老年小鼠脾细胞DNA修复能力的变化及gadd45和gadd153基因的可诱导性改变

目的：研究小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力的增龄变化以及这种变化的发生与损伤可诱导的ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３基因表达的关联。方法：以紫外线损伤脾细胞ＤＮＡ,用非程序ＤＮＡ合成和单细胞凝胶电泳试验测定ＤＮＡ修复能力;用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法检测紫外线损伤后ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３基因转录水平的变化。结果：老年小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力低于青年鼠,老年鼠ｇａｄｄ４５和ｇａｄｄ１５３基因的紫外线损伤的可诱导性也低于青年鼠。结论：小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力随增龄而下降,这种变化的发生可能与老年小鼠脾细胞在紫外线损伤后ｇａｄｄ４５、ｇａｄｄ１５３ｍＲＮＡ表达的可诱导性下降有关。     

一种检测异基因骨移植后供体植活的巢式PCR方法

目的 利用ＢＡＬＢ／Ｃ（Ｈ－２Ｋ＾ｄ）和Ｃ５７ＢＬ／６（Ｈ－２Ｋ＾ｂ）小鼠Ｈ－２Ｋ等位基因不同,建立一种检测异基因骨髓移植后供体植活的方法。方法 分别以供鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）和受鼠（Ｃ５７ＢＬ／６）及ａｌｌｏ－ＢＭＴ后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ为模板进行巢式ＰＣＲ,并用琼脂糖凝胶电泳分析ＰＣＲ扩增产物。结果 以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞ＤＮＡ行巢式ＰＣＲ可扩增了约４２１ｂｐ的特异性片段,而未经移植的Ｃ     

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。方法我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的ＤＮＡ混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，４８ｈ后收集Ⅱ细胞胚胎细胞。结果（１）精子可转染上外源ＤＮＡ，转染率达５３％；（２）转染有外源ＤＮＡ的精子可使Ⅱ细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为１１．５％。结论小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源ＤＮＡ转染并可作为载体     

多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ/3和BCG-Em14-3-3疫苗抑制小鼠脾细胞的凋亡

目的：多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗免疫小鼠并以Em原头节攻击后探讨以上疫苗对小鼠脾细胞凋亡的变化．方法：将混合重组BCG疫苗采用皮下注射和鼻腔内接种分别免疫Balb／c鼠8wk后，用多房棘球绦虫原头节进行攻击感染，感染18wk杀鼠取脾并分离脾细胞，流式细胞仪检测脾细胞的凋亡发生率，同时设有空载体、BCG和PBS对照．结果：疫苗接种组的脾细胞凋亡发生率明显低于感染对照组．结论：泡球蚴感染可引起小鼠脾细胞凋亡，而多房棘球绦虫混合重组BCG-EmⅡ／3和BCG-Em14-3-3疫苗可在一定程度上抑制感染鼠脾细胞的凋亡．     

大鼠衰老过程中肝细胞活性染色质DNA的甲基化

用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定大鼠衰老过程中肝细胞活性染色质与非活性染色质ＤＮＡ甲基化程度的变化。结果表明，老年鼠肝细胞活性染色质ＤＮＡ甲基化程度较青年鼠的低，二者有显著性差异；而老年鼠肝细胞非活性染色质ＤＮＡ甲基化程度较青年鼠高，亦具有显著性差异，这表明衰老过程中基因组ＤＮＡ各组分甲基化程度的变化不一致。     

抑癌基因p53与癌基因mdm2在肺腺癌细胞系GLC—82中的相互作用

探讨抑癌基因ｐ５３和癌基因ｍｄｍ２在肺腺癌细胞系ＧＬＣ－８２中的相互关系和作用。方法；采用脂质体Ｌｉｐｏｆｅｔｉｎ介导的ＤＮＡ转染法。用含有野生型ｐ５３基因和ｍｄｍ２基因的ＰＤＯＲ－ｎｅｏ逆转录病毒载体分别或共转染ＧＬＣ－８２细胞。结果：转染野生型ｐ５３基因可阻止ＧＬＣ－８２细胞生长；抑制ＧＬＣ－８２细胞ＤＮＡ合成；软琼脂培养集落形成率减少及裸小鼠成瘤性减慢，而ｍｄｍ２转染可拮抗野生     

大鼠衰老过程中肝细胞活性染色质DNA的甲基化

用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）法测定大鼠衰老过程中肝细胞活性染色质与非活性染色质ＤＮＡ甲基化程度的变化。结果表明，老年鼠肝细胞活性染色质ＤＮＡ甲基化程度较青年鼠的低，二者有显著性差异；而老年鼠肝细胞非活性染色质ＤＮＡ甲基化程度较青年鼠高，亦具有显著性差异，这表明衰老过程中基因组ＤＮＡ各组分甲基化程度的变化不一致。     

牛磺酸对小鼠脾细胞DNA修复能力的影响

（１）目的观察牛磺权对小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力的影响，以探讨牛磺酸抗衰老的机制。（２）方法以不同鼠龄小白鼠脾细胞悬液进行培养，实验级培养液中加入磺酸（３０μｇ／ｍｌ），以１０ｍｍｏｌ／Ｌ羟基脲抑制ＤＮＡ复制经紫外线照射后，以＾３Ｈ－胸腺嘧啶脱氧核苷（＾３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法测定ＤＮＡ损伤后修复能力。（３）结果鼠龄１１０ｄ１５０ｄ和１８０ｄ３组小鼠中，ＤＮＡ修复能力均随鼠龄增加而降低，但在不同鼠龄阶段     

酶联免疫斑点法研究小鼠急性移植物抗宿主病模型中产生干扰素γ细胞的水平

目的：探讨异基因小鼠混合淋巴细胞反应（MLR）和急性移植物抗宿主病（aGVHD）模型中，供者针对受者细胞反应后产生干扰素-γ细胞（IFN-γ PC）的水平。方法：在近交系MHC不合的异基因小鼠脾细胞MLR和aGVHD模型中，用酶联免疫斑点法（ELISPOT）对供者针对受者细胞反应后IFN-γ PC的水平及其影响因素进行了研究。结果：在异基因小鼠脾细胞MLR后，用ELISPOT检测到IFN-γ PC显著升高，具有针对受者细胞的特异性。在异基因小鼠aGVHD模型中，重度aGVHD小鼠脾细胞与未移植的异基因受鼠脾细胞在MLR后，IFN-γ PC较中度aGVHD明显升高，无aGVHD药物预防组较预防组IFN-γ PC明显升高，并具有针对受者细胞的特异性，与aGVHD的临床评分相一致。结论：用ELISPOT可以快速而敏感地检测异基因小鼠脾细胞MLR中的同种异体反应，并和aGVHD的程度以及病程具有相关性。     

牛磺酸对小鼠脾细胞DNA修复能力的影响

①目的观察牛磺酸对小鼠脾细胞ＤＮＡ修复能力的影响，以探讨牛磺酸抗衰老的机制。②方法以不同鼠龄小白鼠脾细胞悬液进行培养，实验组培养液中加入牛磺酸（３０μｇ／ｍｌ），以１０ｍｍｏｌ／Ｌ羟基脲抑制ＤＮＡ复制，经紫外线照射后，以３Ｈ－胸腺嘧啶脱氧核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法测定ＤＮＡ损伤后修复能力。③结果鼠龄１１０ｄ，１５０ｄ和１８０ｄ３组小鼠中，ＤＮＡ修复能力均随鼠龄增加而降低，但在不同鼠龄阶段，牛磺酸组ＤＮＡ修复能力均高于对照组，牛磺酸组的闪烁值分别为８．０±０．６Ｈｚ，５．３±０．５Ｈｚ和４．１±０．４Ｈｚ，而对照组则分别为６．３±０．７Ｈｚ，４．７±０．５Ｈｚ和３．２±０．２Ｈｚ（ｔ＝７．５０，２．８７，３３．８０，Ｐ均＜０．０１）。④结论牛磺酸具有增强小鼠脾细胞ＤＮＡ的修复能力和延缓衰老的作用。     

HER2/neu诱导DBA/2小鼠特异性CTL应答及其抑瘤效应研究

目的：探讨HER2/neu原癌基因DNA疫苗免疫诱导特异性细胞免疫应答及其在体内的抑瘤效应。方法：将重组HER2/neu原癌基因真核表达载全转染P815细胞，用细胞组织化学及Western-blot方法鉴定质粒在细胞中的表达。在DBA/2小鼠体内构建表达HER2抗原的肿瘤动物模型，通过重组质粒免疫小鼠，诱导小鼠产生细胞免疫应答，观察免疫动物体内的抗瘤效应。结果：在体外获得了稳定表达HER2/neu基因的P815细胞；免疫小鼠脾细胞中诱导出特异性CTL，并杀伤HER2/neu阳性的P815细胞；荷瘤小鼠的肿瘤生长受抑，存活期延长。结论：HER2/neu原癌基因DNA疫苗免疫可诱导特异性细胞免疫应答，并具有一定抗瘤效应。     

小鼠同种异基因骨髓移植aGVHD动物模型的建立

目的：建立一个德定可靠的异基因骨髓移植（allogeneic bone marrow transplantation,Allo-BMT）急性移植物抗宿主病（acute graft-vetsus-host disease,aGVHD）动物模型,为Allo-BMT中aGVHD研究提供理想的实验平台。方法：以雄性C57BL／6（H-2b）为供鼠,雌性BALB／C（H-2d）为受鼠,受鼠致死性全身照射（total body irradiation,TBI）（8.0Gy）预处理后,在移植物中混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞以引起不同程度的aGVHD。根据存活期、外周血白细胞计数、临床表现及病理检查等判断aGVHD程度。结果：单纯异基因骨髓组只有部分小鼠出现aGVHD,75％的小鼠长期存活（〉30d）。混合不同比例的供鼠骨髓细胞和脾细胞的Allo-BMT小鼠出现aGVHD的时间和程度均有差异,其中骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合组小鼠,均可在相对集中的时间内（8-15d）观察到典型的aGVHD临床和病理改变。结论：建立Allo-BMT aGVHD模型需要加入一定比例的脾细胞,供鼠骨髓与脾细胞1.5：1或1：1混合进行的Allo-BMT,可作为理想的aGVHD动物模型。     

阳离子脂质体介层的外源基因转染小鼠脾细胞的方法学探讨

目的：探讨高效阳离子脂质体介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的方法。方法：用新型阳离子脂质体DOSPER包裹携带lac Z报告基因的质粒pCAGGS-lacZ按3种方法转染小鼠脾细胞，（1）常规方法直接转染；（2）脾细胞经刀豆球蛋白A（ConA)活化后再按常规方法转染；（3）用黏附辅助脂质体法（adhesion-assisted lipofection,AAL）转染脾细胞。转染效率用X－gal染色法测定。结果：上述3种方法的转染效率依次为＜0．010，0．057及0．199，经方差分析，3种方法转染效率的差异有显著性（P＜0．01，n=3).结论：AAL法介导外源基因转染体外生长的小鼠脾细胞的转染效率最高。     

老年大鼠大脑皮质,海马和小脑的线粒体DNA缺失突变

目的 测定老年人大鼠脑缺失型ｍＤＮＡ比例,探讨ｍｔＤＮＡ缺失与脑衰老的关系,为研究其分子机制提供基础资料。方法 用碱裂解法抽提青年（３个月）ＳＤ大鼠１０只和老年（２４个月）ＳＤ大鼠１７只的大鼠皮质、海马和小脑的ｍｔＤＮＡ。稀释ＰＣＲ法测ｍｔＤＮＡ的缺失比例。结果 青年鼠和老年鼠大脑皮质、海马和小脑均存在缺失型ｍｔＤＮＡ,缺失片段为４８３４ｂｐ。青年鼠各脑区缺失型ｍｔＤＮＡ比例分别为０．０００１５６     

细胞融合对肿瘤细胞转移能力的影响

利用基因转移技术，将新霉素抗性质粒ＰＳＶ２ｎｅｏ转入正常小鼠脾细胞，然后用ＰＥＧ促融，使其与具高转移力人肺巨细胞癌细胞系ＰＬＡ８０ｌ－Ｄ９５细胞融合，经Ｇ４１８筛选后获得１个无转移力克隆细胞系ＰＭＳ－２。染色体分析和以新霉素抗性基因为探针的ＤＮＡ－ＤＮＡ斑点杂交均证实，ＰＭＳ－２为杂种细胞克隆。裸鼠接种亲代肿瘤细胞３×１０６个细胞／只可发生明显的肺及淋巴结等脏器转移，接种ＰＭＳ－２７×１０６个细胞／只后仅能形成有完整包膜的肿瘤结节，无转移灶产生。此外，细胞的一般特性、生长速度、３Ｈ－ＴｄＲ参入率等也有明显的改变。提示正常小鼠脾细胞与肿瘤细胞融合后表现出的肿瘤转移能力抑制，可能由肿瘤转移抑制基因控制或其他水平干预所致。     

柯萨奇B组病毒3型VP1基因疫苗免疫效果的研究

目的 为研制防治病毒性心肌炎的基因疫苗打下基础。 方法 以带有ＣＶＢ３Ｐ１、Ｐ２区核酸序列的ｐＧＥＭ质粒为模板，用ＰＣＲ方法克隆ＣＶＢ３ＶＰ１基因ｃＤＮＡ，插入真核表达载体ｐｃＤＮＡ３中的ＨｉｎｄⅢ和ＸｂａＩ位点之间，构建成重组质粒。经大量扩增纯化后，肌肉注射免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠３次，用ＣＶＢ３毒株攻击小鼠，取血及脾细胞检测其免疫效果。 结果 小鼠经３次免疫后，虽未测出明显免疫应答指标，但诱导了Ｔ     

导入TNF-αcDNA片断鼠LAK细胞对小鼠移植肿瘤治疗的初步观察

利用逆转录病毒中介的基因转移技术，将重组人ＴＮＦ－αｃＤＮＡ功能片断导入小鼠脾ＬＡＫ细胞中，然后用此细胞对荷瘤小鼠局部治疗，并以导入ＮｅｏＲ基因的ＬＡＫ细胞做对照。结果，经导有ＴＮＦ－α基因的ＬＡＫ细胞治疗的小鼠肿瘤明显变小，甚至消失，小鼠寿命亦明显高于对照组。说明ＴＮＦ－α基因的导入在小鼠体内具有明显的抗瘤效应     

一种检测异基因骨髓移植后供体植活的巢式PCR方法

目的　利用BALB C(H - 2Kd)和C5 7BL 6 (H - 2Kb)小鼠H - 2K等位基因不同 ,建立一种检测异基因骨髓移植 (allo -BMT)后供体植活的方法。方法　分别以供鼠 (BALB C)和受鼠 (C5 7BL 6 )及allo -BMT后小鼠骨髓和脾细胞DNA为模板进行巢式PCR ,并用琼脂糖凝胶电泳分析PCR扩增产物。结果　以供鼠和移植后小鼠骨髓和脾细胞DNA行巢式PCR可扩增出约 42 1bp的特异性片段 ,而未经移植的C5 7BL 6小鼠无此条带 ,与预期结果相符。结论　巢式PCR可敏感检测到不同品系小鼠H - 2K基因间的差异 ,可作为异基因骨髓移植后检测异基因是否嵌合的方法     

肝细胞癌宿主防御的分子与细胞水平研究的进展

研究表明，机体可通过复杂的分子和细胞机制阻止肿瘤的形成与发展。本文简要介绍宿主对原发性肝细胞癌（ＨＣＣ）防御机制分子生物学研究的进展情况。１肿瘤抑制基因肿瘤抑制基因的正常功能是延缓损伤细胞ＤＮＡ的复制，直至ＤＮＡ修复。若肿瘤抑制基因正常功能失效则可导致肿瘤的形成和发展。Ｐ５３就是肿瘤抑制基因主要的一种。肿瘤宿主Ｐ５３表达增加，野生型Ｐ５３具有抑制肿瘤形成的能力。当Ｐ５３不能阻止细胞的复制或不能修复细胞ＤＮＡ时，即可造成细胞的自身破坏。通过有丝分裂停滞和凋亡两个机制Ｐ５３控制细胞周期，其作用受细胞…     

牛磺酸对小鼠脾细胞DNA损伤的影响

目的探讨牛磺酸对紫外线所致小鼠脾细胞ＤＮＡ损伤的影响。②方法小鼠饲料中分别添加牛磺酸、维生素Ｃ（ＶｉｔＣ）和维生素Ｅ（ＶｉｔＥ）喂养１１２ｄ后,荧光法（ＦＡＤＵ法）检测小鼠脾细胞ＤＮＡ链的断裂程度,并与对照组比较。③结果紫外线照射前,小鼠脾细胞ＤＮＡ链断裂程度各组间差异无显著性（Ｆ＝０．８７５６,Ｐ＞０．０５）;紫外线照射后,牛磺酸、ＶｉｔＣ,ＶｉｔＥ各组脾细胞ＤＮＡ双链剩余率高于对照组,差异均有显著性（Ｆ＝２０．４５,ｑ＝３．０１～４．０８,Ｐ均＜０．０５）。④结论牛磺酸可减轻紫外线对小鼠脾细胞ＤＮＡ分子的损伤。