宫颈脱落细胞高危型人乳头状病毒核酸扩增微板杂交捕获检测的临床意义

目的:探讨核酸扩增(PCR)微板杂交捕获检测宫颈脱落细胞内高危型人乳头状病毒(HPV)感染的临床意义,建立快速、灵敏的检测方法。方法:采用PCR微板杂交捕获检测140例宫颈脱落细胞高危型HPV(HPV16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59/68)感染状况。结果:细胞学诊断低度鳞状上皮内病变(LSIL)56例,高危型HPVDNA阳性18例(阳性率为32.5%);细胞学诊断高度鳞状上皮内病变(HSIL)42例,高危型HPVDNA阳性25例(阳性率为59.5%);未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)31例,高危型HPVDNA阳性11例(阳性率为35.5%);鳞状细胞癌9例,高危型HPV阳性8例(阳性率88.9%)。结论:PCR微板杂交捕获检测宫颈脱落细胞内高危型HPV感染,具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点,适用于大规模筛查和临床常规工作。     

两种人乳头瘤病毒分型检测方法的比较

目的通过比较PCR联合地高辛标记探针杂交法与实时荧光定量PCR法检测宫颈液标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染的一致性,评价PCR联合地高辛标记探针杂交法的临床应用价值。方法将4型HPV(16、51、54和56)探针3′端加尾地高辛标记,检测标记探针的灵敏度和特异性。收集63例第二代杂交捕获(HC-Ⅱ)阳性和18例HC-Ⅱ阴性的宫颈液标本,采用HPV通用引物MY11/09对所有标本L1区基因序列进行PCR扩增,利用地高辛标记探针杂交法对PCR产物进行检测分型;同时利用实时荧光定量PCR对这81例标本进行检测,将两者的检测结果进行比较。结果地高辛标记探针杂交法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型40例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,分别占HC-Ⅱ阳性标本的63.5%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;实时荧光定量PCR法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型39例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,占HC-Ⅱ阳性标本的61.9%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;重复性检测显示两种方法检测4型HPV感染的变异系数(CV)为0~1.45%和0~1.50%,检测标本中4型感染的符合率为97.5%~100%。结论PCR联合地高辛标记探针杂交法具有较好的灵敏度和特异性,可能对于临床HPV分型检测有应用价值。     

两种人乳头瘤病毒分型检测方法的比较

目的 通过比较PCR联合地高辛标记探针杂交法与实时荧光定量PCR法检测宫颈液标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染的一致性,评价PCR联合地高辛标记探针杂交法的临床应用价值. 方法 将4型HPV(16、51、54和56)探针3′端加尾地高辛标记,检测标记探针的灵敏度和特异性.收集63例第二代杂交捕获(HC-Ⅱ)阳性和18例HC-Ⅱ阴性的宫颈液标本,采用HPV通用引物MY11/09对所有标本L1区基因序列进行PCR扩增,利用地高辛标记探针杂交法对PCR产物进行检测分型;同时利用实时荧光定量PCR对这81例标本进行检测,将两者的检测结果进行比较. 结果 地高辛标记探针杂交法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型40例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,分别占HC-Ⅱ阳性标本的63.5%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;实时荧光定量PCR法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型39例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,占HC-Ⅱ阳性标本的61.9%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;重复性检测显示两种方法检测4型HPV感染的变异系数(CV)为0～1.45%和0～1.50%,检测标本中4型感染的符合率为97.5% ～100%. 结论 PCR联合地高辛标记探针杂交法具有较好的灵敏度和特异性, 可能对于临床HPV分型检测有应用价值.     

实时荧光聚合酶链反应技术与第2代杂交捕获法检测高危亚型人乳头瘤病毒的比较

目的 比较实时荧光聚合酶链反应技术(实时PCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)16、18型与第二代杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测13种HPV高危亚型.方法 采用实时PCR与HC-Ⅱ分别检测宫颈脱落细胞标本中的HPV16、18型和13种HPV高危亚型,并进行测序分析.结果 HPV16、18型实时PCR总的检出率为24%,13种HPV高危亚型HC-Ⅱ总的检出率为46.6%;高度鳞状上皮细胞内病变(HSIL)组实时PCR和HC-Ⅱ的检出率均较低度鳞状上皮细胞内病变(LSIL)组要高,分别为54%与21%、84.3%与65.6%.HPV16、18型在HPV高危亚型中的总检出率为51%.有2例宫颈炎组标本HC-Ⅱ检测阴性而实时PCR检测阳性,测序结果与实时PCR一致.结论 实时PCR法检测HPV16、18较HC-Ⅱ灵敏度高,但检测的HPV亚型少,相比之下HC-Ⅱ更适合于临床上HPV高危亚型的筛查检测.     

双重实时荧光PCR检测在宫颈癌筛查中的应用

目的评价实时荧光PCR检测方法在宫颈癌筛查中的应用价值及临床意义。方法利用实时荧光PCR技术对310例妇科疑似人乳头瘤病毒(HPV)感染患者进行高危型HPV检测,同时利用低密度基因芯片对310例样本进行HPV基因分型。结果在310例样本中,使用实时荧光PCR技术和低密度基因芯片方法分别检出HPV高危型145例(46.8%)和132例(42.6%),两种方法检测符合率为94.5%(293/310)。基因分型结果:感染率最高的为16型(25%),其次为52型(16%)、58型(15.2%)、56型(7.5%)和31型(7.5%)等。结论实时荧光PCR技术能有效地检测常见高危型HPV的感染,与细胞学检测方法相结合,对宫颈筛查有很重要的指导意义。     

广州地区尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒检测与基因分型

目的分析广州地区尖锐湿疣(Condylomata acuminata,CA)患者人乳头瘤病毒(HPV)感染的型别特点,为临床防治提供参考依据。方法采用"中国生殖器疣的多中心临床流行病学研究"课题组所制定的标准检测技术———通用引物聚合酶链反应(PCR)及基于序列分析的基因分型方法,检测HPV型别。结果经PCR扩增分析153份CA患者活检标本中,93例HPVDNA阳性(60.8%);PCR阳性标本中,75例成功分型;单一型别感染率为47.1%,复合型别感染率为2.0%;高危型HPV16检出24例(15.7%),低危型HPV6和HPV11型分别检出27例(17.6%)和24例(15.7%)。结论本地区CA患者HPV感染以单一型别及HPV6、HPV11和HPV16型为主;感染高峰集中于40岁以下的性活跃期人群。     

高危型HPV检测联合肉眼醋酸试验在宫颈癌前病变筛查中的应用

目的：研究在宫颈癌前病变筛查中采用高危型HPV检测联合肉眼醋酸试验的应用效果。方法：选取2007年8月～2010年2月于我院治疗的可疑宫颈癌前病变患者532例,应用5%醋酸和Lugol＇s液涂抹于宫颈表面,筛选出有异常着色的患者320例,再采用实时荧光定量PCR技术检测高危型HPV病毒感染情况。结果：320例肉眼醋酸试验异常着色患者进行高危型HPV病毒感染检测发现,HPV阳性感染190例,阳性率为59.38%;212例肉眼醋酸试验正常着色患者进行高危型HPV病毒感染检测发现,HPV阳性感染18例,阳性率为8.49%。结论：肉眼醋酸试验联合高危型HPV检测可及时、有效地发现宫颈癌前病变,可作为宫颈癌前病变筛查方案应用于临床。     

实时荧光聚合酶链反应技术检测人乳头瘤病毒高危亚型的临床应用

目的：采用实时荧光聚合酶链反应技术（实时PCR）检测10种人乳头瘤病毒（HPV）高危亚型,比较不同病变程度标本的HPV高危亚型的检出率。方法：采用实时PCR法检测240例妇女宫颈脱落细胞标本中的10种HPV高危亚型,并对部分标本的检测结果应用测序法进行验证。结果：10种HPV高危亚型总的检出率为42．9％;高度鳞状上皮细胞内病变（HSIL）组的检出率均较低度鳞状上皮细胞内病变（LSIL）组要高,分别为81．7％与52．5％。15例HPV检测阳性的标本经测序验证均在10种亚型的范围内。结论：实时PCR法能同时检测10种HPV高危亚型,操作简便、结果准确,适合临床上用于HPV高危亚型的筛查检测。     

重庆地区妇女人乳头瘤病毒感染的调查分析

目的分析重庆地区妇女人乳头瘤病毒(HPV)的感染率、型别分布及其与宫颈疾病的相关性。方法用核酸分子芯片快速杂交法检测宫颈细胞HPV,并对HPV感染率、型别分布及其与宫颈疾病的相关性进行分析。结果共检测7 016例标本,HPV阳性率为33.6%,高危型阳性1 558例(66.1%),型别以HPV 16、58、52、33、18、31、68亚型为主;高危型合并其他型阳性447例(19.0%),型别以HPV 16、52、58亚型为主;低危型合并其他型阳性23例(1.0%),以HPV 6、52亚型为主;低危型159例(6.7%),以HPV 11、6亚型为主;其他型170例(7.2%),以HPV CP8304和53亚型为主。宫颈病变程度与HPV感染呈正相关。结论重庆地区妇女HPV感染率相对较高,HPV-DNA检测对宫颈恶性病变的早期诊断和预防有重要价值。     

宫颈尖锐湿疣组织中HPV分型与端粒酶活性的研究

目的由于宫颈尖锐湿疣(CA)皮损中HPV高危型感染常与其癌变有关，而端粒酶活性增高多见于恶性疾病。该研究探讨宫颈CA皮损中HPV分型与端粒酶活性的关系。方法采用荧光定量PCR检测HPV病毒分型，端粒重复序列扩增文件-酶标法(TRAP—ELISA)检测端粒酶活性。结果尖锐湿疣患者皮损中端粒酶活性明显高于正常皮肤组织；24例(40．0％)HPV16／18型阳性，34例(56．7％)HPV6／11型阳性，2例未检测到HPV；HPV16／18型感染的皮损中端粒酶活性明显高于HPV6／11型感染者。结论认为端粒酶活性与HPV型别有关，可能与HPV病毒协同参与CA发病，HPV16／18型阳性者在临床可能有癌变倾向，抑制端粒酶活性可能可以阻碍疣体生长，为临床治疗提供一个新的方向。     

两种前处理方法对粘液型宫颈HPV分型结果的比较

目的 研究2种前处理方法对粘液型标本HPV DNA杂交结果的影响,为进一步提高临床检验质量和改进检测技术提供理论依据.方法 收集100例妇科门诊患者粘液型宫颈脱落细胞标本,分别采用常规方法(生理盐水震荡法)和蛋白酶K消化法对脓性粘液型标本进行前处理,应用核酸分子快速导流杂交技术进行21种HPV亚型感染检测.研究不同前处理方法对HPV DNA浓度、纯度和分型结果的影响.结果 ①常规方法处理后所抽提的DNA纯度、含量分别为1.63±0.71和(96.35±13.15)μg/ml,蛋白酶K消化法处理后所抽提的DNA纯度、含量分别为1.80±0.52和(105.14±18.65)μg/ml,蛋白酶K消化法处理后检测的DNA纯度和含量分别高于常规法(P＜0.01).②常规法检测出现PCR反应抑制物的例数为4例,而蛋白酶K消化法则为0例.③常规法和蛋白酶K消化法HPV分型的总阳性率、单一感染率、多重感染率分别为28.0％、23.0％、5.0％和32.0％、26.0％、6.0％,两法一致性检验Kappa=0.888,结果具有较好的一致性.结论 基于蛋白酶K消化法的HPV检测,对粘液型标本可获得质量较好的HPV DNA,无核酸丢失和污染,分型结果满意,可以有效去除PCR反应抑制物,操作简便,适合临床检验应用.     

用母体外周血中胎儿游离DNA检测胎儿SRY基因的研究

目的探索从孕妇外周血浆中检测胎儿躲y基因的高灵敏性及高准确性方法。方法应用PcR、实时荧光定量PcR、PEP—PcR技术,检测33例妊娠8～14周的正常孕妇血浆中游离胎儿DNA的脓y基因。组织标本躲y基因检测结果作为性别判定的标准。结果33例孕妇血浆标本检测职y基因,普通PcR检出的灵敏性为58．82％,特异性100％。PEP—PCR的灵敏性为88．24％,特异性100％。荧光定量PCR的灵敏性为88．24％,特异性100％。结论PEP—PCR技术和荧光定量PcR技术均可以提高胎儿游离DNA检测的灵敏度及准确性．可用于进一步染色体疾病的无创性产前筛查研究。     

TCT联合高危HPV—DNA定量检测在宫颈疾病筛查中的价值

目的通过液基细胞学（TCT）联合高危型（8个型）人乳头瘤病毒DNA（HR—HPV—DNA）定量检测,探讨其在宫颈疾病筛查中的价值。方法对怀疑有宫颈病变的患者进行（TCT）和HR—HPV—DNA（16,18,31,33,45,52,56,58型）实时荧光定量检测,并将两者结果和病理活检进行对照分析。结果TCT检测与HR—HPV—DNA检测特异性比较有显著差别（P〈0．01）,HR—HPV—DNA检测诊断敏感度高（92％）,但特异性低（75％）;TCT检查特异性高（97％）,敏感性低（83％）;TCT与联合筛查检出率高达100％,两组比较有明显差别（P〈0．01）。结论TCT联合HR—HPV—DNA进行宫颈疾病的筛查,能明显提高检出率和筛查效率,在宫颈癌高危人群中进行大规模的初筛更具价值,适合在条件允许的地方进行开展。     

运用实时荧光定量PCR技术检测424例患者HPV结果分析

目的探讨采用实时荧光定量PCR反应(qPCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)的感染情况及检测HPV分型的临床意义。方法用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测424例门诊患者阴道分泌物中HPV6/11和HPV8个基因型(HPV16、18、31、33、45、52、56、58型)的病毒拷贝数。结果共检出HPV6/11阳性者99例,阳性率为23%,其中<20岁年龄组阳性率最高,达到50%;共检出HPV8个基因型阳性者103例,阳性率为24%,其中>50岁年龄组阳性率最高,达到42%。结论 qPCR检测技术具有灵敏度高、特异性强及操作快捷等特点,可为HPV感染患者的临床治疗及预后观察提供可靠依据,具有较高的临床应用价值。     

女性宫颈细胞中人乳头瘤病毒感染基因型的研究

目的探讨北京地区女性宫颈细胞中23种人乳头瘤病毒（HPV）感染的基因型分布情况,为宫颈癌的防治及疫苗的研发提供流行病学资料。方法采用HPV基因分型技术对北京地区2050例女性宫颈上皮细胞标本进行23种HPV基因型别检测,并对各种亚型的感染情况进行分析。结果2050例宫颈上皮细胞标本中检出HPV感染总体阳性率为25．85％（530／2050）,其中高危型阳性率为17．37％（356／2050）;低危型阳性率为5．02％（103/050）;在23种亚型中,最常见的类型依次为16、6、58、52、43型,未检测出44、39及MM4型。HPV单一感染共检测出20种型别,其阳性检出率为19．12％（392／2050）,最主要的为16亚型,占21．43％（84／392）。多重型别HPV感染阳性率为6．73（138／2050）;以二重感染最常见,占78．79％（109／138）,其中（HPV11＋43）、（HPV16＋6）型各6例,是混合型感染的主要型别。结论本地区女性宫颈细胞HPV感染高危型以16、52、58型为主,低危型以6、43型为主。对宫颈HPV感染基因型的调查,可以有效降低HPV感染导致宫颈癌的概率,并为宫颈癌疫苗的研发提供流行病学资料。     

应用荧光定量聚合酶链方法检测宫颈组织中人乳头瘤病毒16E6基因

目的　建立荧光定量聚合酶链 (FQ PCR)方法检测宫颈细胞中人乳头瘤病毒 16型(HPV16 )E6基因的方法。方法　以 2 2 0例新疆妇女宫颈不同病变组织DNA作为样本 ,人乳头瘤病毒 16型 (新疆株 )E6基因 (HPV16E6 ,AF32 785 1)作为扩增的靶基因 ,同时以人 β 肌动蛋白基因片段作为内参照 ,借助于设计的目的基因引物 ,两个特异的荧光探针 ,在筛选的FQ PCR优化反应体系中 ,同时对两个基因片段进行扩增 ,得到HPV16E6的相对含量。结果　对 β 肌动蛋白阳性的宫颈不同病变组织中HPV16E6阳性率及其相对含量进行统计分析 ,新疆妇女宫颈脱落细胞标本 96例中 ,HPV16E6阳性 3例 (3 3% ) ;宫颈癌蜡块组织 5 9例中HPV16E6阳性 4 9例 (83 0 % ) ;宫颈上皮内瘤变 (CIN)蜡块组织 6 5例中 ,HPV16E6阳性 2 8例 (75 7% ) ;宫颈炎蜡块组织 33例 ,HPV16E6阳性 2 8例 (93 3% )。HPV16E6的相对含量随病情加重呈上升趋势 ,二者呈显著正相关 ,相关系数为 0 83。结论　建立的FQ PCR检测宫颈不同病变组织内HPV16E6基因的方法 ,能反映单位细胞人乳头瘤病毒的复制情况 ,筛查宫颈癌患者 ,并可能应用于宫颈癌的风险评估和疗效观察。     

下咽癌及其颈部转移淋巴结人乳头瘤病毒16／18的表达

目的：探讨人乳头瘤病毒（ HPV）16/18与下咽鳞癌及其颈部淋巴结转移的关系。方法应用原位杂交（ ISH）技术检测20例下咽癌组织及其颈部淋巴结组织中HPV16/18 DNA的表达情况,并结合病人临床资料进行回顾性分析。结果20例下咽组织中检出HPV16/18 DNA阳性2例占10．0％,12例转移性颈部淋巴结标本中检出 HPV16/18 DNA 阳性1例占8．3％,颈部正常淋巴结中均未检出 HPV16/18 DNA。3例HPV16/18阳性病例均为临床Ⅳ期下咽鳞癌病例。结论 HPV16/18在下咽鳞癌及其颈部转移性淋巴结中的检出率较低。     

新疆维吾尔族宫颈癌组织中HPV—DNA表达及存在状态的研究

目的 探讨高危型人乳头瘤病毒（HR—HPV）在新疆维吾尔族宫颈癌患者中的表达、存在状态及其与宫颈癌的相关性。方法 选择第2代杂交捕获（Hybrid capture,HC2）检测HR—HPV阳性的30例维吾尔族宫颈鳞癌（SCC）患者,利用巢式PCR检测其组织标本中的HPV16-DNA的表达,多重Taqman探针荧光定量PCR检测HPV16～DNA在组织中的存在状态。结果 巢式PCR检测结果 显示宫颈鳞癌患者HPV16-DNA检出率为96．7％,与HC2法的HPV—DNA检出率差异无统计学意义（P〉0．05）;HPV16-DNA在宫颈癌组织中以整合态存在,其整合率为89．7％;HPV16-DNA的表达水平与宫颈癌患者的年龄、有无淋巴结转移无关（P〉0．05）,但其在病理分级高的患者中表达高于病理分级低的患者（P〈0．05）,在临床分期高的患者中表达高于低分期患者（P〈0．05）。结论 HR—HPV感染是导致宫颈癌的主要因素,而HPV16是新疆维吾尔族宫颈癌主要的病毒类型,其在组织中多以整合态存在,在宫颈癌发病中起主要作用,HPV—DNA整合状态与宫颈细胞的恶性转化密切相关。     

宫颈病变中HPV16/18感染与P16^INK4A蛋白表达的关系

目的通过检测宫颈癌及其癌前病变组织中HPVl6／18感染和P16^INK4A蛋白表达的情况，探讨两者之间的关系以及它们在病理诊断中的意义。方法应用荧光定量PCR技术对宫颈组织进行HPV DNA定性检测，采用Envision两步免疫组织化学染色方法检测P16^INK4A蛋白表达。结果268例宫颈组织中HPVl6／18的总检出率为53．73％（144／268），其检出率随CINI级、CINⅡ～Ⅲ级和宫颈鳞癌病变程度的加重而显著增高（P〈0．05）。P16^INK4A“蛋白表达的阳性率在慢性宫颈炎、CINI级、CINⅡ一Ⅲ级和宫颈鳞癌组织中两两比较均有显著性差异（P〈0．05）。HPVl6／18感染与P16^INK4A蛋白的表达呈正相关关系（r8=0．689，P〈0．01）。结论HPV16／18感染可能通过影响P16^INK4A“蛋白的过表达与宫颈癌及其癌前病变的发生发展密切相关，二者联合检测对宫颈癌的筛查和预防具有重要意义。     

宫颈人乳头瘤病毒第二代杂交捕获法和实时荧光聚合酶链反应检测法的临床应用比较

目的：比较第二代杂交捕获法（HCⅡ）与实时荧光聚合酶链反应技术（real-time PCR）在检测女性生殖道人乳头瘤病毒（HPV）高危亚型中的临床价值。方法：随机选取2011年1～6月我院妇产科行液基细胞薄层涂片技术进行低度鳞状上皮内病变（LSIL）检查,检查结果为未明确诊断意义的不典型鳞状上皮细胞（ASCUS）患者100例,分别采用real-time PCR与HCⅡ检测HPV高危亚型,比较两者的检测结果。对检测HPV阳性的样本或HPV阴性但液基细胞薄层涂片技术（LCT）≥LSIL的妇女采用阴道镜下活组织病理学检查,以病理结果作为验证两种HPV检测的参考标准。结果：共取病理68例。病理结果证实该人群中子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ级5例,CINⅡ级11例,CINⅠ级19例,慢性宫颈炎和鳞状上皮化生33例。该100例患者HCⅡ和real-time PCR检测高危型HPV的阳性率分别为63.0%和71.0%,二者总符合率为82.3%;HCⅡ检测手段对高危宫颈病变患者进行高危HPV筛查的灵敏性、特异性、准确性、阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比和阴性似然比分别为79.3%、88.2%、91.2%、10.1%、99.7%、8.9和0.327;real-time PCR以上各指标分别为100.0%、92.5%、86.7%、8.6%、100.0%、8.7和0。结论：Real-time PCR与HCⅡ检测宫颈上皮内瘤变患者高危型HPV有较好的相关性;但real-time PCR检测高危型HPV具有更好的敏感性和特异性。