p38β在矿化诱导液诱导的人牙髓细胞成牙本质向分化中的作用

目的研究p38β丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)对矿化诱导液诱导的人牙髓细胞(h DPC)成牙本质向分化的影响。方法体外培养hDPC,Western blot检测hDPC矿化诱导0、3、7、14 d后p38β蛋白表达情况;构建3条慢病毒载体p38β鄄shRNA并分别转染hDPC,Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测p38β蛋白及基因表达;设立空白对照组、矿化诱导(OM)组、OM+空载体(NC)组、OM+sh鄄p38β组共4组。成牙本质向矿化诱导1、7、14 d,实时荧光定量PCR检测成牙本质向分化指标牙本质涎磷蛋白(DSPP)、碱性磷酸酶(ALP)的基因表达;Western blot检测成牙本质向分化指标DSPP蛋白的表达;成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节的形成情况。结果 Western blot结果表明正常牙髓组织中存在p38β蛋白;成功构建p38β稳定低表达的hDPCs(实时荧光定量PCR显示三条序列干扰效率分别为55.4%、68.3%、54.2%);实时荧光定量PCR显示沉默p38β的hDPCs经矿化诱导后,成牙本质向分化指标DSPP、ALP基因表达水平显著降低,Western blot结果显示成牙本质向分化指标DSPP蛋白表达水平显著降低;茜素红染色结果显示,矿化诱导+sh鄄p38β组与空白对照组较另外两组的矿化结节数量明显减少。结论 p38β在OM诱导的h DPC成牙本质向分化中发挥作用。     

可注射型富血小板纤维蛋白对人根尖牙乳头干细胞生物学行为的影响

目的 探讨可注射型富血小板纤维蛋白（injectable platelet rich fibrin，iPRF）对人根尖牙乳头干细胞（human stem cells from apical papilla，hSCAPs）生物学行为的影响。方法 酶联免疫吸附实验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）测定可注射型富血小板纤维蛋白提取液（injectable platelet rich fibrin extract，iPRFe）生长因子的含量；CCK 8、Transwell实验、茜素红染色分别检测iPRFe对hSCAPs增殖、迁移、矿化诱导的影响；荧光实时定量PCR检测与成骨/成牙向分化相关基因的mRNA表达水平。结果 iPRFe中可检测到血小板衍生生长因子 BB（platelet derived growth factor BB，PDGF BB)、胰岛素样生长因子1（insulin like growth factor 1，IGF1）和转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGFβ1）；iPRFe能促进hSCAPs的增殖，且在1/4×浓度时hSCAPs增殖效果最佳；1/4×浓度的iPRFe对hSCAPs的迁移和矿化也有明显的促进效果；iPRFe还可明显促进碱性磷酸酶（alkaline phosphatase，ALP）、牙本质基质蛋白1（dentin matrix protein 1，DMP1）、牙本质涎磷蛋白（dentin sialophosphoprotein，DSPP）和骨钙素（osteocalcin，OCN） mRNA的表达（P<0.05）。结论 iPRF能够促进hSCAPs的增殖、迁移和矿化，有望为牙髓再生提供可能。     

PI3K/AKT信号通路对体外人牙髓细胞增殖和成牙本质向分化能力的影响

目的 研究PI3K/AKT信号通路对人牙髓细胞（hDPC）体外增殖作用和成牙本质向分化能力的影响.方法 体外培养hDPC,采用PI3K通路抑制剂LY294002（LY）处理hDPC,CCK8法检测细胞增殖情况,Western blot蛋白印记检测PI3K/AKT通路下游蛋白AKT、磷酸化AKT（p-AKT）水平在6、12、24、48、72 h的改变,检测成牙本质向分化指标DSPP的蛋白水平变化;设立空白对照组、矿化诱导组、LY组、矿化诱导＋LY组共4组,成牙本质向矿化诱导14 d,茜素红染色检测矿化结节形成情况.结果 CCK8结果显示,LY294002在24、48和72 h可抑制hDPC的增殖（24 h：Z=-0.358,P＜ 0.05;48 h：t=11.674,P＜ 0.05;72 h：t=10.832,P＜ 0.05）;Western blot显示,LY294002抑制PI3K/AKT通路下游蛋白p-AKT活性,在24 h时作用最明显,成牙本质向分化指标DSPP蛋白水平降低;茜素红染色结果显示,矿化结节的数量B组最多、C组最少.结论 PI3K/AKT信号通路可促进hDPC的增殖和成牙本质向分化能力.     

人骨形成蛋白－2对人牙髓细胞增殖和分化的影响

目的：探讨骨形成蛋白－2（BMP－2）对体外培养的人牙髓细胞（DPCs）增殖和分化的影响。方法：体外培养人DPCs,分别与不同浓度的BMP－2（50、100、200 ng／mL）共同培养;分别检测各组细胞的增殖情况、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性、钙化结节形成量以及牙本质涎磷蛋白（DSPP）、牙本质基质蛋白－1（DMP－1）各成牙本质相关基因的表达水平。结果：50～200 ng／mL 的BMP－2对DPCs的增殖均无明显促进作用;但是,能呈剂量依赖性地提高细胞的ALP活性、促进钙化结节的形成、上调DSPP和DMP－1 mRNA的表达水平,各浓度BMP－2组均高于对照组（P ＜0．05）。结论：BMP－2对体外培养的人DPCs增殖无明显影响,但可明显促进DPCs的成牙本质细胞方向分化。     

重组人结缔组织生长因子对牙髓细胞增殖与成牙本质分化的影响

目的：研究重组人结缔组织生长因子（recombinant connective tissue growth factor, rCTGF）对牙髓细胞（human dental pulp cells,hDPCs）增殖及分化的影响。方法：利用不同浓度（0、1、10、100 ng/mL）rCTGF分别处理牙髓细胞,CCK8法检测牙髓细胞增殖情况;茜素红染色和半定量试验检测细胞矿化结节的形成变化,qRT-PCR测定成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP和OC的表达情况,Western 免疫印迹法测定rCTGF刺激牙髓细胞后,ERK1/2信号通路的磷酸化水平。采用SAS 9.3软件包对数据进行统计学分析。结果：高浓度的rCTGF（100 ng/mL）可以促进牙髓细胞增殖;经矿化诱导后,10 ng/mL rCTGF促进牙髓细胞矿化结节形成的效果最好,钙盐沉积量最明显（P<0.05）,成牙本质分化相关基因DMP-1、DSPP的表达显著上调（P<0.05）。Western 免疫印迹结果显示,10 ng/mL rCTGF刺激牙髓细胞后,p-ERK1/2蛋白的表达升高。结论：rCTGF可能通过激活ERK1/2信号通路,促进牙髓细胞的增殖与分化。     

高迁移率族蛋白B1在人牙髓细胞成牙本质分化中的表达

目的:检测人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)诱导矿化过程中高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)的表达变化,探讨HMGB1在人牙髓细胞损伤修复中的可能作用。方法:组织块法分离培养hDPCs,收集矿化诱导0、3、7、11、14d后hDPCs的mRNA、蛋白质及细胞爬片,实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法(western blot)分别检测HMGB1、牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein, DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein 1, DMP1)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)的mRNA及蛋白表达水平;并检测ALP活性,免疫荧光检测HMGB1在hDPCs矿化过程中的表达。结果:hDPCs矿化诱导后,DMP1、DSPP、ALP及HMGB1的mRNA表达显著性上调,DMP1、DSPP和ALP的mRNA以及碱性磷酸酶活性在诱导7 d、11 d和14 d后与对照组间差异有统计学意义(P<0.05),HMGB1mRNA在矿化诱导11d和14d后与对照组的差异具有统计学意义(P<0.05)。蛋白印迹法检测示细胞内各矿化标记的蛋白表达均较对照组上调,而细胞内HMGB1的蛋白表达较对照组下调。免疫荧光结果显示hDPCs矿化过程中,HMGB1逐渐从胞核转移至胞浆。结论:在hDPCs诱导成牙本质细胞分化过程中,HMGB1在mRNA水平上与DMP1、DSPP和ALP的表达变化趋势相似,而细胞内HMGB1蛋白水平表达下调,且HMGB1在hDPCs细胞内出现转位,提示HMGB1与hDPCs的成牙本质分化有关,可能在牙髓细胞损伤修复中发挥作用。     

DLK1对人牙髓干细胞增殖和成牙本质分化的影响

目的研究DLK1在人牙髓干细胞(hDPSCs)增殖分化中的作用。方法用免疫组织化学分析法来检测小鼠上颌第一磨牙中DLK1的表达。构建重组慢病毒使DLK1在hDPSCs中稳定过表达,用CCK8法和Ed U核素渗入法分别检测hDPSCs的细胞活力和增殖;hDPSCs进行成牙本质细胞向分化诱导后,通过ALP活性分析、ALP和茜素红染色,以及ALP、DSPP、DMP1等矿化相关基因的表达,研究hDPSCs的成牙本质细胞向的分化。结果 DLK1在小鼠上颌第一磨牙的成牙本质细胞和牙髓细胞中高表达,而且正常hDPSCs在成牙本质细胞向分化诱导14 d后,ALP蛋白水平增长1.6倍,DSPP增长1.16倍,DMP1增长1.42倍,DLK1增长1.54倍。hDPSCs中过表达DLK1后,相比于对照组增加了1.7倍,显著促进了细胞增殖,却抑制了其成牙本质细胞向分化。结论 DLK1在牙齿发育中发挥重要作用,DLK1过表达促进hDPSCs的增殖,但抑制其成牙本质细胞向分化。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。     

组蛋白去甲基化酶Jmjd3对牙髓干细胞成牙本质向分化的影响研究

目的研究组蛋白去甲基化酶Jmjd3对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙本质向分化的影响。方法原代分离培养DPSCs,用流式细胞术和茜素红染色鉴定DPSCs。体外诱导DPSCs成牙本质向分化不同时间(0、3、5、7、14 d),qRT-PCR检测Jmjd3及成牙本质细胞标志物牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、牙本质基质蛋白1(dentin matrix protein1,DMP1)的表达情况。用不同浓度(0、1、10μmol/L)的Jmjd3抑制剂GSK-J4处理DPSCs 14 d,q RT-PCR检测DSPP、DMP1的表达情况。结果原代培养的DPSCs表达间充质干细胞表面标记物CD44、CD29、CD146,体外诱导培养具有成骨分化潜能。DPSCs成牙本质向分化过程中,Jmjd3、DSPP、DMP1表达水平均上调(P<0.05),且可能具有时间依赖性。10μmol/L GSK-J4处理DPSCs可明显抑制DSPP、DMP1的表达(P<0.05)。结论Jmjd3在DPSCs成牙本质向分化过程中发挥正调节作用,且与其去甲基化酶活性相关。     

丹参注射液促进人脱落乳牙牙髓干细胞成骨/成牙分化的实验研究

目的 探讨中药丹参对人脱落乳牙牙髓干细胞(SHEDs)成骨/成牙分化功能的影响.方法 利用50mg/ml的丹参注射液作用于SHEDs细胞,利用成骨/成牙分化诱导培养基诱导SHEDs定向分化.通过检测ALP活性、茜素红染色、钙离子定量分析、成骨/成牙分化相关基因的表达研究 SHEDs 体外成骨/成牙分化能力.Western Blot检测AKT信号分子的表达.结果 50mg/ml的丹参注射液促进SHEDs细胞ALP活性,体外矿化能力及成骨/成牙分化相关基因骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)、牙本质涎磷蛋白(Dentin sialophosphoprotein,DSPP)的表达.50mg/ml的丹参注射液促进磷酸化AKT的表达.结论 50mg/ml的丹参注射液具有促进SHEDs细胞体外成骨/成牙分化的潜能,其作用可能与激活AKT信号通路相关.     

Oral cancer: molecular technologies for risk assessment and diagnosis

Purpose: The effective biomarkers related to diagnosis, metastasis, drug resistance and irradiation sensitivity of oral cancers will help the pathologist and oncologist to determine the molecular taxonomy diagnosis and design the individualization treatment for the patients with oral cancers.     

柠檬精油对牙周致病菌抑制作用及其安全性初步研究

目的:探讨柠檬精油对牙周致病菌的体外抗菌活性及对细胞增殖的影响。方法:采用微量液体稀释法测定柠檬精油对Pg、Fn、Aa、Pi的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)及最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);以较低浓度的MIC为标准稀释LEO作为实验组,采用MTT法测定柠檬精油对HUVECs的毒性作用,明确抑菌浓度下LEO的安全性。结果:柠檬精油对牙周主要致病菌均有抑菌作用,Pg、Fn、Aa、Pi的MIC分别是9.0 g/L、4.5 g/L、4.5 g/L、9.0 g/L,Aa、Fn的 MBC是9.0 g/L,Pg、Pi的MBC未测得。1/2MIC、1/20MIC浓度的LEO能够抑制人脐静脉内皮细胞的生长,而低于1/200MIC浓度的LEO则对人脐静脉内皮细胞的生长没有影响,其中1/200MIC浓度的LEO作用明显优于0.02%的CHX。结论:体外环境中,柠檬精油对牙周致病菌Pg、Fn、Aa、Pi具有抗菌活性,低浓度应用对机体相对安全。     

Stimulated whole saliva components in children with Down syndrome

The authors report on the components of stimulated whole saliva from children with Down syndrome—including pH, flow rate, sialic acid and protein concentrations, and amylase and peroxidase activity. Saliva samples were collected from 35 children aged 6–10 years. Of the participants, 17 had Down syndrome and 18 did not. To stimulate saliva production, the children chewed a piece of parafilm for 10 minutes before the sample was collected. Soon after collecting the saliva sample, the authors measured pH using a portable pH-meter. Sialic acid levels were determined with a thiobarbituric acid assay. Protein content was determined with Folin's phenol reagent. Amylase was assayed and the authors measured the maltose produced by the breakdown of starch and peroxidase using ortho-dianisidine.
No statistically significant difference was observed in levels of sialic acid (free and total) between the two groups. Protein concentration was about 36% higher in the group with Down syndrome. However, the salivary flow rate, pH, and amylase and peroxidase activities were lower among the children with Down syndrome.     

Computer-assisted planning for maxillofacial prosthodontic rehabilitation

Computerized tomography (CT) planning and the use of CT derived surgical templates for implant placement have shown promise for restoring function within months after surgical reconstruction of acquired post-oncologic defects.     

牙髓再生的研究现状

目前,根管治疗术在临床上已得到了广泛的应用并成功的保存了患牙,但其仍有许多术后并发症。随着组织工程技术在口腔领域的应用,构建一种组织工程化牙髓进行牙髓-牙本质复合体的再生治疗成为可能。近年来国内外已有很多关于牙髓再生的研究,并且已经取得了一定成果。本文将对目前国内外牙髓再生的研究进展现状作一综述。     

Effect of Pingyangmycin on human venous malformation endothelial cells

Purpose: Venous malformations are common vascular anomalies with a propensity of the head and neck. Intralesional injection of Pingyangmycin (PYM, bleomycin A5 hydrochloride) is a widely used sclerotherapy method for the treatment of venous malformation.     

拔牙位点保存用复合温敏凝胶的构建及体外表征

目的:制备多壁碳纳米管/羟基磷灰石/壳聚糖复合温敏凝胶,探讨其作为拔牙位点保存材料的理化性能。方法:采用原位沉积方法制备多壁碳纳米管/羟基磷灰石(MWNT/ HA简称HAC)复合无机材料,将其分散至壳聚糖温敏凝胶中,制备壳聚糖/多壁碳纳米管/羟基磷灰石(CS /MWNT/HA简称CS/HAC)复合温敏凝胶,以成胶时间、孔径、孔隙率、机械强度及降解性能为指标优化配方设计,并表征复合温敏凝胶的微观形貌及理化性能。结果:以10 g/L的HAC作为补强成分加入到壳聚糖溶液中,能够在不影响成胶并保证一定孔隙率(84%)的前提下,提高材料的机械性能(抗压强度0.441 MPa),所获复合温敏凝胶具有适宜的临床操作时间(12 min),并具有可控的降解速率。结论:负载HAC的复合温敏凝胶具有良好的成型性,并具有较好的机械性能,在拔牙位点保存领域具有良好的应用前景。     

Oropharyngeal dysphagia in amyotrophic lateral sclerosis alters quality of life

Dysphagia is one of the most important complications encountered in amyotrophic lateral sclerosis (ALS). Our aim was to determine whether oropharyngeal dysphagia impacted the quality of life (QoL) of patients with ALS. Thirty consecutive patients were recruited (31–82 years, 18 men). Swallowing function was evaluated using a standardised videofluoroscopic barium swallow. All the patients completed a specific questionnaire on quality of life in dysphagia (SWAL‐QoL) immediately after the videofluoroscopy. The results of dysphagia outcome severity scale separated 14 patients with oropharyngeal dysphagia and 16 with normal swallowing function. There was no difference in the average age, weight and body mass index of the two groups (dysphagic patients: 68 ± 11 kg versus non‐dysphagic patients: 69 ± 14 kg). Most of the dysphagic patients had a bulbar affection based on their Norris scores which determine the importance of cranial nerves illness (20 ± 8), significantly lower than those of the non‐dysphagic patients (35 ± 5) (P < 0·0001). There was no difference in the neurological peripheral symptoms evaluated by Amyotrophic Lateral Sclerosis Functional Rating Scale scores (dysphagic patients: 26 ± 7 versus non‐dysphagic patients: 27 ± 8) (ns). The swallowing quality of life questionnaire revealed that the dysphagic patients had significant burden (P < 0·001). They were affected by the necessity to applied a food selection (P < 0·01), by the increase in eating duration (P < 0·05) and described a decrease in eating desire (P < 0·05). They complained of fear regarding the risk of dysphagia (P < 0·05). They also described difficulties with oral communication (P < 0·001). All of those complained about dysphagia which impacted directly mental health (P < 0·05) and social life (P < 0·05). In conclusion, oropharyngeal dysphagia is a common symptom accompanying ALS, which alters the patient's QoL, especially social health.     

替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节特征的锥形束CT研究

目的:采用锥形束CT(CBCT)研究替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节的影像学特征,探讨Ⅲ类功能状态下,颞下颌关节的生长、改建机制。方法:从就诊于昆明医科大学附属口腔医院正畸科的患者中选取符合纳入标准的替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者及骨性Ⅰ类错牙合患者各20名,使用NNT viewer 5.3图像处理软件进行三维重建及线距和角度的测量,并进行统计学分析。结果:替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者组和替牙期骨性Ⅰ类错牙合患者组对比结果为:矢状面双侧关节前间隙偏小、双侧关节上间隙偏小、双侧关节结节斜度偏小;冠状面双侧关节内间隙偏小,双侧关节上间隙偏小,双侧关节外间隙偏小,右侧髁状突角度偏小;横截面右侧髁状突前后径偏小。结论:替牙期骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节发育不充分,呈现髁状突,关节窝深度,关节结节斜度;冠状面关节内、外间隙均较小的特征。骨性Ⅲ类错牙合患者髁状突在关节窝中处于前置近关节窝顶位置。骨性Ⅲ类错牙合患者颞下颌关节影像学特征与其功能状态相适应。