荧光定量PCR与快速培养法在肺炎支原体临床检测应用比较

目的 比较荧光定量聚合酶链式反应(PCR)与快速培养法检测肺炎支原体(MP)的临床价值.方法 2019年9月-2020年9月,连续纳入本院收治的疑似肺炎支原体肺炎(MPP)患儿160例,以MP-IgM抗体阳性为金标准,采用荧光定量PCR与快速培养法对患儿血清标本中的MP进行检测,比较2种方法的检出率及检出效能.结果 1...     

贵州地区呼吸道感染儿童中肺炎支原体检测与分析

目的探讨肺炎支原体(MP)DNA及MP抗体联合检测的临床诊断价值。方法收集临床疑似MP感染的268例患儿样本,凝集法检测血清MP-抗体、实时荧光定量PCR法检测MP-DNA。结果 268例病例中65例确诊为MP肺炎,两种方法灵敏度分别为70.77%、87.69%,差异有统计学意义(P<0.05);特异度分别为95.07%、96.06%,差异无统计学意义。结论对疑似MP感染患儿同时进行抗体和DNA检测,可有效避免漏检。     

多重荧光定量聚合酶链反应对呼吸道感染患儿支原体和衣原体感染的诊断价值

目的 探讨多重荧光定量PCR技术(TaqMan探针法)在检测呼吸道感染住院患儿中肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)和沙眼衣原体(CT)的应用价值.方法 构建质粒标准品,梯度稀释后进行扩增建立标准曲线检测多重荧光定量PCR方法的扩增效率,并验证其敏感性、特异性和重复性;收集151例疑似呼吸道感染住院患儿的咽拭子样本,采用多重荧光定量PCR技术检测MP、CP和CT基因片段,其中128例样本同时进行MP-IgM和CP-IgM的血清学检测,评价该方法在临床检测中的应用价值.结果 本实验中MP、CP和CT三种病原体的引物和探针的扩增效率分别达到109.20％、116.90％和112.80％,三种病原体的最低检出浓度分别为50、25和25 pg/μL,与其他已知病原体不存在交叉反应;不同批次间三种病原体的扩增Ct值的变异系数均小于3％.151份样本中,多重PCR检测出MP、CP和CT阳性率分别为23.84％(36份)、17.88％(27份)和2.65％(4份),128份样本中MP-IgM阳性检出率为22.65％;CP-IgM阳性检出率为14.06％.结论 多重荧光定量PCR方法可以为临床幼儿呼吸道感染病原体的早期检测提供快速可靠的辅助诊断依据.     

应用快速培养法与real-time PCR检测儿童肺炎支原体

【目的】探讨肺炎支原体快速培养与实时荧光定量PCR在儿童支原体感染早期快速诊断中的价值,寻求更适合临床应用的肺炎支原体检测方法。【方法】对106例呼吸道感染儿童患者咽拭子标本,同时应用肺炎支原体快速鉴定培养法进行MP培养检测和实时荧光定量PCR检测MP-DNA,并分析两种方法结果。【结果】106例呼吸道感染患儿咽拭子标本中肺炎支原体快速培养阳性31例,检出率是29.3%(31/106),PCR方法阳性28例,检出率是26.4%(28/106)。两种方法检出阳性病例不完全相符。联合检查检出率为46.2%。【结论】两种检测方法各有优、缺点,联合应用可以提高检出率,减少漏诊。     

肺炎支原体肺炎患儿DNA拷贝量与临床特征及耐药性的相关性研究

目的研究肺炎支原体(MP)肺炎患儿DNA拷贝量与病情严重程度的关系。方法选取南通市第一人民医院儿科住院的肺炎支原体肺炎的158例患儿作为研究对象,采用实时荧光定量PCR法对咽拭子MP-DNA定量检测,根据检测结果分为低拷贝量组75例及高拷贝量组83例。比较不同DNA拷贝量患儿的临床症状、实验室指标、影像学表现及耐药基因检测结果。结果高拷贝量组患儿总热程、使用大环内酯类后热程、住院时间均长于低拷贝量组,差异均有统计学意义(均P0.05),商拷贝量组患儿发生呼吸困难/窘迫、难治性肺炎支原体肺炎的比例、细胞因子及A2063G突变率均高于低拷贝量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 MP肺炎患儿DNA拷贝量与病情严重度有关,MP肺炎患儿进行DNA定量检测有利于病情监测及指导临床治疗。     

荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染方法的建立

目的 建立Taqman探针法荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染的实验室诊断方法.方法 针对肺炎链球菌自溶素基因设计引物及探针,建立荧光定量PCR Taqman探针法检测肺炎链球菌感染.采用肺炎链球菌标准株,构建质粒,用质粒构建标准品,扩增标准品,绘制标准曲线并检验新建荧光定量PCR的敏感性,采用本实验冻存其他菌DNA样本,检测其特异性;采集2015年9月至2015年12月份北京地区家5家医院儿童门诊或病房,诊断为呼吸道感染患儿的咽拭子标本133例,对新建荧光定量PCR法进行临床样本的验证.结果 绘制了荧光定量PCR Taqman探针法检测肺炎链菌感染的标准曲线;新建荧光定量PCR可检测的肺炎链球菌最低拷贝数为10copies/μL;新建荧光定量PCR可成功区分几种病原体DNA,具有较好特异性;采用新建荧光定量PCR检测临床样本132例,其中肺炎链球菌阳性25例,阳性率为18.94%.结论 新建立的荧光定量PCR检测肺炎链球菌感染的实验室诊断方法具有较高的敏感性和特异性,可用于临床样本的检验.     

2011年北京市顺义区应用实时荧光PCR检测肺炎支原体检测结果分析

目的:通过对北京市顺义区2011年肺炎支原体(mycoplasma pneumonia,MP)实时荧光PCR检测数据进行分析,为支原体肺炎早期诊断及防控工作提供科学依据。方法:采用实时荧光PCR法对肺炎病例鼻咽拭子进行MP核酸检测。采用SPSS13.0对检测结果进行统计学分析。结果:117例肺炎病例中共检出MP核酸阳性18例,阳性率为15.38%。各季节、性别之间MP阳性率差异无统计学意义。分年龄组对MP阳性率进行比较,主要感染人群在35岁以下,差异具有统计学意义。结论:青少年为MP检测阳性的重点人群。MP感染与性别、发病季节无明显关系。实时荧光PCR检测对支原体肺炎的早期诊断和临床用药具有重要意义。     

肺炎支原体RNA和DNA检测在儿童支原体感染诊断中的动态评价

目的比较肺炎支原体(Mycoplasma pneumonia,MP)RNA实时荧光恒温扩增技术(MP-SAT)与肺炎支原体DNA实时荧光定量PCR(MP-DNA)2种方法对早期诊断肺炎支原体感染的作用以及治疗监测的临床意义。方法采集入院24 h内咽拭子标本,分别用2种方法检测,并对MP-SAT与MP-DNA均阳性的28例患儿进行随访检测。结果SAT法检测RNA的敏感度和特异度分别为84.9%和92.5%,2种方法检测的符合率为89.7%。随着大环内脂类抗生素治疗时间的延长,2种方法的检出率逐步降低。住院治疗第5 d时,MP-SAT和MP-DNA分别降为78.6%和71.4%;但在第10 d和第15 d,MP-DNA的下降幅度明显加快,住院率分别为32.1%和7.1%。结论 SAT技术可简单、快速检测RNA,检测效能和实时荧光定量PCR相当,两者联合检测可显著提高早期MP感染的检出率。MP-SAT转阴时间慢于MP-DNA,部分患儿临床症状消失后仍可检出MP-SAT。     

肺炎支原体核酸定量在儿童下呼吸道感染患者精准诊疗中的价值

目的探讨肺炎支原体核酸(MP DNA)定量检测在儿童下呼吸道感染患者诊断和治疗监测中的价值。方法选取本院2017年9月-2018年5月住院儿童下呼吸道感染患者138例,采用标准化吸痰留取标本,进行MP DNA荧光定量PCR(FQ-PCR)检测,并对其中13例患儿进行MP DNA连续监测,从初诊至21 d,每7 d检测1次MP DNA定量。最后统计分析MP DNA定量在儿童下呼吸道感染诊疗中的拷贝数变化。结果 138例儿童下呼吸道感染的患者中MP NDA阳性患儿121例(87.7%),其阳性患儿中男女之间与不同年龄段之间DNA定量值差异均无统计学意义(P0.05)。其中选取的13例阳性患儿,通过大环内酯类抗生素的治疗,除1 d和7 d之间差异无统计学意义(P0.05),其他进行两两比较,差异均有统计学意义(P0.05)。虽然部分患者在治疗过程中MP DNA定量拷贝数有反复,但最终总体呈下降趋势。结论 MP DNA定量在儿童MP感染的治疗监测中具有重要意义,同时规范化的标本取材有助于MP感染患者的精准诊疗。     

PCR诊断支原体肺炎及临床分析

我院1995年2月～1995年12月对拟诊支原体肺炎的64例患儿,应用聚合酶链反应(PCR)技术检测MP DNA,同时做冷凝集试验,诊断支原体肺炎,两种检测方法结果显示,前者灵敏度高,特异性强,快速、简便。     

荧光定量PCR仪检测HBV DNA结果比对分析

目的:探讨分析应用荧光定量PCR仪检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA的结果。方法:选取2018年8月~2019年9月本院收治的30例乙型肝炎患者,按数字法随机分两组,各15例,对照组仪器采用RLC480仪检测,观察组仪器采用荧光定量PCR仪检测,通过对患者HBV DNA水平的测定,对比分析不同仪器检测的结果。结果:RLC480型荧光定量PCR仪器和ABI7500型荧光定量PCR仪器两种仪器测定结果未出现离群值;两台仪器的检测HBV DNA结果的相关性良好(r>0.975);两台PCR检测仪器检测结果的偏倚度百分比为3.18%(<7.51%),一致性良好,且系统误差在可接受的范围内。结论:ABI7500型荧光定量PCR仪器和RLC480型荧光定量PCR仪器检测HBA DNA的一致性极高,误差小,测算乙型肝炎DNA结果偏倚度在可控范围内,两种仪器运用于乙型肝炎的测量结果可用于以后的临床检测中。     

肺炎支原体大环内酯类药物耐药机制研究

目的了解本地区儿童肺炎支原体(MP)的感染及大环内酯类耐药基因(23S rRNA)突变与耐药的相关性。方法收集614例肺炎患儿呼吸道样本,实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测MP感染及23S rRNA基因2063和/或2064 A→G点突变情况,对MP阳性样本进行药敏试验,分析23S rRNA基因2063和/或2064 A→G点突变与大环内酯类药物耐药相关性。结果 614例样本,MP阳性77例,阳性率为12.5%,其中59例23S rRNA存在2063和/或2064A→G点突变,突变发生率为76.6%。所有突变株对对5种大环内酯类药物均不敏感,所有未突变株5种大环内酯类药物均敏感。结论肺炎支原体对大环内酯类药物耐药严重,耐药机制是23S rRNA基因2063和/或2064 A→G点突变,RT-PCR检测MP感染及23S rRNA基因点突变能为肺炎患儿临床MP感染的诊断和治疗提供一定的参考依据。     

广州地区2007年4238例急性呼吸道感染婴幼儿中人副流感病毒1～3型的研究

人副流感病毒(HPIV)1～3型在婴幼儿中主要引起下呼吸道感染,是引起气管炎和肺炎的重要病原体[1].实时荧光PCR检测是公认的核酸分子定性和定量检测的标准方法[2],本研究建立了实时荧光PCR检测HPIV 1～3型的方法,并对2007年广州地区的4238例急性呼吸道感染患儿的临床标本进行检测.     

EB病毒两种实验室检测方法对比分析

目的 比较EB病毒(EBV)两种实验室检测方法 的应用特点.方法 采用免疫荧光技术检测124例患儿血清中特异性EBV抗体,同时采用荧光定量PCR检测124例患儿不同标本中的EBV-DNA含量.结果 124例患儿多种标本EBV的VCA-IgM、VCA-IgG、EA-IgG、EBNA-1-IgG、EB-DNA阳性率分别为0、89.5%、23.4%、49.2%、30.3%,EB-DNA与EBNA-1-IgG同时阳性21例.结论 荧光定量PCR方法 检测EBV-DNA,时间短、准确性好、灵敏度高,对患儿EBV感染相关疾病的诊断和鉴别诊断,具有重要作用.     

肺炎支原体感染患儿对大环内酯类药物的耐药率及血清WBC、CRP、ESR的表达与意义

目的分析肺炎支原体(MP)感染患儿对大环内酯类药物(ML)的耐药率以及发病期血清炎症指标白细胞计数(WBC)、C-反应蛋白(CRP)和血沉(ESR)的表达与临床意义。方法纳入2015年11月-2016年12月在该院小儿科住院,经荧光定量PCR法确诊的5岁以下MP感染患儿250例,同时对其抗大环内酯类抗生素耐药突变位点进行定性检测,分为耐药组与非耐药组,计算ML耐药率。患儿入院时抽血检测血WBC、ESR、CRP水平,并比较两组患儿入院前应用ML情况、病程、治疗反应、并发症发生率、炎症因子WBC、ESR和CRP表达有无差异。结果 250例MP患儿中,140例存在MP DNA 23S rRNA2063(A∶G)和2064(A∶G)点突变,即耐药基因阳性(耐药组),耐药率为45.0%。耐药组患儿平均热程长于非耐药组;肺不张发生率高于非耐药组;入院时WBC、CRP异常发生率高于非耐药组(P0.05);两组患儿性别、年龄、咳嗽持续时间、肺不张发生率、总住院时间、住院前是否应用ML、住院期间ML使用天数及预后比较,差异均无统计学意义(均P0.05)。结论该院5岁以下患儿MP的耐药发生率高,耐药患儿炎症指标WBC、CRP可有不同程度的表达升高,但并非接受ML治疗后疗效及预后的主要影响因素。     

肺炎支原体快速鉴定培养基应用于儿童呼吸道感染早期快速诊断的价值

目的探讨肺炎支原体(MP)快速鉴定培养基在儿童MP感染早期快速诊断中的价值。方法对东莞地区1053例急性呼吸道感染3-7天早期患儿的咽拭子标本同时应用MP快速鉴定培养法进行MP培养检测和PCR技术直接检测MP-DNA及ELISE法检测患儿血清中MP-IgM特异性抗体。结果1053例急性呼吸道感染患儿咽拭子标本中MP培养阳性215例,总阳性率为20.42%;用ELISE法检测患儿血清中MP-IgM阳性103例,阳性率9.78%;PCR技术检测MP阳性236,阳性率为22.41%。三种方法作对比性分析,病程早期MP培养和PCR技术检测阳性率无明显差异(p>0.05)。而MP快速鉴定培养和PCR技术检测阳性率远高于ELISA法直接检测血清中MP-IgM特异性抗体有显著差异(p<0.05)。结论MP快速液体培养法简便快捷,对儿童MP感染的早期诊断治疗具有重要的参考价值,适合一般实验室和基层医院开展应用。     

荧光定量PCR快速检测幽门螺杆菌的研究

目的:建立一种快速检测幽门螺杆菌的荧光定量PCR方法。方法:根据每个幽门螺杆菌有一个拷贝的尿素酶A基因,设计并优化SYBGReen荧光定量PCR条件,评价荧光定量PCR的灵敏度与重复性;收集胃粘膜标本65份,并对其同时进行培养和荧光定量PCR检测。结果:该方法连续8个浓度模板良好线性关系(相关系数,0.997),灵敏度达1拷贝/微升;随机选取两个浓度的样本做重复试验,结果显示具有较高的重复性。65份标本中采用荧光定量PCR方法检出幽门螺杆菌42例(64.62%);细菌培养方法检出31例HP(47.69%)。结论:荧光定量PCR技术能够快速、准确检测幽门螺杆菌,适合于临床检测及科学研究。     

肺炎患儿支原体衣原体感染检测

随着人们对小儿肺炎病原微生物检测方法的不断改善 ,肺炎支原体 (MP)、沙眼衣原体 (CT)感染引起的小儿肺炎 ,引起了广泛关注。本文对 3886例肺炎住院患儿进行MP、CT检测。现将结果报告如下。对象与方法1　对象　对 1999～ 2 0 0 0年收治的 3886例肺炎患儿进行痰PCR -MP、CT -DNA定量检测。其中男 2 0 15例 ,女 1871例。男女比例为 1 0 8∶1,年龄 :<1岁 2 133例 ,1～ 3岁1133例 ,>3岁 6 2 0例。季节 :春季 (3～ 5月份 ) 10 12例(2 6 % ) ,夏季 (6～ 8月份 ) 734例 (18 9% ) ,秋季 (9～ 11月份 ) 999例 (2 5 7% ) ,冬季 (12～ 2月份 …     

肺炎支原体肺炎患儿肺泡灌洗液MP-DNA载量及免疫炎症指标变化的临床意义

目的探讨肺炎支原体肺炎(MPP)患儿肺泡灌洗液(BALF)MP-DNA载量,及其与免疫细胞的相关性。方法选取2015年10月-2016年4月在郴州第一人民医院儿童呼吸科确诊为MPP的患儿24例,作为MPP组,另选同期入院治疗的28例支气管异物患儿作为对照组;比较两组患儿相关炎症指标变化,被动凝集法检测血清MP抗体滴度,采用实时荧光定量PCR法检测其BALF MP-DNA载量,镜检并计算各类免疫细胞百分比。结果 MPP患儿组血清C-反应蛋白(CRP)和红细胞沉降率(ESR)水平分别为(18.30±14.29)mg/L、(32.18±19.85)mm/h,均高于对照组(10.28±12.20)mg/L、(12.67±6.31)mm/h(P0.05),两组其他各项指标比较差异均无统计学意义;MPP患儿组血清MP抗体阳性率79.2%(19/24),高于对照组14.28%(4/28)(P0.05);MPP组患儿BALF中性粒细胞比例高于对照组,巨噬细胞比例低于对照组,两组比较差异有统计学意义(P0.05);MPP患儿BALF中性粒细胞比例与BALF MP-DNA含量呈正相关(r=0.477,P=0.018),巨噬细胞比例与BALF MP-DNA含量呈负相关(r=-0.457,P=0.024)。结论 MPP患儿BALF MP-DNA与中性粒细胞含量显著增加,提示MP可激活中性粒细胞,诱发机体细胞和体液免疫反应。     

百日咳临床流行病学特点及诊断方法的比较研究

目的分析临床和实验室诊断百日咳病例的临床流行病学特点,并比较细菌培养与荧光定量PCR 2种病原菌检测方法的应用价值。方法收集北京儿童医院864例百日咳送检患儿的临床信息,并采用细菌培养和荧光定量PCR检测其鼻咽拭子标本,分析不同诊断标准下百日咳临床流行病学特点,以及2种实验室诊断的临床应用价值。结果临床诊断与细菌培养和荧光定量PCR实验室诊断的百日咳病例的地区、季节和年龄分布相似,北京儿童医院就诊的百日咳患儿以河北(41.6%～45.2%)、北京(36.4%～42.9%)两地为主,诊断病例集中于夏秋季节(5月份-9月份),婴儿是百日咳发病的主要人群(77.5%～89.3%)。2种实验室诊断方法相比,典型临床症状"吸气性回声"在细菌培养阳性样本组更为常见(X~2=5.086,P=0.024)。以临床诊断为标准,细菌培养和荧光定量PCR诊断百日咳的灵敏度分别为27.1%和51.5%,特异度分别为79.0%和59.0%;不满足临床诊断标准的458例患儿中,细菌培养或荧光定量PCR检测为阳性的共193例(42.1%)。结论临床诊断和实验室诊断百日咳揭示的临床流行病学特征相似。以临床诊断为标准,细菌培养诊断百日咳灵敏度低、特异度高,荧光定量PCR灵敏度较高、特异度较低。实验室检测能发现更多临床不典型病例。