观察细胞核凋亡,电镜观查细胞形态,蛋白质印迹（Western blot）检测Caspase-3表达。结果：细胞增殖抑制实验结果显示,EGCG低、中、高浓度组SKOV3细胞的增殖率为（81.33±3.71）%、（67.00±7.21）%和（54.67±3.84）%,与阴性对照组（101.00±3.06）%比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。Hoechst33258染色结果显示,EGCG低、中、高浓度组凋亡细胞比例分别为（16.77±2.48）%、（24.33±3.70）%和（39.67±4.11）%,与阴性对照组[（2.00±1.45）%]相比差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０５）。电镜观察结果显示,随着EGCG作用浓度的增加,SKOV3细胞超微结构损害程度逐渐明显。此外,EGCG可以升高Caspase-3表达水平。结论：EGCG通过增强Caspase-3表达诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡。     

尿激酶型纤溶酶原激活因子介导的卵巢上皮癌细胞浸润转移体外的实验研究

目地:探讨尿激酶型纤溶酶原激活因子在卵巢上皮癌浸润转移中的作用机制。方法:用RT-PCR技术从人卵巢上皮癌组织总RNA中逆转录uPA基因cDNA全长,克隆至pGEM-T Easy Vector,鉴定后与真核表达载体PCMV-HA连接,酶切及测序。用脂质体法将重组质粒DNA转染至SKOV3细胞。加压筛选并培养PCMV-HA-uPA及对照细胞。分别用RT-PCR和W estern blot方法检测转染前后SKOV3细胞uPA的表达。细胞增殖能力测定用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和集落形成实验,细胞周期测定用流式细胞仪法,细胞体外侵袭,迁移和黏附能力测定分别采用Matrigel Invasion,TranswellM igration和Adhersion Assay方法。结果:(1)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞克隆形成,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(2)uPA阳性表达能介导SKOV3细胞的细胞周期中S期比例增加,与对照组细胞的差异有统计学意义(P<0.05);(3)uPA阳性表达介导SK-OV3细胞的体外侵袭,迁移和黏附能力均明显强于对照细胞株,差异有统计学意义(P=0.0002,<0.0001和0.0049)。结论:uPA通过促进肿瘤细胞侵袭,迁移和黏附能力在卵巢上皮癌浸润转移中起了重要作用。     

miR-101对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用研究

目的:探讨miRNA-101(miR-101)对上皮性卵巢癌SKOV3细胞抗失巢凋亡的作用,以及在失巢凋亡过程中可能的作用机制。方法:构建失巢凋亡模型模拟卵巢癌细胞转移的生长状态;用脂质体Lipofectamine 2000将miR-101 mimics及miR-NC转染SKOV3细胞,随机分为阴性对照组、miR-空白质粒组(miR-NC组)和miR-101质粒组。RTPCR法检测细胞内miR-101 mRNA表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;Transwell侵袭实验及划痕实验检测细胞的侵袭及迁移能力;RT-PCR及Western blot法检测c-fos基因mRNA和蛋白表达水平。结果:失巢凋亡模型构建成功,模型中SKOV3细胞呈悬浮、团簇状生长;将miR-101 mimics转染SKOV3细胞后,SKOV3细胞中miR-101表达水平增加,同时癌细胞失巢凋亡增加;透膜细胞数量及细胞迁移距离减少;c-fos mRNA和蛋白表达水平均降低。结论:miR-101过表达可增加SKOV3细胞失巢凋亡,降低细胞侵袭及迁移能力,下调c-fos基因表达可能是其作用分子机制。     

METTL14在卵巢上皮性癌组织中的表达及对A2780、SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:研究甲基转移酶样蛋白14（METTL14）在卵巢上皮性癌（卵巢癌）组织中的表达及其临床意义,探讨上调和下调METTL14表达对卵巢癌细胞系A2780、SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:（1）组织标本检测：选取2019年12月—2020年11月在广西医科大学附属肿瘤医院行手术治疗的20例卵巢癌患者的新鲜癌...     

间隙连接蛋白43的磷酸化调节在卵巢上皮性癌化疗耐药中的作用

目的 通过检测卵巢上皮性癌(卵巢癌)间隙连接蛋白43(Cx43)、非磷酸化Cx43及蛋白激酶C(PKC)的表达,探讨Cx43的磷酸化调节在卵巢癌化疗耐药中的作用.方法 采用免疫组化法检测29例化疗敏感(化疗敏感组)和28例化疗耐药(化疗耐药组)卵巢癌患者癌组织中以及PKC抑制剂--星孢菌素处理后的卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP细胞中Cx43、非磷酸化Cx43及PKC蛋白的表达,并采用三磷酸腺苷-生物荧光肿瘤药敏实验(ATP-TCA)检测SKOV3/DDP细胞对化疗药物的敏感性.结果 (1)免疫组化法检测显示,化疗耐药组Cx43和非磷酸化Cx43蛋白的阳性表达率(分别为54%和14%)明显低于化疗敏感组(分别为83%和59%,P<0.05);化疗耐药组PKC蛋白的阳性表达率明显高于化疗敏感组(分别为64%和31%,P<0.05).卵巢癌组织中,PKC蛋白的阳性表达率与Cx43、非磷酸化Cx43蛋白的阳性表达率呈明显负相关关系(r=-0.626和-0.714,P<0.05).(2)免疫组化法检测显示,星孢菌素处理后SKOV3/DDP细胞中PKC蛋白的表达强度减弱,Cx43及非磷酸化Cx43蛋白的表达强度增强,随着星孢菌素处理时间的延长,Cx43蛋白的表达强度进一步增强.(3)ATP-TCA检测显示,体外培养的SKOV3/DDP细胞对紫杉醇和顺铂均耐药;紫杉醇和顺铂分别联合星孢菌素处理后细胞敏感度增加,其中联合低浓度(1×10-8 mol/L)星孢菌素者为中度敏感.联合高浓度(1×10-7 moL/L)星孢菌素者为高度敏感.结论 PKC通过对Cx43的磷酸化作用导致Cx43蛋白的表达下降,降低卵巢癌对化疗药物的敏感性,这种效应可以被星孢菌素逆转.     

阿司匹林对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨阿司匹林对卵巢癌细胞凋亡的影响以及对凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的作用。方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)快速比色法分析阿司匹林对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用,用流式细胞术分析方法定量检测细胞凋亡及细胞周期的变化。用RT-PCR法检测凋亡相关基因bcl-2/bax mRNA的表达。结果:阿司匹林对SK-OV3细胞的增殖有明显的抑制作用,并呈量效和时效的关系;1、5、10mmol/L3个浓度的阿司匹林处理细胞48h后,细胞凋亡率呈剂量依赖性增加,而且G0/G1期细胞比例下降,G2/M期细胞比例升高,细胞被阻滞在G2/M期,细胞周期也发生明显改变;阿司匹林可抑制卵巢癌细胞的bcl-2mRNA表达,而上调bax mRNA的表达。结论:阿司匹林能抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导其凋亡。此作用可能与阿司匹林抑制细胞bcl-2mRNA的表达和上调bax mRNA表达有关。