老鹳草素对去势抵抗性前列腺癌细胞增殖与迁移能力的影响

目的探讨老鹳草素对去势抵抗性前列腺癌细胞增殖与迁移能力的影响及机制。方法培养人前列腺癌DU145细胞株,分别用浓度为0、30、60、100μmol/L的老鹳草素培养液作用于DU145细胞。MTS法检测老鹳草素对DU145细胞增殖的影响;划痕实验和Transwell检测细胞的迁移能力;Western-blot检测细胞增殖及迁移相关蛋白的表达水平。结果 MTS显示老鹳草素呈浓度依赖性抑制DU145细胞增殖(P <0.05);划痕实验和Transwell显示老鹳草素能够显著抑制DU145细胞的迁移能力(P <0.05);经老鹳草素干预后,c-Myc蛋白表达水平较对照组显著降低,E-cadherin蛋白表达水平较对照组显著增加。结论老鹳草素可显著抑制去势抵抗性前列腺癌细胞DU145的增殖和迁移能力。     

TRPM8抑制剂BCTC对前列腺癌DU145细胞的抑癌作用

目的:探讨TRPM8抑制剂BCTC对前列腺癌DU145细胞的抑癌作用。方法:PCR和Western blot检测TRPM8的表达;MTT法检测DU145细胞增殖能力;划痕实验、transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测周期相关蛋白(p-AKT,p-GSK-3β,cyclin B1,cyclin D1,CDK2/4/6)、凋亡相关蛋白(Bcl-2,Bax,caspase-3)、迁移相关蛋白(pFAK,MMP2)表达水平的变化。结果:PCR和Western blot提示TRPM8在前列腺癌DU145细胞中表达显著高于正常前列腺上皮PNT1A细胞;BCTC处理后,DU145细胞增殖能力下降(P<0.05),细胞周期表现为G0/G1阻滞期(P<0.05),迁移、侵袭能力也明显下降(P<0.05),但凋亡相关实验显示BCTC并不引起细胞凋亡(P>0.05)。Western blot显示BCTC能下调p-AKT,cyclin D1,CDK2,CDK6,MMP2和pFAK等的表达,而上调p-GSK-3β的表达。结论:TRPM8抑制剂BCTC能抑制前列腺癌DU145细胞增殖、迁移和侵袭能力,是一个极具潜力的抗前列腺癌药物。     

白花蛇舌草对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察白花蛇舌草提取物对人前列腺癌DU145细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:不同浓度(0.25 g·L-1、0.5 g·L-1、1 g·L-1)白花蛇舌草提取物作用人前列腺癌DU145细胞24 h、48 h、72 h后,使用CCK-8法检测白花蛇舌草提取物对DU145细胞增殖的影响;流式细胞术检测细胞凋亡的改变;实时定量PCR检测COX-2 m RNA和PCNA m RNA的表达;Western bloting法检测Bcl-2、Bax、Caspase3、Cyclin D1蛋白表达。结果:随着作用时间的延长和剂量的增加,白花蛇舌草提取物对DU145细胞增殖抑制率明显提高,呈时效和量效依赖效应。白花蛇舌草提取物作用48 h后,可明显提高细胞凋亡率,下调DU145细胞COX-2 m RNA、PCNA m RNA及Bcl-2、Cyclin D1蛋白表达,上调Bax、Caspase3蛋白表达,呈量效依赖效应。结论:白花蛇舌草提取物能降低人前列腺癌DU145细胞增殖能力,并诱导其凋亡,其机制可能与改变细胞周期和影响凋亡相关基因表达有关。     

BEZ235对体外前列腺癌细胞的抑制作用

目的：探讨PI3K/mTOR双重靶向抑制剂BEZ235对人前列腺癌细胞株的增殖、迁移能力的影响。方法： 采用MTT实验分析BEZ235对正常前列腺上皮细胞RWPE-1和前列腺癌细胞PC3及DU145增殖能力的影响;划痕试验检 测BEZ235对RWPE-1,PC3及DU145细胞迁移的影响;Western印迹及免疫荧光染色方法检测BEZ235对上皮-间质转化 (epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物蛋白表达的影响。结果：BEZ235对PC3和DU145细胞的增殖具有明 显的抑制作用(P<0.01),而对RWPE-1作用不明显;BEZ235明显上调PC3和DU145细胞标志物E-cadherin的表达,下调间 质标志物Vimentin的表达(P<0.01)。结论：BEZ235可体外抑制PC3和DU145细胞增殖和迁移,其部分机制可能是通过 抑制EMT途径而实现。     

Bloom解旋酶基因RNA干扰载体对前列腺癌PC3细胞的抑制作用

目的 采用RNA干扰(RNAi)技术抑制前列腺癌PC3细胞系中Bloom解旋酶基因的表达,探讨Bloom解旋酶基因表达下调后对PC3细胞的抑制作用.方法 使用实验室前期成功构建的两条针对于Bloom解旋酶基因的RNAi载体shRNA-1和shRNA-2转染前列腺癌PC3细胞,以未转染RNAi载体为对照组,分别在转染24、48、72h后通过MTT法检测细胞增殖情况,转染48 h后通过Transwell小室法检验细胞侵袭、迁移能力,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Hoechst/PI双染法检测细胞凋亡情况.结果 转染RNAi载体后,与未转染对照组相比,各实验时间点的转染组细胞增殖率降低(P＜0.05),Transwell细胞侵袭和迁移实验中穿过室膜的细胞数与对照组比均减少(侵袭:119±24、118±30 vs 227±38;迁移:122±13、121±47 vs 277±32,P＜0.05),划痕愈合率与划痕迁移距离均降低,48 h时差异有统计学意义(P＜0.05),而且细胞凋亡明显增加.结论 以RNAi载体干扰Bloom解旋酶基因的表达可抑制前列腺癌PC3细胞的增殖、迁移和侵袭能力并促进其凋亡,为前列腺癌的靶向基因治疗提供了依据.     

前列腺癌细胞系中STAT3活性与顺铂敏感性之间的关系

目的 研究前列腺癌细胞系中STAT3活性与顺铂敏感性之间的关系.方法 通过免疫细胞化学和蛋白质印迹法(Western blotting)检测3种常见前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、DU145基础STAT3的活性;选取激素非依赖性细胞系PC3、DU145,分别加入2 ng/ml、20 ng/ml、200 ng/ml、2μg/ml、20 μg/ml顺铂检测细胞增殖抑制情况,蛋白质印迹法检测低浓度顺铂作用DU145后STAT3的活性变化.结果 激素非依赖性前列腺癌细胞系PC3、DU145中STAT3的活性较激素依赖性细胞系LNCaP中的高,且STAT3活性较低的PC3细胞较DU145细胞对顺铂更敏感,低浓度顺铂长时间作用DU145后可引起STAT3活性上调.结论 STAT3可能参与调节前列腺癌细胞对顺铂的敏感性.     

青藤碱对人前列腺癌DU145细胞增殖、凋亡的影响

目的 研究天然化合物青藤碱对人前列腺癌DU145细胞增殖及凋亡的影响.方法 采用MTT法检测青藤碱对DU145细胞增殖的影响;采用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测青藤碱对DU145细胞凋亡的影响;采用电子显微镜观察青藤碱作用DU145细胞后细胞超微结构的变化.结果 MTT结果显示青藤碱浓度在100～400 μmol/L时,作用24、48小时后,细胞增殖受到抑制,呈现明显时间剂量效应关系;流式细胞仪AnnexinV/PI双染法显示青藤碱(0、200、400 μmol/L)作用于细胞24小时后,细胞凋亡率升高,且呈剂量效应关系;电子显微镜下青藤碱处理组细胞可见染色质浓聚、边集等典型的凋亡改变,而空白对照组没有相应的变化.结论 青藤碱能有效抑制人前列腺癌DU145细胞增殖、诱导细胞凋亡.     

20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的:研究20(S)-原人参二醇对人前列腺癌细胞凋亡的影响。方法:采用台盼蓝染色、噻唑蓝(MTT)法、Hochest33258染色和DNA Ladder方法分别测定20(S)-原人参二醇对DU145和PC3细胞凋亡诱导作用。结果:20(S)-原人参二醇可明显降低DU145和PC3细胞存活率和细胞活性,IC50分别为38.0μmol/L和28.6μmol/L。20(S)-原人参二醇处理后DU145和PC3细胞核出现典型的凋亡形态学改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNA Ladder条带。结论:20(S)-原人参二醇可有效诱导人前列腺癌DU145和PC3细胞的凋亡并有剂量依赖关系。     

甲基化硒酸对人前列腺癌DU145细胞增殖与凋亡的影响

目的：观察甲基化硒酸（MSA）对DU145前列腺癌细胞增殖及凋亡的影响，并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法观察1.25、2.50和5.00 μmol•L^-1MSA对DU145细胞增殖活力的抑制作用；吖啶橙染色观察MSA诱导细胞凋亡情况；流式细胞术分析细胞周期及凋亡，并计算细胞平均凋亡指数；免疫细胞化学技术观察细胞内激活的caspase-3的表达情况。结果：经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理48　h后，DU145细胞生长抑制率分别为16.35%、38.10%和73.54%，3组间比较差异有显著性（P<0.01），随MSA浓度升高细胞生长抑制率增加，呈明显的剂量依赖性。吖啶橙荧光染色可见，经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理后的细胞呈明显凋亡形态，并随药物剂量增加凋亡细胞数增多；流式细胞术结果显示，经1.25、2.50和5.00　 μmol•L^-1MSA处理48 h后，细胞凋亡率分别为5.34%、8.71%和13.60%，3组间比较差异有显著性（P<0.05）,随MSA浓度升高细胞凋亡率升高，呈剂量依赖关系；免疫细胞化学染色结果显示，随着MSA剂量增加，细胞内激活的caspase-3表达上调。结论:MSA对DU145细胞具有明显的抗肿瘤作用，其机制可能与激活的caspase途径诱导细胞凋亡有关。     

冬凌草甲素通过抑制Akt通路诱导人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145细胞凋亡

目的:观察冬凌草甲素对人雄激素非依赖性前列腺癌细胞DU145细胞增殖、凋亡的影响,并分析可能的作用机制。方法:体外培养的DU145细胞,用不同浓度冬凌草甲素(浓度0、10、20、40、80、100μmol/L)处理24、48、72 h,MTT法测定其对DU145细胞增殖的影响;冬凌草甲素(浓度分别为0、20、40、80μmol/L)处理DU145细胞48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot法检测Akt、p-Akt、p-GSK-3β、Bax及Bcl-2蛋白的表达情况。结果:冬凌草甲素对DU145细胞的增殖具有抑制作用,且呈剂量、时间依赖性;DU145细胞经冬凌草甲素作用48 h后,细胞凋亡率显著增加;Bax表达上调,而Bcl-2表达下调;p-Akt及其下游蛋白p-GSK-3β的表达降低。结论:冬凌草甲素可通过抑制DU145细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Akt信号通路激活,继而上调Bax并下调Bcl-2有关。     

SOX10对前列腺癌细胞增殖及侵袭的影响

目的：探讨SOX10对前列腺癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法：利用Western blotting方法检测SOX10蛋白在前列腺癌细胞系PC3、DU145及LNcap中的表达水平。利用si-RNA干扰的方法下调前列腺癌细胞系PC3及DU145中SOX10的表达,通过细胞增殖及侵袭实验评估SOX10对前列腺癌细胞增殖能力和侵袭能力的影响。结果：下调SOX10后,前列腺癌细胞的增殖能力明显降低,表现为实验组中前列腺癌细胞PC3及DU145的光密度值明显低于对照组（细胞系PC3: 0 d: 0.166±0.01, 0.162±0.012 vs. 0.155 ±0.01, P>0.05; 1 d: 0.210±0.011, 0.211±0.018 vs. 0.252±0.023, P>0.05; 2 d: 0.293±0.017, 0.280±0.028 vs. 0.433±0.030, P<0.01; 3 d: 0.363±0.071, 0.411±0.038 vs. 0.754±0.045, P<0.01; 4 d: 0.592±0.065, 0.670±0.093 vs. 1.456±0.111, P<0.01。细胞系DU145: 0 d: 0.168±0.018, 0.164±0.01 vs. 0.153 ±0.012, P>0.05; 1 d: 0.218±0.007, 0.206±0.024 vs. 0.255±0.02, P>0.05; 2 d: 0.297±0.013, 0.291±0.012 vs. 0.444±0.023, P<0.05; 3 d: 0.378±0.058, 0.419±0.026 vs. 0.762±0.039, P<0.01; 4 d: 0.681±0.094, 0.618±0.050 vs.1.419±0.170, P<0.01）;同时,下调SOX10后前列腺癌细胞的侵袭能力也明显受到抑制,与对照组相比,实验组迁出的细胞数明显减少(细胞系PC3: 142±38, 171±17 vs. 304±55; 细胞系DU145：96±22, 134±23 vs. 341±34), 差异均具有统计学意义（P均<0.05）。结论：SOX10可能通过促进前列腺癌细胞的增殖和侵袭能力促进前列腺癌的发生及进展,并且可能成为前列腺癌潜在的治疗靶点。     

微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸对前列腺癌细胞生长的影响

摘要 目的 研究微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸对前列腺癌生长的影响。方法 利用PWR1E,RWPE1和DU145细胞株,通过蛋白质印迹分析、siRNA实验和MTT实验,检测微管蛋白酪氨酸连接酶类似物12和硝基化酪氨酸微管蛋白的含量,并观察细胞的生长情况。结果 在硝基化酪氨酸的作用下,DU145细胞的硝基化酪氨酸微管蛋白含量低于PWR1E和RWPE1细胞（P＜0.05）;和对照组相比,PWR1E和RWPE1实验组细胞生长受到抑制（P＜0.05）,而DU145细胞生长无明显改变（P＞0.05）;在有效沉默TTLL12后,实验组的硝基化酪氨酸微管蛋白含量高于对照组（P＜0.05）;实验组在硝基化酪氨酸作用下,细胞生长受到抑制,与对照组相比,差异有统计学意义（P＜0.05）,而对照组内两组细胞生长改变较小,差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 TTLL12可使前列腺癌细胞逃避硝基化酪氨酸的打击,从而使前列腺癌细胞逃脱机体监控作用,获得异常增殖机会,而对这一调控机制的进一步研究,将有助于控制肿瘤细胞的生长。     

三氧化二砷对前列腺癌DU-145细胞RASSF1A基因的去甲基化作用

目的研究三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对激素非依赖性前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对RASSF1A基因去甲基化和蛋白表达的影响。方法应用MTT法检测不同浓度(0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、12.0、20.0μmol/L)的As2O3不同作用时间(24、48、72 h)对DU145细胞的生长抑制作用;应用甲基化特异性PCR(MSP)和West-ern blot检测As2O3对DU145细胞RASSF1A基因甲基化状态及蛋白表达的影响。结果 As2 O3可抑制DU145细胞的增殖,在一定范围内随着药物浓度的增高,抑制作用逐渐增强(F=838.089,P<0.05);同一浓度作用时间越长,抑制率越高(F=8.849,P<0.05);且As2O3可使RASSF1A基因甲基化逆转,蛋白重新表达。结论 As2O3可以逆转前列腺癌DU145细胞RASSF1A基因启动子CpG岛的异常甲基化,诱导该抑癌基因的重新表达,抑制前列腺癌DU145细胞的增殖。     

PKCzeta在前列腺癌组织中的表达及其对前列腺癌细胞增殖的影响

目的 检测PKCzeta在不同分级前列腺癌(PCa)组织的表达情况,并探究PKCzeta的表达对前列腺癌细胞系增殖的影响.方法 采用免疫组织化学染色法检测19例前列腺癌组织和4例正常前列腺组织的PKC-zeta表达情况,并按肿瘤分级分为3组,进行PKCzeta表达的差异性分析;应用Hilymax试剂转染PKCzeta质粒(CA-PKCzeta)过表达前列腺癌细胞PKCzeta;通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot分别检测PC3和DU145细胞内PKCzeta的mRNA和蛋白水平;利用平板克隆形成试验和CCK-8试剂盒检测PC3和DU145细胞增殖能力的差异以及转染PKCzeta质粒后细胞增殖的变化.结果 PKCzeta在前列腺癌组织中的表达高于正常前列腺组织(P＜0.05),而且低分级(1级)前列腺癌PKCzeta的表达高于高分级(2～3级)前列腺癌(P＜0.05).DU145细胞的PKCzeta表达高于PC3细胞,而其增殖速度较PC3细胞低;过表达PKCzeta使前列腺癌细胞系的增殖受抑.结论PKCzeta与肿瘤分级存在负相关关系,在癌症早期可能有一定的保护作用,且过表达PKCzeta能抑制前列腺癌细胞的增殖.     

前列腺癌细胞系中STAT3活性与顺铂敏感性之间的关系

[摘要] 目的 研究前列腺癌细胞系中STAT3活性与顺铂敏感性之间的关系。方法 通过免疫细胞化学和Western Blot检测三种常见前列腺癌细胞系LNCaP、PC3、DU145基础STAT3的活性,选取激素非依赖性细胞系PC3、DU145分别加入不同浓度顺铂检测细胞增殖抑制情况,蛋白印迹法检测低浓度顺铂作用DU145后STAT3的活性变化。结果STAT3活性在激素非依赖性前列腺癌细胞系PC3、DU145中较激素依赖性细胞系LNCaP高,且STAT3活性较低的PC3较DU145对顺铂更敏感,低浓度长时间作用DU145后可引起STAT3活性上调。结论 STAT3可能参与调节前列腺癌细胞对顺铂的敏感性。     

过表达miR-140-5p促进前列腺癌细胞凋亡抑制其增殖

［摘要］ 目的研究miR-140-5p在前列腺癌细胞中的表达情况,探讨 miR-140-5p在前列腺癌细胞中的生物学功能。 方法RT-qPCR方法检测前列腺癌细胞株PC3细胞及DU145细胞中miR-140-5p表达;PC3细胞中转染miR-140-5p模拟物或抑制物,CCK-8及AnnexinV/PI双染流式细胞学检测细胞活力及细胞凋亡。TCGA数据库分析高表达miR-140-5p与前列腺癌患者总生存率的关系。 结果miR-140-5p在DU145及PC3细胞中的表达明显低于RWPE-1细胞,miR-140-5p在PC3细胞中的表达明显低于DU145细胞（P＜0.05）。转染miR-140-5p模拟物的 PC3细胞中miR-140-5p相对表达量明显高于阴性对照组（P＜0.05）。miR-140-5p的模拟物转染PC3细胞48 h,过表达组细胞增殖率低于阴性对照组,凋亡率高于阴性对照组（P＜0.05）。转染miR-140-5p抑制物的PC3细胞中miR-140-5p相对表达量明显低于阴性对照组（P＜0.05）。敲低miR-140-5p表达组细胞增殖率明显高于阴性对照组,凋亡率明显低于阴性对照组（P＜0.05）。低表达miR-140-5p组患者总生存率低于高表达miR-140-5p组患者（P＜0.05）。 结论miR-140-5p在前列腺癌细胞株低表达,低表达miR-140-5p前列腺癌患者预后不良;过表达miR-140-5p可促进前列腺癌细胞凋亡,抑制其增殖。     

Polo-like激酶1在人类3种前列腺癌细胞株中的表达

目的检测Polo-like激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)在人类3种前列腺癌细胞株中的表达。方法采用RT-PCR和Western Blot方法检测人类前列腺癌细胞株LNCaP,DU145和PC3中PLK1 mRNA和蛋白的表达。结果在LNCaP,DU145和PC3中PLK1 mRNA均呈高表达,其PLK1/-actin比值分别为1.34,1.31,1.37;PLK1蛋白的表达水平有差异,Western Blot结果显示PLK1/-actin比值分别为1.17,0.83,0.76。结论mRNA水平上,PLK1在3种前列腺癌细胞中均呈高表达;蛋白水平上,PLK1的表达在不同前列腺癌细胞中存在差异。