涎腺腺样囊性癌裸鼠转移灶细胞时相分析及定量形态学研究

本研究利用流式细胞仪及Ｖｉｄａｓ自动图象分析系统，检测了涎腺样囊性裸鼠肺转移灶细胞周期时相分布及其定量形态学参数，结果表明：肺转移灶细胞Ｓ期明显低于皮下移植癌细胞，而Ｇ０／Ｇ１期高于皮下移植癌，肺转移灶细胞之核浆比，核面积，核周长，等效径，形态因子等定量形态学参数提示肺移灶细胞趋向高分化。本研究结果对于解释涎腺腺样囊性癌临床生物学行为及制定临床治疗计划均有重要意义。     

肺高转移性涎腺腺样囊性癌细胞株的筛选

为了筛选出具有肺高转移性的克隆株，为涎腺腺样囊性癌肺转移提供实验基础。作者通过５次连续裸鼠体内传代，结合体外克隆技术、血小板凝集能力分析，从Ａｃｃ－２细胞系中筛选出肺高转移性腺样囊性癌细胞株——Ｍ－５ｃｌｏｎｅ２４，命名为Ａｃｃ－Ｍ。其转移能力与Ａｃｃ－２相比有明显增强，转移率由１８％提高至９６％（Ｐ＜０．００１），转移灶肺重量由０．３１ｇ提高至０．８８ｇ（Ｐ＜０．０１）；细胞使血小板凝集能力与转移率（ｒ１＝０．８９）、转移灶肺重量（ｒ２＝０．８５）呈高度相关。本研究提示，血小板凝集能力可作为判断涎腺腺样囊性癌细胞转移能力的一个指标     

细胞外基质与涎腺腺样囊性癌的远处转移

目的 研究涎腺腺样囊性癌与细胞外基质的关系。方法 通过肿瘤手术标本的免疫组化染色和超微结构观察、细胞系体外粘附实验及人工重组基底膜侵袭实验，并采用整合素受体抑制剂精氨酸-天冬氨酸进行体外及荷瘤动物体内实验，观察其预防及治疗肺转移的效果。结果 肿瘤团索周围的基膜样物质呈多层、溶解或断裂现象。出现腺样囊性癌远处转移患者的肿瘤标本组织蛋白酶D免疫组化阳性反应率(75％)明显高于无转移患者(43．8％)。肺高转移涎腺腺样囊性癌细胞株对人工重组基膜的侵袭细胞数明显高于其相应的非高转移细胞系。精氨酸-天冬氨酸在体外能抑制肺高转移涎腺腺样囊性癌细胞对人工重组基膜的侵袭，在体内能显著延长涎腺腺样囊性癌实验性肺转移动物的生存期。结论 涎腺腺样囊性癌的远处转移与细胞外基质有密切关系。     

PPARγ在人肺高、低转移涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达及意义

目的检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）在涎腺腺样囊性癌高、低转移细胞系中的表达,并探讨PPARγ是否与涎腺腺样囊性癌（SACC）肺转移转移相关。方法采用Western blot和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及实时定量PCR（Quantitative Real-time PCR）方法检测肺高转移性涎腺腺样囊性癌（SACC-LM）及肺低转移性涎腺腺样囊性癌（SACC-83）细胞系中PPARγ蛋白表达和PPARγmRNA的表达水平。所得实验数据采用SPSS 16.0统计软件进行t检验。结果 PPARγ蛋白及mRNA在SACC-LM细胞系及SACC-83细胞系中均有表达,与SACC-83细胞系相比,SACC-LM细胞系中PPARγ蛋白较高表达,并且SACC-LM细胞系中PPARγmRNA表达水平是SACC-83细胞中表达水平的4.346939倍（P〈0.01）。结论 PPARγ在SACC肺高低转移细胞系中的差异表达,初步证实PPARγ在SACC远处转移方面有重要作用。     

蛋白激酶CK2-β在腺样囊性癌细胞中的活性及表达

我们对比了涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞(salivary adenoid carcinoma lung metastasis，SACC-LM)与低转移的涎腺腺样囊性癌细胞(SACC-83)中蛋白激酶CK2-β的活性，探讨蛋白激酶CK2-β与涎腺腺样囊性癌发生肺转移的关系。     

涎腺腺样囊性癌的研究进展

涎腺腺样囊性癌是涎腺最常见的上皮源性恶性肿瘤之一,具有嗜神经侵袭和肺转移特性,手术、放射及化学药物治疗效果均不理想.近年来国内外在其基因及分子水平做了广泛深入的研究,以期探讨其侵袭转移机制,指导临床治疗和预后评估.本文就涎腺腺样囊性癌的研究进展作一综述.     

涎腺腺样囊性癌细胞侵袭鼠尾胶原的实验观察

为了研究涎腺腺样囊性癌对Ｉ型胶原的侵袭能力，本实验利用鼠尾胶原作培养基，接种涎腺腺样囊性癌细胞系ＡＣＣ２和高转移细胞株ＡＣＣＭ，以研究其侵袭能力。结果发现，肿瘤细胞紧密粘附胶原上，部分形成单层或复层，高转移细胞（ＡＣＣＭ）形成侵袭灶，并形成类似腺管样结构，说明高转移细胞株对Ｉ型胶原具有更强的侵袭能力。     

涎腺腺样囊性癌细胞侵袭鼠胶原的实验观察

为了研究涎腺腺样囊性癌对Ｉ型胶原的侵袭能力，本实验利用鼠尾胶原作培养基，接种涎腺腺样囊性癌细胞系ＡＣＣ－２和高转移细胞株ＡＣＣ－Ｍ，以研究其侵袭能力。结果发现，肿瘤细胞紧密粘附胶斫，部分形成单层或复层，高转移细胞（ＡＣＣ－Ｍ）形成侵袭灶，并形成类似腺管结构，说明高转移细胞株对Ｉ型胶原具有更强的侵袭能力。     

白血病抑制因子受体在人涎腺腺样囊性癌细胞系中的表达

目的 :探讨白血病抑制因子受体 (LIFR)与人涎腺腺样囊性癌转移的相关性。方法 :以涎腺腺样囊性癌细胞系ACC 2及其肺高转移株ACC M作为研究肿瘤转移分子机制的模型 ,应用RT PCR技术和免疫组化方法检测LIFR的表达。结果 :RT PCR检测表明LIFRmRNA在肺高转移细胞株ACC M细胞中的表达低于在ACC 2细胞中的表达 ,免疫组化检测表明LIFR蛋白在ACC M细胞中表达降低。结论 :LIFR在涎腺腺样囊性癌转移过程中可能发挥抑制作用。     

细胞粘附蛋白在涎腺腺样囊性癌细胞中的表达

目的　探讨具有不同转移能力的涎腺腺样囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄ ｃｙｓｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍ ａ; Ａ Ｃ Ｃ）细胞系中粘附分子表达的差异。方法　采用免疫组化方法对两株人腺样囊性癌细胞系（ Ａ Ｃ Ｃ２ 和 Ａ Ｃ Ｃ Ｍ）培养细胞及其 Ｓ Ｃ Ｉ Ｄ 小鼠移植瘤模型进行粘附分子 Ｃ Ｄ４４ｓ（标准型）、 Ｃ Ｄ４４ｖ６（变异型）、 Ｅｃａｄｈｅｒｉｎ（ Ｅｃａｄ）、αｃａｔｅｎｉｎ（αｃａｔ）、βｃａｔｅｎｉｎ（βｃａｔ）的检测。结果　（１） Ａ Ｃ Ｃ肺转移灶的肿瘤细胞中粘附分子的表达普遍高于其皮下移植瘤细胞;（２） Ａ Ｃ Ｃ Ｍ 肺转移灶肿瘤生长缓慢,细胞分化相对较好,而其皮下移植瘤和腹腔种植瘤肿块生长迅速,细胞分化差;（３） Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在 Ａ Ｃ Ｃ Ｍ 和 Ａ Ｃ Ｃ２ 体外培养细胞中均有弱阳性表达,而在异体移植瘤中包括皮下移植瘤和肺部转移灶均无表达。结论　 Ａ Ｃ Ｃ细胞中 Ｃ Ｄ４４ｓ 的表达受细胞分化程度影响,并影响了肿瘤细胞本身的生长状况; Ｅｃａｄ／ｃａｔ复合体的表达与否或表达强度与肿瘤细胞的分化成正比; Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在涎腺 Ａ Ｃ Ｃ中的表达和转移能力可能无关。     

维甲酸对涎腺腺样囊性癌实验性肺转移的抑制作用研究

本文利用已建立的涎腺腺样囊性癌肺转移动物模型，着重观察了Ａｃｃ－Ｍ细胞株经维甲酸体外处理后其在裸鼠肺部形成转移能力的情况。结果表明：１０μｍｏｌ／Ｌ、２０μｍｏｌ／Ｌ两种浓度有明显抑制转移作用，转移率及肺转移灶重量、数目和直径均较对照组有显著下降（Ｐ〈０．０５）；但抑制作用无浓度依赖性，揭示维甲酸对Ａｃｃ－Ｍ细胞株的作用位点是有限的。１０μｍｏｌ／Ｌ、２０μｍｏｌ／Ｌ可能是维甲酸抑制Ａｃｃ－Ｍ细胞株转移的最低饱和浓度。     

精氨酸-天冬氨酸抗涎腺腺样囊性癌实验性肺转移的研究

目的 研究精氨酸－天冬氨酸（Arg-Asp,RD)抗涎腺腺样囊性癌实验性肺转移（salivary adenoid cystic carcinoma lung metastation,SACC-LM)的作用。方法 观察不同剂量、不同时间RD灌胃对SACC－LM的影响。结果30mg/kg和120mg/kgRD灌胃可抑制SACC－LM的形成；7．5mg/kg、30mg/kg、120mg/kgRD灌胃均可延长SACC－LM鼠的生存期。结论 RD毒性小、可经口给药，具有抗SACC－LM的作用。     

阿斯匹林抗ACC-M裸鼠肺转移的实验研究

目的 应用ACC-M裸鼠肺转移模型研究阿斯匹林对腺样囊性癌细胞转移的抑制作用。方法 裸鼠尾静脉注射肿瘤细胞前后各7天连续服用分别含1mg％、10mg％和50mg％阿斯匹林饮用水或消毒饮用水14天,接种肿瘤后6周处死动物,比较各实验组与对照组的裸鼠肺重量和肺转移灶面积比。结果 服用含1mg％和 50mg％阿斯匹林饮用水的实验组与对照组相比较,两项指标的差别均有显著性（P<0.05）。结论 阿斯匹林对腺样囊性癌细胞ACC-M裸鼠肺转移有抑制作用。     

涎腺腺样囊性癌高转移细胞克隆株Acc－M体外移动性和粘附性的实验观察

研究癌细胞的运动性和粘附性，是探索恶性肿瘤侵袭转移机理的重要方面。本研究应用改良的Ｂｏｙｄｅｎ小室测得涎腺腺样囊性癌细胞系Ａｃｃ－２和高转移细胞株Ａｃｃ－Ｍ的体外运动能力，经统计学处理，高转移细胞株的运动能力明显高于Ａｃｃ－２系细胞株；两种细胞克隆的体外粘附性也有较大的差别，说明在Ａｃｃ转移过程中，癌细胞的运动性和粘附性起到重要的作用     

miR-181a抑制唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移机制的实验研究

目的 探讨miR-181a在唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭、转移中的作用。方法 利用QRT-PCR检测miR-181a在一对不同侵袭、迁移能力细胞株中的表达水平。过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达。利用激光共聚焦显微镜观察转染后细胞骨架的改变。Western免疫印迹检测转染后侵袭、转移相关因子的表达。通过尾静脉注射miR-181a mimics和mimics NC细胞,建立裸鼠肺转移模型。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果 QRT-PCR结果显示,miR-181a在低侵袭、迁移能力SACC-83细胞中的表达量显著高于高侵袭、迁移能力的SACC-LM细胞。SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后,细胞呈梭形,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平下调;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后,细胞变圆,体积变小,Slug、pERK1/2、ERK1/2表达水平升高。裸鼠肺转移模型miR-181a mimics组,细胞形成肺转移灶面积显著小于mimics NC组（P<0.05）。结论 miR-181a能抑制SACC的侵袭和转移。     

Integrins in metastatic adenoid cystic carcinoma

Adenoid cystic carcinoma exhibits a diverse clinical behaviour from very localised invasion to widespread metastatases. Recently two adenoid cystic carcinoma cells lines have been isolated and cultured which distinctly show either a low metastatic tendency (Acc-2) or a highly metastatic behaviour (Acc-M). It was hypothesised that these two types of behaviour may at least in part be explained by the different integrin profile on the cells' surface membrane. The integrins represent the largest known family of cell adhesion molecules and a number of tumour cell processes have been shown to be dependant on their integrin expression. Adenoid cystic carcinoma cells of both types were obtained and successfully cultured. These were then subjected to integrin analysis by a number of monoclonal antibodies to alpha(1), alpha(2), alpha(3), alpha(v), alpha(6), beta(1), alpha(v)beta6, alpha(v)beta4 using a fluorescence activated cell sorter. Although there was an apparent difference of integrin expression in the Acc-M group as compared to the Acc-2 group, this was not statistically significant. It is still possible though, that this might account for the differences in behaviour of the two cell lines, and the relationship between integrins, and invasion and metastases in other tumours is discussed. The pattern of integrin expression in Acc may be prognostically significant and useful for treatment planning in the future.     

裸鼠体内原位移植法筛选粘液表皮样癌高转移细胞

目的：筛选高转移人涎腺粘液表皮样癌细胞。方法：用人涎腺粘液表皮样癌细胞Mc3经裸鼠涎腺移植、鼠间原位移植、细胞培养技术获取所需细胞,用相差显微镜、电子显微镜、细胞计数法、染色体显示法、流式细胞术、软琼脂克隆形成法以及癌细胞裸鼠尾静脉注射法研究其生物学特性。结果：经4次鼠间原位移植,肺转移率为3／10。取转移灶行细胞培养,获得形态均一、生长旺盛的上皮样细胞,命名为M3SP4。M3SP4细胞所致肺肿瘤显示粘液表皮样癌组织学特征,细胞染色体为亚二倍体,仍保持人类染色体形态。M3SP4与Mc3形态相似,群体倍增时间（h）分别为23.9和25.9,S期细胞（％）分别占细胞周期26.8和15.3,克隆形成率（％）分别为54.6和30.2,经尾静脉注射后M3SP4细胞引起的肺转移结节比Mc3多35％。结论：M3SP4是转移力强于Mc3的人涎腺粘液表皮样癌细胞系,Mc3细胞经裸鼠涎腺移植、鼠间原位移植后转移力有所提高。     

The role of GPC5 in lung metastasis of salivary adenoid cystic carcinoma

Objective

Proteoglycans play a crucial role in salivary adenoid cystic carcinoma (SACC) tumorigenesis, neurotropic growth and lung metastasis. In this study, we investigated the role of GPC5 in the lung metastasis of SACC.

Design

The expression of heparan sulfate proteoglycans (HSPGs) was detected in SACC-M (high lung-metastatic cell line), SACC-2 (low lung-metastatic cell line) and SACC-83 (low lung-metastatic cell line) cells by relative quantitative Real-Time PCR. The expression of GPC5 was detected by immunofluorescence and Western blot analysis in SACC-M, SACC-2 and SACC-83 cells, and by immunohistochemical analysis in primary tumours from 16 cases of SACC patients with or without lung metastasis. GPC5 expression was silenced in SACC-M cells, cell proliferation and tumour growth was evaluated by MTT assay and nude mice model, respectively.

Results

Expression of most HSPGs was decreased in SACC-M cells, but GPC5 expression increased 3.24-fold and 815.69-fold (more than 3-fold) in SACC-M compared with SACC-2 and SACC-83 cells, respectively. Immunohistochemical analysis showed higher expression of GPC5 in SACC with lung metastasis compared to SACC without lung metastasis. The lung metastasis of SACC-M cells in nude mice was obviously decreased after GPC5 silencing (P < 0.05), although GPC5 silencing had no significant effect on SACC-M cell proliferation.

Conclusion

GPC5 may contribute to lung metastasis of SACC.