阿托伐他汀对ApoE-/-小鼠关节损伤的保护作用

目的观察阿托伐他汀对ApoE^-/-小鼠关节损伤的保护作用。方法将40只ApoE^-/-小鼠随机分为模型组和药物组,高脂饲料喂养,药物组给予阿托伐他汀10 mg/(kg·d)灌胃,模型组给予等量生理盐水灌胃。20只对照组C57BL/6J小鼠普通饲料喂养。全自动生化分析仪检测血脂变化,ELISA方法检测血清IL-6、TNF-α水平,取膝关节组织标本做HE染色、番红O-固绿染色观察组织形态学变化,透射电镜观察软骨细胞超微结构变化。结果与模型组相比,阿托伐他汀干预药物组血清TC、TG和LDL-C均明显下降(P<0.01),而HDL-C水平升高(P<0.01),血清炎症因子IL-6和TNF-α明显下降(P<0.01),软骨细胞超微结构的损伤明显改善,膝关节滑膜炎症细胞浸润减少,软骨组织结构损伤和骨化程度明显减轻,显著延缓疾病进程。结论阿托伐他汀可通过调节血脂和下调炎症因子对ApoE^-/-小鼠关节损伤产生保护作用。     

参红通络颗粒对 ApoE－／－小鼠动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡的影响及其抗动脉粥样硬化作用机制

目的：探讨参红通络颗粒对载脂蛋白E基因缺陷（ApoE^-/-）小鼠血脂水平、主动脉粥样硬化斑块及斑块内细胞凋亡的影响,阐明参红通络颗粒抗动脉粥样硬化的作用机制。方法：选取无特异病原（SPF）级6周龄雄性ApoE^-/-小鼠40只,适应性喂养1周后,按随机数字表法分为正常对照组、模型组、低剂量中药治疗组和高剂量中药治疗组,每组10只。正常对照组给予普通饲料,其余各组小鼠通过喂饲高脂饲料建立小鼠动脉粥样硬化模型,造模成功后,低和高剂量中药治疗组小鼠分别给予参红通络颗粒5.06和10.12g·kg^-1·d^-1灌胃治疗6周。6周后腹腔麻醉下摘眼球取血,测定各组小鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平;分离主动脉弓,行HE染色,观察各组小鼠主动脉粥样硬化斑块形态并计算斑块面积;TUNEL法检测小鼠主动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡情况,计算凋亡指数;免疫组织化学染色法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果：低剂量中药治疗组小鼠血清TG水平明显低于模型组（P<0.05）,低和高剂量中药治疗组小鼠血清HDL-C水平明显高于模型组（P<0.05或P<0.01）;高剂量中药治疗组小鼠血清TG和HDL-C水平均明显高于低剂量中药治疗组（P<0.05）。与模型组比较,低和高剂量中药治疗组小鼠主动脉粥样硬化斑块面积明显缩小（P<0.01）,主动脉粥样斑块内细胞凋亡指数明显降低（P<0.01）,主动脉粥样斑块内Bcl-2蛋白表达水平明显降低、Bax蛋白表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：参红通络颗粒能够显著升高ApoE^-/-小鼠血清HDL-C水平,并通过调控Bcl-2、Bax蛋白表达抑制细胞凋亡,从而有效抑制动脉粥样斑块进展。     

iPSC-MSCs抑制ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成及其机制

目的探究诱导性多能干细胞源性间充质干细胞(iPSC-MSCs)对高脂饲养的ApoE(-/-)小鼠的动脉粥样硬化抑制作用及其相关机制。方法 40只8周的ApoE-/-小鼠随机分为4组,每组10只:普通饲料组:给予普通饲料喂养,高脂饲料组:给予高脂饲料喂养,干细胞组:给予高脂喂养同时尾静脉注射iPSC-MSCs,PBS组:给予高脂喂养同时尾静脉注射PBS。12周后观察小鼠主动脉粥样硬化斑块形成情况、血脂水平、炎症因子水平以及Nothc1蛋白的表达情况。结果高脂喂养后,高脂组ApoE(-/-)小鼠的斑块面积较普通饲料组明显增多,且小鼠总胆固醇(CHOL)、低密度脂蛋白(LDL)、TNF-α、IL-6分别为(32.02±2.32)mmol/L、(20.36±0.90)mmol/L、(534.30±89.51)pg/ml、(32.69±1.86)pg/ml均较普通饲料组明显升高,差异具有统计学意义(P0.01);注射iPSC-MSCs后斑块面积明显减小,小鼠的CHOL、LDL、TNF-α、IL-6水平分别为(24.98±1.18)mmol/L、(15.34±1.54)mmol/L、(230.6±13.31)pg/ml、(8.54±2.02)pg/ml,较高脂组明显下降,差异具有统计学意义(P0.05)。且高脂组中ApoE(-/-)小鼠的Notch1蛋白水平要明显高于普通饲料组(P0.01),iPSC-MSCs干预后Notch1蛋白表达水平要明显低于高脂组(P0.05),PBS对于ApoE(-/-)小鼠Notch1蛋白表达无影响(P0.05)。结论 iPSC-MSC可以抑制ApoE(-/-)小鼠动脉粥样硬化斑块形成,可能与iPSC-MSCs可以减轻ApoE(-/-)小鼠TNF-a、IL-6等炎症因子水平,降低胆固醇含量,下调Notch1的蛋白表达有关。     

达格列净对动脉粥样硬化的影响以及与钠氢交换体1相关机制

目的 探讨达格列净对载脂蛋白E敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的影响以及与钠氢交换体1(NHE1)相关的机制。方法 6周龄雄性ApoE^-/-小鼠24只,随机分为普通饮食组、高脂饮食组、高脂饮食+达格列净组(10 mg/(kg·d))以及高脂饮食+格列美脲组(0.5 mg/(kg·d))。8周后,HE染色检测小鼠主动脉的AS斑块情况,定量PCR及免疫印迹法检测主动脉钠葡萄糖协同转运蛋白2(SGTL2)表达,免疫组化法检测主动脉NHE1表达。进而给予达格列净(10μmol/L)、阿米洛利(20μmol/L)以及脂多糖(100 ng/mL)干预小鼠巨噬细胞系RAW 264.7细胞处理24 h,免疫印迹法检测NHE1蛋白表达以及SNARF-1/AM荧光法检测NH₄Cl诱导pH值回复率(NHE1活性);酶联免疫吸附法检测TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10分泌情况。结果 高脂饮食+达格列净组主动脉的AS斑块面积显著低于高脂饮食组(P<0.05);各组主动脉斑块内均极低表达SGLT2(P<0.0...     

瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化的治疗作用及其机制

目的: 探讨瑞舒伐他汀对载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化模型血脂水平、动脉粥样硬化斑块及斑块内细胞凋亡的影响,阐明瑞舒伐他汀抑制动脉粥样斑块进展及斑块内细胞凋亡的机制。方法: 选取健康6周龄雄性ApoE^-/-小鼠30只,随机分为高脂饮食组、高脂+他汀组和普通饮食对照组,每组10只。前2组小鼠给予高脂饮食,普通饮食对照组小鼠给予普通饲料,喂养4周后,3组小鼠分别给予0.9%生理盐水、瑞舒伐他汀(10mg·kg^-1·d^-1)和0.9%生理盐水灌胃8周,ELISA法检测各组小鼠血清血脂水平,HE染色观察小鼠动脉粥样硬化斑块大小,TUNEL法检测斑块内细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测凋亡相关基因Bax蛋白表达。结果: 高脂+他汀组小鼠血清总胆固醇(TC)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平明显低于高脂饮食组(P<0.05或P<0.01),高脂+他汀组高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显高于高脂饮食组(P<0.01)。高脂饮食组小鼠主动脉粥样斑块呈巨块型,斑块内可见大量泡沫细胞、胆固醇结晶、坏死细胞及炎性细胞;高脂+他汀组小鼠主动脉粥样斑块较小,泡沫细胞、坏死细胞和炎性细胞均较少;高脂+他汀组小鼠主动脉粥样斑块面积明显小于高脂饮食组(P<0.01);高脂+他汀组小鼠主动脉粥样斑块内细胞凋亡指数明显低于高脂饮食组(P<0.01)。与高脂饮食组比较,高脂+他汀组小鼠Bax蛋白表达明显降低。结论: 瑞舒伐他汀可以抑制动脉粥样斑块进展,抑制斑块内细胞凋亡,其作用机制可能与线粒体途径有关。     

半乳糖凝集素-3通过lncARSR影响小鼠冠状动脉粥样硬化易损斑块稳定的机制

目的 探讨半乳糖凝集素-3（Gal-3）通过lncARSR影响冠状动脉粥样硬化易损斑块稳定的机制。方法 将60只雄性BALB/c小鼠随机分为3组（n=20）：正常饮食组、高脂饮食组（15%脂肪+0.25%胆固醇饮食）、高脂饮食+lncARSR抑制剂组（15%脂肪和0.25%胆固醇饮食,隔日尾静脉注射50 nmol/L lncARSR抑制剂）,12周后取材。通过苏丹IV和油红O染色分析小鼠冠状动脉粥样硬化及斑块损伤,Westen blot分析小鼠冠状动脉Gal-3和ARSR蛋白表达,免疫组化检测小鼠冠状动脉中PI3K和Akt表达。同时取冠状动脉组织进行细胞培养,分为对照转染组、Gal-3转染组和Gal-3抑制组,转染24 h后用双荧光素酶报告基因测定Gal-3与lncARSR的靶标关系,RT-qPCR检测转染细胞中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-β（IL-β）、IL-6的mRNA表达。结果 正常饮食组苏丹IV阳性面积和红油染色面积以及ARSR的蛋白表达最低,而高脂饮食组最高（P<0.05）;Gal-3转染组较对照转染组、Gal-3抑制组的WT-lncARSR酶活性升高（P=0.026）,Gal-3抑制组较对照转染组WT-lncARSR酶活性降低（P= 0.017）。高脂饮食组较正常饮食组PI3K和Akt的蛋白以及TNF-α、IL-β、IL-6的mRNA表达升高,高脂饮食+lncARSR抑制剂组较高脂饮食组PI3K和Akt的蛋白以及TNF-α、IL-β、IL-6的mRNA表达降低（P<0.05）。结论 冠状动脉粥样硬化中Gal-3和lncARSR过量表达。Gal-3能靶向调控lncARSR,通过抑制lncARSR表达,调控PI3K/Akt信号通路,降低炎症反应,调节冠状动脉粥样硬化易损斑块稳定。     

miR-29c通过调控SIRT1表达介导动脉粥样硬化氧化应激与炎症反应

目的研究miR-29c能否通过调控沉默信息调节因子2相关酶类1(SIRT1)的表达影响动脉粥样硬化(AS)进程中氧化应激及炎症反应。方法采用ApoE^-/-基因敲除小鼠(ApoE^-/-),经适应性饲养,于6周龄时以高脂饲料喂养,构建AS模型(AS组);以C57BL/6J小鼠为正常对照组,给予普通饲料喂养。12周后取主动脉,检测miR-29c表达以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA水平、活性氧(ROS)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶水平。培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),分别转染miR-29c mimic和antagomir,以氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)(50μg/ml)进行刺激,检测各组TNF-α表达、ROS、NADPH氧化酶水平。此外,实时PCR和Western blot检测oxLDL诱导的内皮细胞损伤模型中SIRT1 mRNA及蛋白表达水平变化,并进一步检测正常细胞转染miR-29c mimic与antagomir后SIRT1 mRNA及蛋白表达水平。结果与正常组比较,AS组miR-29c表达及TNF-αmRN...     

PM2.5通过激活巨噬细胞内质网应激进而影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块

探讨细颗粒物（PM2.5）通过激活巨噬细胞内质网应激促进巨噬细胞细胞质内Ca2+的积累,进而影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块的形成。方法 体内实验 ：8周龄ApoE-/-小鼠共计24只,随机分为对照组和PM2.5组,每组12只。采用高脂饲料喂养8周后,对照组小鼠气管内滴注生理盐水,PM2.5组小鼠气管内滴注PM2.5的生理盐水混悬液（30 mg/kg/d）。8周后主动脉根部石蜡切片行movat染色、DHE法检测氧自由基（ROS）水平;采用TUNEL法对斑块内细胞凋亡情况进行检测;Western Blot法检测内质网应激下游炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1蛋白的表达量。体外实验：分离培养小鼠原代腹腔巨噬细胞后,将细胞分为对照组（无刺激）、LPS组（模型组,LPS 100ng/mL,24 h）、LPS+PM2.5组（24 h）。采用钙离子荧光探针Fura-2 AM检测巨噬细胞内Ca2+ 的积累量,Western Blot法检测巨噬细胞内IL-6、TNF-α、MCP-1蛋白的表达量。结果 体内实验 PM2.5组小鼠AS斑块面积明显增大,ROS水平显著增高(P＜0.001);斑块内坏死凋亡细胞数量明显增多,内质网应激下游炎症因子IL-6、TNF-α、MCP-1蛋白表达量升高(P＜0.001);体外实验 LPS+PM2.5组与LPS组比较,细胞内Ca2+ 积累量明显增多(P＜0.001);IL-6、TNF-α、MCP-1蛋白的表达量均升高(P＜0.001)。结论 经PM2.5处理的高脂饲养的ApoE-/-小鼠,PM2.5可作用于巨噬细胞,激活其内质网应激,导致巨噬细胞细胞质中Ca2+ 积累增加,使氧自由基的产生与斑块内细胞坏死凋亡数量增加,对动脉粥样硬化斑块的发生发展起到促进作用     

瑞舒伐他汀对动脉粥样硬化APOE-/-小鼠VCAM-1、VEGF和TNF-α表达的影响

目的 探讨瑞舒伐他汀对载脂蛋白E敲除基因(APOE^-/-)小鼠动脉粥样硬化的作用以及对血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）和α肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor, TNF-α）表达的影响。方法 将18只8周龄健康雄性APOE^-/-小鼠随机分为3组,即模型组、低剂量治疗组和高剂量治疗组,每组6只,6只C57BL/6小鼠作为对照组;除对照组小鼠用普通饲料喂养外,3组APOE^-/-小鼠均用高脂饲料喂养。喂养8周后,低剂量治疗组按瑞舒伐他汀1.5 mg/kg灌胃给药,高剂量治疗组按瑞舒伐他汀5 mg/kg灌胃给药,对照组和模型组用等量蒸馏水灌胃,1次/d,共8周;取胸主动脉HE染色后,观察主动脉的病理形态学变化,计算主动脉内弹力板周长、外弹力板周长、残腔周长和动脉粥样硬化斑块的面积;分别用蛋白质免疫印迹（Western Blot, WB）法...     

血管软化丸调控Nrf2/xCT/GPX4通路抑制血管内皮细胞铁死亡改善动脉粥样硬化的作用机制

目的 从核因子E2相关因子2(Nrf2)/胱氨酸谷氨酸反向转运蛋白(xCT)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)通路探讨血管软化丸对ApoE^-/-动脉粥样硬化(AS)小鼠铁死亡的作用及分子机制。方法 10只普通饲料喂养C57BL/6J雄性小鼠为正常组。ApoE^-/-小鼠高脂饲料喂养12周构建AS动物模型,按随机数字表法将50只造模成功的小鼠分为模型组、血管软化丸低剂量(2.34 g/kg)组、血管软化丸高剂量(4.68 g/kg)组、血管软化丸高剂量+ML385(0.03 g/kg)组、铁死亡抑制剂(1 mg/kg)组,每组10只,连续干预6周。采用全自动血脂分析仪检测血脂水平[甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)],油红O染色观察主动脉脂质沉积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉窦组织形态学变化,比色法检测各组小鼠血清中Fe²⁺、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平,免疫荧光观察各组小鼠主动脉窦铁蛋白重链(FTH1)和铁蛋白...     

麝香保心丸对小鼠动脉粥样硬化的作用及机制研究

目的探究麝香保心丸在载脂蛋白E(ApoE)敲除小鼠中的抗动脉粥样硬化作用及其作用机制。方法2019年9月—2020年8月于武汉科技大学实验动物中心进行实验。ApoE基因敲除雄性小鼠60只,按照随机数字表法分为2组,各30只。干预组小鼠予麝香保心丸(25 mg/kg)研沫+生理盐水灌胃,对照组予生理盐水(与干预组等体积)灌胃。2组小鼠均高脂饲养20周后处死,取主动脉树及主动脉窦染色,比较2组小鼠主动脉树及主动脉窦部斑块面积,取血液检测血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,免疫荧光法及PCR法检测小鼠主动脉组织白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,PCR及Western-blot法检测小鼠主动脉组织肝细胞X受体-α(LXRα)、LXRβ、ATP结合盒转运蛋白A1(ABCA1)、ABCG1表达水平。结果干预组小鼠主动脉树及主动脉窦部斑块面积均低于对照组(t/P=3.021/0.019、3.238/0.001);血清TG、TC、LDL-C水平均低于对照组(t=5.074、6.327、4.492,P均<0.001),而HDL-C水平高于对照组(t/P=3.138/0.001)。干预组小鼠主动脉组织IL-6及TNF-αmRNA水平明显低于对照组(t/P=3.027/0.017、2.478/0.019),主动脉组织LXRα、LXRβ、ABCA1、ABCG1 mRNA均高于对照组(t=5.276、6.137、4.565、5.136,P均<0.01)。结论麝香保心丸通过抑制炎性反应和促进胆固醇流出,可达到抗动脉粥样硬化的目的。     

基于RhoA/ROCK/NF-κB信号通路探究益肾活血化痰方对动脉粥样硬化小鼠炎症反应的影响

目的 探讨益肾活血化痰方对动脉粥样硬化(AS)小鼠炎症反应的影响及机制。方法 采用高脂饲养法制备AS模型。将小鼠分为对照组、模型组、药物组(303 mg/kg益肾活血化痰方灌胃给药)、抑制剂组(仅给予5 mg/kg的ROCK抑制剂Y-27632腹腔注射)、阳性药物组(3.03 mg/kg的阿托伐他汀灌胃给药),每组10只。油红O染色观察小鼠主动脉组织斑块形成。ELISA法检测血清炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)水平,自动生化分析仪检测血脂(TG、TC、LDL-C、HDL-C)水平,免疫组化法检测主动脉组织IL-1β表达。Western blot法检测主动脉组织RhoA、ROCK蛋白表达及NF-κB p65磷酸化水平。结果 与对照组比较,模型组小鼠血清TG、TC、LDL-C、TNF-α、IL-1β、IL-6水平显著升高(P<0.05),HDL-C水平显著降低(P<0.05),主动脉斑块面积增大(P<0.05),主动脉组织IL-1β、RhoA、ROCK蛋白表达及p-NF-κB p65/NF-κB p65显著升高(P<0.05)。与模型组比较,药物组、抑制...     

电针对ApoE~（-/-）小鼠血浆hs-CRP、IL-6含量及主动脉窦斑块TNF-α表达的影响

目的观察电针对ApoE-/-小鼠血浆超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)含量及主动脉窦斑块肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法将造模成功的ApoE-/-小鼠30只随机分为模型组和药物组及电针组,每组各10只。电针组予针刺单侧神门、内关、后三里及三阴交,并接通韩氏电针仪,药物组给予辛伐他汀40mg/(kg·d)。采用ELISA法检测各组小鼠血浆hs-CRP及IL-6的含量,免疫组织化学法检测各组小鼠主动脉窦斑块中TNF-α的表达。结果电针组血浆中hsCRP、IL-6含量与模型组相比较,均有显著降低(P0.01);主动脉窦TNF-α免疫组化显示:模型组有大量TNF-α分布于纤维帽上,斑块中含有大范围坏死核和胆固醇结晶体,而电针组少量TNF-α表达于纤维帽上,未见明显坏死核和胆固醇结晶体。结论电针治疗改善了ApoE-/-小鼠机体的炎症反应状态、达到保护血管内膜、抑制斑块发展的作用,说明抗炎可能是电针治疗AS的机制之一。     

辛伐他汀对兔硬化髂动脉TNF-α的影响

目的研究辛伐他汀对兔粥样硬化髂动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响. 方法30只雄性新西兰大白兔,分别予普通饲料喂养(n=8)及高脂喂养(胆固醇1g/d,猪油10g/d;n=22)6周.高脂喂养2周后行髂动脉内膜球囊损伤术;术后辛伐他汀组(n=12)予辛伐他汀15mg/d;分组喂养4周后处死所有动物取一侧病变髂动脉做病理切片,用免疫组化方法观察TNF-α的表达情况;取另一侧病变髂动脉抽提总RNA和总蛋白,分别应用半定量逆转录多聚酶链式反应和Western蛋白印迹测定TNF-αmRNA和蛋白质水平的表达. 结果辛伐他汀可以显著降低兔血浆总胆固醇,降低粥样硬化髂动脉组织TNF-α的表达,正常对照组、基础对照组和辛伐他汀组动脉壁 TNF-α mRNA的相对值分别为0.16±0.024、0.56±0.050、0.37±0.031,相互间有统计学差异(P＜0.05),Western blot 检测和免疫组化结果一致. 结论辛伐他汀可以显著降低兔粥样硬化髂动脉组织TNF-α的表达.     

靶向干预Sestrin 1对动脉粥样硬化小鼠斑块内巨噬细胞极化和血管内皮损伤的影响

目的分析Sestrin 1对动脉粥样硬化小鼠斑块内巨噬细胞极化的调控作用及对血管内皮炎性损伤的影响。方法将40只ApoE^-/-小鼠随机分为对照组、模型组、si-NC组和si-Sestrin 1组,对照组小鼠正常饲养,其余小鼠均采用高脂饮食法建立动脉粥样硬化模型。建模成功2周后,si-NC组和si-Sestrin 1组分别给予尾静脉注射携带对照序列和Sestrin 1干扰序列的RAW 264.7细胞,其他两组输入等量细胞培养液。末次输注后次日,分离各组小鼠胸主动脉,油红O染色后测量斑块总面积,并测定斑块内活性氧活性;分离斑块中的巨噬细胞,采用流式细胞仪测定巨噬细胞表面标志物CD64、CD197、CD163、CD206阳性率,实时定量PCR测定肿瘤坏死因子α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)的mRNA表达量,蛋白免疫印迹法测定Sestrin 1蛋白表达量。结果 (1)对照组、模型组、si-Sestrin 1组的斑块面积依次增加,斑块内活性氧活性依次升高,Sestrin 1蛋白表达量依次降低(均...     

养阴活血方干预ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠DNA甲基化酶的研究

  目的  从DNA甲基化角度观察养阴活血方及其功效单元干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis, AS)进程。  方法  ApoE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组、养阴活血方组、养阴组、清热组和活血组。对照组小鼠给予普通饲料喂养, 其余组小鼠均给予高脂饲料喂养。分别于第10、12、14、16、18周, 对照组小鼠注射等体积无菌PBS, 其余组腹腔注射10 μg的LPS。灌胃给药与高脂饲料喂养同时进行, 第20周检测。油红O染色观测小鼠主动脉斑块面积; 生化试剂盒检测小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、non-HDL-C水平; HE冠脉染色观测小鼠冠脉管腔狭窄情况和管腔面积; qPCR检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Tet1、Tet2、Tet3、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA表达; Western blot检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达; ELISA检测细胞因子IL-6、IL-2、TGF-β1的变化。  结果  与模型组相比, 养阴活血方组能显著减少斑块面积并抑制冠脉狭窄(P < 0.01), 降低TG、LDL-C水平(P < 0.01), 升高HDL-C水平(P < 0.05), 降低脾脏Dnmt1和Dnmt3a蛋白表达(P < 0.05), 降低主动脉Dnmt1 mRNA、Dnmt3b mRNA(P < 0.05, P < 0.001)和主动脉Dnmt1、Dnmt3b蛋白表达(P < 0.05), 下调血清IL-6水平(P < 0.05), 上调TGF-β1水平(P < 0.05)。与模型组比较, 各功效单元组均不同程度减少斑块面积、调节血脂水平; 养阴组降低脾脏Dnmt3b mRNA表达(P < 0.05), 降低主动脉Dnmt3b mRNA(P < 0.001)和Dnmt3a蛋白(P < 0.05)表达, 升高TGF-β1水平(P < 0.05);清热组降低脾脏Dnmt1蛋白表达(P < 0.05), 主动脉Dnmt1和Dnmt3b mRNA(P < 0.05)和Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达(P < 0.05), 降低IL-6水平(P < 0.05), 增加TGF-β1水平(P < 0.05);活血组降低主动脉Dnmt3a和Dnmt3b蛋白表达(P < 0.05), 降低IL-6水平(P < 0.05)。  结论  养阴活血方通过调节血脂, 降低DNA甲基化酶Dnmts的表达, 改善炎症水平, 从而有效减少高脂联合LPS注射诱发的ApoE-/-小鼠AS斑块的形成。      

牙龈卟啉单胞菌促进动脉粥样硬化的机制研究

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌(P. gingivalis)加速载脂蛋白E基因敲除(ApoE^-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)形成的分子生物学机制。 方法 ApoE^-/-小鼠分为对照组和P. gingivalis感染组,每周通过尾静脉注射磷酸盐缓冲液或P. gingivalis活菌1次,共10次。末次注射后24 h,检测血液中炎症细胞因子水平; 测量主动脉粥样斑块面积,分析主动脉血管壁的炎症因子、Toll样受体-2(TLR-2)和TLR-4表达水平以及核因子-κB(NF-κB)的活化水平。 结果 与对照组比较,P. gingivalis感染组主动脉粥样斑块面积增加; P. gingivalis感染后,血液中肿瘤坏死因子(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和白细胞介素-1β(IL-1β)的水平显著增加; 免疫组织化学显示,P. gingivalis感染后主动脉组织TNF-α和MCP-1表达水平显著增加; 免疫印迹显示,P. gingivalis感染导致主动脉组织TLR-2和TLR-4表达增加; EMSA显示,P. gingivalis感染后血管壁NF-κB信号活性增加。 结论 P. gingivalis通过TLRs/NF-κB信号通路,促进血管壁局部和全身炎症反应,加速ApoE^-/-小鼠AS形成。     

丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除动脉粥样硬化小鼠主动脉TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路变化研究

目的 :通过观察丹参酮Ⅱ A对Apoe基因敲除(ApoE-/-)小鼠主动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)/p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)/血清核因子-κ B(NF-κ B)/视黄醇结合蛋白(RBP4)信号通路变化,探讨丹参酮Ⅱ A对动脉粥样硬化炎症反应过程的影响及其作用机制。方法 :将20只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、丹参酮Ⅱ A组,每组10只,空白对照组选取具有相同遗传背景的同龄野生型C57BL/6J小鼠10只;模型组与丹参酮Ⅱ A组均给予高脂饲料喂养8周,空白对照组给予普通饲料喂养;丹参酮Ⅱ A组每日灌胃丹参酮Ⅱ A(30 mg/kg),空白对照组与模型组给予等量生理盐水灌胃,8周后,分离3组小鼠血清,分离主动脉,分别保存于4%多聚甲醛和-80℃冰箱。Elisa法检测小鼠血清TNF-α、RBP4水平变化,全自动生化分析仪检测血清中TG、TC、HDL-C、LDL-C水平,HE染色法观察主动脉组织形态学变化,Western blot法检测TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白表达,RT-PCR法检测主动脉TNF-α、NF-κ B、RBP4基因表达情况。结果 :与空白对照组相比,模型组小鼠血清中TG、TC、LDL-C水平显著升高(P0.05),HDL-C水平显著降低(P0.05);主动脉管腔内可见较大的AS斑块形成;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著升高(P0.05)。与模型组相比,丹参酮Ⅱ A组TG、TC、LDL-C水平显著降低(P0.05),HDL-C水平显著升高(P0.05);主动脉管腔内的AS斑块面积显著减小;TNF-α、p38MAPK、NF-κ B、RBP4蛋白和TNF-α、NF-κ B、RBP4基因m RNA水平显著降低(P0.05)。结论 :丹参酮Ⅱ A具有调节血脂和抗AS的作用,其机制可能与其参与TNF-α/p38MAPK/NF-κ B/RBP4信号通路调控有关。     

白藜芦醇通过抑制小鼠肥大细胞增殖、脱颗粒,减轻动脉粥样硬化的发生

目的:观察小鼠肥大细胞炎症反应在白藜芦醇灌胃减轻Apo E-/-小鼠进展期动脉粥样硬化过程中的作用。方法:30只Apo E-/-小鼠从6周开始,取其中的20只,进行连续24周的高脂饲料喂养,造成进展期动脉粥样硬化模型。于高脂喂养12周后,在20只小鼠中随机分出10只进行白藜芦醇灌胃干预(50 mg/kg)。取心脏主动脉流出道进行石蜡包埋切片,H.E.染色显示大体病变改变,Movat染色显示动脉粥样硬化病变,甲苯胺蓝染色显示结缔组织肥大细胞分布、数量和脱颗粒状态。免疫组织化学显示IL-6、TNF-α表达。结果:经过高脂喂养后,H.E.和Movat染色显示心脏流出道管壁附着粥样硬化斑块面积明显增加,白藜芦醇灌胃12周可以减轻粥样硬化斑块内胆固醇结晶的面积(14.7%vs 10.6%),增加胶原纤维比例(31.9%vs 42.5%),并表现出具有较厚纤维帽的稳定型斑块特征。甲苯胺蓝染色显示在病变组的血管周围结缔组织中,出现成簇的、三五成群的肥大细胞,部分肥大细胞呈现脱颗粒状态。白藜芦醇干预可以减少肥大细胞浸润数量(11.4个/只vs 6.5个/只),抑制脱颗粒反应细胞比例(28.6%vs 11.1%),减少肥大细胞浸润区域IL-6、TNF-α表达。结论:白藜芦醇可能通过小鼠较少血管周围结缔组织中肥大细胞的数量及脱颗粒反应,减轻局部炎症,延缓动脉粥样硬化的发生。     

炎症诱导SCAP功能失调促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的分子机制

目的 探讨炎症诱导胆固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失调促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的分子机制.方法 24只8周龄雄性ApoE-/-小鼠(C57BL/6遗传背景,体质量18～24 g)随机分组为高胆固醇饮食组(n=12,对照组)和高胆固醇饮食+炎症组(n=12,炎症组).炎症组小鼠给予隔日皮下注射10％酪蛋白,非炎症组小鼠给予隔日皮下注射生理盐水,共14周.双抗夹心ELISA法检测ApoE-/-小鼠血清炎症指标(serum amyloid A,SAA)和TNF-α水平,HE染色观察ApoE-/-小鼠主动脉结构及局部炎症细胞浸润情况,油红O染色观察ApoE-/-小鼠主动脉斑块形成情况,Real-time PCR法与免疫组织化学法检测ApoE-/-小鼠主动脉LDLr、SREBP2、SCAP、α-甘露糖苷酶Ⅰ及α-甘露糖苷酶ⅡmRNA与蛋白表达.结果 炎症组小鼠血清SAA[(529 ±23)ng/mL]与TNF-α[(37 900 ±3 100)ng/mL]水平显著高于对照组小鼠血清SAA[(248±27) ng/mL]与TNF-α[(1 789±219) ng/mL]水平(P＜0.01),表明ApoE-/-小鼠炎症模型建立成功.炎症组小鼠较对照组小鼠主动脉粥样硬化性病变更为严重(P＜0.01),其LDLr、SCAP及α-甘露糖苷酶ⅡmRNA及蛋白表达、细胞核内NSREBP2水平明显高于对照组(P＜0.05).结论 炎症通过增加血管壁细胞内胆固醇敏感器SCAP的表达,并通过增强高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ对SCAP的糖基化修饰,促进ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的发生和发展.