慢性乙型肝炎患者肝组织中螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因及HP特异性基因分析

目的对慢性乙型肝炎患者肝组织进行螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因及幽门螺杆菌（HP）特异性基因检测,探讨螺杆菌在慢性乙型肝炎发生、发展中的作用。方法对56例行肝穿刺活检的慢性乙型肝炎患者的肝组织应用针对螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因的通用引物进行基因扩增及微需氧分离培养,并对螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因阳性者进一步应用HPcagA、vacA和glmM基因特异引物进行扩增。结果对56例慢性乙型肝炎患者的肝组织DNA应用螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因通用引物进行扩增,共有35例患者的肝组织中发现了螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因,其中肝硬化组（72.7%）和原发性肝癌组（87.5%）的检出率明显高于慢性肝炎组（42.3%,P〈0.05）,而慢性肝炎组中随着炎症评分的增加,检出率亦增加。对这35例螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因阳性的肝组织DNA进一步应用HPcagA、vacA和glmM基因特异性引物进行扩增,结果证实有21例为HPDNA。所有肝组织经微需氧分离培养均未发现可疑菌落生长。结论慢性乙型肝炎患者肝组织中除存在HPDNA外,可能还存在其他螺杆菌DNA。螺杆菌在慢性乙型肝炎向肝硬化和肝癌的发展中可能发挥致病作用。     

胆囊结石病患者胆道系统的螺杆菌DNA

目的　近来 ,螺杆菌属细菌与胆道疾病的关系日益受到重视 ,并在胆固醇结石中检测到细菌DNA。为进一步研究胆囊结石病与螺杆菌感染的关系 ,对胆囊结石患者的胆石、胆汁 ,胆囊黏膜行螺杆菌 16SrRNA基因检测。方法　研究对象为 2 9例胆囊结石病患者。胆汁和胆囊黏膜标本接种于需氧、厌氧和非选择性微需氧培养基培养。利用两对特异性的螺杆菌 16SrRNA基因引物对患者的胆石、胆汁、胆囊黏膜标本行nested PCR扩增 ,利用特异的螺杆菌DNA探针 ,对PCR产物行Southern杂交检测 ,并对 1例胆囊黏膜PCR产物直接测序 ,将测序结果与基因库中的标准螺杆菌株序列作比较 ,采用Neighbor joining法绘制种系发生树。氧化酶法测定胆石胆固醇含量。 结果　胆汁和胆囊黏膜标本经需氧、厌氧、微需氧培养 ,未发现螺杆菌生长。 2 9例胆石标本nested PCR分析 ,2例阳性 (6 .9% ) ,2 3例胆汁中 9例阳性 (39.1% ) ,2 9例胆囊黏膜中 2 2例阳性 (75 .9% )。PCR阳性的标本Southern杂交均为阳性。 1例胆囊黏膜标本的PCR扩增产物纯化后直接测序 ,证实为螺杆菌属细菌。 2 9例胆囊结石的平均胆固醇含量为 (6 2 .2± 3.8) % ,PCR结果阳性的 2例胆石为胆固醇为主的混合性结石。结论　螺杆菌DNA存在于胆囊结石、胆汁及胆囊黏膜中 ,胆道系统螺杆菌感     

肝脏疾病与肝特异性自身抗体

许多肝脏疾病的发生、发展与自身免疫反应有关,血清中常出现多种自身抗体。1965年Walker等发现原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者血中存在抗线粒体抗体。同年Johnson应用免疫荧光间接法在狼疮样肝炎患者血中检查出抗平滑肌抗体。1972年Me-yer zum Buschenfelde报道,他在60年代从人肝细胞匀浆中提取出一种肝特异性抗原,肝特异性脂蛋白(LSP),它在自身免疫性疾病的发生中有重要意义。1979年他又     

原发性胆汁性肝硬化患者自身抗体检测及其临床意义

目的 探讨血清自身抗体对原发性胆汁性肝硬化(PBC)的诊断及其临床意义.方法 对PBC患者采用间接免疫荧光、免疫印迹法检测抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)、抗线粒体抗体(AMA),并对AMAM2亚型及其抗可溶性肝抗原/肝胰抗原(SLA/Le)、抗肝肾微粒体Ⅰ型(LKM-1)和抗肝特异性胞浆Ⅰ型抗体(LC-1)等肝脏疾病相关的自身抗体进行检测.结果 PBC患者自身抗体以AMA和AMAM2亚型为主.其阳性率分别为96.5%和93.1%.患者的抗体滴度均大于1:100,其中有8例出现ANA和SMA,1例出现AMA和SLA/LP同时阳性,表现与Ⅰ型和Ⅲ型自身免疫性肝炎重叠,另有19例AMAM2阳性患者进行肝穿病理检查时,12例(63.7%)患者病理提示符合PBC诊断.结论 自身抗体对PBC有诊断意义,注重自身抗体的检测对明确自身免疫性肝病有重要的临床意义.     

我国不同品系实验室小鼠肝螺杆菌感染状况调查

目的 调查我国不同地域不同品系实验室小鼠中是否存在肝螺杆菌(Hh)感染,为进一步探讨Hh在小鼠慢性肝炎、肝细胞癌以及下消化道肿瘤中的作用奠定基础.方法 收集国内不同地域的114只不同品系小鼠,其中C57BL/6小鼠39只,BABL/C小鼠43只,SCID小鼠14只,C3H小鼠18只.分别用ELISA法检测小鼠血清Hh抗体和粪便Hh抗原;PCR法检测粪便螺杆菌菌属特异性16SrRNA基因和Hh特异性16SrRNA基因;粪便螺杆菌分离、培养及鉴定等方法分析Hh在小鼠中的感染状况.上述方法中有一项阳性即判断为存在Hh感染.结果 在114只小鼠中有25只感染了螺杆菌(21.9%),其中44.0%(11/25)为Hh感染,并以SCID小鼠和C3H小鼠Hh感染率较高.同时,PCR检测结果显示,在其余56.0%(14/25)的螺杆菌感染小鼠中发现存在其他螺杆菌感染.结论 来自我国不同地域不同品系实验室小鼠中除存在Hh感染外,可能还存在其他螺杆菌的感染.     

原发性肝癌组织中螺杆菌感染状况分析

目的对原发性肝癌患者肝组织内螺杆菌菌属特异性16S rRNA基因检测,分析螺杆菌感染与原发性肝癌发生、发展的关系。方法对36例原发性肝癌患者的肝组织应用螺杆菌菌属特异性16S rRNA基因的通用引物进行基因扩增及微需氧分离培养。结果 36例原发性肝癌患者的肝癌组织DNA中,有25例发现了螺杆菌菌属特异性16S rRNA基因,而23例正常肝组织仅有3例阳性,两组比较有显著差异(P<0.001)。对两组患者肝组织微需氧分离培养均未发现可疑菌落生长。结论原发性肝癌患者的肝组织中存在螺杆菌感染。螺杆菌在原发性肝癌的发展过程中可能发挥重要作用。     

20例原发性胆汁性肝硬化自身抗体和免疫功能分析

背景:一般认为血清抗线粒体抗体M2亚型(AMA-M2)阳性是诊断原发性胆汁性肝硬化(PBC)的必备标准,但仍存在一定比例的AMA-M2阴性PBC患者。因此,了解PBC患者的自身抗体谱和免疫功能有助于PBC的诊断。目的:分析PBC患者的自身抗体和免疫功能,探讨其对PBC的诊断价值。方法:连续纳入确诊的PBC患者20例,以免疫印迹法检测肝特异性自身抗体,以间接免疫荧光法检测肝非特异性自身抗体,以免疫散射比浊法检测免疫球蛋白和补体;13例患者行肝穿刺活检组织病理学检查。结果:本组PBC患者女性多于男性(17:3),年龄39～75岁,平均57.2岁±2.1岁。肝特异性自身抗体中AMA-M2阳性最为多见(40%),其次为核点蛋白SP100抗体(15%)、肝肾微粒体1型(LKM-1)抗体(15%)、GP210抗体(10%)和肝细胞溶质抗原Ⅰ型(LC-1)抗体(10%);肝非特异性自身抗体以抗核抗体(ANA)检出率最高(70%);IgA、IgM和IgG升高者均占50%。结论:自身抗体,尤其是血清AMA-M2阳性是诊断PBC的重要依据之一,但多种蛋白在PBC病程中均有表达,且临床上有相当比例的AMA-M2阴性PBC患者。其他肝特异性自身抗体,如SP100抗体、GP210抗体等以及临床特点和肝穿刺活检对AMA-M2阴性PBC的诊断有重要价值。     

肝癌患者肝组织中螺杆菌感染的研究

目的　探讨螺杆菌感染是否与人类肝癌的发生相关。方法　选取经病理诊断的肝癌组织及癌旁组织 2 0例为研究对象 ,非肝癌组织 16例作对照 ,采用聚合酶链反应 (PCR)扩增螺杆菌 16SrRNA基因 (16SrDNA)检测螺杆菌 ,扩增产物经Southern杂交证实 ,并对部分标本的PCR产物进行测序及同源比较。阳性者再扩增幽门螺杆菌 (H pylori)的特异基因 (2 6 -kDa蛋白 )和相关功能基因 (cagA、vacA、glmM、rps4 )来验证是否为该菌。结果　 4 0 % (8/ 2 0 )的肝癌组织中发现螺杆菌 16SrD NA存在 ,其对应的癌旁组织大部分亦阳性 (7/ 8) ,而非肝癌组无一例阳性 (P <0 0 1)。所有PCR产物用Southern杂交得到证实。 6例测序及同源比较显示 ,肝癌组织中的螺杆菌 16SrDNA序列与H pylori的 16SrDNA序列有 98 5 %～ 99 0 %的同源性。阳性标本中 2 6 -kDa基因大部分亦阳性 (7/ 8) ,但仅 2例扩增出cagA基因 ,2例扩增出glmM基因 ,一直未扩增出vacA基因和rps4基因。 结论　肝癌患者肝组织中螺杆菌感染率较高 ,它与肝癌的发生可能存在某种联系。     

自身免疫性肝炎临床、免疫学及病理学特征分析142例

目的:了解自身免疫性肝炎(AIH)患者的临床、免疫学和病理学特点.方法:回顾性分析142例AIH患者的一般资料、临床特点、生化检查、免疫学检查和自身抗体的结果.结果:142例AIH患者男女比例1∶3.73,发病年龄为52.57±14.85岁,首次发病诊断分别为慢性肝炎(42.3%)、急性肝炎(34.5%)、重型肝炎(9.9%)和肝硬化(13.4%);临床表现主要为乏力(97.2%)、纳差(84.5%)、黄疸(84.5%)、发热(19.0%)、恶心(14.1%)和腹胀(12.7%)等.生化检查显示,ALT、AST、TBIL水平升高.AIH亚型中Ⅰ型多见(92.2%),Ⅱ型少见(6.3%),Ⅲ型罕见,仅1例.AIH重叠原发性胆汁性肝硬化(PBC)占14.1%,合并其他自身免疫性疾病占17.6%.免疫学检测显示,γ球蛋白和IgG升高明显.自身抗体检测出不同类型21种,以抗核抗体(82.4%),抗平滑肌抗体(19.7%),抗线粒体抗体(19%),抗SSA抗体(9.2%)多见.肝活检19例,均可见不同形式的肝细胞变性,坏死和浆细胞浸润,17例患者存在不同程度的纤维增生,1例有胆管轻度破坏.结论:AIH女性多见,发病和临床表现无特异性,生化检查以肝细胞损伤为主,Ⅰ型AIH最多见,检出自身抗体种类较多,但特异性和敏感性较高的自身抗体尚待进一步研究.肝组织学改变主要为不同程度的肝细胞变性,坏死,浆细胞浸润和纤维增生.胆管破坏少见.     

一种检测肝螺杆菌套式PCR方法的建立及临床应用

目的:建立一种敏感性高、特异性强的检测肝螺杆菌(Helicobacter hepaticus,H.hepaticus)的套式PCR方法并对其临床应用进行探讨.方法:本研究基于9种H.hepaticus亚种的16S rRNA基因设计筛选出1套套式引物(2条内引物、2条外引物),优化反应条件后,通过模拟粪便和胆汁标本、相关细菌、动物模型标本和临床标本的检测对该套式PCR方法的敏感性、特异性进行评估.结果:在模拟粪便和胆汁标本中,该方法检测H.hepaticus的最低检出浓度达到102C F U/m L.幽门螺杆菌、胆螺杆菌、空肠弯曲菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌检测结果均为阴性.本研究建立了3例感染肝螺杆菌的SPF级Balb/c小鼠模型.该方法在3例模型的粪便和盲肠标本及2例模型的肝脏标本中检测出H.hepaticus.10例胆石病患者中,该法在2例患者的胆囊胆汁、胆囊黏膜和粪便标本中检测出有H.hepaticus临床标本的检测中,PCR检测方法、医疗干预和标本的类型及处理可能都会影响检测的结果.结论:本研究建立的套式P C R方法,敏感性高、特异性强,可以用于小鼠和人的H.hepaticus感染.H.hepaticus感染可能和人胆石病有关.PCR检测方法、医疗干预和标本的类型及处理可能都会影响临床标本的检测结果.     

肝细胞癌组织中Cyr61、VEGF和HSP27的表达及意义

目的观察富半胱氨酸蛋白61（Cyr61）、血管内皮生长因子（VEGF）和热休克蛋白27（HSP27）在肝细胞癌（HCC）中的表达,分析其与HCC病理学特征和转移的关系。方法采用免疫组化SP法分别检测34例HCC患者肝癌组织和癌旁肝组织中的Cyr61、VEGF和HSP27表达情况,并与HCC患者的临床、病理学特征进行相关性分析。结果VEGF和HSP27在肝癌组织中的表达显著高于癌旁组织（P〈0．05）,Cry61在癌旁组织中的表达显著高于肝癌组织（P〈0．05）;HCC转移者的Cyr61、VEGF和HSP27阳性表达率明显高于无转移者（P〈0．06）。结论Cyr61、VEGF和HSP27的表达与HCC转移密切相关;联合检测Cyr61、VEGF和HSP27的表达情况对判断HCC转移和预后有—定的临床价值。     

Helicobacter species sequences in liver samples from patients with and without hepatocellular carcinoma

AIM: Only a minority of patients carrying a defined viral aetiologic agent develop cirrhosis and ultimately hepatocellular carcinoma (HCC), the mechanism underlying the worsening is still undefined. Experimental infection by Helicobacter hepaticus in mice causes chronic hepatitis and HCC and recently, more Helicobacter species (Helicobacter spp.) have been detected in the liver of patients suffering from cholestatic diseases and HCC arising from non-cirrhotic liver. We investigated whether Helicobacter spp. sequences could be detected in the liver of patients with cirrhosis and HCC compared to subjects with metastasis to liver from colon cancer. METHODS: Twenty-three liver samples from patients operated upon for HCC superimposed on hepatitis C virus (HCV)-related cirrhosis and 6 from patients with resected metastases from colorectal cancer, were tested by polymerase chain reaction for presence of genomic 16S rRNA of Helicobacter genus using specific primers. DNA sequencing and cag A gene analysis were also performed. RESULTS: Genomic sequences of Helicobacter spp. were found in 17 of 20 (85%) liver samples from patients with HCC and in 2 of 6 samples from patients with liver metastasis. In three samples of the first group the result was uncertain. H pylori was revealed in 16 out of 17 positive samples and Helicobacter pullorum in the other. CONCLUSION: Helicobacter spp., carcinogenic in mice, were found at a higher frequency in the liver of patients with HCV-related cirrhosis and HCC than those in patients without primary liver disease.     

Study on the association of Helicobacter species with viral hepatitis-induced hepatocellular carcinoma

Helicobacter species are important pathogens and previous studies in mice suggested a link between colonization by Helicobacter hepaticus (H. hepaticus) and hepatocellular carcinoma (HCC). This study aimed at corroborating this potential link in human patients. We used a sensitive and specific Helicobacter ssp PCR assay to screen stool samples from a collective of patients with viral-induced HCC (hepatitis B or hepatitis C) and a control group for presence of Helicobacter ssp DNA. Although retrieving DNA of H. pylori and H. canadensis from stool samples of non-HCC patients, we found no evidence indicating the presence of H. hepaticus in HCC-patients with chronic hepatitis B or hepatitis C. Interestingly we found H. canadensis in a stool sample of a patient presenting with diarrhea. Taken together, our data argue against a pathogenic role of H. hepaticus in viral-induced HCC. Yet, our results do not exclude a role of H. hepaticus in those HCC cases caused by other carcinogens, such as aflatoxin. Moreover, we speculate that H. canadensis might be a novel gastrointestinal pathogen.     

组织芯片检测肝肠钙粘连蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义

目的研究肝肠钙粘连蛋白（LI—cadherin）在肝癌组织中的表达以及与肝癌的发生发展和临床病理特征之间的相关性。方法采用免疫组织化学sP法检测70例不同类型肝癌组织和5例正常肝组织标本中LI—cadherin的表达情况,并结合临床资料和相关病理参数进行统计分析。结果70例肝癌组织中LI—cadherin阳性表达39例,总阳性率为55．7％,5例正常肝组织中未见阳性表达;LI—cadherin的表达与年龄、性别、肿瘤分化程度以及有无远处转移无关（P〉0．05）,而与淋巴结转移及血管侵犯密切相关（P〈0．05）。结论LI—cadherin的表达与肝癌的发生、转移和浸润有关,LI—cadherin可能成为诊断肝癌发生、转移及临床分期的新生物学标志物,对于提高临床治疗效果具有指导意义。     

肝细胞癌组织中信号素3F 蛋白表达变化及其与患者预后的关系

目的：探讨肝细胞癌（HCC）组织中信号素3F（SEMA3F）蛋白表达与患者预后的关系。方法采用Western blot法检测32例HCC患者手术切除的HCC组织（ HCC组）和相应癌旁肝组织（对照组）标本中的SEMA3F蛋白表达,分析SEMA3F蛋白表达水平与HCC临床病理特征、复发转移及预后的关系。结果 HCC组及对照组SEMA3F蛋白表达阳性率分别为84％、97％,HCC组SEMA3F蛋白表达量低于对照组（P＜0．05）。肿瘤有包膜者SEMA3F蛋白表达量高于无包膜者,肿瘤为单个结节者表达量高于多个结节者（P均＜0．05）。 HCC组有、无肝硬化者的SEMA3F蛋白表达量差异无统计学意义。15例SEMA3F蛋白低表达者复发率显著高于17例高表达者,生存时间短于高表达者（P均＜0．05）。结论 SEMA3F可能在抑制HCC的侵袭转移中起重要作用。癌组织中SE-MA3F表达水平有助于判断HCC患者的预后。     

Serum antibodies to Helicobacter hepaticus and Helicobacter pylori in patients with chronic liver disease

BACKGROUND: Bile tolerant helicobacter species such as H hepaticus and H bilis have frequently been reported to cause hepatitis in mice and other rodents. AIMS: To investigate the possible pathogenic role of these and other helicobacter species in chronic liver disease in humans. METHODS: Serum samples from 144 patients with various chronic liver diseases, 30 patients with primary sclerosing cholangitis (PSC), and 48 healthy blood donors were analysed for antibodies against H hepaticus murine strain CCUG 33637 and H pylori strain CCUG 17874. Cell surface proteins of H hepaticus were extracted by acid glycine buffer and used in an enzyme immunoassay (EIA) and immunoblot (IB). RESULTS: 56 of 144 (39%) patients with chronic liver diseases and six of 30 (20%) with PSC showed increased antibody concentrations in the H hepaticus EIA; in the H pylori EIA the numbers were 58% and 13% respectively. Compared with the healthy blood donors the antibody reactivity against the two helicobacter species was not increased (46% and 48% respectively). Patient serum samples retested by the H hepaticus EIA after absorption with sonicated H pylori cells remained positive in 12 of 37 (33%) serum samples. Distinct antibody reactivity to 55-65 kDa proteins was observed by H hepaticus IB, after the absorption step, and was considered specific for H hepaticus. These 12 serum samples were from patients with chronic alcoholic liver disease. CONCLUSIONS: Antibodies to H hepaticus, often cross reacting with H pylori, occur frequently in patients with chronic liver diseases, with no clear cut relation to specific diagnostic groups. The pathogenic significance of these findings is not known.     

miR-143在HCC组织中的表达及其临床意义

目的 通过检测肝细胞肝癌（HCC）组织中micro RNA-143（mi R-143）的表达,探讨mi R-143在HCC侵袭转移过程中的作用。方法 收集45例HCC组织和对应的癌旁肝组织标本,采用实时荧光定量PCR（q PCR）法检测上述组织中mi R-143的表达,并分析其与HCC的临床病理学参数及HBV的关系。结果 癌旁肝组织中无mi R-143表达的病例,HCC组织中mi R-143的阳性表达率为88.89%（40/45）。mi R-143的表达与肿瘤数目、肿瘤包膜、门静脉癌栓、癌细胞分化、远处转移和肿瘤分期呈显著相关（P均〈0.05）,而与患者年龄、性别、肿瘤直径和HBV感染无关（P均〉0.05）;mi R-143表达阳性与阴性的HCC患者3年生存率分别为89.12%、32.56%,差异有统计学意义（P〈0.005）。结论 mi R-143表达可能与HCC的侵袭转移有关,mi R-143可作为预测HCC预后的标志物。     

肝癌组织中survivin、VEGF的表达及意义

目的探讨survivin与血管内皮生长因子（VEGF）在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测50例HCC组织和20例正常肝组织中survivin、VEGF蛋白的表达,并分析其与HCC临床病理参数的关系。结果50例HCC组织中survivin、VEGF蛋白的阳性表达率分别为64.0%、68.0%,在正常肝组织中的表达率分别为0、10%,两者相比,P均〈0.05;survivin、VEGF蛋白表达与HCC临床分期及淋巴结转移相关（P〈0.05）;HCC中survivin、VEGF蛋白表达呈正相关（r=0.886,P〈0.05）。结论survivin和VEGF蛋白在HCC中表达率较高,为肝癌的分子靶向治疗提供了新的靶点;survivin和VEGF在HCC中的表达关系密切,对肝癌的发展可能有协同作用;测定HCC中survivin、VEGF蛋白的表达,对判断患者预后及指导治疗有较大帮助。     

肝癌组织中HIF-1α蛋白的表达与多药耐药蛋白相关性研究

目的：探讨肝癌组织中乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）蛋白的表达与多药耐药蛋白（multi-drug resistance protein,MRP）的关系。方法收集78例原发性肝细胞癌患者肝组织和对应癌旁正常肝组织的石蜡标本,采用免疫组织化学 SP法检测原发性肝细胞癌组织及其癌旁正常肝组织中 HIF-1α和 MRP 蛋白的表达情况。结果 HIF-1α和MRP蛋白在肝癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁正常肝组织（P〈0.05）。病理分级（Ⅲ-Ⅳ级）、TNM 分期（Ⅲ-Ⅳ期）、有门静脉癌栓、有淋巴结转移的肝癌组织中 HIF-1α的阳性表达率明显增高（P〈0.05）;病理分级（Ⅲ-Ⅳ级）、有淋巴结转移的肝癌组织中 MRP的阳性表达率明显增高（P〈0.05）。78份肝癌组织中,HIF-1α和 MRP 的表达之间呈正相关（r=0.524,P〈0.05）。结论 HIF-1α和 MRP过表达可能在肝癌的恶性增殖、分化及淋巴结转移过程中发挥重要作用,且两者在肝癌组织中的表达可能具有协同作用。     

肝内胆管细胞癌的临床病理学观察

常见肝内胆管恶性肿瘤有肝内胆管癌（ICC）、细胆管细胞癌（CLC）及混合细胞型肝癌（CHC）中的胆管癌成分。ICC是肝脏第二常见恶性肿瘤,根据我院手术切除的3．3万余例肝脏恶性肿瘤的病理资料统计,肝细胞癌（HCC）和ICC分别占85．6％和7．7％,ICC的发病呈逐年上升趋势,具有易转移复发的生物学特性;CLC少见,因起源于肝脏双向分化的前体细胞而具有侵袭性强的特点;CHC的病理检出率有增多趋势,预后较HCC和ICC更差。准确的病理分型对于临床诊治和预后评估具有实际意义。