可注射牙槽骨修复材料引导牙周组织再生的动物研究

目的：建立实验动物牙周炎模型,评价含四环素的新型可注射牙槽骨修复材料用于引导牙周组织再生的实际效果。方法：选用15只雄性、健康的杂交犬,在双侧上颌尖牙的近中根面放置不锈钢网6周,建立实验动物牙周炎模型。在上颌尖牙近中牙槽骨处制作3壁骨内袋缺损,分别随机将含有1％、5％、10％四环素（TTC）的不饱和聚磷酸酯／β－磷酸三钙复合物（UPPE／β－TCP）直接注射入一侧的牙周骨缺损区（实验组）,另一侧不植入任何材料（空白对照组）。术后16周处死动物,常规制备组织病理学样本,对实验组和空白对照组牙周组织的再生情况进行组织学和形态学评价,并对实验结果进行单因素方差分析和组间多重比较。结果：植入UPPE／β－TCP／TTC复合物的牙周骨缺损区内均可见新骨和新牙骨质形成等牙周组织再生现象,无明显的炎症反应,部分UPPE／β－TCP／TTC复合材料被新生骨组织所替代,且新生骨组织、新生牙骨质和新生牙周结缔组织附着宽度与空白对照组间的差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论：含TTC的新型可注射牙槽骨修复材料UPPE／β－TCP复合物可为牙周骨缺损区的愈合提供稳定的空间,并促进牙周组织的愈合,有望用于牙周组织再生治疗。     

不饱和聚磷酸酯对MC3T3－E1成骨细胞的毒性研究

目的：评价不饱和聚磷酸酯（UPPE）聚合物对小鼠胚胎颅顶骨MC3T3－E1成骨细胞的毒性影响。方法：将β－磷酸三钙（β－TCP）、UPPE聚合物分别与小鼠胚胎颅顶骨MC3T3－E1细胞共同培养，细胞培养液作为阴性对照组， AlamarBlue法评价其对MC3T3－E1细胞的体外细胞毒性，对实验结果进行单因素方差分析及Turkey＇s HSD多重比较。结果：各组的MC3T3－E1细胞活性均随培养时间的延长而增长，β－TCP组、UPPE聚合物组的细胞毒性与阴性对照组相比无统计学差异（P＞0．05）。结论：UPPE聚合物对MC3T3－E1细胞的生长无不利影响，具有较好的骨细胞生物相容性。     

骨髓基质细胞-牙根-珊瑚羟基磷灰石复合体体内再植的初步观察

目的:评价体外构建的骨髓基质细胞(BMSCs)、珊瑚-羟磷灰石支架(CHA)、牙根复合体植入体内后牙根周组织的再生情况。方法:体外分离纯化的狗BMSCs分别与牙根及CHA支架共培养形成复合体后植入体内生长,16周后取材,组织切片观察牙根周组织的再生情况。结果:实验组较对照组所不同的是:有更趋成熟、致密的牙槽骨生成;牙根与牙槽骨之间形成了清晰的软组织间隙———类牙周膜结构,主要由纤维组织、毛细血管组成。结论:BMSC-CHA-牙根复合物植入体内后有效促进牙周组织的再生;组织工程学方法促进牙周组织再生具有可行性。     

PDLLA和PDLLA/TCP复合物修复下颌骨缺损过程中TGF-β1的表达

目的：检测混旋聚乳酸（PDLLA）及PDLLA/磷酸三钙（TCP）复合物植入骨缺损模型后,不同时期TGF-β1的表达特点,探讨PDLLA及PDLLA/TCP复合物对骨缺损修复的影响。方法：在60只大鼠一侧下颌骨体部形成下颌骨缺损模型,并随机分为三组,每组20只。分别为PDLLA组,PDLLA/TCP组及空白对照组。术后第2、8、16周分批处死各组大鼠,取下颌骨采用免疫组织化学方法观察缺损区域TGF-β1的表达特点。结果：3组动物均能在术后2周在缺损区附近组织检测到TGF-β1的高水平表达,PDLLA组及PDLLA/TCP组阳性表达一直持续到8周以后,16周时仍能检测到弱阳性表达,空白对照组表达强度减弱较快,8周后基本呈阴性表达。结论：下颌骨缺损植入PDLLA/TCP复合物或纯PDLLA后,缺损区附近组织TGF-β1呈持续阳性表达,表达位置与成骨活跃部位一致,提示有持续活跃的成骨现象,证实PDLLA及PDLLA/TCP复合物对下颌骨缺损修复有持续的诱导作用。     

胶原/纳米磷酸三钙复合人工骨修复骨缺损的实验研究

目的 观察胶原（Collagen,简称Co)／纳米磷酸三钙（Nano-Tricalcium Phosphate,简称N－TCP）复合人工骨的生物相容性，Co/N-TCP植入骨缺损区促进骨创愈合的能力。方法 家兔24只，颅骨制成直径8.0mm圆形穿通型缺损，左侧植入Co/N-TCP复合人工骨作为实验组，右侧植入非纳米Co/TCP人工骨作为对照组；于2，4，8，12周后处死各组动物取材，行肉眼，组织学方法观察。结果 两组材料除早期（2周内）轻微炎性2细胞浸润外，其余各时间点均未见异物巨细胞反应，4－8周骨新生活跃，有骨岛形成，12周时可见骨性连接。结论 Co/N-TCP复合人工骨具有良好的生物相容性及骨引导活性，能促进骨缺损的早期修复，是一种颇有潜力的骨缺损修复材料。     

掺铝β-磷酸三钙及掺锶β-磷酸三钙植入兔骨缺损区形态及组织学观察

目的：探索磷酸钙陶瓷的化学成份、结晶相、结构形态等材料学因素与降解的关系。方法：掺杂磷酸钙陶瓷（β－TCPA、β-TCPs)植入兔颌骨人工缺损区后观察X线片，横截面面积测量、光镜、电镜及能谱分析的变化。结果：24周时β－TCPA吸收率为22％，β－TCPs为28％和β－TCP为40％。4周时在下颌骨和种植体之间有新骨形成，在12－24周时新骨形成更明显，未发现炎症反应，界面的Ca、P和S的相对含量随时间而变化。结论：β－TPCA和β－TCPs在组织中的降解速度较β－TCP慢，但其具有良好的生物相容性，对骨缺损的修复有较大的临床应用潜力。     

PDLLA-β-TCP膜引导牙周组织再生的实验研究

目的：对新研制的聚D,L-乳酸-β-磷酸三钙（PDLLA-β-TCP）膜的降解性及其生物相容性,以及引导牙周组织再生（GTR）的效果进行研究. 方法：①将膜植入小鼠皮下,光镜下观察植入2、4、8、12、16周后膜的降解情况及周围组织反应.②将膜植入狗牙周骨缺损处,设空白对照组,16周后普通光镜和偏振光显微镜观察牙周组织再生情况.结果：①该膜可发生降解,膜的维持时间为4周,且生物相容性好.②实验组形成的新附着占暴露根面的70.2%,而对照组的新附着仅占30.2%.实验组获得的新牙骨质与新牙槽骨均显著高于对照组（P＜0.05）.结论： PDLLA-β-TCP膜是一种可降解的、生物相容性好的GTR膜,具有良好的应用前景.     

犬骨髓基质细胞和β-磷酸三钙复合物在裸鼠体内的成骨性能

目的：观察犬骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）和支架材料β-磷酸三钙（β-TCP）复合物植入裸鼠体内的成骨情况。方法：首先在体外构建BMSCs和β-TCP的复合物，大小3mm^3左右。实验分为3组：裸鼠体内植入单纯β-TCP，植入未经体外培养的BMSCs和β-TCP复合体，植入体外培养5d的BMSCs和β-TCP复合体。植入后1周、1个月和3个月取出标本，进行大体观察、X线片观察、灰度测定、组织学观察及成骨图像分析。结果：植入后3个月，BMSCs＋B-TCP体外培养组X线片密度最高，DigiDens X线片灰度值3组分别为：0．605〉0．555〉0．473（P〈0．01）。HE染色显示：1个月后，BMSCs＋β-TCP体外培养组见新骨和血管形成；3个月后，BMSCs＋β-TCP体外培养组新骨形成明显，并有大量血管生成．BMSCs＋β-TCP体外未培养组少量成骨，单纯β-TCP组未见明显成骨。成骨罔像分析3组成骨密度均数分别为：23．99％、8．36％、1．23％（P〈0．05）。结论：BMSCs＋β-TCP复合物植入裸鼠体内4周出现新骨形成．3个月时．骨形成明显并有血管化生成。     

多孔块状β—磷酸三钙陶瓷兔颅骨缺损修复的组织学观察

目的 为临床筛选合适的骨修复材料。方法 通过β－磷酸三钙（β－－TCP）陶瓷兔颅骨缺损的修复,显微镜下观察各组织标本的组织切片,观察β－TCP的被吸收过程、生物相容性和引导成骨能力,并和羟棋磷灰石（HA）对比。结果 本实验明确观察到大量的多核异物巨细胞吞噬β－TCP材料,引起材料被吸收;β－TCP和HA均未引起组织学免疫排斥反应;β－TCP的引导成骨能力大于HA。结论 β－TCP陶瓷是具有可吸收性和良好组织相容性的骨修复材料;多核异物巨细胞对材料的吞噬作用是其吸收性的重要机理之一。     

胶原/纳米磷酸三钙复合人工骨修复骨缺损区TGF-β的表达

目的：观察胶原(Collagen，简称Co)／纳米磷酸三钙(Nano-Tricalcium Phosphate，简称N-TCP)复合人工骨植入骨缺损区转化生长因子-β(TGF-β)的分布、刺激引导成骨细胞聚集、促进骨创愈合的能力。方法：家兔24只，颅骨制成直径8．0mm圆形洞穿缺损，左侧植入Co／N-TCP复合人工骨作为实验组，右侧植入非纳米Co／TCP人工骨作为对照组；于2、4、8、12周后处死各组动物取材，FGF-β免疫组织化学染色。结果：TGF-β免疫组织化学染色显示：成骨细胞、新生骨细胞大量TGF-β阳性表达，细胞间质及纤维组织中散在的TGF-β阳性反应；近骨床区各期内两组间TGF-β阳性表达程度无明显差异，远骨床区Co／N-TCP组TCP-β阳性表达高于Co/TCP组。结论：Co／N-TCP复合人工骨在修复骨缺损区可有效刺激引导TGF-β表达，促进骨缺损的早期修复。     

TGF-β1/iNOS在Tca8113细胞系中的表达

目的:探讨转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitricoxide synthase,iNOS)在舌鳞癌细胞株Tca8113中的表达,为进一步研究TGF-β1和iNOS在舌鳞癌浸润转移中的作用提供实验依据。方法:应用SP免疫组化方法和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法,对舌鳞癌细胞株Tca8113中TGF-β1和iNOS的蛋白、mRNA表达情况进行检测。结果:SP免疫组化检测到TGF-β1/iNOS蛋白在舌鳞癌Tca8113细胞胞浆中呈强阳性表达,RT-PCR检测到舌鳞癌Tca8113细胞株中TGF-β1/iNOS的mRNA条带明显。结论:TGF-β1/iNOS的蛋白和mRNA在舌鳞癌Tca8113细胞株中同时呈高水平表达。     

BMP-2和地塞米松联合诱导大鼠牙囊细胞与β-磷酸三钙生物陶瓷相容性的实验研究

目的：以BMP-2和地塞米松诱导的大鼠牙囊细胞作为种子细胞,β-磷酸三钙作为细胞支架材料,体外构建细胞生物材料复合体,观察大鼠牙囊细胞在β-磷酸三钙生物陶瓷材料的贴附、增殖情况。方法：收集培养的第3代RDFCs,血清饥饿同步化后,细胞分为四组,分别为BMP-2、Dex、BMP-2＋Dex诱导组及空白对照组。诱导3d后,将密度为4×106/ml的细胞悬液0.1ml均匀接种到预制好的β-TCP支架材料上,分别于体外培养3d、7d取细胞材料复合体,通过细胞计数、扫描电子显微镜观察细胞在材料表面的贴附、增殖情况。结果：细胞计数发现,7d时BMP-2＋Dex诱导组细胞数量显著高于BMP-2诱导组、Dex诱导组（P〈0.01）。扫描电镜观察,β-TCP表面呈多孔三维立体网状结构。细胞接种3 d和7d时,单位面积内BMP-2＋Dex诱导组细胞数量均明显高于BMP-2诱导组、Dex诱导组、对照组。结论：β-磷酸三钙具有良好的生物相容性,利于大鼠牙囊细胞的贴附和生长,证明BMP-2和地塞米松联合作用促进大鼠牙囊细胞的增殖、分化的协同效应,为进一步使用BMP-2和地塞米松诱导大鼠牙囊细胞,并与β-磷酸三钙生物陶瓷复合后体内移植实验提供依据。     

Wnt1、β-catenin在硝苯地平引起的药物性牙龈增生中的表达

目的:探讨Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin在硝苯地平引起的药物性增生的牙龈组织中的表达.方法:选择正常牙龈对照组、(未服药)高血压牙龈增生组、硝苯地平引起的药物性牙龈增生组各10例,用Western-Blot和RT-PCR检测牙龈组织中Wnt1、β-catenin的表达.结果:药物性牙龈增生组的牙龈组织中Wnt1、β-catenin蛋白及mRNA表达水平显著高于正常牙龈对照组(P＜0.05)和高血压牙龈增生组(P＜0.05).结论:硝苯地平引起的药物性牙龈增生的牙龈组织中Wnt1、β-catenin表达水平增高,可能通过Wnt/β-catenin信号通路促进牙龈成纤维细胞的增殖导致牙龈纤维化.     

TGF-β3对成骨细胞的增殖和成骨能力的影响及其机制初探

目的 观察不同浓度的转化生长因子-β3(transforming growth factor-β3, TGF-β3)对成骨细胞增殖和成骨能力的影响及其机制。方法 分离获得新西兰幼兔颅盖骨成骨细胞,纯化并鉴定后用不同浓度的TGF-β3(0.1、1、10、100μg/L)诱导成骨细胞,CCK-8法检测增殖活性,定量检测法测定碱性磷酸酶(ALP)含量;免疫细胞化学染色观察Ⅰ型胶原Α1(COL-1A1)、Runt相关骨形成蛋白-2(Runx-2)和骨钙素(OCN)蛋白表达;qPCR法检测ALP、骨桥蛋白(OPN)、骨涎蛋白(BSP)、成骨细胞特异性转录因子(Osx)和Smad4基因的表达;Western blotting法检测Smad2/3蛋白的表达情况。结果 成功分离获得并鉴定成骨细胞;10、100μg/L的TGF-β3能明显促进成骨细胞增殖(P<0.05);10μg/L TGF-β3组ALP含量始终高于对照组(P<0.05);免疫细胞化学染色结果显示10、100μg/L的TGF-β3组各蛋白表达均强于对照组;qPCR结果示10、100μg/L的TGF-β3能促进ALP、OPN、...     

aFGF和TGFβ1联合诱导猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化

目的建立猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化的体外诱导方案。方法联合应用aFGF和TGFβ1对体外培养的猪牙乳头细胞进行平面诱导,观察诱导后细胞的形态学变化,通过Von Kossa染色检测诱导后细胞的矿化能力,并采用免疫荧光染色和RT-PCR检测成牙本质细胞特异性标志物——DSP蛋白和DSPP mRNA在诱导后细胞中的表达。结果诱导后部分细胞出现细长的单侧细胞突起,在矿化液培养2周后形成典型的矿化结节,并且表达DSP蛋白和DSPP mRNA。结论联合应用aFGF和TGFβ1可以诱导体外培养的猪牙乳头细胞向成牙本质样细胞分化。     

Wnt1在口腔黏膜下纤维性变中的表达

目的:研究wnt1在口腔黏膜下纤维性变(OSF)患者治疗前后的表达并探讨其在OSF发生发展中的作用.方法:40例OSF中期患者采用曲安奈德+丹参局部封闭治疗4周,治疗前及第5周复诊时记录VAS及张口度,取唾液及龈沟液ELISA检测wnt1表达,实时荧光定量PCR检测OSF病变颊黏膜中wnt1 mRNA表达.结果:治疗前OSF组wnt1表达[颊黏膜定量PCR(36.89±10.40)×10-5,唾液浓度(61.61 ±4.45)ng/L,龈沟液浓度(56.20±3.65) ng/L]均高于正常组[颊黏膜定量PCR(4.63±1.53)×10-5,唾液浓度(40.26 ±3.00) ng/L,龈沟液浓度(53.45±1.74) ng/L] (P＜0.01);OSF组经治疗后,唾液与龈沟液中wnt1表达均降低,且与OSF临床严重程度呈正相关(P＜0.05).结论:wnt1可能参与OSF的发生发展,其在唾液与龈沟液中的实时监测有望成为评价OSF诊疗的无创性检控手段之一.     

The effect of olive leaf extract in decreasing the expression of two pro-inflammatory cytokines in patients receiving chemotherapy for cancer. A randomized clinical trial

BackgroundOral mucositis is the most common side effects of chemotherapy of all cancer with intensive treatments regimen, and is the most common side effects of head and neck radiation therapy. For steam cell transplantation, its also regarded as the most debilitating side effects.Aims of the studyThe objectives of this study were to assess the effect of a mouth rinse containing olive leaf extract (OLE) in preventing severe oral mucositis in patients receiving chemotherapy, and to estimate its effect in decreasing pro-inflammatory cytokine production after chemotherapy.Materials and methodsThis study utilized a placebo-controlled, randomized, double-blind, and cross-over design. Twenty-five patients undergoing intensive chemotherapy were randomly assigned to receive a mouth wash containing OLE, benzydamine hydrochloride, or placebo in 3 different cycles of chemotherapy. Oral mucositis severity was assessed using the World Health Organization criteria and Oral Mycositis Assessment Scale. Patients were evaluated weekly until 15 days after chemotherapy for each cycle. Salivary levels of interleukin-1 beta (IL-1β) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) were evaluated by enzyme-linked immunosorbant assay.ResultsOral mucositis rates and severity after 2 weeks were significantly lower in the OLE and benzydamine groups compared to the placebo group. The IL-1β and TNF-α levels were significantly decreased in the OLE group compared to the other groups.ConclusionPreliminary findings indicate that OLE is effective in reducing IL-1β and TNF-α levels after chemotherapy and exert a therapeutic effect and prevent development of severe oral mucositis.     

Does TGF-β play a role in degenerative temporomandibular joint diseases? A systematic review

Objectives: The objective of this review was to assess the literature for evidence investigating the role of TGF-β in temporomandibular joint disease with osteoarthritis.

Method: An electronic and manual search was carried out on the databases, MEDLINE/PubMed, Cochrane Library, Web Of Science, and EMBASE, from 1975 to December 2015 by two independent evaluators to identify clinical and laboratory trials in English.

Results: The search produced 693 records. Following a process of selection based on certain criteria, eight articles were included.

Discussion: This systematic review suggests that TGF-β administration alone does not result in joint regeneration; other factors may be involved, such as TGF-β receptor expression ,and TGF-β receptor mutations that do not allow a correct transduction, resulting in TGF-β deficiency. The anabolism induced by this growth factor is also able to neutralize the catabolic processes that are elevated in osteoarthritis. Therefore, further studies are essential to determine how the concentration of TGF-β in the temporomandibular joints acts as a potential marker for the development of degenerative conditions.     

转化生长因子β3促进兔牙髓干细胞成骨向分化机制的初步研究

［摘要］ 目的 探讨转化生长因子β3（transforming growth factor β3,TGF-β3 ）体外联合兔牙髓干细胞(rabbit dental pulp stem cells,rDPSCs)诱导其成骨向分化的作用机制。方法 酶解组织块法分离获得rDPSCs;将rDPSCs分为实验组（rDPSCs+80ng/ml TGF-β3）,对照组（rDPSCs+矿化液）和空白组（rDPSCs）,三组细胞分别培养第7、14d行ALP活性定量检测;RT—qPCR检测COL-IA1、Runx-2, OPN, BSP和Smad4基因的表达;western blot法检测COL-1A1,Runx-2蛋白的表达情况;茜素红染色观察矿化结节形成情况。结果 成功分离获得rDPSCs;实验组ALP含量明显高于对照组和空白组（P＜0.05）;COL-1A1、Runx-2、OPN、BSP、Smad4基因的表达均高于空白组（P＜0.05）COL-1A1、Smad4基因的表达高于对照组（P＜0.05）; Western blot结果示实验组COL-1A1,Runx-2蛋白的表达均强于其余两组（P＜0.05）;实验组矿化结节较其余两组明显。结论 TGF-β3体外促进rDPSCs成骨向分化;TGF-β3促进rDPSCs成骨向分化可能通过激活Smad通路来实现。     

上皮间质转化相关蛋白在口腔黏膜下纤维化及其癌变组织中的表达

目的：探讨上皮间质转化相关标记蛋白E－cadherin和β－catenin在口腔黏膜下纤维化组织（oral submu－cous fibrosis,OSF）及其癌变组织中的表达特点及作用。方法：应用免疫组化SP法检测60例OSF患者,15例OSF癌变患者以及5例正常对照者的口腔黏膜组织中E－cadherin和β－catenin的表达并用IPP图像处理软件分析其平均光密度值。结果：①E－cadherin免疫组化阳性反应基本位于细胞膜,在正常黏膜和OSF早、中、晚期以及OSF癌变组织中其异常表达率分别为0、5％、20％、35％和53．3％;其平均光密度值分别为0．125±0．004,0．116±0．0006,0．109±0．008,0．103±0．009与0．095±0．008,各组之间表达均有显著性差异（P＜0．05）。②β－catenin免疫组化阳性反应在正常细胞基本位于细胞膜,而在OSF各组病变组织细胞中出现膜表达减少而质核表达增加的现象。在正常黏膜和OSF早、中、晚期以及OSF癌变组织中其异常表达率分别为0、60％、80％、90％和93．3％;其平均光密度值分别为0．105±0．007,0．098±0．009,0．106±0．012,0．114±0．007与0．119±0．003,β－catenin蛋白含量在早期组略有下降,但与正常组相比,表达无显著性差异（P＞0．05）;而OSF病变组间比较,表达均有显著性差异（P＜0．05）。结论：OSF及其癌变组织中E－cadherin的表达降低,β－catenin胞质核表达明显升高,EMT可能参与OSF及其癌变过程。