RT-PCR法检测白血病干细胞Flt3和N-ras基因的表达

目的：采用逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检测益气养阴方及其拆方后的扶正方组、祛邪方组急性白血病干细胞Fh3和N-ras基因的表达,以期阐明Flt3和N-ras基因表达与疾病发生、发展的关系。方法：RT-PCR法检测中药益气养阴方组、扶正方组、祛邪方组及对照组AML患者骨髓单个核细胞Fh3和N-ras基因表达的情况。结果：Fh3和N-ras基因表达阳性率益气养阴组、扶正组、祛邪组与对照组比较,差异有显著性意义（P均〈0．01）;益气养阴组与扶正组和祛邪组比较,差异有显著性意义（P均〈0．01）;扶正组与祛邪组比较,差异无显著性意义（P〉0．05）;各FAB亚型AML间Fh3与N-ras表达阳性率比较,差异无显著性意义（P〉0．05）。结论：中药益气养阴方可降低Flt3和N-ras基因在AML细胞的表达水平,抑制AML细胞的克隆性增殖,对AML具有治疗作用。     

Flt3、c-kit和SHP-1基因在急性白血病中的作用

目的探讨Flt3、造血细胞磷酸酶（SHP-1）基因与原癌基因c-kit在髓系白血病患者中的表达以及其与白血病发生和预后的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应法检测52例髓系白血病患者（实验组）及33例正常对照组Flt3、SHP-1与c-kitmRNA表达。结果急性髓系白血病（AML）患者的Flt3及c-kit平均表达水平高于对照组,SHP-1平均表达水平均低于对照组（P〈0.05）;34例初治AML患者中,Flt3＋及c-kit＋的完全缓解率低于Flt3-及c-kit-者,而SHP-1则相反。结论Flt3、c-kit对于白血病的转归、预测白血病的复发、监测微小残留病变有重要的意义,SHP-1可能作为潜在的抑癌基因与Flt3、c-kit基因参与白血病的发生。     

Flt3基因突变与急性髓系白血病发生和预后的关系

Fms样酪氨酸激酶3（Fms-like tyrosine kinase3,Flt3）是Ⅲ型受体型酪氨酸激酶（receptor tyro-sine kinase,RTK）家族成员之一,在正常造血及免疫系统发育中起着重要作用。Fh3基因突变与急性髓系白血病（acute myelogenous leukemia,AML）的发生、预后密切相关。以Flt3作为靶分子已成为AML治疗的一种新策略。     

Flt3配体在急性髓系白血病化疗过程中的变化及意义

目的通过检测FLt3配体(FL)浓度在急性髓系白血病患者化疗前后的变化情况,统计分析其与白细胞数量变化的相关性。方法对48例急性髓系白血病患者进行追踪观察,于化疗前、化疗结束后5～7 d和20～30 d取外周血2,0例健康人为正常对照,应用酶联免疫吸附技术(ELISA),检测FL在白血病初治和缓解患者化疗前后浓度的动态变化。结果在急性髓系白血病初治组患者,化疗结束后5～7 d FL浓度明显大于化疗前,且明显大于对照组FL浓度([392±55.07)pg/mL,P<0.05]。在缓解组中,3个阶段的浓度差异无统计学意义(P<0.05),但明显低于对照组FL浓度(P<0.05)。并且根据直线相关分析,FL浓度与外周血白细胞数量呈明显负相关(r=-0.464,P<0.05)。结论在急性髓系白血病化疗后,FL浓度与外周血白细胞总数有一定相关性。FL浓度一定程度上反映了患者的骨髓代偿能力。     

人Flt3配体基因的克隆及其在CHO细胞中的表达

目的 克隆人Flt3配体(Flt3 LIg and,FL),并在CHO细胞中进行表达.方法 从健康人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR技术,扩增Flt3配体胞外区cDNA功能性片段,经DNA测序证实后,将得到的片段基因插入pcDNA3.0表达载体,构建了pcDNA3.0-FL真核表达载体;将重组质粒pcDNA3.0-FL转染CHO细胞,经G418筛选出阳性细胞克隆,扩大培养,提取细胞总蛋白,用SDS-PAGE分离并Western blotting检测到在相对分子质量约24 000处有一显色条带.结果 FL胞外区cDNA被正确克隆到真核表达载体pcDNA3.0中并在CHO细胞中成功表达.结论 成功构建了真核表达载体pcDNA3.0-FL并在CHO细胞中成功表达,为FL的相关研究和应用开发奠定了基础.     

Wnt3基因在急性髓系白血病中的表达及意义

目的研究Wnt3基因在急性髓系白血病（AML）患者中的表达及其意义。方法应用实时定量PCR（real—timePCR）方法检测10名正常人、40例AML患者中Wnt3基因的表达。结果10例正常人中检测到较低水平Wnt3基因的表达;Wnt3基因在AML患者中的表达水平增高,AML缓解后Wnt3基因的表达水平较初诊时明显降低;Wnt3的表达与AML患者年龄、性别以及初诊白细胞数等临床特征无关;Wnt3低表达组完全缓解率高于高表达组。结论Wnt3在AML发病中可能起重要作用,可作为判断AML预后的一个指标。     

异基因外周血干细胞移植治疗白血病4例

外周血干细胞(PBSC)多用于造血系统恶性肿瘤及某些实体瘤的自体移植.近几年来,用异基因PBSC移植(Allo-PBSCT)治疗造血系统恶性肿瘤也日渐增多,为探讨Allo-PBSCT的动员及临床移植效果,现对4例白血病患者的Allo-PBSCT资料作如下分析.     

白血病患者WT1基因的表达及临床意义

目的：检测白血病患者WT1基因的表达水平，并探讨其与临床的关系。方法：应用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）技术，检测58例初治急性白血病（AL）、20例慢性粒细胞白血病（CM）和10例非血液病患者WT1基因的表达。结果：10例非血液病患者WT1基因的表达均呈阴性。58例AL患者44例检测有WT1基因的表达，阳性率为75．9％，其中急性髓性白血病（AML）阳性率为86．4％，急性淋巴细胞白血病（ALL）为42．9％，两者差异有显著性（P＜0．01）；AML治疗前WT1的表达水平与完全缓解（CR）率无相关（P＞0．05），但倾向于WT1基因低表达者有更高的CT率（低表达组CR率为75．0％，高表达组率为34．8％）。CML慢性期WT1的表达水平极低，随临床分期进展水平增高，高表达者预示急变。结论：AL和CML急变期患者WT1基因过度表达，初治AML治疗前WT1的表达水平与疗效无相关，但低表达组CR为75％，高表达组CR为34．8％。     

Flt3的原核表达、纯化及多克隆抗体制备

Flt3(fms-like receptor tyrosine kinases)又称FLK-2(foetal liver kinase2)、STK-1(stem cell tyrosine kinase 1),为Ⅲ型受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTK)成员之一,在血细胞中表达仅限于造血干/祖细胞表面,与其配体在正常造血及免疫系统发育中起重要的调节作用.     

Flt3配体免疫佐剂作用的研究进展

Flt3配体(FL)是近年来发现的早期造血细胞生长因子，能在体内、体外扩增树突状细胞(DC)，特别对DCI亚群的扩增作用更为明显。大量的研究证实了FL能有效提高HIV、HCV、HBV和肿瘤疫苗的细胞免疫应答水平，展示了FL在治疗性疫苗中的应用前景；同时也发现FL不仅有单纯的免疫增强作用，其也能诱导免疫耐受，显示了FL生物学作用的多样性和复杂性。     

恶性胶质瘤患者外周血淋巴细胞基因表达谱的研究

目的 运用基因芯片技术研究恶性胶质瘤患者和正常人外周血淋巴细胞基因表达差异,以探讨恶性胶质瘤患者免疫细胞的基因表达特点。方法 应用含13824点cDNA的人类基因表达谱芯片分别检测23例恶性胶质瘤患者和40例正常外周血淋巴细胞基因表达差异。提取恶性胶质瘤患者和健康人淋巴细胞的mRNA,反转录制备标有不同荧光素的cDNA探针,将探针与芯片杂交后扫描荧光强度并数字化,用专业软件对检测结果进行分析从而筛选出差异性表达的基因。结果 发现恶性胶质瘤患者淋巴细胞有96个基因呈现差异表达,其中上调表达的基因25个,下调表达的基因71个。结论 恶性胶质瘤患者和正常人的外周血淋巴细胞基因表达存在差异。淋巴细胞DNA结合,转录功能异常和信号传导功能异常可能是恶性胶质瘤患者免疫功能有别于健康人的原因之一。     

恶性血液病Flt3基因内部串联重复突变分析

目的：研究Flt₃-ITD在恶性血液病中的突变及分布情况。 方法：采用PCR法检测103例恶性血液病患者基因组DNA Flt₃-ITD突变。结果：44例初治急性髓细胞白血病（AML）患者中8例发生Flt₃-ITD突变,突变率为18.2%,以M1型最高;急性淋巴细胞白血病（ALL）、骨髓增生异常综合征（MDS）、多发性骨髓瘤（MM）、非何杰淋巴瘤（NHL）及慢性髓细胞白血病（CML）均未检出Flt₃-ITD突变。 结论：Flt₃-ITD可作为AML重要分子标志。     

无血缘关系供体外周血造血干细胞移植治疗白血病的临床研究

目的 :观察无血缘关系供体外周血造血干细胞移植 (PBSCT)治疗白血病的疗效及其并发症的防治。 方法 :用 HL A配型完全相合的无关供体移植治疗白血病 3例。预处理方案为 :例 1采用环磷酰胺 (CTX) +全身照射 (TBI) ;例 2采用 CTX+TBI+抗胸腺细胞球蛋白 (ATG) ;例 3采用 CTX+TBI+ATG+依托泊苷 (VP16 )。 3例患者输入单个核细胞数 (/ kg)分别为5 .90× 10 8、6 .43× 10 8和 6 .0 1× 10 8,CD34 +细胞 (/ kg)分别为 6 .34× 10 6、2 .6 2× 10 6和 2 .30× 10 6;急性移植物抗宿主病(GVHD)预防采用霉酚酸酯 (MMF)联合环孢素 A (Cs A)和短程甲氨蝶呤 (MTX)方案。 结果 :3例患者均顺利造血重建 ,无 1例发生 度或 度以上急性 GVHD;例 1患者移植后 180 d细胞遗传学复发 ,停用 Cs A后 2个月 Ph染色体消失 ,且出现局限性慢性 GVHD;例 2患者移植后 2 2 0 d出现局限性慢性 GVHD;例 3患者移植后 30 0 d有复发趋势 ,停用 Cs A 2周后完全缓解。结论 :无关供体 PBSCT可用于治疗白血病 ;MMF联合 Cs A和短程 MTX可用于预防无关供体移植急性 GVHD的发生。     

异基因外周血干细胞移植治疗白血病27例

目的: 探讨异基因外周血干细胞移植治疗白血病的疗效及主要并发症的处理.方法: 接受异基因外周血干细胞移植的白血病患者27例,年龄16～50岁,其中急性髓细胞白血病(AML)10例, 急性淋巴细胞白血病(ALL) 8例,慢性髓细胞白血病(CML) 9例.HLA完全相合同胞供者25名, 1～2个HLA主要位点不合同胞供者2名.采用环磷酰胺联合全身放疗(CYTBI)为主的预处理方案或白消安联合环磷酰胺(BuCY2 )方案预处理.采用标准环孢霉素A(CsA)联合短期甲氨蝶呤(MTX)预防移植物抗宿主病(GVHD).2个HLA主要位点不合的1例移植患者加用兔抗人胸腺球蛋白(ATG)及抗CD25单克隆抗体.结果: 全部患者均获得稳定植入,Ⅱ-Ⅲ度急性GVHD 3例(11%),慢性GVHD 7例.并发特发性间质性肺炎1例.ABO血型主要不合及Rh血型不合的CML患者并发纯红细胞性再生障碍性贫血1例.随访2～30 mo,存活20例(74%),移植后4～11 mo死于白血病复发7 例(26%). 结论: 异基因外周血干细胞移植是治疗白血病的有效方法,但移植前处于高危难治状态的病例复发率仍较高.     

Allogeneic peripheral blood stem cell transplantation for leukemia

Objective To observe engraftment kinetics, the incidence and severity of graft-versus-ho st disease (GVHD), and clinical outcome on 40 recipients undergoing allogeneic p eripheral blood stem cell transplantation (allo-PBSCT).Methods From June 1997 to May 1999, forty leukemia patients with a median age of 35 year s underwent allo-PBSCT. PBSC were mobilized with G-CSF at a dose of 5 μg/kg s.c. every 12 hours for 5 days. A median of 7.7 (2.0-16.8)×10 (6) CD34(+) cells/kg was infused into the recipients. Busulfan-cyclophosphamid e (BU-CY) was used as the conditioning regimen. All patients received cyclospo rine A and either methotrexate (n=34) or methylprednisolone (n=6) for GVHD p rophylaxis. Results Engraftment of neutrophils and platelets was achieved at a median of 13 days (9 -28 days) and 12 days (7-60 days) respectively. Patients receiving ≥4×10 (6) CD34(+) cells/kg or given G-CSF post transplant had significantl y accelerated neutrophil and platelet engraftment. Acute GVHD occurred in 17 of 40 patients (42.5%), with grade Ⅱ-Ⅳ acute GVHD in 10 patients (25%). Chron ic GVHD developed in 21 (9 extensive, 12 limited) out of 30 evaluable patients ( 21/30, 70%) with a median follow up of 380 days (180-900 days). Transplan t related mortality was 17.5% and the relapse rate was 10%. The probability of leukemia free survival at 3 years was 72.5%.Conclusion Allo-PBSCT can provide rapid hematopoietic reconstitution without an increased incidence of acute GVHD, but may be associated with a high risk of chronic GVHD .     

外周血细胞计数对老年急性髓系白血病生存预后的影响

目的：探讨不同外周血细胞计数对老年急性髓系白血病（AML）生存预后的影响。方法：回顾分析我科1997～2008年收治的可评估的老年AML患者67例,按外周血细胞的不同分组,进行完全缓解（CR）率的比较及单因素的Kaplan-Meier生存分析。结果：67例患者的中位生存期为4.2个月。20例（29.9%）获得完全缓解（CR）,中位生存期为7.5个月 未缓解的中位生存时间为3.5个月（P〈0.01） 外周血红蛋白浓度≥80g/L时CR率高（P〈0.05）,而不同白细胞及血小板计数的组别其CR率比较无统计学意义（P〉0.05）。白细胞计数≥50&#215;10^9/L组,中位生存时间为2.5个月,明显低于其他组别（P〈0.01）。不同血小板计数及血红蛋白浓度分组未见生存差异（P〉0.05）。结论：外周血高白细胞计数是老年AML患者预后不良的因素,支持治疗对老年AMI很重要。     

The Gene Expression Patterns of Peripheral Blood Mononuclear Cells in Patients with Systemic Lupus Erythematosus

This study examined the gene expression patterns of peripheral blood mononuclear cells(PBMCs) in patients with systemic lupus erythematosus(SLE) by using serial analysis of gene ex-pression(SAGE) technology.Following the construction of serial analysis of gene expression(SAGE) library of PBMCs collected from 3 cases of familial SLE patients,a large scale of tag sequencing was performed.The data extracted from sequencing files was analyzed with SAGE 2000 V 4.5 software.The top 30 expressed genes of SLE patients were uploaded to http://david.niaid.nih.gov/david/ease.htm and the functional classification of genes was obtained.The differences among those expressed gene were analyzed by Chi-square tests.The results showed that a total of 1286 unique SAGE tags were identified from 1814 individual SAGE tags.Among the 1286 unique tags,86.8% had single copy,and only 0.2% tags had more than 20 copies.And 68.4% of the tags matched known expressed sequences,41.1% of which matched more than one known expressed sequence.About 31.6% of the tags had no match and could represent potentially novel genes.Ap-proximately one third of the top 30 genes were ribosomal protein,and the rest were genes related to metabolism or with unknown functions.Eight tags were found to express differentially in SAGE li-brary of SLE patients.This study draws a profile of gene expression patterns of PBMCs in patients with SLE.Comparison of SAGE database from PBMCs between normal individuals and SLE pa-tients will help us to better understand the pathogenesis of SLE.     

HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达

目的:了解HCAP1蛋白在急性白血病患者外周血原始细胞中的表达.方法:分离18个正常个体外周血白细胞和20例急性白血病患者原代白血病细胞,用免疫细胞化学染色和Western印迹分析HCAP1蛋白表达并进行比较.结果:受检的正常人外周血白细胞和白血病患者原始细胞均表达HCAP1蛋白;在正常人外周血成熟白细胞,HCAP1主要分布于细胞核,而急性白血病患者的原始细胞在细胞核和细胞质均有分布;急性白血病患者原始细胞HCAP1蛋白的相对表达值(HCAP1/actin的灰度比值)为(0.37±0.23),正常人外周血白细胞的HCAP1蛋白相对表达值为(0.31±0.19,P＞0.05).结论:正常入外周血白细胞和白血病患者的原代白血病细胞均表达HCAP1蛋白,两者之间表达水平并无显著差异,但其在细胞内的分布有所不同.     

无血缘关系供者异基因外周血干细胞移植治疗急、慢性白血病7例

目的 观察无血缘关系供者外周血干细胞移植治疗急、慢性白血病的疗效.方法 2005年1月～2006年10月本科行无血缘关系供者造血干细胞移植治疗急、慢性白血病患者7例,所有供受者之间HLA高分辨配型全相合.预处理方案: CY TBI方案4例、BU/CY方案3例.采用环孢菌素A加骁悉加MTX加ATG(即复宁)预防性控制移植物抗宿主病.结果 移植 9～ 22d(中位时间 13.2d),中性粒细胞》0.5×109/L; 14～ 27d(中位时间 17.5d),血小板》20×109/L.2例于移植 38d和 56d发生Ⅱ度急性移植物抗宿主病,予甲强龙治疗后控制,4例发生慢性移植物抗宿主病,局限型2例,广泛型2例;无1例发生VOD及巨细胞病毒感染;移植相关不良反应CY TBI方案与BU/CY方案未见差异;随访5～27个月,6例患者无病生存,1例死于本病复发;3例慢性粒细胞白血病bcr/abl融合基因检测转阴.结论 无血缘关系供者外周血干细胞移植是一种有效的血液肿瘤治疗方法.