吡柔比星对大鼠心肌细胞的损伤作用及其模型建立

目的：探讨吡柔比星（THP）对大鼠心肌细胞的损伤作用,阐明THP诱导心肌细胞损伤模型的建立方法。方法：常规体外培养大鼠心肌细胞H9C2,将细胞分为空白对照组和不同浓度（1×10^-6 mol·L^-1、1×10^-5 mol·L^-1、1×10^-4 mol·L^-1、1×10^-3 mol·L^-1和1 μmol·L^-1、3 μmol·L^-1、5 μmol·L^-1、7 μmol·L^-1、9 μmol·L^-1和10 μmol·L^-1 THP组,采用不同浓度THP处理细胞,并在6、12、24、36和48 h时间点采用CCK-8法检测各组细胞存活率,DCFH-DA活性氧（ROS）探针法检测细胞中ROS水平,硫代巴比妥酸比色法检测各组细胞中丙二醛（MDA）水平,黄嘌呤氧化法检测各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）活性,二硝基苯肼显色法检测各组细胞中乳酸脱氢酶（LDH）活性,TUNEL染色法检测各组细胞凋亡率,qRT-PCR法检测各组细胞中B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤2（Bcl-2）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶9（Caspase-9）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中Bax、Bcl-2、活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）和活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白表达水平。结果：与空白对照组比较,1、5和9μmol·L^-1 THP组H9C2细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）,细胞中ROS和MDA水平及LDH活性升高（P<0.05或P<0.01）,SOD活性降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,细胞中Bax、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2 mRNA表达水平降低（P<0.05）,Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）。结论：THP对大鼠心肌细胞具有损伤作用,其中5 μmol·L^-1是THP诱导H9C2细胞损伤模型的最佳造模浓度。     

鹿茸多肽介导心肌干细胞分化对终末心肌分化基因ANP和MLC-2v表达的影响

目的：探讨鹿茸多肽介导心肌干细胞（CSC）分化对终末心肌分化基因心房钠尿肽（ANP）和心肌肌凝蛋白轻链2（MLC-2v）表达的影响,阐明其修复受损心肌的作用机制。方法：选取出生2d的雄性Wistar大鼠,提取CSC,免疫荧光鉴定CSC表面标志物c-Kit,流式细胞术鉴定CSC纯度。以培养皿为实验单位,分为空白对照组（加等量缓冲液）、5-氮胞苷组（终浓度3 μmol·L^-1）、鹿茸多肽组（终浓度800 mg·L^-1）和联合组（3 μmol·L^-1 5-氮胞苷＋800 mg·L^-1鹿茸多肽）,于37℃、5% CO₂培养箱中培养48 h。ELISA法检测各组细胞上清液中ANP和MLC-2v表达水平,RT-PCR法检测各组细胞中ANP和MLC-2v mRNA表达水平。结果：获得纯度>95%的CSC。ELISA法检测,与空白对照组比较,5-氮胞苷组、鹿茸多肽组和联合组细胞上清中ANP和MLC-2v表达水平明显升高（P<0.05）;联合组ANP和MLC-2v表达水平高于5-氮胞苷组和鹿茸多肽组,但差异无统计学意义（P>0.05）。RT-PCR法检测,与空白对照组比较,5-氮胞苷组、鹿茸多肽组和联合组ANP和MLC-2v mRNA表达水平明显升高（P<0.05）。结论：鹿茸多肽可以通过增强心肌分化基因ANP和MLC-2v表达介导CSC分化为心肌细胞,且在一定程度上减轻5-氮胞苷所致的细胞毒性。     

刺五加叶皂苷B对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨刺五加叶皂苷B（C-B）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,阐明其对氧化应激损伤所致的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法：乳鼠心肌细胞行原代培养,取自主搏动良好的心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2 损伤组(200 μmol•L^-1H2O2诱导心肌细胞凋亡)、100 mg•L^-1C-B 组和200 mg•L^-1 C-B 组,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC 流式细胞术检测凋亡率,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,200 μmol•L^-1H₂O₂组心肌细胞有损伤性改变,细胞
存活率明显降低（P<0.001）,凋亡率升高（P<0.001）,Caspase-3活性增加（P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3及Bax蛋白表达增多,PARP蛋白降解增多。与H2O2损伤组比较,100及200 mg•L^-1C-B组心肌细胞损伤性改变均减轻,细胞存活率增加（P<0.05或P<0.01）,凋亡率降低（P<0.001）,Caspase-3活性降低（P<0.05或P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达和Caspase-3蛋白表达减少,PARP蛋白降解减少（依据电泳条带的宽窄及明暗度判断蛋白表达程度）,且200 mg•L^-1C-B组的作用更明显。结论：C-B对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有一定的抑制作用,可能与其调节细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达有关。     

五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用及其机制

目的：探讨五味子甲素对脑胶质瘤C6细胞生长的抑制作用,阐明其作用机制。方法：培养大鼠脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组及50、100和200mg·L^-1五味子甲素组,采用MTT法检测C6细胞增殖率,流式细胞术分析细胞周期百分率,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测细胞培养上清中CyclinD1、Bax、Bcl-2和Casepase-3蛋白表达水平。结果：与对照组比较,24和48h时50、100和200 mg·L^-1五味子甲素组细胞增殖率均明显降低（P < 0.01）,72h时100和200 mg·L^-1五味子甲素组细胞增殖率明显降低（P < 0.05或P < 0.01）。与对照组比较,200 mg·L^-1五味子甲素组SubG₁期细胞百分率升高（P < 0.05）,S期细胞百分率降低（P < 0.05）。与对照组比较,100和200mg·L^-1五味子甲素组细胞CyclinD1蛋白表达水平降低（P < 0.01）,不同浓度五味子甲素组Bax蛋白表达水平升高（P < 0.05或P < 0.01）,200mg·L^-1五味子甲素组Bcl-2蛋白表达水平降低（P < 0.01）,不同浓度五味子甲素组Bax/Bcl-2比值明显升高（P < 0.01）,200 mg·L^-1五味子甲素组Caspase-3蛋白表达水平升高（P < 0.01）。结论：五味子甲素通过下调CyclinD1蛋白表达水平、上调促凋亡因子Bax和Bcl-2表达水平而抑制C6细胞的生长。     

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的：观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法：C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol•L^-1 LPS组、1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组及1 000 μmol•L^-1 H₂O₂与100μmol•L^-1 LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果：与空白对照组比较, 100 μmol•L^-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05) ,而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H₂O₂组和LPS组比较,LPS与H₂O₂联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论：单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H₂O₂引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。     

鹿茸多肽对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和胶原蛋白分泌能力的影响及其机制

目的：探讨鹿茸多肽对小鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3增殖和胶原蛋白分泌能力的影响,并阐明其相关作用机制。方法：选取对数生长期的NIH/3T3细胞,加入不同剂量（1.56、3.13、6.25、12.50、25.00、50.00、100.00和200.00 mg·L^-1）鹿茸多肽作为实验组,以加入0 mg·L^-1鹿茸多肽的细胞作为空白对照组,以加入50μg·L^-1碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的细胞作为阳性对照组。MTT法检测各组NIH/3T3细胞存活率,ELISA法检测各组NIH/3T3细胞中胶原蛋白分泌情况,划痕愈合实验检测各组NIH/3T3细胞的迁移能力,Western blotting法检测各组NIH/3T3细胞的细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK 1/2）的磷酸化蛋白（p-ERK 1/2）表达水平,免疫荧光法检测转化生长因子β1（TGF-β1）的表达情况。结果：与空白对照组比较,阳性对照组和6.25、12.50、25.00、50.00、100.00及200.00 mg·L^-1鹿茸多肽组细胞存活率明显升高（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,阳性对照组和6.25、12.50、25.00和50.00mg·L^-1鹿茸多肽组NIH/3T3细胞培养液中Ⅰ型胶原蛋白水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,阳性对照组和12.50及25.00 mg·L^-1鹿茸多肽组NIH/3T3细胞培养液中Ⅲ型胶原蛋白水平明显升高（P<0.05）。与空白对照组比较,阳性对照组和12.50mg·L^-1鹿茸多肽组细胞划痕愈合率、NIH/3T3细胞中p-ERK 1/2表达水平及NIH/3T3细胞质中TGF-β1表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：鹿茸多肽能促进NIH/3T3细胞增殖和胶原蛋白分泌,并提高其迁移能力,其作用机制是可能是通过激活ERK 1/2磷酸化及增加TGF-β1表达实现的。     

姜黄素对冈田酸损伤的HT⁃22细胞的保护作用

目的：探讨姜黄素（curcumin,Cur）对冈田酸（okadaic acid,OA）损伤的小鼠海马神经元细胞保护作用的机制,为阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的治疗提供新的理论基础。方法：小鼠海马神经元HT?22细胞经OA处理,分为对照组、Cur组、OA组、OA+Cur组,MTT检测各组细胞活力;Annexin V?FITC/PI双染色荧光显微镜及流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;DCFH?DA探针荧光显微镜及流式细胞仪测定细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平;免疫印迹法检测Cleaved?caspase?3、Bcl?2、总微管相关蛋白Tau（t?Tau）、磷酸化的微管相关蛋白Tau（p?Tau）蛋白的水平。结果：与对照组相比,不同浓度的OA作用HT?22细胞24 h后,细胞活力呈剂量依赖性下降,差异有统计学意义。OA损伤持续一定时间后细胞内ROS水平升高,OA损伤后细胞凋亡增加,抗凋亡蛋白Bcl?2表达量降低、凋亡蛋白Cleaved?caspase?3蛋白表达升高且t?Tau、p?Tau蛋白表达异常增加。姜黄素作用OA损伤的HT?22细胞后,与OA组相比,OA+Cur组细胞活性增加,凋亡率降低,细胞内ROS生成减少,同时Bcl?2表达增加、Cleaved?caspase?3蛋白和t?Tau、p?Tau蛋白表达减少。结论：姜黄素可以保护OA损伤的小鼠海马神经元细胞,为阿尔茨海默病相关神经元细胞的保护提供了新的理论依据。     

五味子多糖对脑肿瘤干细胞的凋亡诱导及生长抑制作用

目的：探讨五味子多糖（SCP）对脑肿瘤干细胞（BTSCs）生长的抑制作用,阐明SCP抑制BTSCs生长的抑制机制。方法：培养原代人脑肿瘤细胞,CD133免疫磁珠法分选获得BTSCs,免疫荧光法鉴定BTSCs中神经干细胞标记抗原CD133和Nestin表达情况;将BTSCs分为对照组和不同剂量SCP组,分别用0、200、400和800 μg·L^-1SCP处理;噻唑蓝（MTT）法检测各组BTSCs的增殖率,Annexin Ⅴ-PI分析细胞凋亡率,酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组BTSCs培养上清中Bax、Bcl-2和Cascpase-3蛋白表达水平。结果：免疫荧光染色,CD133和Nestin在BTSCs中呈阳性表达。MTT检测,与对照组比较,各剂量SCP组BTSCs增殖率降低,400和800 mg·L^-1组差异有统计学意义（P<0.05）。Annexin Ⅴ-PI检测,800 mg·L^-1SCP组细胞凋亡率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。ELISA法检测,与对照组比较,各剂量SCP组BTSCs中Bax蛋白表达水平升高（P<0.05）,800 mg·L^-1SCP组Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.05）,各剂量SCP组Bax/Bcl-2比值明显升高（P<0.05）。与对照组比较,800 mg·L^-1 SCP组BTSCs中Caspase-3蛋白表达水平明显升高（P<0.01）。结论：SCP可抑制BTSCs生长,诱导细胞凋亡可能是其作用机制之一。     

维生素K3诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤中Bcl-2和Bax表达的变化及意义

目的：探讨Bcl-2、Bax在维生素K3 (VK3)诱导人肝癌细胞SMMC-7721损伤过程中的变化,为研究VK3诱导肝癌细胞损伤的机制提供参考。方法：体外培养SMMC-7721细胞,取对数生长期细胞分为对照组和不同浓度VK3处理的实验组（20、40和60 μmol•L^-1）,MTT法检测各组SMMC-7721细胞生存率;紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;RT-PCR检测Bcl-2及Bax mRNA表达水平;Western blotting检测Bcl-2及Bax蛋白表达水平。结果：与对照组比较,20 μmol•L^-1 VK3组细胞存活率、LDH释放率、Bcl-2和Bax mRNA表达量及其蛋白表达量未见明显变化;与对照组比较,40和60 μmol•L^-1 VK3组细胞存活率降低(P<0.05或P<0.01);LDH释放率增加(P<0.05或P<0.01);Bcl-2 mRNA表达率降低(P<0.05);Bax mRNA表达量率升高(P<0.05);Bcl-2蛋白表达水平下降(P<0.05);Bax 蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论：40 μmol•L^-1剂量的VK3能够诱导SMMC-7721细胞损伤,其机制可能与下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达有关。     

As2O3联合γ分泌酶抑制剂MW167对人肝癌HepG2/ADM细胞耐药性的影响

目的：探讨三氧化二砷（As₂O₃）和γ分泌酶抑制剂MW167单独及联合作用对HepG₂/ADM细胞耐药性的影响,并阐明其作用机制。方法：MTT法检测不同浓度As₂O₃（0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和8.00 mg·L^-1）和MW167（10、20和40 μmol·L^-1）处理HepG₂/ADM细胞24、48和72 h后细胞的吸光度（A）值,计算细胞增殖抑制率,确定药物作用浓度和时间;将HepG₂/ADM细胞分为空白组、As₂O₃组、MW167组、As₂O₃和MW167联合组;根据MTT结果选取无细胞毒剂量的As₂O₃、MW167干预各组细胞48 h后,FCM法检测细胞凋亡率;RT-PCR和Western blotting法分别检测各组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1（P-gp）、Bcl-2和Bax mRNA及蛋白表达水平。结果：在同一浓度时,As₂O₃和MW167对HepG₂/ADM细胞的增殖抑制率随着作用时间的延长而升高（P<0.05或P<0.01）;在同一时间点,As₂O₃和MW167对HepG₂/ADM细胞的增殖抑制率随药物浓度的增加而升高（P<0.05）;确定As₂O₃和MW167的无毒剂量分别为0.25 mg·L^-1和10 μmol·L^-1,干预时间为48 h。药物干预48 h后,与空白组比较,各干预组细胞凋亡率均升高（P<0.05）,其中以联合组升高最为明显（P<0.01）。与空白组比较,各干预组细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1（P-gp）和Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,其中以联合组降低最为明显（P<0.01）;与空白组比较,各干预组Bax mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,其中以联合组升高最为明显（P<0.01）。结论：As₂O₃可逆转HepG₂/ADM细胞的耐药性,其作用机制可能与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡、下调细胞中Notch-1、Hes-1、MDR-1（P-gp）和Bcl-2基因及蛋白表达水平及上调Bax基因和蛋白表达水平有关。     

纳米SiO2对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的凋亡诱导作用及其机制

目的:探讨纳米二氧化硅(SiO₂)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡和周期的影响,阐明其作用机制。方法:选取不同浓度粒径为90 nm的SiO₂颗粒作用于SH-SY5Y细胞,分别为0、3.125、6.250、12.500、25.000、50.000 mg·L^-1 SiO₂组,其中0 mg·L^-1组为对照组。MTT法检测各组SH-SY5Y细胞存活率;采用AO/EB染色和 Annexin Ⅴ-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率;流式细胞术(FCM)检测细胞周期百分比和细胞中活性氧(ROS)水平。结果:MTT检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于对照组 (P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞存活率低于3.125 mg·L^-1 SiO₂组 (P<0.05)。AO/EB染色和 Annexin V-FITC/PI法检测,6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞凋亡率高于3.125 mg·L^-1 SiO₂组(P<0.05)。FCM检测,3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组细胞中ROS水平高于对照组 (P<0.05)。25.000和50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₀/G₁期细胞百分比低于3.125 mg·L^-1SiO₂组和对照组(P<0.05),50.000 mg·L^-1 SiO₂组G₂/M期细胞百分比高于对照组 (P<0.05)。结论:纳米SiO₂ 可降低SH-SY5Y细胞的活力,诱导细胞凋亡,增加细胞中ROS水平,可干扰细胞周期进程,对SH-SY5Y细胞的增殖具有抑制作用。     

银杏叶提取物各组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质积聚的抑制作用

目的: 探讨银杏叶提取物(GBE)不同组分对高糖培养下系膜细胞增殖及细胞外基质(ECM)积聚的作用,阐明其作用机制。方法: 高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚、异鼠李素、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、3.125、6.250、12.500、25.000和50.000 mg·L^-1,同时设低糖对照组,MTT法检测各组系膜细胞增殖情况。高糖培养的系膜细胞分别给予GBE、总黄酮、总内酯、银杏内脂A、银杏内脂B和银杏内脂C,药物浓度分别为0(高糖对照组)、0.05、0.50、5.00和50.00 mg·L^-1,同时设低糖对照组,ELISA法检测条件培养基中Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(FN)水平。结果: MTT检测,与高糖对照组比较, 50.000 mg·L^-1GBE组细胞增殖活性明显降低(P<0.01),25.000 和50.000 mg·L^-1总黄酮组细胞增殖活性明显降低(P<0.05或P<0.01),总黄酮水解物、槲皮素、山奈酚和异鼠李素各浓度组细胞增殖活性均明显降低(P<0.01),50.000 mg·L^-1内脂C组细胞增殖活性明显降低(P<0.05);其他各组细胞增殖活性与高糖对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测,与高糖对照组比较,5.00和50.00 mg·L^-1GBE 组Col Ⅳ和FN水平均明显降低(P<0.01), 0.50 mg·L^-1GBE组FN水平明显降低(P<0.05),0.50、5.00和50.00 mg·L^-1总黄酮组Col Ⅳ水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00 mg·L^-1总内脂组Col Ⅳ和FN水平降低(P<0.05或P<0.01),50.00 mg·L^-1内脂 C 组FN水平降低(P<0.05)。结论: GBE在高浓度时(50.000 mg·L^-1)抑制高糖诱导的肾小球系膜细胞增殖而低浓度(自0.500 mg·L^-1起)时抑制系膜细胞ECM积聚;GBE中总黄酮在抑制细胞增殖和ECM积聚方面起主要作用,总内脂无明显效果;苷元抑制系膜细胞增殖的作用远远强于糖苷。     

褪黑素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞体外增殖及凋亡的影响

目的: 探讨褪黑素(MLT)、卡铂(CBP)单独及联合应用在体外对人卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,阐明MLT和CBP的药物协同作用。 方法: 将体外培养的人卵巢癌SKOV3细胞分为空白对照组、MLT组(1和2 mmol·L^-1)、CBP组(12.5、25.0和50.0mg·L^-1)、联合用药组(不同浓度MLT及CBP联合用药)。应用MTT比色法、流式细胞术(FCM)测定各组SKOV3细胞的增殖抑制率及凋亡情况,并应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)测定各组SKOV3细胞中Bcl-2和Bax基因表达水平。 结果: MTT法检测,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率高于MLT组,且高于 50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2 mmol·L^-1MLT联合50mg·L^-1CBP 组效果最佳,增殖抑制率为(70.7±4.2)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞增殖抑制率明显增高(P<0.05)。流式细胞术检测,联合用药组SKOV3细胞凋亡率高于MLT组,且高于50.0mg·L^-1CBP组,差异有统计学意义(P<0.05), 2mmol·L^-1MLT 联合50mg·L^-1CBP组SKOV3细胞凋亡率为(58.9±2.0)%;与双倍浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞凋亡率明显增高(P<0.05)。与同浓度CBP组比较,联合用药组SKOV3细胞中Bax基因表达水平明显升高(P<0.05),Bcl-2基因表达水平明显降低(P<0.05)。 结论: MLT可增强CBP在体外对卵巢癌SKOV-3细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用,通过增强Bax基因表达及下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡。     

紫薯花青素抗结肠癌作用及其诱导细胞凋亡机制

目的: 探讨紫薯中原花青素(PCI)对人结肠癌细胞(HCT-116)的细胞毒性作用,阐明其诱导细胞凋亡的机制。方法: 取处于对数生长期HCT-116细胞和人成纤维细胞HF-91随机分为对照组(PBS组)、阳性药组[25 mg·L^-1顺铂(DDP)]和PCI组(终浓度分别为25、50和100 mg·L^-1)。采用CCK8法检测细胞增殖抑制率,AO/EB法荧光显微镜观察细胞凋亡情况,流式细胞术检测JC-1线粒体膜电位变化,qPCR法检测p53和caspase-3 mRNA表达水平。结果: 与DDP组比较,100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05),各浓度PCI组HF-91细胞增殖抑制率明显降低(P<0.05),且呈浓度依赖性。与DDP组比较,50和100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。与对照组比较,DDP组和不同浓度PCI组HCT-116细胞中caspase-3和p53 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与DDP组比较,不同浓度 PCI组HCT-116细胞中caspase-3 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05),100 mg·L^-1 PCI组HCT-116细胞中p53 mRNA表达水平明显升高(P<0.05),且呈浓度依赖性。结论: 紫薯花青素对消化系统肿瘤细胞具有较强的毒性作用,而对正常细胞毒性较小。     

荞麦花叶芦丁对高糖刺激血管损伤的保护作用

目的: 观察荞麦花叶芦丁(RBFL)对高糖所致血管损伤的保护作用,并探讨其可能机制。 方法: 45只SD大鼠随机取出8只作为正常对照组,其余37只空腹一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ,60 mg·kg^-1)建立1型糖尿病动物模型。将造模成功大鼠分为模型组 (n=10)和低剂量(45 mg·kg^-1,n=8)、中剂量(90 mg·kg^-1,n=8)及高剂量(180 mg·kg^-1,n=8)RBFL干预组,灌胃给药,每天1次,连续8周;正常对照组和模型组大鼠灌胃等量生理盐水。给药8周后观察各组大鼠的一般状况,记录血糖和体质量,检测不同浓度乙酰胆碱 (Ach)(1×10^-9~1×10^-5 mol·L^-1)和硝普钠 (SNP)(1×10^-10~1×10^-5 mol·L^-1)诱导的各组大鼠胸主动脉血管舒张率,检测各组大鼠血清中氧自由基(ROS)、一氧化氮(NO)水平和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px)及总一氧化氮合酶(tNOS)活性。正常大鼠处死并迅速分离胸主动脉,分为正常葡萄糖对照组(11 mmol·L^-1 葡萄糖),高浓度葡萄糖损伤(HG)组(44 mmol·L^-1 葡萄糖),低剂量RBFL(0.2 mg·L^-1)、中剂量RBFL(0.4 mg·L^-1)和高剂量RBFL(0.8 mg·L^-1)处理组,HG+亚硝基左旋精氨酸甲酯(L-NAME)组,HG+L-NAME+RBFL组,HG+亚甲蓝(MB)组,HG+MB+RBFL组(n=6)。检测不同浓度Ach 和SNP诱导的各组大鼠胸主动脉血管舒张率,检测正常葡萄糖对照组、HG和RBFL处理组大鼠胸主动脉组织中SOD和NOS活性。 结果: 与正常对照组比较,模型组大鼠体质量下降,血糖升高(P<0.01);与模型组比较,RBFL干预组大鼠体质量升高,血糖降低(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组比较,模型组大鼠胸主动脉Ach诱导的血管舒张率降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,RBFL干预组Ach诱导的血管舒张率均升高(P<0.05或P<0.01),且该作用可被L-NAME和MB所取消;各组大鼠SNP诱导的血管舒张率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠血清ROS水平升高(P<0.01),NO水平及SOD和NOS活性降低(P<0.01);与模型组比较, 高剂量RBFL干预组大鼠血清ROS水平降低(P<0.01), NO水平及SOD和NOS活性升高(P<0.01)。各组大鼠血清GSH-Px活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常葡萄糖对照组比较,HG组大鼠Ach诱导的胸主动脉血管舒张率降低(P<0.01);与HG组比较,不同剂量RBFL(0.2、0.4和0.8 mg·L^-1)处理组大鼠Ach诱导的血管舒张率均升高(P<0.05或P<0.01),且该作用可被L-NAME和MB所取消;各组大鼠SNP诱导的血管舒张率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常葡萄糖对照组比较,HG组大鼠血管组织中SOD和tNOS活性下降(P<0.01);与HG组比较,高剂量RBFL 处理组大鼠血管组织中SOD和tNOS活性升高(P<0.01)。 结论: RBFL慢性整体给药和急性处理可以有效改善小鼠高糖刺激血管内皮依赖性舒张功能,其保护作用与增强血管SOD活性、减少ROS过量生成及促进血管内皮细胞合成NO有关。     

低分子壳聚糖对缺氧/复氧大鼠心肌细胞中ClC-3表达的影响

目的: 研究低分子壳聚糖(LMCTS)对缺氧/复氧(H/R)损伤大鼠心肌细胞中氯离子通道3(ClC-3)表达的影响,探讨LMCTS对大鼠心肌细胞H/R损伤的保护作用及其与ClC-3通道的关系。方法: 原代培养的大鼠心肌细胞分为空白对照组,模型组和200、400及600mg·L^-1LMCTS组。除空白对照组细胞不做任何处理、正常培养外,其余各组细胞均进行低压缺氧处理1h,之后在37℃条件下复氧24h,构建心肌细胞H/R损伤模型,其中模型组不加药物,正常培养;而不同浓度LMCTS组细胞在构建模型前分别给予200、400和600mg·L^-1LMCTS。采用RT-PCR法检测大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA的表达水平;Western blotting法和免疫荧光法检测大鼠心肌细胞中ClC-3蛋白的相对表达水平。结果: RT-PCR法和Western blotting法检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.01);与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05),其中以600mg·L^-1LMCTS组心肌细胞中ClC-3mRNA和蛋白表达水平最低。免疫荧光检测,与空白对照组比较,模型组大鼠心肌细胞荧光强度明显增强;与模型组比较,不同浓度LMCTS组大鼠心肌细胞荧光强度明显降低。结论: 大鼠心肌细胞中ClC-3表达水平与心肌细胞H/R损伤有关联,LMCTS可降低ClC-3表达水平,其可能通过降低ClC-3表达水平对大鼠心肌细胞H/R损伤发挥保护作用。     

北五味子总木脂素对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及其抑制NF-κB/iNOS/NO信号通路的机制

目的:观察北五味子总木脂素(SCL)对H₂O₂诱导的PC12细胞氧化应激损伤的保护作用及对NF-κB/iNOS/NO信号通路的影响,并探讨其机制。方法:将处于对数生长期PC12细胞分为对照组、模型组(H₂O₂ 200 μmol·L^-1)、SCL高剂量组(SCL 30 mg·L^-1+H₂O₂ 200 μmol·L^-1,SCL₁组)和SCL低剂量组(SCL 10 mg·L^-1+ H₂O₂ 200 μmol·L^-1,SCL₂组)。对照组PC12细胞不做任何处理;模型组PC12细胞用200 μmol·L^-1H₂O₂孵育6 h造成细胞氧化应激损伤模型;SCL₁和SCL₂组分别采用不同剂量SCL预处理PC12细胞2 h后再用H₂O₂(200 μmol·L^-1)继续孵育6 h。MTT法检测各组细胞存活率,酶标仪检测培养基上清中乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)水平,流式细胞术检测活性氧(ROS)水平,免疫组织化学和Western blotting法检测PC12细胞中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和核转录因子(NF-κB) P65蛋白的表达情况。结果:与对照组比较,模型组PC12细胞存活率明显降低(P<0.01),细胞上清液中LDH活性升高(P<0.01),SOD活性降低(P<0.01),MDA和NO水平升高(P<0.01),细胞中ROS水平升高(P<0.01),NF-κB阳性细胞数显著增加(P<0.01),iNOS和NF-κB P65蛋白表达水平均升高 (P<0.01);与模型组比较,SCL₁和SCL₂组细胞存活率明显升高(P<0.05或P<0.01),细胞上清中LDH活性降低(P<0.05或P<0.01),SOD活性升高(P<0.01),MDA和NO水平降低(P<0.05或P<0.01),细胞中ROS水平降低(P<0.01),NF-κB阳性细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01),iNOS和NF-κB P65蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论:SCL对氧化应激损伤的PC12细胞具有一定的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB/iNOS/NO信号通路、减少氧自由基的产生和减轻脂质过氧化损伤有关联。     

黄芪中新型FLT3受体相互作用凝集素的生物学活性分析

目的: 从黄芪中提取、纯化Fms样酪氨酸激酶3(FLT3)受体相互作用凝集素(FRIL),分析鉴定其生物学活性。方法: 采用亲和层析方法纯化黄芪水浸粗提物,用BCA蛋白测定法测定FRIL含量,糖抑制红细胞凝集实验鉴定FRIL与糖结合的生化特性;培养Raji细胞,分为对照组和20及40 mg·L^-1FRIL组;培养FLT3受体高表达细胞株HL-60细胞,分别设置对照组和2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 mg·L^-1 FRIL组;流式细胞术和MTT法分别检测FRIL对Raji细胞和HL-60细胞的增殖作用。结果: 从黄芪中分离得到含有4个亚基的凝集素FRIL达到27 mg;FRIL主要与α-D-甘露糖有很高的亲和性,证实FRIL能与糖专一性结合具有凝集素活性;40 mg·L^-1FRIL组Raji 细胞凋亡率明显低于20 mg·L^-1FRIL组(P<0.01);与对照组比较, 5.0~40.0 mg·L^-1FRIL组HL-60细胞体外增殖活性增加(P<0.05)。结论: 成功从黄芪中分离得到具有凝集素活性的FRIL蛋白,对表达FLT3受体的细胞具有刺激增殖作用。     

桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖和凋亡的影响

目的: 研究桦木醇对人结肠癌SW480细胞增殖及凋亡的影响,并探讨其相关作用机制。方法: 培养结肠癌SW480细胞,传代后用于实验。SW480细胞分为对照组和不同剂量桦木醇(1、5、10、20、50和100 mg·L^-1)组,MTT法测定各组细胞的增殖抑制率;以不加桦木醇的SW480细胞为对照组,DAPI染色观察15 mg·L^-1桦木醇作用SW480细胞6、12和24h后的形态学变化;流式细胞术分析Sub-G₁细胞百分比即细胞凋亡率,体外caspase活力测定法检测凋亡相关蛋白caspase-3、caspase-8和caspase-9的激活情况,Western blotting法检测各组细胞caspase-3底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)断裂和凋亡蛋Bcl-2、Bcl-xL和cytochrome C的表达情况。结果: MTT法检测,与对照组比较,随着桦木醇剂量(1、5、10、20、50和100 mg·L^-1)增加SW480细胞的增殖抑制率逐渐增加(P<0.05或P<0.01),其增殖抑制率呈剂量效应关系,半数抑制浓度(IC₅₀)为12.875 mg·L^-1。DAPI染色,与对照组比较,15 mg·L^-1桦木醇组正常细胞数量减少,在12和24 h时呈现出典型的细胞凋亡特征(膜气泡,核固缩、变形及染色质浓缩等)。流式细胞术检测,与对照组比较,随着作用时间的延长,15 mg·L^-1桦木醇组SW480细胞中处于Sub-G₁期的细胞逐渐增多,即细胞凋亡率逐渐增加。caspase活力测定,与对照组比较,caspase-3和 caspase-9活性明显增加(P<0.05或P<0.01)。免疫印迹检测,与对照组比较,15 mg·L^-1桦木醇组SW480细胞中PARP出现断裂,凋亡蛋白Bcl-xL表达下调,cytochrome C表达上调,而Bcl-2蛋白表达无明显变化。结论: 桦木醇可抑制结肠癌SW480细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能是通过下调Bcl-xL表达启动线粒体介导的cytochrome C释放进而激活caspase-9凋亡途径实现。