联合应用Schwann细胞与同种异体基底膜修复鼠坐骨神经？…

目的：观察自体Ｓｃｈｗａｎｎ细胞与同种异体基底膜合用促进鼠坐骨神经再生的能力。方法：将无细胞成分的同种异体基底膜与Ｓｃｈｗａｎｎ细胞混合培养７ｄ，获得含Ｓｃｈｗａｎｎ细胞的基底膜。２４只ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠随机分为Ａ、Ｂ两组并分别移植含有Ｓｃｈｗａｎｎ细胞的基底膜及无细胞成分的基底膜，术后１，２，４，８周测定Ａ、Ｂ两组坐骨神经功能指数（ＳＦＩ）及再生髓鞘平均厚度（ＴＲＭＳ）。结果：术后１，２周，Ａ、Ｂ     

同种异体神经与自体神经瘤联合修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨用优化法处理后的脱细胞同种异体神经和自体神经瘤组成的联合体修复大鼠坐骨神经缺损的效果. 方法 30只SD大鼠随机分为2组(每组15只):A组(自体神经瘤模型组),行同种异体神经与自体神经瘤联合移植;B组(坐骨神经缺损模型组),做自体神经移植.将30只成年Wistar大鼠作为神经供体,取其单侧坐骨神经,制备为脱细胞同种异体神经.在术后的8周、16周进行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查. 结果 两组模型制备成功后,术后8周时大鼠均出现肢体躲避反应;术后16周时均有大量神经纤维通过移植体,两组再生神经的纤维数量、直径及髓鞘比较,差异无统计学意义;术后8周电生理检测发现A组再生神经的传导速度明显慢于B组(P<0.05),术后16周两组比较,差异无统计学意义(P>0.05);术后16周A组和B组坐骨神经功能指数比较,差异无统计学意义(P>0.05). 结论 同种异体神经与自体神经瘤组成的联合体能修复周围神经缺损,恢复神经的传导功能,有效地促进神经的再生,此联合体是一种良好的自体神经移植替代材料.     

化学萃取同种异体神经修复鼠坐骨神经缺损

目的 :通过化学萃取同种异体神经 ,去除髓鞘和雪旺细胞 ,形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损 ,研究神经再生效果。方法 :正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管 ,桥接鼠坐骨神经 2 0mm缺损。实验分 3组 :无细胞基膜管移植组 (A组 )、自体神经移植组 (B组 )和异体神经移植组 (C组 )。术后进行肌电图、组织形态学及图像分析仪检查。结果 :A组再生神经有大量轴突通过移植体 ,术后 2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组 (P <0 .0 5 ) ,3个月时差异无显著性。髓鞘厚度在术后 3个月时亦低于B组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。轴突直径及数目两组无差异。结论 :这种无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移 ,是一种良好的神经移植替代材料。     

脱细胞异体神经修复鼠坐骨神经缺损

目的　通过化学萃取同种异体神经 ,去除髓鞘和雪旺细胞 ,形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损 ,研究神经再生效果。方法　正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管 ,桥接鼠坐骨神经 2 0mm缺损。将实验分 3组 :无细胞基膜管移植组 (A组 ) ;自体神经移植组 (B组 ) ;异体神经移植组 (C组 )。术后进行肌电图 ,组织形态学及图像分析仪检查。结果　A组再生神经有大量轴突通过移植体 ,术后 2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组 (P <0 0 5) ,3个月时差异无显著性。髓鞘厚度在术后 3个月时亦低于B组 ,差异有显著性 (P <0 0 5)。轴突直径及数目两组无差异。结论　无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移 ,是一种良好的神经移植替代材料。     

异体羊膜复合神经生长因子桥接周围神经缺损的实验研究

目的 :探讨同种异体羊膜材料复合应用神经生长因子替代神经材料桥接周围神经缺损的可行性。方法 :4 8只健康SD大鼠制备坐骨神经缺损模型 ,随机分为 4组 ,即自体神经原位移植组 (A组 )、异体神经移植应用环孢菌素A(CSA) 5mg/(kg·d) 5周组 (B组 )、异体羊膜材料桥接缺损复合应用神经生长因子组 (C组 )、单纯异体神经移植组 (D组 )。 6只Wistar大鼠取双侧坐骨神经作为供体。于术后 12周取移植段神经行光镜、电镜形态学观察 ,测定神经运动诱发电位潜伏期、神经运动诱发电位峰值、神经传导速度和振幅积分、腓肠肌最大收缩力 ,再生轴突计数及髓鞘厚度测定。结果 :12周时A、B、C组的各项检测指标明显优于D组 (P <0 0 5 ) ,A、B、C 3组间差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,再生神经形态与功能恢复良好。结论 :对于长段周围神经缺损 ,应用异体羊膜复合神经生长因子进行桥接可以有效促进神经再生及功能恢复     

人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植修复犬坐骨神经缺损

目的:探讨人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植技术的可行性。方法:12只犬分为脱细胞同种异体神经移植组和人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植(B)组,每组6只,均建立坐骨神经缺损动物模型。制备人胎盘羊膜和脱细胞同种异体神经。A和B组分别行同种异体神经移植术和人胎盘羊膜包裹的同种异体神经移植术。术后16周运用电生理学、髓鞘HE染色等观察2组犬移植段神经比目鱼肌诱发电位的波幅和时限、双侧坐骨神经传导速度的差异。结果:术后16周,A组犬足部及小腿红肿;B组犬神经功能恢复,小腿肌肉肌力恢复,犬右后肢能够站立。A和B组犬移植段神经连续性好,B组犬移植段神经周围炎症反应轻。B组与A组相比可见较多雪旺细胞增殖及大量再生的神经纤维。B组轴突密度和比目鱼肌诱发电位波幅、时限明显高于A组(t=10.195、4.825和6.323,P<0.001)。结论:人胎盘羊膜包裹的脱细胞同种异体神经移植术可改善神经形态学变化,提高移植神经的修复质量。     

经辐照氟银处理肌腱的异体移植

目的　观察辐照氟银异体肌腱移植的效果。方法　 32只家兔随机分为 4组 :分别将制备好的辐照氟银异体肌腱 (A组 ) ,单纯辐照异体肌腱 (B组 ) ,深低温冷冻异体肌腱 (C组 )与自体肌腱 (D组 ) ,行肌腱移植。术前进行各组Ag+ 检测 ,术后观察生物力学及组织形态学的变化并行羟脯氨酸含量测定。结果　术后 12周辐照氟银组最大载荷和抗张强度与其它各组差别无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;组织学变化 :术后 4周各处理组细胞增多 ,均多于自体组 ,A、B组细胞呈椭圆形 ,C组为线形或梭形 ;术后 12周各处理组细胞减少 ,仍多于自体组 ,细胞以线形或梭形为主 ;术后 12周辐照组羟脯氨酸含量与自体组无差异 (P >0 .0 5 ) ,但高于冷冻组 (P <0 .0 5 )。结论　辐照氟银异体肌腱移植后效果良好 ,是一种良好的自体肌腱替代材料     

冷冻保存后不同直径异体神经移植的实验研究

目的 探讨经液态氮冷冻贮存后,不同直径同种异体神经移植的神经再生情况.方法 取40只Wistar大鼠,雌雄不限,取10只鼠分别切取正中神经、桡神经及坐骨神经,放于-196℃液态氮贮存3周备用;其余30只鼠随机分为A、B、C 3组,均造成右侧胫神经8mm的神经缺损模型,分别植入不同直径异体神经.A组:粗直径同种异体神经移植组;B组:等直径同种异体神经移植组;C组:细直径同种异体神经移植组.术后2、4周分别进行大体手术显微镜下观察、病理组织学及电生理学检查.结果 电生理学检查:2周时,传导速度(CV)及波幅(Amp)经统计学分析,A、B、C 3组之间无显著性差异(P>0.05);4周时,CV及Amp经统计学分析,3组之间存在显著性差异(P<0.05),并且C组明显优于A组.病理组织学检查:2周时,3组均见明显髓鞘、轴突崩解和空泡变性,基底膜管完整清晰,外周见较多新生血管及巨噬细胞、淋巴细胞浸润;4周时,各组吞噬现象消失,并见较多新生神经轴突.其中C组的再生轴突数量和直径均优于其余2组;结论不同直径同种异体神经移植,对神经再生效果有明显影响,其中细直径移植组神经再生效果最佳.     

自体骨髓间充质干细胞促进大鼠坐骨神经缺损修复的实验研究

目的　观察自体骨髓间充质干细胞在神经再生室中的作用 ,探讨其作为组织工程的种子细胞修复周围神经缺损的可行性。方法　成年Wistar大鼠 2 4只 ,随机分成 3组 ,每组 8只 ,硅胶导管桥接右侧 13mm的坐骨神经缺损 ,A组在神经再生室内植入骨髓间充质干细胞 ECM (extracellularmatrix ,ECM )凝胶 ;B组植入ECM凝胶 ;C组注入生理盐水。术后 12周 ,进行大体观察及坐骨神经功能指数测定、电生理检测、神经组织学等观察。结果　A、B两组均有再生神经生成 ,但A组各项检测指标均优于B组 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论　自体骨髓间充质干细胞能够促进周围神经再生 ,可以作为种子细胞应用于外周神经组织工程。     

微囊化转NGF基因NIH3T3细胞填充静脉修复大鼠坐骨神经缺损的作用

目的：了解微囊化转NGF基因NIH3T3细胞在修复周围神经缺损中的作用。方法：SD雄性大白鼠30只,建立大鼠坐骨神经离断模型后随机分为3组,A组：异体静脉桥接神经缺损,形成神经再生室,其内填充微囊化转NGF基因NIH3T3细胞,修复大鼠坐骨神经10 mm缺失;B组：自体神经移植;C组：微囊化NIH3T3细胞。于术后4、8及12周进行足迹试验,术后12周进行电生理学测试及形态学观察。结果：术后4、8和12周不同时间点坐骨神经功能指数,术后12周神经传导速度、再生神经的组织学改变及再生神经纤维的成熟程度A组和B组比较,差异均无显著性(P>0.05), A 组和B组明显优于C组 (P<0.05)。结论：聚赖氨酸/海藻酸钠(APA) 微胶囊与外周神经组织有良好的生物相容性;辅加微囊化转NGF基因NIH3T3细胞对修复缺损的神经具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。     

脱细胞异种神经移植体复合BMSCs修复大鼠坐骨神经缺损的研究

目的：对脱细胞异种神经的生物相容性进行评价,证明应用其复合BMSCs促进神经再生和功能恢复的效果。方法：采用化学萃取法制备兔的脱细胞神经,应用扫描电镜观察其超微结构;将BMSCs种植到神经支架构建神经移植体,体外培养后观察细胞形态;用构建的异种神经移植体桥接大鼠坐骨神经缺损,术后8周,检测胫前肌湿重比率,对再生神经进行组织形态学分析;并应用免疫荧光染色检测神经内NGF的表达。结果：脱细胞异种神经较完整地保留了天然立体的施万细胞基底膜管结构,完全地移除了神经内的施万细胞、轴突和髓鞘成分;在体外培养中支持种植的BMSCs黏附和生长。神经移植术后,与单纯异种脱细胞神经移植组相比,复合BMSCs的异种神经移植体移植能使胫前肌湿重比率增加、有髓神经纤维数目、髓鞘厚度和轴突直径增加;增加再生神经内NGF的表达。结论：异种脱细胞神经移植体具备天然的立体结构,移除了施万细胞、髓鞘等抗原成分;神经支架无细胞毒性,具有良好的细胞相容性;复合BMSCs的异种神经移植体可显著地促进神经再生及功能恢复。     

Survival and migration of Schwann cells after the vascularized peripheral nerve grafted into spinal cord in rats

Objective：To study the survival and ability of inducing axonal regeneration of the Schwann cells after the peripheral nerve being grafted into spinal cord. Methods：A total of 30 adult female Wistar rats were randomly divided into the VN （vascularized peripheral nerve） and PN （peripheral nerve） groups. A 5-mm spinal cord defect of the left posterior column was made at the T1-3 vertebral level. The defect was grafted with the vascularized or isolated peripheral nerve respectively. The survival and proliferation of the Schwann cells were assessed by histological and morphometric analysis 8 weeks after the operation. Resuits：In the VN group, the peripheral nerve grew into the cord with lots of Schwann cells survived and proliferated, and had more NF and S-100 positive fibers than in the PN group. Conclusion：The vascularized peripheral nerve enhances the survival and proliferation of the Schwann cells and prompts the regener- ation of injured axon of the central nerve system to certain degree.     

雪旺细胞移植改善心肌梗死后副交感/交感神经重塑

目的： 对心肌梗死后的心脏进行雪旺细胞（Schwann cells）移植,从而改善心肌梗死的心脏神经的重塑,降低心肌梗死后室性心律失常易感性,以达到雪旺细胞移植治疗心肌梗死后心率失常的目的。方法： 利用结扎Lewis大鼠冠状动脉前降支的方法建立急性大鼠心肌梗死模型,并将心肌梗死的大鼠随机分为细胞移植组（ n=31）和对照组（ n=30）。雪旺细胞取自大鼠坐骨神经,经爬片S100染色鉴定雪旺细胞表面标记物。并将经体外培养扩增后的雪旺细胞（5×106）通过注射的方式移植于心肌梗死周边区,并在细胞移植后的2 周用免疫荧光及免疫组织化学方法检测心肌梗死边缘区副交感、交感神经,动态心电图和程序性电刺激（PES）检测室性心律失常的易感性。 结果： 通过S100染色发现,培养获得的雪旺细胞纯度达到95%以上,在雪旺细胞移植后的2 周,免疫组织化学和免疫荧光结果显示,雪旺细胞移植能够显著改善心肌梗死边缘区副交感/交感神经的比例,并且能够显著降低动态心电图频域检测中低频/高频的比值,同时显著降低了室性心律失常的易感性。结论： 雪旺细胞移植能够有效改善心肌梗死部位副交感/交感神经的比例,从而降低心肌梗死后室性心律失常的发生率。     

脊髓内移植纤维蛋白胶包裹嗅粘膜固有层促进损伤轴突再生

目的：将富含嗅神经鞘细胞的大鼠嗅粘膜固有层(OLP)碎片裹以纤维蛋白胶(FG)，移植到脊髓全横断断端间隙内，观察对脊髓两断端连接及轴突再生的影响。方法：成年雄性SD大鼠24只，全横断胸10节段脊髓。分别于脊髓断端间隙内移植OLP(OLP组)、FG包裹的OLP(FG-OLP组)或等量的FG(FG组)，每组6只；另6只仅行脊髓横切（单纯全切组）。10wk后处死动物，取材观察四组大鼠脊髓断端的连接情况。再取损伤区2cm范围脊髓节段，行冰冻水平切片，免疫组化ABC法染色，观察神经丝（NF）和生长相关蛋白－43(GAP－43）免疫组化染色阳性神经纤维的分布与形态，同时行NF和GAP－43的免疫荧光双标染色，激光共聚焦显微镜下观察两者的相互关系及形态异同。结果：单纯全切组和OLP组脊髓两断端连接较差;FG组和FG－OLP组断端连接较好，少有空洞。单纯全切组和FG组损伤区可见少量NF及GAP－43免疫组化染色阳性纤维，分布弥散，纤维细小，排列方向凌乱。OLP组可见较多NF及GAP－43免疫组化染色阳性纤维，但未见跨越脊髓横切部位；而FG－OLP组损伤区内有大量NF及GAP－43免疫组化染色阳性纤维，并跨越脊髓横切部位。NF和GAP－43免疫荧光双标结果显示，二者在损伤区的分布相同。结论：脊髓断端间隙内移植FG包裹的OLP碎片可促进脊髓两断端的连接及轴突的再生。     

Functional recovery following traumatic spinal cord injury mediated by a unique polymer scaffold seeded with neural stem cells and Schwann cells

Background The most important objective of transplant studies in the injured spinal cord has been to provide a favorable environment for axonal growth. Moreover, the continuing discovery of new grafts is providing new potentially interesting transplant candidates. Our purpose was to observe the morphological and functional repair effects of the co-transplantation of neural stem cell （NSC）, Schwann ceils （SCs） and poly lactide-co-glycolide acid （PLGA） on the spinal cord injury of rats.Methods A scaffold of PLGA was fabricated. NSCs and SCs were cultured, with the NSCs labeled with 5-bromodeoxyuridine, and the complex of NSC/PLGA or NSC＋SCs/PLGA were constructed. Thirty-six Wistar rats were randomly divided into three groups： group A （transplantation of PLGA）, group B （transplantation of NSC/PLGA） and group C （transplantation of NSC＋SCs/PLGA）. The 3 mm length of the right hemicord was removed under the microscope in all rats. The PLGA or the complex of PLGA-celIs were implanted into the injury site. Basso-Beattie-Bresnahan （BBB）locomotion scores, motor and somatosensory evoked potential of lower limbs were examined to learn the rehabilitation of sensory and motor function at 4 weeks, 8 weeks, 12 weeks and 24 weeks after injury. All the recovered spinal cord injury （SCI） tissues were observed with HE staining, immunohistochemistry, and transelectronmicroscopy to identify the survival, migration and differentiation of the transplanted cells and the regeneration of neural fibres at 4 weeks, 8 weeks,12 weeks and 24 weeks after injury.Results （1） From 4 weeks to 24 weeks after injury, the BBB locomotion scores of cell-transplanted groups were better than those of the non-cell-transplanted group, especially group C （P 〈0.05）. The amplitudes of the somatosensory evoked potential （SEP） and motor-evoked potential （MEP） were improved after injury in groups B and C, but the amplitude of SEP and MEP at 4 weeks was lower than that at 12 weeks and 24 weeks after injury. Compared with group B, the amplitude of SEP and MEP in group C was improved. The amplitude of SEP and MEP was not improved after injury in group A. （2） HE staining revealed the volume of the scaffold decreased and the number of cells in the scaffold increased. Newly-grown capillaries also could be seen. Immunohistochemistry staining showed the transplanted NSCs could survive and migrate until 24 weeks and they could differentiate into neurons and oligodendrocytes. The regenerated axons were observed in the scaffold-cell complex with transelectronmicroscopy. The above manifestations were more extensive in group C.Conclusions The transplanted NSC can survive and migrate in the spinal cord of rats up to 24 weeks after injury, and they can differentiate into various neural cells. Co-transplantation of cells/PLGA can promote the functional recovery of the injured spinal cord. The effect of co-transplanting NSC＋SCs/PLGA is better than transplanting NSC/PLGA alone.     

脊髓半横断损伤大鼠微囊化施万细胞移植后的组织学观察

目的:观察脊髓半横断损伤大鼠植入微囊化施万细胞(Schwann Cells,SCs)后的组织学变化。方法:制备施万细胞及微囊化施万细胞悬液,建立T10脊髓右半横断损伤的大鼠模型,并随机分为A组(单纯损伤组,50只)、B组(SCs移植组,50只)、C组(微囊化SCs移植组,50只),分别于损伤处植入吸附有10μL DMEM培养液、SCs悬液、微囊化SCs悬液的明胶海绵,采用BBB评分观察大鼠后肢运动功能恢复情况,并制备脊髓标本切片通过染色在光镜下观察其组织学变化。结果:C组BBB评分、髓鞘结构和数量的改善情况均优于A、B组(P<0.05,P<0.01)。结论:微囊具有免疫保护作用,微囊化施万细胞可更有效地促进大鼠脊髓神经元修复和轴突髓鞘化。     

指数曲线电刺激对周围神经移植的组织学影响

目的 :研究指数曲线电刺激对周围神经移植修复后神经再生的影响。方法 :将 1 2 0只Wistar成年雄性大鼠制成坐骨神经移植模型 ,随机分为A组 (对照组 )、B组 (弥可保组 )、C组(指数曲线电刺激组 ) ,给予不同的治疗 ,在不同时段观察步态、毛发、展爪反射 ,测定SFI、神经传导速度、小腿三头肌湿重等指标。结果 :指数曲线电刺激有助于神经传导的恢复 ,减慢小腿三头肌失神经的废用 ,加快SFI及神经远段变性的恢复。结论 :指数曲线电刺激有利于神经再生。     

足迹分析法评定超短波促进大鼠坐骨神经损伤后功能恢复的研究

目的:探讨超短波照射促进周围神经损伤后的功能恢复作用。方法:60只成年雌性SD大鼠制成右坐骨神经钳夹伤模型,随机分为超短波治疗组和对照组,进行足印分析。结果:超短波治疗组SFI指数在术后2周时即出现明显升高;对照组SFI指数则在术后4周时才开始升高;在2、4、8周各时间点上,治疗组SFI指数均显著高于对照组(P<0.05)。结论:超短波能促进神经损伤后的功能恢复。     

骨髓间充质干细胞对大鼠周围神经端侧吻合后神经再生的影响

目的周围神经损伤是临床常见的难题,干细胞移植治疗各种疾病已成为一种新的医学发展趋势。本实验的目的是研究大鼠MSCs移植后对大鼠周围神经端侧吻合后神经吻合口处神经轴突再生的影响。方法 50只Wistar大鼠随机分为2组,均在显微镜下制成腓神经与胫神经端侧吻合模型。1实验组：在端侧吻合术后1周尾静脉注射1×107制备好的MSCs;2对照组：不予特殊处理。分别在术后2、3、4、8、12周进行取材,对比镜下吻合口神经再生情况、测定腓神经功能指数（PFI）、测定双侧胫前肌湿重恢复率。结果术后8周及12周时实验组大鼠行走步态较对照组大鼠稳定;术后8周及12周时实验组大鼠的胫前肌湿重恢复率较对照组明显增加;大鼠神经端侧吻合标本镜下观察：实验组端侧吻合口神经芽突生长较对照组明显,神经细胞也较为丰富。结论周围神经损伤在无条件进行端端吻合修复时可采用端侧吻合的方式进行修复,MSCs可有效地促进端侧吻合后的神经再生,促进神经功能的恢复。