问荆合剂对胶原诱导关节炎大鼠滑膜细胞分泌TNF-α、IL-β水平的影响

采用Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,以雷公藤多甙作对照,通过对大鼠的关节肿胀指数观察及检测问荆合剂含药血清对滑膜细胞细胞因子TNF-α、IL-β水平的影响,探讨问荆合剂治疗类风湿关节炎的部分作用机制。结果发现问荆合剂能显著减轻大志关节肿胀指数,不同程度地抑制大志关节滑膜炎性细胞因子TNF-α、IL-β的水平。提示问荆合剂对Ⅱ型胶原诱导的大鼠关节炎具有一定抑制作用,可通过抑制关节滑膜分泌的炎性细胞原子TNF-α、IL-β的水平,从而减轻关节滑膜的炎症,可能是其治疗类风湿关节炎的作用机制之一。     

白细胞介素17在类风湿关节炎中对滑膜细胞的作用

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性起病的自身免疫性疾病,其具体的发病机制至今尚未完全清楚,其病程最终转归往往导致关节破坏和功能障碍.类风湿关节炎的发生发展与滑膜细胞特征性的改变相关,活化的滑膜细胞过度增殖,滑膜血管增生形成血管翳,炎性细胞浸润.白介素17(Interleukin-17,IL-17)在类风湿关节炎患者血清与关节滑液中水平升高,并与类风湿关节炎疾病的严重程度相关[1].IL-17是一种主要由CD4+T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞等分泌的促炎性细胞因子,具有强大的募集中性粒细胞及促进多种炎性因子释放的作用,在类风湿关节炎的发病机制中起重要作用.     

复方黑骨藤对佐剂性关节炎大鼠IL-4、IFN-γ及TGF-β1表达的影响

目的:研究复方黑骨藤对佐剂性关节炎大鼠模型血清中IL-4、IFN-γ和TNF-α及关节滑膜组织中TGF-β1的表达水平的影响,以深入探讨复方黑骨藤对类风湿关节炎的治疗作用及其相关机制。方法:构建大鼠弗氏完全佐剂性(AA)关节炎模型,通过ELISA与免疫组化方法分别检测大鼠血液中IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量和大鼠膝关节滑膜组织中TGF-β1的含量。结果:模型组与正常组比较,血清的IFN-γ、TNF-α水平升高,IL-4和滑膜组织中的TGF-β1水平降低(P0.01)。复方黑骨藤组与模型组比较血清中IFN-γ、TNF-α水平显著下降,IL-4、TGF-β1水平上调,与模型组有显著性差异。结论:本实验研究表明复方黑骨藤能显著抑制IFN-γ、TNF-α的表达,增强IL-4、TGF-β1的表达,调整大鼠Th1/Th2细胞及其细胞因子失衡,从而减轻关节滑膜炎症的持续发展和软骨破坏,对实验性类风湿关节炎的滑膜组织中T细胞增生及浸润具有显著的抑制作用。     

间充质干细胞对类风湿性关节炎患者细胞因子的调节作用

目的 探讨间充质干细胞分泌物对类风湿关节炎细胞因子的调节作用,以期发现有效缓解类风湿关节炎滑膜炎症、减少炎症细胞因子产生的治疗方法.方法 随机选取49例类风湿关节炎患者作为研究对象,收集患者流行病学信息资料,采用ELISA方法检测间充质干细胞分泌物刺激下的患者外周血淋巴细胞分泌的TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-...     

LncRNA Gm15621通过调控miR-133a/SOCS2轴抑制类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞炎症

目的探讨lncRNA Gm15621和miR-133a在类风湿关节炎滑膜组织中的表达及其与滑膜组织中成纤维样滑膜细胞炎症调控的关系。方法于2018年1月到2018年12月收集53例类风湿关节炎滑膜组织和20例正常滑膜组织,通过qPCR技术检测不同患者滑膜组织Gm15621和miR-133a的表达情况,免疫印迹法检测滑膜成纤维细胞SOCS2等蛋白的表达情况。结果类风湿关节炎患者滑膜组织Gm15461表达水平是正常滑膜组织的(43.06±2.48)%,miR-133a表达水平是正常组织的(2.94±0.13)倍;类风湿关节炎患者滑膜组织Gm15621表达水平与血清TNF-α(r=-0.441,P=0.001 1),IL-6(r=-0.442,P=0.0017)和IL-1β(r=-0.532,P<0.001)呈负相关,与滑膜组织中miR-133a(r=-0.629,P<0.001)表达呈负相关。荧光素酶报告基因显示:Gm15621和SOCS2都是miR-133a的靶基因,且miR-133a靶向抑制成纤维样滑膜细胞Gm15621和SOCS2,Gm15621抑制成纤维样滑膜细胞中miR-133a的表达。在体外,SOCS2敲低可以显著上调成纤维样滑膜细胞中TNF-α,IL-6和IL-1β的表达。结论类风湿关节炎患者滑膜组织中Gm15621低表达,miR-133a高表达,并且Gm15621通过抑制成纤维样滑膜细胞中miR-133a的表达促进SOCS2的表达,最终发挥抑制炎症因子表达的效果。     

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响

目的:观察雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖和IL-6分泌的影响,探讨其治疗类风湿性关节炎的作用机理.方法:培养大鼠滑膜细胞株RSC-364,运用CCK-8法检测不同剂量的雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响,酶联免疫吸附实验检测细胞株培养上清中的IL-6的含量.结果:经过IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364,在不同浓度的雷公藤多甙的作用48h后,其增殖明显受到抑制,并呈剂量依赖性.同时各剂量组均可抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364分泌炎性因子IL-6的分泌.结论: 雷公藤多甙抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364的过度增殖和IL-6的分泌,这可能是其治疗类风湿性关节炎的作用机理之一.     

IL-17调控类风湿性关节炎滑膜细胞SENP6表达与Cyr61关系初探

探讨IL-17调控类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞SENP家族分子表达与Cyr61表达间的关系,取8例类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞进行原代培养与鉴定,并利用real-time PCR检测了经IL-17刺激后,滑膜细胞中SENP家族分子与Cyr61表达格局。结果显示:经IL-17刺激后,有四例滑膜细胞Cyr61的表达上调,同时SENP6的表达也上调,另外四例经IL-17刺激Cyr61未见上调的滑膜细胞,其SENP6的表达却未见上调。初步分析表明IL-17调控类风湿性关节炎滑膜细胞SENP6表达与Cyr61表达存在正相关性,提示SENP6可能在IL-17刺激类风湿性关节炎滑膜细胞Cyr61的表达中起着调控作用。     

IL-15在类风湿关节炎治疗中的研究进展

IL-15是一种非常重要的致炎症细胞因子,它在类风湿关节炎中的表达机制尚不清楚。因而对类风湿关节炎的传统治疗,尤其是对TNF-α的抗体治疗,其效果不理想。随着免疫学的进一步研究,发现类风湿关节炎滑膜细胞表面能够持续地高表达IL-15,这提示IL-15在类风湿关节炎的发病机制中具有重要的作用。本文阐述了近年来IL-15对类风湿关节炎发病机制的研究中所取得的一些认识和进展,以期为以后的研究工作提供帮助。     

核心肽对类风湿关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的影响

背景:前期研究发现,在类风湿关节炎关节腔中注入核心肽,可以明显抑制病情活跃度且抑制滑膜的浸润增生。但由于T细胞和滑膜细胞之间联系密切,核心肽是通过直接作用于滑膜细胞还是通过T细胞介导抑制滑膜细胞尚缺乏研究。目的:对比观察核心肽对类风湿关节炎和骨性关节炎滑膜细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用酶消化法分离类风湿关节炎和骨性关节炎患者手术切取的病变滑膜组织滑膜细胞,MTT法检测滑膜细胞增殖率。取第3代类风湿性关节炎和骨性关节炎滑膜细胞分5组干预:空白对照组、甲氨蝶呤组、10,25,50μmol/L核心肽组。MTT法检测各组滑膜细胞增殖率变化;采用流式细胞仪检测各组滑膜细胞凋亡情况。结果与结论:类风湿关节炎滑膜细胞体外增殖速度较骨性关节炎滑膜细胞快(P0.05)。3种剂量的核心肽均可抑制骨性关节炎滑膜细胞的增殖,诱导其凋亡,且具有剂量相关性,高剂量时,核心肽更明显表现出对骨性关节炎滑膜细胞凋亡的诱导作用。而对于类风湿关节炎滑膜细胞,只有中、高剂量核心肽显示出明显的诱导细胞凋亡作用,但未见明显的剂量依赖性。核心肽对类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡诱导作用明显小于其对骨性关节炎细胞的凋亡诱导作用。结果提示核心肽对滑膜细胞具有一定的直接作用,高剂量核心肽在体外可抑制类风湿关节炎滑膜细胞的过度增殖,而中、高剂量核心肽可诱导类风湿关节炎滑膜细胞的凋亡。     

利用基因扫描技术分析类风湿关节炎T细胞受体的表达

目的 通过研究T细胞Vβ的表达探讨类风湿关节炎的发病机制，为新的治疗手段提供一定的理论基础。方法 应用半定量的逆转多聚酶链反应及基因扫描技术分析类风湿关节炎、骨关节炎、截肢病人滑膜及外周血中T细胞受体Vβ基因的表达情况以及T细胞的克隆性，并选择呈现单克隆或寡克隆的部分Vβ基因进一步克隆与测序。结果 滑膜组织与外周血T细胞表达绝大多数Vβ基因。类风湿关节炎病人滑膜组织中Vβ基因的表达呈现更明显的不均衡状态，Vβ6、Vβ17与Vβ22为优势亚群，其中以Vβ17的高水平表达最为突出。大多数阳性表达的Vβ基因均呈多克隆性。结论 类风湿关节炎病人滑膜组织中Vβ基因表达无限制性，但是存在明显的不均衡性，某些特定Vβ基因的选择性表达支持类风湿关节炎为抗原或超抗原驱动的免疫过程。     

类风湿性关节炎滑膜组织中NLRP3炎性小体及下游因子IL-1β/IL-18的表达及意义

目的检测NLRP3炎性小体及其下游炎性因子IL-1β/IL-18在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者滑膜被覆细胞及滑膜间质中的表达及分布情况,探讨NLRP3炎症复合体在RA免疫调节中的作用机制。方法采用免疫组化EnVision法检测30例RA、10例骨性关节炎(osteoarthritis, OA)患者滑膜被覆细胞及滑膜间质中NLRP3、Caspase-1及其下游炎性因子IL-1β及IL-18的表达。采用Spearman秩相关分析RA患者滑膜组织中NLRP3炎性小体及其下游炎性因子IL-1β/IL-18的表达水平与RA临床和实验室参数的相关性。结果 NLRP3在RA、OA组中的阳性率分别为100.00%和70.00%,Caspase-1在RA、OA组中的阳性率分别为100.00%和50.00%,IL-1β在RA、OA组中的阳性率分别为100.00%和60.00%,IL-18在RA、OA组中的阳性率分别为86.67%和0,NLRP3、Caspase-1、IL-1β及IL-18在RA和OA组间差异均有统计学意义(P0.05)。IL-1β与RF表达呈显著正相关(P0.05);NLRP3与CRP、RF、Caspase-1及IL-1β表达均呈显著正相关(P0.05),而与IL-18表达无相关性(P0.05)。结论 NLRP3/Caspase-1信号通路因子在RA的发病过程中起重要作用,且与疾病的活动性密切相关。IL-1β的分泌主要是由Caspase-1介导产生,提示抑制NLRP3或Caspase-1可有效下调IL-1β的表达,可能是RA潜在的治疗靶点,具有重要的临床指导意义。     

抗IL-1βscfv抗体与TNF-α可溶性受体融合蛋白的构建及其生物学活性分析

目的 设计原核表达抗人白细胞介素-1β单链抗体(IL-1βscfv)与TNF-α可溶性受体的融合蛋白,并分析其生物学活性,为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物.方法 利用RT-PCR方法从HeLa细胞总RNA中扩增了人肿瘤坏死因子Ⅰ型受体胞外区基因片段,与抗人IL-1βscfv通过抗体铰链区融合,克隆至pET27b(+)表达载体中,构建成pET-IL-1scfv:TNFR1质粒;转化大肠杆菌Rosetta进行表达.从包涵体中纯化得到IL-1scfv:TNFR1蛋白,进行IL-1scfv:TNFR1的鉴定及活性检测.结果 ELISA结果证明,IL-1scfv:TNFR1可以分别结合hIL-1β和hTNF-α,并呈现剂量依赖性,表明IL-1scfv:TNFR1的单链抗体部分和可溶性受体部分可以各自形成正确的空间构象;免疫斑点分析证明,IL-1scfv:TNFR1与hTNF-α结合后仍可以结合hIL-1β,具有同时结合hIL-1β和hTNF-α的两种靶分子的能力,表明IL-1scf:TNFR1的两个部分不会相互影响与靶分子的结合.活性测定结果表明,IL-1 scfv:TNFR1可以有效封闭肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒效应,具有显著抑制hIL-1β促进L929细胞增殖的活性,IL-1scfv:TNFR1对两种靶分子的拮抗作用均呈现明显的剂量依赖性.结论 成功构建了能够同时结合hIL-1β和hTNF-α两种靶因子的双特异性IL-1 scfv:TNFR1融合蛋白,并能有效抑制hTNF-α和IL-1β的生物活性,为类风湿关节炎的治疗提供新的候选药物.     

雷公藤多甙对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364表达JNK1蛋白的影响

目的探讨雷公藤多甙（Tripterygium Glycosides，TG）对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364 JNK1的影响，进一步阐明雷公藤多甙治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法运用Western—blot检测不同浓度的雷公藤多甙（0、5、10、20mg／L）对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC．364JNK1蛋白的表达。结果雷公藤多甙明显地抑制IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364对JNK1蛋白的表达。结论雷公藤多甙抑制IL—1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC．364对JNK1蛋白的表达，可能是其治疗类风湿性关节炎的重要作用机制之一。     

IL-38 抑制LPS / TLR4 诱导炎症减轻类风湿关节炎的机制研究

目的:探讨IL-38 和TLR4 在类风湿关节炎中的潜在关联及其在类风湿性关节炎中致病的机制。方法:选取2013 年1 月至2016 年2 月间本院收治的41 例类风湿关节炎患者(观察组)及45 例本院实施创伤后滑膜切除术的患者(对照组)为研究对象。收集观察组和对照组的外周血单个核细胞(PBMCs)、滑膜组织及血清。荧光定量PCR 检测PBMCs 及滑膜组织中IL-38 及TLR4 的mRNA 水平。ELISA 检测滑膜液及血清中IL-38 的表达,Western blot 检测滑膜组织中IL-38 及TLR4的表达。LPS 和/ 或IL-38 刺激RAW264.7 细胞,ELISA 检测RAW264.7 细胞上清中IL-6、IL-8 及TNF-α的含量,荧光定量PCR检测RAW264.7 细胞TLR4、IL-6、IL-8 及TNF-α的表达。NF-κB 激活-核转运试剂盒及Western blot 检测NF-κB 信号的激活水平。结果:与对照组相比,类风湿关节炎患者PBMCs、血清及滑膜组织和滑膜液中IL-38 水平显著升高,而TLR4 水平也显著升高,Pearson 相关分析显示二者呈负相关。LPS 和/ 或IL-38 刺激RAW264.7 细胞后,IL-38 能够抑制LPS 诱导的TLR4、IL-6、IL-8 及TNF-α表达,进一步的分析显示,IL-38 能抑制NF-κB 信号途径激活,因此推测IL-38 可能是通过抑制NF-κB 信号途径激活从而抑制LPS/ TLR4 信号诱导的炎症因子表达。结论:IL-38 能抑制LPS/ TLR4 诱导炎症减轻类风湿关节炎,其机制可能是通过抑制NF-κB 信号途径的激活。     

Tolicizumab在类风湿性关节炎中的应用

类风湿关节炎是以滑膜炎、慢性系统性炎症反应及自身抗体分泌为特点的自身免疫性疾病.已有研究结果表明,过量表达的IL-6在类风湿关节炎起病与进展过程中发挥着重要作用.Tolicizumab是第1个人源性的IL-6受体抗体,通过特异性识别结合IL-6受体而阻断IL-6生物学活性,发挥抑制类风湿关节炎炎症反应的作用.大量临床试...     

IL-17和TNF-α在体外协同诱导软骨破坏

目前认为T细胞在类风湿性关节炎(RA)的诱发和持续中起关键性作用，其中以CD4^ 记忆，Th细胞尤为重要。IL-17是由活化的记忆CD4^ T细胞产生的细胞因子。已在RA病人滑膜上清液中发现有生物活性的IL-17，并在其滑膜中发现高水平的IL-17。近来研究显示，IL-17在体内抑制正常小鼠关节软骨中蛋白多糖的合成，产生IL-17的，Th1细胞在体     

诱骗受体DcR3对佐剂型关节炎大鼠模型的作用分析

目的 研究诱骗受体DcR3 对佐剂型关节炎(AA)大鼠模型的作用及其机理.方法 注射弗式完全佐剂建立大鼠佐剂型关节炎(AA)模型,尾静脉注射DcR3蛋白,观察大鼠关节肿胀度、间接 ELISA 检测血清和滑膜液中细胞因子IL-1 β、TNF-α、IFN-γ的变化.RT-PCR检测滑膜和淋巴细胞中DcR3、Fas、FasL mRNA的表达以及脾脏中TGF-β、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-10 mRNA的表达.Western blot分析滑膜细胞中Caspase-8、Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2蛋白的表达.结果 DcR3 治疗AA大鼠后,足肿胀度降低;血液和滑膜液的IL-1β、TNF-α、IFN-γ水平下降;脾脏中TGF-β、IFN-γ、TNF-α mRNA 表达下调,IL-4、IL-10 mRNA表达上调;滑膜细胞中Caspase-8、Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调. 结论 DcR3 可以用于实验性大鼠AA的治疗,其治疗机制与调节滑膜细胞FasL、Fas mRNA的表达和血液淋巴细胞中 Fas mRNA的表达,促进滑膜细胞和自身反应性淋巴细胞的凋亡;调节脾脏细胞Th1/Th2细胞因子平衡相关.本研究为进一步阐明RA的发病机理奠定了重要基础,为有效治疗RA提供了新思路.     

IL-17、MMP-3在类风湿关节炎患者滑膜液及血浆中的表达及意义

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者滑膜液及血浆中白细胞介素-17(IL-17)、基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的水平及其临床意义.方法:应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测RA患者滑膜液及血浆中IL-17及MMP-3的水平,分析IL-17及MMP-3与临床指标的关系.结果:RA患者滑膜液IL-17及MMP-3水平明显...     

野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞超微结构及分泌功能的影响

目的:从关节滑膜超微结构和分泌功能的角度,探讨野菊花总黄酮(TF℃)对佐剂性关节炎(AA)大鼠治疗作用的机制.方法:SD大鼠复制AA模型;大鼠免疫后12 d开始分别灌胃TFC 84、168、336 mg/kg和对照药雷公藤多件片100mg/kg.组织块培养法分离培养大鼠滑膜细胞,透射电镜分析滑膜细胞内具分泌功能细胞器的形态学改变;放射免疫测定法检测滑膜细胞分泌IL-1β、TNF-α水平;RT-PCR检测滑膜组织IL-1β、TNF-α mRNA表达.结果:TFC 168、336 mg/kg可恢复A、B型滑膜细胞的细胞器分泌功能;纠正AA大鼠滑膜细胞分泌过高的IL-1β、TNF-α功能;RT-PCR也表明TFC可剂量依赖性的抑制IL-1β、TNF-α mRNA表达.结论:TFC可恢复AA大鼠滑膜细胞具分泌功能细胞器的形态,降低滑膜细胞分泌炎性介质的功能是其治疗AA的途径之一.     

核因子-κB诱骗剂局部应用对胶原诱导性关节炎大鼠治疗作用的研究

探讨核因子-κB诱骗剂(NF-κB decoy)局部应用对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及其对滑膜基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、IL-17、TGF-β表达的影响。建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,用NF-κB诱骗剂注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、CIA模型组和实验组。42d后观察各组关节炎指数、病理指标,采用ELISA法检测各组大鼠关节液中IL-17、IL-12和TGF-β的水平,免疫组织化学方法检测关节组织MMP-3、TGF-β和IL-17表达。与对照组比较,CIA模型组大鼠关节炎指数、关节液中IL-17、IL-12水平均明显升高,滑膜组织MMP-3、IL-17阳性表达的积分光密度(IOD)值明显增加;实验组经NF-κB诱骗剂注射后,与CIA模型组比较,关节炎指数、关节液中IL-17、IL-12水平均明显降低,而TGF-β的含量显著增高,滑膜组织MMP-3、IL-17阳性表达的IOD值明显降低,TGF-β阳性表达的IOD值显著增高。NF-κB诱骗明显减轻CIA大鼠的关节炎症状,延缓关节破坏的进展,对CIA有较好的治疗作用。