自体去肌浆骨骼肌的制备及其修复周围神经缺损初探

自体去肌浆骨骼肌的制备及其修复周围神经缺损初探金国华，田美玲修复周围神经缺损的非神经移植材料研究甚多，Ｆａｗｃｅｔｔ曾用化学和挤压的方法在体外主除骨骼肌肌浆，修复鼠和兔的周围神经缺损。本文将去肌浆骨骼肌的制备及其结果和用其修复大鼠坐骨神经１０ｍｍ缺损...     

化学去细胞同种异体神经移植的实验研究

目的探讨化学去细胞同种异体神经的免疫学特性及其修复灵长类动物神经缺损的能力。方法(1)分别获取SD大鼠的坐骨神经和猕猴的正中神经,经4.0%TritonX-100和72mM脱氧胆酸钠溶液重复消化处理,制备SD大鼠和猕猴的化学去细胞神经。在Wistar近交系大鼠的皮下植入化学去细胞同种异体神经和新鲜SD近交系大鼠的神经,检测植入部位组织内T淋巴细胞及其亚群的浸润程度。(2)用化学去细胞同种异体神经移植修复猕猴5cm长的正中神经缺损,通过功能观察、神经电生理检测、神经再生组织学、S-100免疫组织化学染色和运动终板染色观察神经移植后的效果。结果化学去细胞异体神经植入体内后,移植神经周围组织浸润的CD3+、CD4+和CD8+细胞数量明显少于新鲜同种异体神经移植的对照组。去细胞同种异体神经可以修复猕猴5cm长的周围神经缺损,在移植术后5个月患肢功能均有不同程度的改善。移植术后6个月神经电生理检测显示,刺激可以通过移植段神经到达远端的效应器,在神经支配区肌肉可以记录到运动诱发电位,跨过移植神经段的传导速度已达(40.5±6.8)m/s。神经再生组织学检查显示有再生的神经纤维通过移植段神经,在去细胞异体神经移植段内分布纵行排列的雪旺细胞,在支配区肌肉可以检测到重建的运动终板。结论化学去细胞同种异体神经的抗原性明显降低,可修复高等哺乳类动物的周围神经损伤。     

冻干去细胞同种异体神经种植类许旺细胞修复坐骨神经缺损的实验研究

目的研究冻干去细胞异体神经修复大鼠坐骨神经缺损的效果。方法50只成年雌性DA大鼠随机分为5组，每组10只，分别用5种移植物桥接大鼠1．5cm坐骨神经缺损。A组：冻干去细胞异体神经种植类许旺细胞移植组；B组：冻干去细胞异体神经移植组；C组：去细胞异体神经移植组；D组：新鲜异体神经移植组；E组：自体神经移植组。术后4、24周通过大体观察、神经电生理、肌肉湿重及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果术后24周A、E组间差异无统计学意义（P〉0．05），A、E组的各项指标均优于B、C、D组（P〈0．05或P〈0．01）。结论冻干化学去细胞神经是良好的神经移植替代材料。     

硫酸软骨素酶处理的异体去细胞神经修复周围神经缺损的实验研究

目的 评价应用硫酸软骨素酶ABC降解硫酸软骨素蛋白多糖的去细胞异体神经修复神经缺损的效果.方法 经硫酸软骨素酶ABC处理后化学去细胞异体神经修复大鼠15 mm坐骨神经缺损为实验组(A组),对照组为未经酶处理的化学去细胞异体神经移植组(B组)和自体神经移植组(C组).术后8、12周进行痛觉刺激试验.术后12周进行肌电图检查,检测小腿三头肌湿重和有髓神经纤维密度,评价其修复周围神经缺损的效果.结果 术后8周,A组痛觉恢复率高于B、C组.术后12周A、C组痛觉均恢复,B组部分大鼠痛觉恢复.术后12周,A、C组小腿三头肌湿重差异无统计学意义,移植段神经5mm处有髓神经纤维密度A组高于C组,移植段神经10 mm处有髓神经纤维密度差异无统计学意义,移植段神经以远5 mm处胫神经平面有髓神经纤维密度A组略低于C组.肌电图动作电位波幅A组和C组无明显差别.神经传导速度A组低于C组.A、C组上述指标均优于B组.结论 经硫酸软骨素酶ABC处理的去细胞神经,有利于轴突进人生长,缩短靶器官神经重新支配时间,提高修复效果.     

优化法去细胞大鼠神经同种异体移植修复坐骨神经缺损

[目的]以优化法去细胞大鼠神经移植,修复同种异体坐骨神经缺损,观察术后动物的免疫排斥、早期功能恢复及神经再生情况。[方法]以优化去细胞方法处理新鲜取材的成年SD大鼠坐骨神经,移植修复同种异体1.0cm坐骨神经缺损,以自体神经和新鲜异体神经移植为对照,术后1个月行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查,观察动物在功能恢复、免疫排斥及神经再生方面的情况。[结果]自体神经和去细胞异体神经移植组动物的坐骨神经功能指数无显著差异(P>0.05),大体观察均可见神经连续性良好。电生理检测表明2组动物移植神经均已恢复电传导能力,在传导速度(CV)上无显著差异(P>0.05),但均未达到正常神经水平(P<0.05)。组织学观察则显示2组再生神经纤维均已长入移植段远端。S-100免疫组化显示两者在雪旺氏细胞数、形态和排列等方面无明显差异。2组在CD8 T细胞和巨噬细胞免疫组化染色阳性面积百分比上差异无统计学意义(P>0.05)。计算移植神经中段轴突密度后表明两者无显著差异(P>0.05),但都比正常神经小(P<0.05),比新鲜异体神经移植组大(P<0.05)。[结论]优化去细胞神经移植组与自体神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面无显著差异。优化法去细胞神经在移植修复同种异体神经缺损时,可以达到免疫耐受,其早期功能恢复和神经再生情况良好,在修复周围神经缺损时可以作为自体神经移植的一种替代疗法。     

构建猕猴组织工程化周围神经的实验研究

目的评价组织工程化周围神经修复猕猴4cm尺神经缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用6种移植物桥接4cm尺神经缺损。A组:自体BMSCs 去细胞同种异体神经支架;B组:自体SCs 去细胞同种异体神经支架;C组:自体BMSCs PLGA支架导管;D组:去细胞同种异体神经支架;E组:PLGA支架导管;F组:自体神经。通过功能学、神经电生理学及组织学研究评价各自的实验效果。结果A、B、C三种组织工程化神经实验组,术后6个月神经电生理和组织学检查,能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组(F组)相比差异无显著性意义(P>0.05),但分别大于未加细胞的支架组(D、E组),差异有显著意义(P<0.05)。结论用自体源SCs或BMSCs作种子细胞与去细胞同种异体神经支架,或自体源BMSCs与PLGA支架导管构建不同的组织工程化周围神经,修复猕猴4cm尺神经缺损均取得较好的效果。     

异种神经基膜管桥接周围神经缺损的初步研究

目的探索经化学萃取的去细胞神经基膜管支架用于异种移植桥接周围神经缺损的可行性.方法 SD大鼠 30只,随机分为5组,分别制作预溃变2周(溃变支架桥接组)和新鲜的兔胫神经进行化学萃取,形成去细胞神经基膜管支架(异体支架桥接组),兔新鲜胫神经束(异种神经移植组);切取自体神经15 mm原位移植(自体神经移植组),修复大鼠坐骨神经长15mm 的缺损.坐骨神经切断后不作移植修复,为对照组.术后6个月行坐骨神经功能指数(SFI)测定和疼痛试验,用美蓝染色、免疫组织化学、透射电镜等方法对吻合口、移植体中央和远侧神经段的再生神经纤维进行形态学观察,并对再生有髓纤维的数量、直径及髓鞘厚度等进行量化分析.结果术后3个月,仅有溃变支架桥接组、支架桥接组和自体神经移植组动物患肢行走逐渐恢复.6个月时,针刺患足可引起背部肌肉收缩和下肢屈曲反应;术后6个月行SFI检测,溃变支架桥接组为-36.2%±9.7%,支架桥接组为-30.7%±6.8 %,自体神经移植组为-33.9%±11.3%,各组间比较无统计学意义(P>0.05).组织学观察见溃变支架桥接组与支架桥接组移植体中央横切面再生神经呈微束状分布.透射电镜观察见再生神经纤维具有正常的形态和结构.图像分析结果显示溃变支架桥接组再生有髓纤维的数量和直径均达到自体神经移植组的水平(P>0.05);但溃变支架桥接组再生纤维的髓鞘厚度明显小于自体神经移植组(P<0.05).结论用化学方法萃取的兔神经基膜管支架能移植于大鼠,成功桥接周围神经缺损,为应用动物神经修复人体周围神经缺损提供了实验依据.     

异种化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损的功能评价

[目的]评价异种化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损后神经功能恢复,从而为临床应用去细胞异种神经移植修复神经缺损提供更为充分的理论依据.[方法]雄性Wistar大鼠15只,致左侧坐骨神经1 cm缺损,以等粗兔化学去细胞神经移植修复.每2周测定坐骨神经指数,移植后4个月动物麻醉后暴露移植段神经,刺激近侧神经干、于同侧胫后肌群记录运动诱发电位,之后取移植段神经切片后行HE组织化学及NF-160免疫组织化学染色. [结果]去细胞异种神经移植物未被宿主排斥,大量神经纤维长入移植物,神经电生理及坐骨神经指数显示宿主坐骨神经功能有部分恢复.[结论]去细胞异种神经移植可以作为修复周围神经缺损的一种有效方法.     

用去细胞同种异体神经构建猕猴组织工程化神经的实验研究

目的评价用自体源骨髓间充质干细胞(MSCs)或许旺细胞(SCs)作种子细胞,与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴尺神经4cm缺损的实验效果,为临床研究提供资料。方法分别用4种移植物桥接猕猴4cm尺神经缺损。A组:种植自体MSCs的去细胞同种异体神经;B组:种植自体SCs的去细胞同种异体神经;C组:去细胞同种异体神经;D组:自体神经移植。通过功能学、神经电生理学及组织学指标评价各组修复神经缺损的效果。结果A、B组术后6个月能引起小鱼际肌群产生复合动作电位的潜伏期、复合动作电位的最大振幅、神经传导速度和再生的神经纤维数目与自体神经移植组相比无统计学意义(P>0.05);但A、B、C、D组分别与C组相比,差异有统计学意义(P>0.05)。结论用自体源SCs或MSCs作种子细胞,与去细胞同种异体神经构建的组织工程化外周神经修复猕猴4cm尺神经缺损,均能取得与自体神经移植相近的效果。     

基膜管－自体神经嵌合体修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的 寻找一种简单有效,修复长段周围神经缺损的方法.方法 在两段同种异体大鼠的脱细胞坐骨神经之间置入一段自体坐骨神经,形成基膜管-自体神经嵌合体,与单纯基膜管、硅胶管带自体神经、单纯硅胶管、自体神经等其他桥接物比较修复神经缺损的效果.结果 分组动物实验显示基膜管-自体神经嵌合体组的神经功能、形态恢复最佳.结论 基膜管-自体神经嵌合体修复周围神经缺损简单有效,并能延长修复长度,在修复长段周围神经缺损方面有着良好的应用前景.     

Repair of nerve defect with acellular nerve graft supplemented by bone marrow stromal cells in mice

The acellular nerve graft that can provide internal structure and extracellular matrix components of the nerve is an alternative for repair of peripheral nerve defects. However, results of the acellular nerve grafting for nerve repair still remain inconsistent. This study aimed to investigate if supplementing bone marrow mesenchymal stromal cells (MSCs) could improve the results of nerve repair with the acellular nerve graft in a 10-mm sciatic nerve defect model in mice. Eighteen mice were divided into three groups (n = 6 for each group) for nerve repairs with the nerve autograft, the acellular nerve graft, and the acellular nerve graft by supplemented with MSCs (5 × 10(5)) fibrin glue around the graft. The mouse static sciatic index was evaluated by walking-track testing every 2 weeks. The weight preservation of the triceps surae muscles and histomorphometric assessment of triceps surae muscles and repaired nerves were examined at week 8. The results showed that the nerve repair by the nerve autografting obtained the best functional recovery of limb. The nerve repair with the acellular nerve graft supplemented with MSCs achieved better functional recovery and higher axon number than that with the acellular nerve graft alone at week 8 postoperatively. The results indicated that supplementing MSCs might help to improve nerve regeneration and functional recovery in repair of the nerve defect with the acellular nerve graft.     

Improvement of peripheral nerve regeneration in acellular nerve grafts with local release of nerve growth factor

Previous studies have demonstrated the potential of growth factors in peripheral nerve regeneration. A method was developed for sustained delivery of nerve growth factor (NGF) for nerve repair with acellular nerve grafts to augment peripheral nerve regeneration. NGF‐containing polymeric microspheres were fixed with fibrin glue around chemically extracted acellular nerve grafts for prolonged, site‐specific delivery of NGF. A total of 52 Wister rats were randomly divided into four groups for treatment: autografting, NGF‐treated acellular grafting, acellular grafting alone, and acellular grafting with fibrin glue. The model of a 10‐mm sciatic nerve with a 10‐mm gap was used to assess nerve regeneration. At the 2nd week after nerve repair, the length of axonal regeneration was longer with NGF‐treated acellular grafting than acellular grafting alone and acellular grafting with fibrin glue, but shorter than autografting (P < 0.05). Sixteen weeks after nerve repair, nerve regeneration was assessed functionally and histomorphometrically. The percentage tension of the triceps surae muscles in the autograft group was 85.33 ± 5.59%, significantly higher than that of NGF‐treated group, acellular graft group and fibrin‐glue group, at 69.79 ± 5.31%, 64.46 ± 8.48%, and 63.35 ± 6.40%, respectively (P < 0.05). The ratio of conserved muscle‐mass was greater in the NGF‐treated group (53.73 ± 4.56%) than in the acellular graft (46.37 ± 5.68%) and fibrin glue groups (45.78 ± 7.14%) but lower than in the autograft group (62.54 ± 8.25%) (P < 0.05). Image analysis on histological observation revealed axonal diameter, axon number, and myelin thickness better with NGF‐treated acellular grafting than with acellular grafting alone and acellular grafting with fibrin glue (P < 0.05). There were no significant differences between NGF‐treated acellular grafting and autografting. This method of sustained site‐specific delivery of NGF can enhance peripheral nerve regeneration across short nerve gaps repaired with acellular nerve grafts. © 2009 Wiley‐Liss, Inc. Microsurgery, 2009.     

犬化学去细胞神经同种异体移植的早期观察

目的：以化学去细胞同种异体神经，移植修复犬粗大神经的长段缺损，观察早期功能恢复及神经再生。方法：去细胞神经移植组和自体神经移植组各3犬，分别桥接坐骨神经5.0cm缺损。术后3个月观察其运动功能及神经再生。结果：实验组和对照组在术后功能恢复；移植段内新生神经纤维、新生血管及许旺细胞；吻合口远端有髓神经纤维等方面非常相似。结论：化学去细胞神经作为同种异体神经移植物，在修复粗大和长段神经缺损时不会被宿主排斥和吸收，其早期功能恢复及神经再生与自体神经移植无明显差别。     

犬化学去细胞神经同种异体移植的实验研究

目的以化学去细胞同种坐骨神经移植修复犬坐骨神经的长段缺损，观察其功能恢复及神经再生。方法15犬分成去细胞同种神经组(实验组)6犬、自体神经组(对照组Ⅰ)6犬、新鲜同种神经组(对照组Ⅱ)3犬。右侧坐骨神经造成5．0cm长缺损，以上述三种移植物桥接修复。术后6个月行步态分析、神经电生理及神经再生观察。结果实验组和对照组Ⅰ在运动功能恢复，踝关节运动步态，小腿二头肌运动诱发电位、感觉诱发电位，移植段内新生轴突、血管及雪旺细胞，远端胫神经内有髓神经纤维及靶肌肉运动终板等方面非常相似。对照组Ⅱ神经功能始终无恢复，移植段被吸收。结论化学去细胞同种神经移植物修复犬粗大长段神经缺损时不会被宿主排斥和吸收，其近期功能恢复及神经再生与自体神经移植无明显差别。     

Nerve regeneration and functional recovery after a sciatic nerve gap is repaired by an acellular nerve allograft made through chemical extraction in canines

The purpose of the present study is to test whether chemically extracted acellular nerve segments can be used to repair the sciatic nerve gap. Fifteen canines were divided into acellular nerve allografting group (ANG, six canines), autografting group (AG, six canines), and fresh nerve allografting group (FNG, three canines). The sciatic nerves on the right side of the animals were exposed, and 5-cm-long segments of the nerves were removed from the midthigh level and replaced by the three types of grafts. At 6 months after grafting, all animals in the ANG and AG had similar patterns of right posterior limb gait cycle and right ankle movements. Moreover, the animals in the ANG and AG had similar nerve regeneration, with dense regeneration fibers in the distal tibial nerves and obvious motor end plates in the target muscle. But in FNG, the area surrounding the graft was scarred as the result of inflammation, and there was a brown central area where there was little nerve regeneration. All of the above shows that chemical acellular nerve allografting can be used to repair a gap as long as 5 cm in the continuity of the sciatic nerve in canines and has similar effects to autografting.     

优化法去细胞兔神经移植修复大鼠坐骨神经缺损

目的 以优化法去细胞兔臂丛神经，移植修复大鼠坐骨神经缺损，观察免疫排斥情况、早期功能恢复及神经再生情况。方法 以优化法处理新鲜取材的新西兰大白兔臂丛神经分支，移植修复成年sD大鼠坐骨神经1．0cm缺损，分别于术后1个月及3个月行功能评价、电生理和组织学检查，观察免疫排斥、功能恢复及神经再生情况。结果 实验组与自体神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面无显著差异，却明显优于新鲜兔神经移植组。3个月取材时的神经再生及功能恢复情况优于1个月取材时。结论 优化法去细胞神经在移植修复异种神经缺损时，可以达到免疫耐受，其早期功能恢复和神经再生情况良好，在修复周围神经缺损时有望作为自体神经移植的一种替代疗法。     

犬化学去细胞神经同种异体移植的神经再生研究

目的 观察犬去细胞异体神经移植后近期神经再生的情况。谅15只家犬分成实验组（去细胞神经移植组，6只犬），对照组I（自体神经移植组，6只犬），对照组Ⅱ（新鲜异体神经移植组，3只犬），制成犬坐骨神经缺损5.0cm的模型，以上述3种神经移植物桥接修复。术后6个月行神经再生的组织学观察。结果 实验组移植段内有大量的新生神经纤维，新生血管及雪旺细胞；远端胫神经内出现大量的有髓神经纤维；靶肌肉运动终板的数量，形态及分布均良好。实验组和对照组I非常相似。结论 化学去细胞神经作为同种异体神经移植物，在修复术的粗大和长段神经缺损时不会被宿主排斥和吸收，其神经再生与自体神经移植无明显差别。     

同种异体神经复合体修复兔坐骨神经缺损的研究

目的 用种植胎兔雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体修复兔缺损的坐骨神经,观察坐骨神经再生及功能恢复.方法 健康成年新西兰白兔48只,体质量1.5-2.0 kg,随机分成2组.两组动物均切除一段坐骨神经,造成2.0 cm长的缺损.实验组:用种植胎兔雪旺细胞的同种异体神经复合体修复坐骨神经.对照组:仅用去细胞同种异体神经修复.术后4、8、16周进行大体观察、标本光镜和电镜观察且进行量化分析、肌湿重检测.结果 手术区局部均未出现明显的排斥反应,实验组足部溃疡愈合情况优于对照组,实验组再生神经纤维数目、有髓神经纤维轴突直径、髓鞘厚度4、8、16周分别为(906.25±30.68,1726.25±51.89,2825.13±22.79)、(5.35±0.62,5.46±0.38,5.59±0.80),(1.65±0.37,1.75±0.41,1.83±0.49)均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).小腿三头肌湿重于术后4周两组间差异无统计学意义(P>0.05),实验组术后8、16周分别为(5.62±0.99,7.38±0.26)恢复优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 种植雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体对神经再生及功能恢复有更好的促进作用.     

无细胞的异体神经修复鼠坐骨神经缺损

目的 通过化学萃取同种异体神经,去除髓鞘和雪旺细胞,形成无细胞基膜管后桥接鼠坐骨神经缺损,研究神经再生效果。方法 正常鼠坐骨神经用非变性生物剂处理后得到无细胞的基膜管,桥接鼠坐骨神经20mm缺损。实验分3组:无细胞基膜管移植组(A组),自体神经移植组(B组)和异体神经移植组(C组)。术后进行肌电图、光镜、电镜及图象分析仪检查。结果 A组再生神经有大量轴突通过移植体,术后2个月电生理检测再生神经的潜伏期及波幅低于B组(P<0.05),术后3个月2组差异无显著意义。髓鞘厚度在术后3个月时亦低于B组,差异有显著意义(P<0.05)。轴突直径及数目两组无差异。C组因无神经再生,结果无法测量。结论 这种无细胞基膜管移植体能支持轴突的生长和雪旺细胞的迁移,是一种良好的神经移植替代材料。