b-FGF和NF-κB在哮喘大鼠肺内的表达及布地奈德干预的作用

目的：探讨哮喘大鼠发病过程中碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)和核因子-κB（NF-κB）在气道内表达的变化,及布地奈德的干预对其表达的影响。方法：清洁级Sprague-Dawley雄性大鼠45只,随机分为对照组、哮喘组、干预组。观察卵蛋白激发及用布地奈德干预后哮喘大鼠气道的病理变化;免疫组织化学染色观察b-FGF和NF-κB蛋白表达的变化。结果：布地奈德干预减轻了哮喘大鼠气道损伤。B-FGF和NF-κB在对照组中呈弱阳性表达,在哮喘组中表达明显增加,使用布地奈德进行干预后b-FGF和NF-κB的表达明显降低（111.61±5.52 vs 126.21±6.46; 110.65±8.71 vs 134.15±9.42; P<0.05）,且二者呈正相关性。结论：b-FGF和NF-κB可能与哮喘大鼠气道重塑相关,布地奈德改善哮喘大鼠的气道重塑可能与降低b-FGF和NF-κB的表达有关。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：393-396］     

细胞外信号调节激酶信号转导通路在病毒性心肌炎心肌细胞中的调控作用

目的：细胞外信号调节激酶(ERK)与细胞生长，分化，增殖等生理病理过程有密切关系。该研究通过比较ERK1/2在病毒性心肌炎心肌细胞中表达变化及ERK特异性阻断剂PD98059干预后细胞活性的改变，探讨ERK信号传导通路在病毒性心肌炎早期病毒攻击心肌细胞过程中的作用。方法：取新生SD大鼠，采用酶消化法分离得到心肌细胞。将培养细胞分为对照组，柯萨奇B3(CVB3)感染组，20 μmol/L和50 μmol/L PD98059干预组，后3组用柯萨奇B 3M 株感染。采用Westen blot分别测定ERK1/2，ERK激活后产物(P-ERK1/2)表达变化，采用MTT法检测细胞活性，采用细胞病变法计算细胞病变。结果：4组ERK1/2表达总量差异无显著性；CVB3感染组P-ERK1/2表达为 135.57 ± 0.7 高于对照组的 119.41 ± 1.97 ，差异有显著性( P < 0.01 )。经20 μmol/L或 50 μmol/L PD98059干预后心肌细胞P-ERK1/2 表达为 113.75±1.03，42.56±2.17 比感染组细胞低，差异有显著性(均P<0.01)；其中50 μmol/L PD98059干预组P-ERK1/2表达较20 μmol/L组低(P<0.01)。PD98059干预组心肌细胞活性0.53±0.13，0.41±0.04 明显高于感染组0.17±0.04，差异有显著性(P<0.01)；不同浓度PD98059干预组间心肌细胞活性差异无显著性(P>0.05)。PD98059干预组细胞出现细胞病变的时间较感染组晚，程度较感染组轻，感染面积较感染组小。结论：病毒在攻击心肌细胞时启动了ERK信号通路；PD98059能干预病毒对心肌细胞的感染。     

川崎病小鼠肿瘤坏死因子α/核因子κB/基质金属蛋白酶-9通路研究

目的通过检测川崎病（KD）小鼠TNF-α、核因子-κB（NF-κB）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）表达及活性变化,探讨KD的发病机制。方法3周龄C57BL/6雄性小鼠60只,分为模型组和对照组,每组各30只。模型组单次腹腔注射0.5 mL干酪乳杆菌细胞壁提取物（LCWE）制备KD模型,对照组注射等量生理盐水。检测两组小鼠注射后14、28和56 d时点外周血TNF-α水平,心脏、冠状动脉组织NF-κB、MMP-9及其组织抑制物-1（TIMP-1）表达水平,NF-κB 、MMP-9表达活性。观察小鼠心脏超声改变,同时行病理学检查冠状动脉病变严重程度。 结果①模型组建模后14 和28 d时点超声心动图显示,冠状动脉血管内膜毛糙,血管壁与血管周围出现高回声,部分呈冠状动脉瘤样扩张改变;②模型组建模后14 和28 d时点病理学检查可见冠状动脉主干周围管壁肿胀、以淋巴细胞为主的大量炎细胞浸润,弹力层显著破坏。模型组建模后14 d时点,血清TNF-α水平明显高于对照组［（389.3±0.3） vs （18.9±0.3）pg·mL-1,P＜0.01］;建模后14和28 d时点心脏及冠状动脉NF-κBp65蛋白表达水平模型组均显著高于对照组［14 d：（37.5±9.3） vs （14.6±5.6）μg·L-1,28 d;（57.6±13.7） vs （21.6±6.6）μg·L-1;P均<0.05］;建模后14和28 d时点心脏及冠状动脉MMP-9/TIMP-1水平模型组显著高于对照组［14 d：（4.9±1.7） vs （0.5±0.4）,28 d：（12.3±6.9） vs （0.09±0.1）;P均＜0.01］。 结论KD急性期TNF-α等炎性细胞因子分泌,NF-κB活化和MMP-9分泌上调可能是KD心脏及冠状动脉炎症发生的重要通路。     

儿茶素对肾病综合征TGF-β1表达的影响研究

目的：研究儿茶素对肾病综合征大鼠TGF-β1表达的影响。方法：20只SD雌性大鼠随机分成正常组、肾病组、激素组、儿茶素治疗组共4组。实验末应用生化法测定血清中白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、三酰甘油(TG)、BUN、转化生长因子 β1(TGF-β1)及24 h尿蛋白排泄量,分别应用免疫组化与原位杂交法检测肾固有细胞中TGF-β1与TGF-β1mRNA的表达,并应用半定量评分法对各组大鼠病理改变进行计量分析。结果：儿茶素治疗组大鼠血清中总TGF-β1 ［(59.40±8.12) μg/L］、活性TGF-β1 ［(47.56±9.88) μg/L］,肾组织中TGF-β1 ［(45.1±2.0)%］、TGF-β1 mRNA 表达水平［(51.6±3.19)%］均明显低于肾病组［分别为(127.78±16.11) μg/L,(93.79±12.45) μg/L,(56.9±3.5)%,(60.4±4.8)%］(P<0.01);与肾病组相比,儿茶素治疗组血清Alb明显增高,TG含量明显下降［(11.28±4.18) g/L vs (1.46±0.71) g/L;(2.89±0.64) mmol/L vs (6.02±0.90) mmol/L;P<0.01］;与肾病组相比,儿茶素组大鼠肾脏病理损害明显减轻(P<0.05)。结论：儿茶素可通过抑制TGF-β1 mRNA的表达,降低肾脏局部及血清中活性TGF-β1蛋白表达水平,减轻肾脏损伤,改善肾功能,延缓肾脏病理慢性进展。     

糖皮质激素抑制实验性肾炎大鼠肾组织中核因子-κB活化及单核细胞趋化蛋白-1表达

目的：探讨核因子-κB(NF-κB)活化在肾小球肾炎发病机制中的作用及糖皮质激素对NF-κB活化的调节作用。方法：肾毒血清肾炎应用兔抗鼠肾小球基底膜肾毒血清制备。模型组：注射肾毒血清后不加任何治疗,第14 d处死;糖皮质激素干预组(治疗组)：于肾毒血清注射后第1～14 d给予地塞米松每日0.125 mg/kg腹腔注射。采用免疫组化及医学图像分析系统观察肾小球及肾小管中NF-κB活化和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达,并分析其与蛋白尿和肾小球细胞数之间的关系。结果：模型组肾小球及肾小管中NF-κB活化较正常对照组显著上调,分别为(38.27±8.83)% vs (1.82±0.68)%和(68.46±12.94)% vs (16.89±4.47)%,P均<0.01;模型组肾小球及肾小管中MCP-1表达分别为(24.37±7.06)个/gcs和(54.78±11.49)%,较正常对照组显著升高(P<0.01),肾小球中NF-κB活化和MCP-1表达与单核细胞浸润和蛋白尿密切相关;糖皮质激素干预组肾小球及肾小管中NF-κB活化和MCP-1表达均显著下调。结论：NF-κB活化在肾小球肾炎发病机制中发挥重要作用,抑制NF-κB活化可能是糖皮质激素抗肾炎作用的机制之一。     

肿瘤坏死因子-α单抗对小鼠病毒性心肌炎的影响

目的：探讨细胞间粘附分子-1(ICAM1)及肿瘤坏死因子α(TNFα)在心肌炎发病中的作用及TNF-α单克隆抗体预处理对其的影响,为临床治疗提供实验依据。方法：Balb/c雄性小鼠随机分为三组:正常对照组、柯萨奇B3病毒感染组和病毒感染加TNFα抗体干预组,采用光镜、电镜和免疫组织化学测定不同时期心肌病理变化、超微结构改变和心肌ICAM1与TNFα的表达。结果：光镜和电镜结果显示干预组心肌病理变化和超微结构改变较感染组减轻;免疫组织化学结果显示干预组ICAM1及TNFα的表达较感染组减轻(7d:14.71±1.94vs18.80±2.62,P<0.01和16.70±2.90vs20.63±1.95,P<0.05;14d:17.49±2.58vs23.51±3.50,P<0.01和19.29±3.21vs24.64±2.97,P<0.01);感染组TNFα与ICAM1的表达呈正相关(r=0.706,P<0.05),TNFα,ICAM1的表达与心肌病变积分呈正相关(r=0.737,P<0.05;r=0.693,P<0.05)。结论：TNFα与ICAM1在病毒性心肌炎小鼠的发生发展中发挥重要作用,抗TNFα单克隆抗体抑制其表达,对受损心肌有保护作用。     

癫癎患儿外周血单个核细胞NF-κb活化的变化

目的：探讨癫癎患儿外周血单个核细胞中核因子κB(nuclear factor-kappa B, NF-κB)活化的变化及其临床意义。方法：采用流式细胞学方法检测84例癫癎患儿治疗前后及32例正常儿的外周血单个核细胞中NF-κB的活化情况。结果：各实验癫癎组患儿外周血单个核细胞中NF-κB的活化均明显高于健康对照组（P<0.05,或<0.01）,差异具有显著性意义;全身发作组和分类不明组的癫癎患儿外周血单个核细胞中NF-κB的活化明显高于部分发作组（P<0.01）,且全身发作组高于分类不明组（P<0.05）。癫癎患儿部分发作组、全身发作组及分类不明组在治疗后外周血单个核细胞中NF-κB的活化明显降低（P<0.01）,差异具有极其显著性意义。结论：癫癎发作患儿外周血单个核细胞NF-κB的激活是增加的,与发作的严重程度呈正相关。［中国当代儿科杂志,2009,11（1）：44-46］     

阿奇霉素对香烟烟雾致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用及其机制研究

目的：香烟烟雾提取物(CSE)可导致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤、核因子-κB(NF-κB)活化和肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌增加,阿奇霉素对CSE诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)中的这些损伤是否有保护作用目前尚不清楚,该实验对此进行研究并探讨其作用机制。方法：体外培养A549,分为空白对照组、阿奇霉素阴性对照组、CSE组和CSE+阿奇霉素组,在8 h后使用倒置显微镜、免疫组化染色(SP)和酶联免疫法（ELISA）观察检测上述条件下A549细胞的形态、NF-κB活化和分泌TNF-α水平的变化。结果：CSE可导致细胞形态和结构的改变,同时诱导产生染色呈深棕黄色颗粒的强阳性NF-κB细胞,其TNF-α分泌水平达0.307±0.036 pg/mL,而CSE＋阿奇霉素组细胞形态和结构有所恢复,NF-κB染色亦相对变浅, TNF-α水平较CSE组减少,为0.269±0.009 pg/mL,空白对照组、阿奇霉素阴性对照组无上述形态学变化,NF-κB染色为蓝紫色,TNF-α水平分别为0.234±0.028 pg/mL和0.259±0.014 pg/mL。结论：阿奇霉素可部分抑制CSE刺激的细胞NF-κB活化,减少TNF-α的分泌,减轻CSE对肺泡II型上皮细胞的毒性作用。［中国当代儿科杂志,2007,9（1）：63-66］     

亚低温对HIBD新生鼠大脑皮质神经元NSE表达及血糖水平影响的研究

目的：通过亚低温对新生鼠缺氧缺血脑损伤(HIBD)大脑皮质神经元特异性烯醇化酶(NSE)及血糖水平影响的研究,探讨亚低温对HIBD的保护作用机制。方法：建立新生鼠HIBD标准化动物模型,将其随机分为对照组、31℃亚低温和34℃亚低温干预组及假手术组,应用免疫组化染色观察大脑皮质区NSE阳性神经元数目,并利用微量血糖监测仪测定血糖。结果：缺血缺氧后12 h,24 h亚低温干预组大脑皮质NSE阳性神经元数目均显著低于对照组［31℃亚低温组：(54.3±6.5) vs (82.3±6.0),(34.6±5.6) vs (53.3±5.6),P<0.05 或 0.01;34℃亚低温组：(56.8±7.1) vs (82.3±6.0),(32.9±4.9) vs (53.3±5.6),P<0.05］。缺氧缺血后12 h,24 h 血糖水平［31℃亚低温组：(5.74±1.52),(5.89±1.62) mmol/L;34℃亚低温组：(5.69±1.48),(5.91±1.53) mmol/L］亦显著高于对照组［(3.64±1.22),(4.16±1.54) mmol/L］(P<0.01)。31℃亚低温和34℃亚低温干预两组间各个时期大脑皮质区NSE阳性神经元数目及血糖水平差异无显著性(P>0.05)。结论：亚低温可通过抑制神经元内NSE活性及升高血糖水平,对HIBD新生鼠大脑皮质神经细胞起到保护作用。     

雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞eIF-4E表达的影响

目的：探讨雷帕霉素对柯萨奇病毒B3诱导的心肌成纤维细胞eIF-4E表达的影响,寻找病毒性心肌炎的药物治疗靶点。方法：选用MOI为0.5 PFU/cell的柯萨奇病毒B3感染心肌成纤维细胞,利用细胞形态及RT-PCR法检测细胞内柯萨奇病毒B3 mRNA表达,确定柯萨奇病毒B3成功感染心肌成纤维细胞。以10nM雷帕霉素干预,采用RT-PCR及Western blot检测对照组、病毒组(MOI为0.5 PFU/cell)、雷帕霉素组及病毒+雷帕霉素组eIF- 4E表达。结果：MOI为0.5 PFU/cell的柯萨奇病毒B3感染心肌成纤维细胞,透射电镜下可见细胞形态改变,胞浆内可见病毒颗粒。RT-PCR结果显示：感染后第1天、第2天、第3天及传代后第2天细胞有病毒mRNA表达。RT-PCR检测上述4组的eIF- 4E /β-actin 光密度比值分别为：0.73±0.07,0.87±0.03,0.32±0.03,0.56±0.04;Western blot灰度值分别为：0.79±0.09,1.35±0.12,0.55±0.04,0.62±0.07;RT-PCR及Western blot结果显示：病毒组eIF- 4E表达高于对照组,雷帕霉素组和病毒+雷帕霉素组低于对照组及病毒组（均P<0.05）。结论：柯萨奇病毒B3可感染心肌成纤维细胞,并使eIF- 4E表达增加,雷帕霉素可抑制其表达,提示心肌成纤维细胞可能通过mTOR/eIF- 4E信号通路参与病毒性心肌炎的发病机制,雷帕霉素对病毒性心肌炎有潜在的治疗作用。［中国当代儿科杂志,2007,9（6）：587-590］     

蛋白酶体抑制剂MG-132诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的：观察蛋白酶体抑制剂MG-132对人红白血病细胞株K562的致凋亡作用及其对凋亡相关基因NF-κB与caspase-3表达的影响。方法：将蛋白酶体通路特异性阻断剂 MG-132 加入K562细胞,用AO/EB细胞形态和DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡,流式细胞仪检测凋亡率,逆转录-PCR检测NF-κB的转录水平,免疫组化法检测NF-κB与caspase-3的表达,比色法检测caspase-3活性。结果：流式细胞仪检测15 μmol/ L MG-132作用24 h后,凋亡率为(26.5±0.6)％,与对照组(1.2±0.1)％相比明显增多,差异有显著性(P<0．01),MG-132诱导K562细胞凋亡具有量-效关系; RT-PCR检测发现NF-κB mRNA表达下调;免疫组化法检测发现MG-132可降低 NF-κB的表达,增加caspase-3蛋白的表达, 且表达量与MG-132的作用呈剂量相关。结论：MG-132能诱导K562细胞凋亡,其机制可能与MG-132抑制NF-κB信号转导通路,下调NF-κB表达继而上调caspase-3表达有关。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：255-258］     

干扰素-λ2对急性病毒性心肌炎小鼠凋亡相关蛋白的研究

目的：干扰素-λ（IFN-λ)广泛存在于人体各组织中,目前研究发现其具有抗病毒、抗肿瘤等作用。但其是否能用于治疗病毒性心肌炎尚缺乏相关报道。探讨IFN-λ2在病毒性心肌炎（VMC）早期的作用,为IFN-λ2 是否能应用于临床治疗或预防VMC提供实验室依据。方法：采用腹腔注射柯萨奇B3（CVB3）病毒的方法制造病毒性心肌炎小鼠模型。实验分3组：空白对照组、病毒组、IFN-λ2 治疗组。空白对照组给予腹腔注射等量的PBS培养液,记为第0天;IFN-λ2治疗组从第1天开始,连续5 d每天经背部皮肤不同点给予小鼠IFN-λ2 400 ng （0.1 mL）,空白对照组和病毒组则每天以同样方法给予等量生理盐水。死亡小鼠从组中剔除。9 d后处死所有存活小鼠。检测各组小鼠心脏的病理改变。采用免疫组织化学技术检测各组小鼠心脏组织中凋亡相关蛋白Bcl-2 及Bax的表达。结果：①病毒组心肌病理评分要高于空白对照组及IFN-λ2治疗组。 ②免疫组化结果显示正常心肌组织有少量Bcl-2及Bax的表达,病毒组较空白对照组Bcl-2表达减少、Bax表达明显增加(P<0.01);IFN-λ2治疗组较病毒组Bcl-2表达增加、Bax表达减少(P<0.01) 。结论：INF-λ2 能减轻柯萨奇病毒所致心肌炎小鼠的心肌病理改变,能抑制小鼠心肌细胞凋亡,对VMC小鼠的心肌细胞具有保护作用。［中国当代儿科杂志,2009,11（4）：296-300］     

新生儿窒息后血清诱导人肾小管细胞粘附中性粒细胞的作用及机制

目的研究新生儿窒息后血清诱导的人肾小管细胞粘附中性粒细胞的作用及机制。方法以HK 2细胞株为研究对象, 用含20%的窒息后血清作为诱导因素。实验分空白对照组、窒息组(窒息后1,3,7 d组)和吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)干预组。分别检测各组细胞悬液中髓过氧化物酶（MPO）活性;检测HK 2细胞膜ICAM 1和细胞核内NF κB的表达。结果窒息后1 d血清组细胞悬液MPO值显著高于各PDTC干预组、对照组及窒息后3,7 d血清组（P<0.01）。窒息后1 d血清组HK 2细胞表面ICAM 1表达和HK 2细胞核NF κB表达亦显著高于各PDTC干预组、对照组及窒息后3,7 d血清组（P<0.01）。结论 窒息后血清可以诱导肾小管上皮细胞活化进而粘附中性粒细胞,其作用机制可能涉及到窒息后血清活化了NF-κB,从而使肾小管上皮细胞膜表面ICAM-1表达增加,进而粘附中性粒细胞。     

抗FasL抗体对小鼠病毒性心肌炎作用机制的研究

目的探讨抗FasL抗体对小鼠柯萨奇病毒性心肌炎的治疗作用及作用机制。方法80只BALB／c小鼠随机分为4组：1组为空白对照组、2组为病毒对照组、3组为IgG对照组、4组为抗FasL抗体治疗组。于接种病毒后第10天每组处死小鼠8只,取心脏,分别采用光镜检查心肌组织的病理变化,原位末端标记法（TUNEL）检测心肌细胞凋亡的情况,免疫组化方法检测活化caspase-3的表达,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测心肌组织中caspase-3和CVB,mRNA表达。结果（1）病毒对照组可见活化的caspase-3表达和心肌细胞的凋亡,且均与心肌病变积分成正相关（r=0．81,P〈0．05;r=0．73,P〈0．05）。（2）抗FasL抗体治疗组小鼠心肌组织病变积分、心肌细胞凋亡率、caspase-3蛋白和mRNA表达及心肌细胞内CVB,mRNA表达均明显低于病毒对照组（P〈0．01,P〈0．01,P〈0．01,P〈0．01,P〈0．05）和IgG对照组（P〈0．01,P〈0．01,P〈0．05,P〈0．01,P〈0．05）。结论凋亡是病毒性心肌炎心肌损伤的重要机制之一,抗FasL抗体可降低caspase-3活化和mRNA表达,减少心肌细胞凋亡,降低心肌细胞内病毒复制,使心肌损伤明显减轻。     

黄芪对心肌炎心肌穿孔素及外周血TNF-α的影响

目的：儿童病毒性心肌炎(VMC)发病率高,临床上缺乏有效的治疗药物。该研究旨在探讨黄芪注射液治疗小鼠柯萨奇B3(CVB-3)病毒性心肌炎的疗效及其机制。方法：24只Balb/C鼠腹腔感染柯萨奇病毒B3亲心肌细胞株后,随机等分为两组：黄芪治疗组(黄芪注射液10 g/kg,腹腔注射,每天1次,连续7d)和对照组(同法每天注射等容积注射用水)。实验第8天留取心肌和血液标本,进行心肌病理检查,逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测心肌穿孔素(PFP)mRNA表达及放免法检测外周血肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。结果：①黄芪治疗组心肌组织病理改变明显轻于对照组;②黄芪治疗组心肌PFP mRNA的表达明显低于对照组［(1.10±0.07) vs (1.31±0.12)］(P<0.01);③黄芪治疗组血清TNF-α含量明显低于对照组［(2.39±0.21) ng/ml vs (2.97±0.32) ng/ml］(P<0.01)。④PFP mRNA表达水平与血清TNF-α含量呈显著正相关(r=0.84,P<0.01)。结论：黄芪注射液对病毒性心肌炎有明显的治疗作用,其机制可能是通过减轻病毒性心肌炎中PFP介导的细胞毒性作用和炎症反应。     

重组人促红细胞生成素对新生大鼠高体积分数氧肺损伤细胞炎症的影响

目的探讨人重组促红细胞生成素(rhEPO)对新生大鼠高体积分数氧(高氧)肺损伤炎症的影响。方法将72只新生SD大鼠按随机数字表法分为4组:对照组、支气管肺发育不良(BPD)组、高氧+低剂量促红细胞生成素[EPO(L)]组、高氧+高剂量促红细胞生成素[EPO(H)]组。BPD组、高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠暴露于850 mL/L氧气中,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组分别于高氧暴露后1、3、7 d给予800 IU/kg、2000 IU/kg rhEPO皮下注射,对照组和BPD组注射等量9 g/L盐水。实验开始后3、7、14 d记录各组体质量。HE染色,光镜下观察其肺组织形态结构的改变,检测肺组织放射状肺泡计数(RAC)。免疫荧光染色法检测核因子-κB(NF-κB)的表达,Western blot技术检测肺组织磷酸化NF-κB(pNF-κB)、抑制蛋白(IκB)及Caspase-3的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(IL-1β)的表达。结果1.BPD组新生大鼠14 d时体质量明显低于对照组[(18.97±3.21)g比(27.97±2.30)g],差异有统计学意义(P<0.05);14 d时,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠体质量[(24.16±2.15)g、(26.04±1.97)g]均显著高于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2.HE染色观察肺组织形态学结构显示,与对照组比较,BPD组3 d肺泡间隔有少量炎性细胞渗出,7 d更为明显,肺泡腔有渗出,14 d出现肺泡数量减少,肺大疱形成,间隔增厚,RAC明显减少(5.50±1.29比14.33±2.80),差异均有统计学意义(P<0.01);高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组新生大鼠肺组织病理改变减轻,炎性细胞浸润减少,RAC值在14 d均明显高于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。3.免疫荧光结果显示,BPD组NF-κB p65阳性细胞数目明显增多,荧光强度增强,给予EPO处理后可减少NF-κB p65阳性细胞数目,荧光强度减弱。4.Western blot结果显示,与对照组比较,BPD组pNF-κB p65及Cleaved Caspase-3显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05);IκB明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与BPD组比较,高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组pNF-κB p65及Cleaved Caspase-3显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05),IκB均明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。5.ELISA结果显示,与对照组比较,BPD组IL-1β表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);高氧+EPO(L)组和高氧+EPO(H)组IL-1β表达则显著低于BPD组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论EPO能通过NF-κB途径抑制细胞炎性反应,减轻高氧诱导的肺组织凋亡,对新生大鼠高氧肺损伤起保护作用。     

膜联蛋白A2对肺炎支原体诱导的人气道上皮细胞EGFR/NF-κB信号转导及黏蛋白表达的影响

目的探讨沉默膜联蛋白A2(Anx A2)对肺炎支原体(MP)处理后人气道上皮细胞H292表皮生长因子受体(EGFR)/核因子κB(NF-κB)信号转导及黏蛋白表达的影响。方法将H292细胞分为对照组、MP组、NC-si RNA+MP组和Anx A2 si RNA+MP组。MP组上皮细胞采用5μg/m L MP抗原孵育2 h。NC-si RNA+MP组和Anx A2 si RNA+MP组细胞分别转染NC-si RNA和Anx A2 si RNA 24 h后用MP抗原刺激2 h。MTT法检测各组细胞活性;实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测各组细胞中Anx A2 m RNA的表达水平;Western blot法检测各组细胞Anx A2、磷酸化EGFR(p-EGFR)、磷酸化p65 NF-κB(p-p65 NF-κB)的表达水平;酶联免疫吸附试验检测黏蛋白5AC(MUC5AC)和黏蛋白5B(MUC5B)的分泌。结果 MP组和NC-si RNA+MP组细胞活性低于对照组(P0.05),Anx A2 si RNA+MP组细胞活性高于MP组和NC-si RNA+MP组,但仍低于对照组(P0.05)。MP组和NC-si RNA+MP组Anx A2 m RNA和蛋白表达水平均明显高于Anx A2 si RNA+MP组(P0.05)。相比于对照组,MP组和NC-si RNA+MP组中p-EGFR、p-p65 NF-κB、MUC5AC和MUC5B的蛋白表达水平均明显升高(P0.05),Anx A2 si RNA+MP组上述蛋白表达水平则低于MP组和NC-si RNA+MP组,但仍高于对照组(P0.05)。结论 Anx A2通过介导人气道上皮细胞EGFR/NF-κB信号活化和黏蛋白表达参与MP抗原诱导的气道病变。