地诺孕素治疗子宫内膜异位症的机制分析

目的:研究地诺孕素治疗子宫内膜异位症(EMT)的信号通路途径。方法:从2012年3月至2013年3月,将我院180例女性患者的子宫内膜组织作为研究对象,根据子宫内膜情况随机分成四组,分别为:正常对照组(45例);正常地诺孕素组(45例);异位对照组(45例);异位地诺孕素组(45例)。以3D胶原凝胶培养对各组细胞在TPL作用凝胶表面积实施测量,记录并对比细胞密度的变化情况。荧光定量测定各组细胞在经地诺孕素作用之后的RhoA、ROCKⅠ、ROCKⅡ等相关信号转导通路关键分子基因的表达。结果:异位地诺孕素组在作用后的RhoA水平、ROCKⅠ、ROCKⅡ均分别显著低于异位对照组的,以及正常地诺孕素组的,差异均有统计学意义(均P<0.05)。此外,正常地诺孕素组的RhoA水平、ROCKⅠ、ROCKⅡ均分别显著低于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。异位地诺孕素组在作用后的细胞表面积,均分别显著小于异位对照组,以及正常地诺孕素组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。正常地诺孕素组的细胞表面积、细胞密度,均分别显著小于正常对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:以地诺孕素治疗EMT疾病的主要作用靶点可能位于Rho/ROCK,且地诺孕素可有效抑制子宫内膜细胞的增殖及纤维化作用,临床治疗时应予以关注。     

子宫内膜异位症患者核转录因子-κB及细胞间粘附分子-1的表达

目的 检测核转录因子(NF-κB)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在子宫内膜异位症(内异症)中的表达,探讨其在内异症发病中的作用。方法 采用免疫组化SP法分别检测NF-κB及ICAM-1在35例正常子宫内膜、48例内异症患者的在位内膜及76例内异症患者的异位内膜中的表达,并对检测结果进行统计学分析。结果 ①NF-κB和ICAM-1主要表达于三组内膜的腺上皮细胞,在正常子宫内膜表达最弱,而在异位内膜的表达最强(P<0.001);②NF-κB和ICAM-1在正常子宫内膜、在位内膜及异位内膜中的表达呈正相关,相关系数分别为r=0.688、r=0.773及r=0.777(P<0.01)。结论 NF-κB和ICAM-1在内异症在位内膜和异位内膜的高表达及二者之间的正相关性提示其在内异症发生发展过程中起重要的作用。     

消瘤方对子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞NF-κB/MAPK信号通路的影响

目的:探讨中药消瘤方对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位和异位内膜基质细胞核转录因子(NF)-κB/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:采用改良筛网法原代分离、培养EMs患者在位、异位及正常人子宫内膜基质细胞;将分离出的子宫内膜细胞分为正常组、在位组和异位组,其中在位和异位组再随机分为空白对照组(生理盐水组)、西药对照组(孕三烯酮组)、中药低剂量组(消瘤方提取物5 g/L组)及高剂量组(消瘤方提取物10 g/L组),各组分别加入相应药物干预后采用RT-PCR方法检测内膜细胞NF-κB/MAPK因子的表达水平。结果:药物干预后发现,消瘤方高剂量组和西药组可抑制在位及异位子宫内膜细胞的NF-κB/MAPK p38信号因子的激活,降低NF-κB/MAPK p38因子的表达,差异具有统计学意义(P0.01,P0.05)。结论:子宫内膜异位症的发生与NF-κB/MAPK信号通路的激活密切相关,消瘤方可通过抑制子宫内膜细胞NF-κB/MAPK信号通路因子的表达,从而阻止内异灶的形成而起到治疗的作用。     

正常与异位子宫内膜Bcl-2表达与细胞凋亡的关系

目的 :探讨 Bcl- 2和细胞凋亡与在位及异位子宫内膜的关系。方法 :应用免疫组化法对61例正常月经周期子宫内膜及卵巢子宫内膜异位症患者进行 Bcl- 2检测。同时用 TUNEL法对其中 34例标本进行凋亡检测。结果 :正常位置的子宫内膜分泌期及月经期凋亡细胞较多 ,增生期内膜及异位内膜无凋亡。 Bcl- 2蛋白在增生期含量高 ,分泌期低落 ,月经期消失 ,异位内膜中高于增生期( P<0 .0 5 )。结论 :细胞凋亡与子宫内膜脱落有关 ;异位子宫内膜细胞通过抗凋亡基因 Bcl- 2的高表达而抑制细胞的凋亡过程 ,延长生命周期     

核转录因子-κB和血管内皮生长因子在子宫内膜异位症中的表达及其相关性

目的:检测核转录因子(NF-κB)及血管内皮生长因子(VEGF)在子宫内膜异位症(EM)中的表达,探讨其与EM发病机制的相关性.方法:采用免疫组化SP法分别检测NF-κB及VEGF在35例正常子宫内膜、48例EM在位内膜及76例EM异位内膜中的表达,并对检测结果进行统计学分析.结果:NF-κB和VEGF主要定位于3 组内膜腺上皮细胞的胞质中,其中异位内膜表达强度最强,正常子宫内膜的表达强度最弱(P＜0.05).在位内膜和正常子宫内膜NF-κB和VEGF的表达强度随月经周期发生一定的变化,分泌期高于增殖期,差异有统计学意义(P＜0.05).NF-κB与VEGF之间在正常子宫内膜、异位内膜和在位内膜中的表达具有正相关性,相关系数分别为0.660,0.733和0.827 (P＜0.01).结论:NF-κB和VEGF在EM患者的在位及异位内膜的高表达及二者之间的正相关性提示其在EM发病机制中起一定的作用.     

Toll样受体4和核因子-κBp65在子宫内膜样癌中的表达

目的探讨Toll样受体4(TLR4)和核因子-κB(NF-κB)p65在子宫内膜样癌中的表达及意义。方法收集2010年7月至2013年7月在咸宁市第一人民医院接受诊断性刮宫术和子宫内膜活检患者的组织标本116例,其中正常子宫内膜组织30例,子宫内膜增生组织35例,子宫内膜样癌组织51例,采用免疫组织化学法检测3种组织中TLR4和NF-κB p65的表达,并分析TLR4、NF-κB P65的表达与子宫内膜样癌病理特征的相关性。结果子宫内膜样癌组织中TLR4和NF-κB p65阳性表达显著高于子宫内膜增生和正常子宫内膜组织(P<0.01),子宫内膜增生组织中TLR4和NF-κB p65阳性表达显著高于正常子宫内膜组织(P<0.01)。TLR4、NF-κB p65阳性表达与子宫内膜样癌的组织分化程度、TNM分期和淋巴结转移有显著相关性(P<0.01)。结论 TLR4和NF-κB p65的表达与子宫内膜样癌的发生、发展有一定的相关性。     

正常与异位子宫内膜Bcl-2与PCNA的表达

目的：探讨B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白和增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白与正常及异位子宫内膜的关系。 方法：应用免疫组化法检测46例正常月经周期子宫内膜和15例卵巢子宫内膜异位症患者的异位子宫内膜中的Bcl-2蛋白和PCNA蛋白。 结果：Bcl-2蛋白和PCNA蛋白在正常月经周期子宫内膜增生期升高(两组均为61.5%),分泌期低落(22.2%和5.5%),月经期消失(0和33.3%);在异位内膜中的表达(均为100%)高于增生期（P<0.05）。 结论：正常月经周期子宫内膜中Bcl-2蛋白和PCNA蛋白表达有周期性变化,且与异位子宫内膜中的表达不同,异位子宫内膜通过多种方式获得生存优势。     

凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2在子宫内膜异位症中的表达及相关性研究

目的了解凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2在子宫内膜异位症（EMs）中的表达及相关性。方法应用SP免疫组化方法检测在位内膜、异位内膜、及正常子宫内膜分别在增生期、分泌期凋亡抑制蛋白Survivin和Bcl-2的阳性率。结果凋亡抑制蛋白Survivin、Bcl-2分别在正常子宫内膜中无论是增生期还是分泌期均未见阳性表达,但凋亡抑制蛋白Survivin、Bcl-2在在位子宫内膜、异位子宫内膜中无论是增生期还是分泌期均存在阳性表达,且凋亡抑制蛋白Survivin、Bcl-2在异位子宫内膜中无论是增生期还是分泌期的阳性率均分别高于在位内膜的阳性率．差异具有统计学意义（P〈0．05））。但Survivin、Bcl-2分别在异位内膜的增生期与分泌期阳性率比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。子宫内膜异位症组织中survivin蛋白表达与Bcl-2表达呈正相关（r=0．785,P=0．000）。结论Survivin、Bcl-2二者在异位内膜中共同协作抑制了异位内膜的凋亡,从而参与了子宫内膜异位症的发病过程。     

靶向NF-κB的siRNA抑制人子宫内膜异位种植的实验研究

目的:观察NF-κB p65 siRNA对人子宫内膜在异位种植于裸鼠的影响,以明确NF-κB在子宫内膜异位症（EMs）发生发展的作用,为EMs治疗探索新的途径。方法:将EMs患者在位子宫内膜组织分别注入30只裸鼠,随机分为3组,每组10只,3d后分别给予生理盐水、NF-κB p65 siRNA或阴性siRNA干预,观察各自子宫内膜种植成功率及内膜的病理特点。结果: NF-κB p65 siRNA干预组子宫内膜种植成功率（20%）低于其他两组(80%,70%)（p<0.05）;且成活的异位内膜腺体发育不良,组织中NF-κB、VEGF及ICAM-1表达亦减少,与其他两组差异有显著性（p<0.05）;接种组与阴性干预组间比较差异则无显著性（p>0.05）。结论: NF-κB参与调控EMs的发生发展,沉默NF-κB基因可以显著抑制异位病灶的种植和生长;NF-κB是通过降调VEGF及ICAM-1等发挥作用的。     

核因子-κB p65和骨桥蛋白在子宫内膜癌组织与细胞中的表达及相关性研究

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)p65和骨桥蛋白(OPN)在子宫内膜癌组织及细胞中的表达,并分析两者的相关性.方法:收集子宫内膜腺癌患者35例(子宫内膜腺癌组)、子宫内膜非典型增生患者35例(非典型增生内膜组)和正常子宫内膜患者35例(正常子宫内膜组),采用免疫组织化学法检测三组子宫内膜组织中NF-κB p65、O...     

p16INK4A表达水平差异与子宫内膜病变发生及发展的关系

目的研究抑癌基因p16INK4A在不同程度子宫内膜病变中的表达水平变化,分析这种差异表达与甲基化及病变程度的关系。方法逆转录-聚合酶链法(RT-PCR)检测正常子宫内膜组织、子宫内膜复杂性增生、子宫内膜不典型增生、子宫内膜癌中p16INK4A基因的表达水平,每组均检测30例标本。蛋白免疫印迹法分析各组p16INK4A蛋白水平的表达。甲基化特异性的PCR技术(MSP)对p16INK4ADNA进行甲基化分析。结果随着子宫内膜病变程度的加重,p16INK4A的表达量逐渐降低,子宫内膜癌与其他病变比较,差异有统计学意义(P<0.05);不典型增生与其他病变比较差异均有统计学意义(P<0.05);子宫内膜复杂性增生与正常子宫内膜比较差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白的表达检测也得到相同的结果。MSP进一步分析各组织中p16INK4A的甲基化状态,发现在子宫内膜癌组织中有19例存在不同程度的p16INK4A的甲基化,子宫内膜不典型增生组织中有11例甲基化,子宫内膜复杂性增生组织中有1例甲基化,这些甲基化的组织同时伴有p16INK4A蛋白的表达异常。甲基化与子宫内膜癌手术-病理分期有关(P<0.05)。正常子宫内膜组织中未发现p16INK4A甲基化。结论 p16INK4A作为一种抑癌基因,它的表达缺失或下降在子宫内膜病变的发生及发展过程中起重要作用,表达越低,内膜的病变程度越重,基因甲基化可能是导致这种异常表达的主要原因。     

c-fos在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探讨c-fos在子宫内膜异位症（EMT）发生发展中的作用。方法收集正常子宫内膜标本26例,EMT在位内膜标本及异位内膜标本各27例,通过免疫组织化学染色法,检测c-fos蛋白在三组内膜中的表达情况。结果 c-fos主要表达于正常子宫内膜、异位内膜及在位内膜腺上皮细胞核中,少量表达于间质细胞浆;异位内膜及在位内膜组的c-fos蛋白表达明显升高,呈强阳性,与正常对照组比较,两组具有显著性差异（P〈0.05）;但在位内膜与异位内膜c-fos表达率未见明显差异（P〉0.05）;c-fos蛋白在正常子宫内膜组织、异位症在位内膜组织及异位内膜组织中的表达强度均呈现周期性变化,且增生期表达均明显高于分泌期,P值均〈0.05。结论 c-fos蛋白可能为EMT发生发展的重要调控蛋白之一。     

IL-8及其受体CXCR1在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的探讨白细胞介素8(IL-8)及其受体CXCR1在子宫内膜异位症(EMT)内膜上的表达水平及其在EMT发病中的意义。方法 EMT患者38例作为研究组,非内膜异位症(非内异症)患者29例作为对照组。免疫组化法检测EMT患者异位内膜、在位内膜及非内异症的对照子宫内膜之间IL-8与CXCR1的表达情况。结果所有异位内膜均可检测到IL-8与CXCR1蛋白的表达,且其染色强度高于在位内膜及正常生育期子宫内膜(P0.05),EMT患者的在位内膜IL-8与CXCR1的表达高于同期正常生育期子宫内膜(P0.05),对照组和异位组增生期子宫内膜与分泌期子宫内膜相比IL-8与CXCR1的表达无显著性差异(P0.05)。结论证明IL-8在正常生育期子宫内膜、EMT患者在位子宫内膜及异位灶组织的表达差异与CXCR1一致,CXCR1/IL-8蛋白的异常表达可能在内异症的发生中发挥着极为重要的作用。     

核因子κB信号转导通路与子宫内膜异位症

子宫内膜异位症是妇科常见病,疑难病。虽为良性疾病,却有侵袭、转移等恶性生物学行为。核因子κB(NF-κB)信号转导通路参与了炎症、细胞生存、增殖、凋亡以及免疫反应等病理过程。NF-κB信号通路在子宫内膜异位症中被过度激活,通过调节下游因子的表达,影响性激素的表达,促进炎症反应及氧化应激,减少凋亡,增加异位内膜的黏附、侵袭及血管生成能力,与子宫内膜异位症的发生、发展关系密切。     

地诺孕素对异位子宫内膜间质细胞凋亡的影响及其机制研究

目的：探究地诺孕素对异位子宫内膜间质细胞的作用及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测地诺孕素对异位子宫内膜间质细胞增殖的作用;采用流式细胞术检测地诺孕素诱导异位子宫内膜间质细胞凋亡情况;用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测地诺孕素作用后NF‐κB、Bcl‐2和Bcl‐XL蛋白的表达。结果 MTT结果显示地诺孕素对ECSC细胞增殖抑制作用强于NSCS细胞（P＜0．05）。流式细胞术显示地诺孕素诱导ECSC细胞凋亡作用强于NSCS细胞（P＜0．05）。Western blot结果显示地诺孕素明显减少了ECSC细胞中NF‐κB、Bcl‐2和Bcl‐XL蛋白水平。结论地诺孕素通过降低 NF‐κB、Bcl‐2和Bcl‐XL的水平而有抑制异位子宫内膜间质细胞增殖并诱导其凋亡的作用。     

Bcl-2 fas及survivin在子宫内膜异位症患者卵巢异位内膜的表达变化及意义

目的研究与细胞凋亡相关因子Bcl-2 fas及survivin在子宫内膜异位症（EMS）患者卵巢异位内膜的表达变化,探讨EMS的发生发展与细胞凋亡的关系。方法采用免疫组化SP法检测49例卵巢异位内膜和48例正常在位内膜的Bcl-2f、as及survivin的表达。结果①Bcl-2在囊肿组异位内膜的表达显著高于对照组在位内膜（P〈0.01）。②fas在囊肿组异位内膜的表达显著低于对照组在位内膜（P〈0.01）。③survivin在囊肿组异位内膜的表达显著低于对照组在位内膜（P〈0.01）。结论①Bcl-2在EMS卵巢异位内膜表达显著增强,推测Bcl-2是异位内膜的主要抗凋亡因子之一,异位内膜Bcl-2的升高是促使EMS发生发展的因素之一。②fas在EMS卵巢异位内膜表达显著降低,推测EMS异位内膜凋亡能力降低,致使异位的子宫内膜组织在异位种植生长,促使EMS的发生发展。③囊肿组异位内膜survivin表达比对照组在位内膜显著降低,推测survivin有可能不是EMS的主要抗凋亡因子。     

子宫内膜异位症组织中Survivin蛋白表达与凋亡的关系

目的研究子宫内膜异位症(EM)患者在位、异位内膜组织以及正常子宫内膜中的Survivin蛋白表达和细胞凋亡状况,探讨它们在子宫内膜异位症发生中的作用及临床意义。方法39例子宫内膜异位患者的39份异位子宫内膜及21份在位内膜为研究组;26例非子宫内膜异位症患者的子宫内膜为对照组。Survivin蛋白表达用免疫组化法检测;细胞凋亡用TUNEL法检测。结果EM组在位及异位内膜增生期Survivin蛋白表达水平分别明显高于同期正常子宫内膜水平(P<0.05)。EM组在位及异位内膜分泌期Survivin蛋白表达水平分别明显高于同期正常子宫内膜水平(P<0.05)。EM组在位及异位内膜增生期凋亡指数(AI)分别明显低于同期正常子宫内膜(P<0.05)。EM组在位及异位内膜分泌期AI分别明显低于同期正常子宫内膜(P<0.05)。EM组在位及异位内膜Survivin蛋白表达水平均与AI负相关(P<0.05)。结论子宫内膜异位症患者子宫内膜组织细胞凋亡水平下降。凋亡水平的下降导致经期脱落的子宫内膜细胞异位生存和种植的能力增强。子宫内膜异位症患者Survivin蛋白表达上调是导致其凋亡水平下降的机制之一。     

基于Bcl-2/Bax凋亡探讨仙子益真胶囊对大鼠卵巢储备功能减退的作用机制

【目的】基于Bcl-2/Bax凋亡途径,探讨仙子益真胶囊（熟地黄、菟丝子等）对卵巢储备功能减退大鼠的作用机制。【方法】选用动情周期规律的60只SPF级雌性大鼠,随机分为正常组,模型组,中药低、中、高剂量组,西药组,每组10只。除正常组,其余组别大鼠构建卵巢储备功能减退模型。造模14 d后给药,中药低、中、高剂量组分别给予0.625、1.25、2.5 g·kg-1·d-1仙子益真胶囊灌胃,西药组给予补佳乐、地屈孕酮灌胃序贯治疗。干预28 d后,选择动情间期取材,实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测卵巢组织凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase-3、p53 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测卵巢组织核转录因子kappaB(NF-κB) p65、子宫内膜ERα、PR的蛋白表达水平。【结果】与正常组比较,模型组卵巢组织Bcl-2 mRNA表达水平降低,Bax、Caspase-3、p53 mRNA表达水平升高,Bcl-2/Bax比率降低,卵巢组织NF-κB p65,子宫内膜ERα、 PR蛋白表达水平降低（均P<0.05）;与模型组比较,中药组卵巢组...     

NF-κB、COX-2在子宫腺肌病中的表达及意义

目的 探讨核因子κB（NF-κB）、环氧化酶-2（COX-2）在子宫腺肌病中的表达及意义.方法 应用免疫组化法检测NF-κB、COX-2在正常子宫内膜（对照组）、子宫腺肌病在位子宫内膜（在位内膜组）、异位子宫内膜（异位内膜组）中的表达.结果 NF-κB在子宫腺肌病异位内膜组和在位内膜组的表达均明显高于对照组（P＜0.05）,异位内膜组的表达明显高于在位内膜组（P＜0.05）;COX-2在子宫腺肌病异位内膜组和在位内膜组的表达均明显高于对照组（P＜0.05）,异位内膜组的表达明显高于在位内膜组（P＜0.05）.NF-κB、COX-2在子宫腺肌病异位内膜中的表达呈正相关（r=0.786,P＜0.05）.结论 NF-κB、COX-2在子宫腺肌病的发生发展过程中可能发挥重要作用.     

Bcl-2与子宫内膜异位症发病关系的研究

目的 :研究Bcl- 2基因蛋白与子宫内膜异位症的发病关系。方法 :用免疫组化ABC法检测了 4 0例正常子宫内膜和 4 6例子宫内膜异位症患者异位内膜组织中Bcl- 2蛋白的表达情况。结果 :Bcl- 2基因蛋白在子宫内膜异位症患者的异位内膜组织中的表达评分 (172 .4± 87.6 )明显高于正常子宫内膜中的表达评分 (10 6 .2±118.1) ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :Bcl- 2基因与子宫内膜异位症的发生有一定关系。