腺苷对人肺腺癌细胞A549增殖和细胞周期的影响

目的：探讨腺苷对人肺腺癌细胞株A549增殖和细胞周期的影响。方法：体外培养肺腺癌细胞株A549,采用RT-PCR方法检测腺苷受体mRNA在A549细胞中的表达情况。以0、1、10、100和1 000μmol/L的腺苷分别作用A549细胞24、48和72 h后,采用MTT方法检测细胞光密度值,分析不同时间、不同浓度的腺苷对A549细胞存活率的影响。以100μmol/L的腺苷作用A549细胞24 h,采用流式细胞术检测其细胞周期。对上述所得数据进行单因素方差分析和独立样本t检验。结果：四种腺苷受体A1、A2A、A2B和A3在A549细胞中均有表达。MTT结果显示,作用时间24 h,各腺苷处理组（1、10、100和1 000μmol/L）细胞存活率分别为91%、84%、80%、73%;作用时间48 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为82%、69%、58%、55%;作用时间72 h,各腺苷处理组细胞存活率分别为86%、56%、52%、38%,表明腺苷对A549细胞具有生长抑制效应,抑制率随着腺苷浓度升高而增强。与对照组相比,100μmol/L腺苷作用于A549细胞24 h后,能增加G1期细胞比例（对照组：59.07±0.70;100μmol/L：65.05±0.62,t=-11.04,P〈0.01）,并减少G2期细胞比例（对照组：6.67±0.95;100μmol/L：1.29±0.43,t=8.89,P〈0.01）。结论：腺苷能够抑制人肺腺癌细胞A549的生长,并改变其细胞周期分布。     

低氧对人肺腺癌细胞株A549细胞周期及HIF-1α、p27表达的影响

目的 探讨低氧诱导入肺腺癌细胞株A519发生G0/G1期细胞周期阻滞的分子机制。方法 将培养的细胞分为对照组、低氧21h组低氧48h组。流式细胞仪检测细胞周期分布及p27蛋白表达，免疫细胞化学与原位杂交技术检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α ）蛋白表达及p27mRNA转录水平。结果①低氧21h组与18h组G0/G1期细胞比例显著高于对照组（P＜0．05）；②HIF-1α蛋白在对照组有少量表达，随着低氧时间的延长，其表达增加（P＜0.01）；p27mRNA转录水平及p27蛋白表达均随低氧时间的延长而增高（均P＜0.01）;③低氧组HIF-1α表达与p27蛋白表达存在显著相关（r=0.958,P＜0.01）；低氧组p27蛋白表达与G0/G1期阻滞呈现著正相关（r=0.867,P＜0.01）；低氧组HIF-1α表达与p27mRNA转录呈显著相关（r=0.695,P＜0.01）。结论 低氧能使人肺腺癌细胞株A549发生G0/G1期阻滞，HIF-1α对p27转录和表达的调控在其中可能起重要作用。     

胰岛素对人肺腺癌细胞株A549影响的体外研究

目的：探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平及其机制。方法：采用MTT比色法,分析胰岛素对肺腺癌A549细胞代谢的影响,用流式细胞仪作细胞周期分析,用Western Blot印迹方法检测细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果：胰岛素（2.0～32.0mU/mL）可促进人肺腺癌细胞A549的增殖（P〈0.05）,细胞周期结果显示胰岛素（8mU/mL）可使S期细胞增多。Western Blot印迹方法检测结果显示胰岛素（8mU/mL）后CyclinD1的表达明显增强,CyclinA的表达变化不明显。结论：胰岛素能促进人肺腺癌细胞株A549增殖,并且其增殖作用是可逆的。胰岛素主要作用于人肺腺癌细胞株A549细胞的S期。CyclinD1的表达增强在胰岛素促增殖机制中起着重要作用。     

重铬酸钾对人肺腺癌A549细胞hMGMT蛋白表达的影响

目的:研究不同浓度重铬酸钾(K2Cr2O7)对人肺腺癌A549细胞的增殖抑制效应以及对O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(hMGMT)蛋白表达的影响.方法:用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定9种不同浓度K2Cr2O7,(0.000、0.010、0.040、0.160、0.312、0.625、1.250、2.500、5.000.μmol/L)对A549细胞的增殖抑制率;用损伤修复试验观察在不同浓度K2Cr2O7,作用下人肺腺癌A549细胞的划痕修复情况;以β-actin为参照,应用Western blotting技术检测不同浓度K2Cr2O7,对人肺腺癌A549细胞hMGMT表达的影响.结果:MTT比色法检测显示,大于0.625μmol/L浓度组K2Cr2O7,可抑制细胞活性,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).损伤修复试验显示,与空白对照组比较,0.625、1.250.2.500和5.000 μmoL/L的K2Cr2O7,抑制细胞损伤修复,而0.312、0.160、0.040μzmoL/L的K2Cr2O7促进细胞损伤修复.Western blotting显示,0.312、0.160、0.040 μmoL/L的K2Cr2O7对hMGMT蛋白的表达具有促进作用,0.625、1.250、2.500和5.000 μmoL/L的K2Cr2O7,对hMGMT蛋白的表达具有抑制作用.结论:低浓度的K2Cr2O7,对人肺腺癌A549细胞的增殖、损伤修复和hMGMT蛋白的表达呈现低剂量兴奋效应;高浓度K2Cr2O7,对hMGMT蛋白的表达则呈现抑制作用.     

肺腺癌A549细胞中Nestin的表达

目的探讨nestin在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,用免疫组化检测肺癌标记物及nestin表达.结果四个肺癌标记物中鼠抗人p63蛋白,鼠抗人细胞角蛋白7,鼠抗人甲状腺转录因子染色阳性,nestin在肺腺癌A549细胞中部分细胞表达.结论肺癌细胞中存在部分神经干细胞的标记物nestin.     

昆明山海棠总生物碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变

目的 为探讨昆明山海棠总生物碱(alkaloidsfrom Tripterygium Hypoglaucum Hutch,THHa)抗肺癌机制,研究THHa诱导肺腺癌A549细胞凋亡与细胞周期改变的关系.方法 应用形态学观察、DNA凝胶电泳、流式细胞仪检测分析肺腺癌A549细胞凋亡及细胞周期改变.结果 THHa能够诱导肺腺癌A549细胞凋亡并主要作用于细胞周期S期(S期细胞增多).结论 THHa可能通过诱导细胞凋亡而抑制A549细胞增殖,这种作用与细胞周期有关,这些有助于将来肺癌治疗方案的合理设计.     

干扰素α对人肺腺癌细胞系A549增殖抑制和诱导分化作用

目的：探讨干扰素α（ＩＦＮ－α）对人肺腺癌细胞的增殖抑制和诱导分化作用。方法：用不同质量浓度ＩＦＮ－α（２５μｇ／Ｌ,７５μｇ／Ｌ,１００μｇ／Ｌ）处理人肺腺癌Ａ５４９细胞,记录细胞数目,进行甲基绿－派洛宁染色,测定软琼脂集落形成率。结果：ＩＦＮ－α能明显抑制Ａ５４９细胞的增殖,药物组与对照组之间差异有显著性（Ｐ〈０．０５）,药物组与对照组比较增殖型细胞减少,分化型细胞数增加,双层软琼脂中细胞集落     

人肺腺癌细胞A549放射治疗前后Dystrobrevin蛋白表达的变化

目的射线诱导肺腺癌A549细胞凋亡,于凋亡高峰时检测放疗前后dystrobrevin的表达,探讨其与放射剂量及凋亡的关系。方法人肺腺癌A549细胞株培养24 h后用10 Gy X线照射,分别培养6 h、14 h、23 h、40 h,应用Hoechest33258荧光染色在荧光显微镜下观察细胞形态变化——细胞的凋亡,并计算凋亡率。采用Western blot检测0 Gy、6 Gy、10Gy照射A549细胞14 h后dystrobrevin蛋白表达水平的变化。结果 10 Gy X射线照射A549细胞株后14 h凋亡率达到高峰。Western blot检测显示,随着放射剂量的增加,α-dystrobrevin有下降的趋势,而ε-dystrobrevin有升高的趋势。结论人肺腺癌A549细胞株在能量为6-MV,剂量率为300 cGy/分,接受10 Gy X线照射后14 h出现明显的凋亡;并且在此时间点上随着放射剂量的增加α-dystrobrevin和ε-dystrobrevin变化趋势不同。     

盐酸埃克替尼对肺癌A549细胞PI3K/AKT、HIF-1α信号通路的影响

目的 探讨盐酸埃克替尼对肺腺癌A549细胞PI3K/AKT、HIF1α信号通路的影响。 方法 采用细胞计数法分析在不同浓度盐酸埃克替尼下肺腺癌A549细胞生长情况,MTT法测定不同浓度盐酸埃克替尼对肺腺癌A549细胞抑制率。采用显微镜下直接观察不同浓度盐酸埃克替尼下肺腺癌A549细胞的细胞形态变化情况,采用TUNEL法检测在不同浓度盐酸埃克替尼下肺腺癌A549细胞凋亡率;免疫组化法检测肺腺癌A549细胞PI3K/AKT、HIF1α蛋白表达。 结果 随盐酸埃克替尼浓度增加,肿瘤细胞增加明显减少,细胞形态不规则,50 mg/L剂量组可见大量坏死肿瘤细胞。盐酸埃克替尼抑制肺腺癌A549细胞增殖,在一定时间范围内呈现剂量和时间依赖性,各组与空白对照组相比,差异具有统计学意义(P＜0.01);12.5 mg/L组、25 mg/L组、50 mg/L组、DPP(25 mg/L)组肿瘤细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05);12.5 mg/L组、25 mg/L组、50 mg/L组、DPP(25 mg/L)组肺腺癌A549细胞PI3K、AKT、HIF1α蛋白表达明显低于于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05)。 结论 盐酸埃克替尼对肺腺癌A549细胞增殖具有抑制作用,其作用可能是通过诱导细胞凋亡及抑制PI3K/AKT、HIF-1α信号通路来实现的。      

槲皮素对肺腺癌A549细胞生长的影响

目的 观察槲皮素对肺腺癌A549细胞生长及对hTERT基因表达的影响. 方法以台盼蓝拒染法计数肺腺癌细胞的生长抑制率,透射电镜和DNA Ladder实验了解A549细胞凋亡的发生;PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT mRNA表达.结果 台盼蓝拒染法计数显示槲皮素抑制肺腺癌A549细胞增殖的作用明显,且呈剂量和时间依赖性,槲皮素处理48 h后的IC50为22.5 μmol/L.DNA Ladder实验和透射电镜形态学检测显示出细胞凋亡的特征性变化,细胞呈现核固缩、染色质边集、凋亡小体形成等典型凋亡表现.经槲皮素处理后肺腺癌A549细胞hTERT mRNA表达降低,端粒酶活性受抑制. 结论槲皮素能抑制肺腺癌细胞的生长,呈时间、剂量依赖性,能诱导A549细胞凋亡,其抑制增生与诱导凋亡的机制可能与下调hTERT 基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关.     

曲古抑菌素A下调人肺腺癌细胞A549内IDO表达的分子机制

【目的】研究曲古抑菌素A (-TSA)抑制γ干扰素（IFN-γ）诱导的人A549细胞内吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）表达的分子机制。【方法】 采用蛋白质免疫印迹技术检测TSA在IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达、信号转导及转录激活子1（STAT1）的磷酸化和干扰素调节因子1（IRF-1）的激活等过程中的作用,在激光共聚焦显微镜下观察TSA对STAT1核转位的影响,利用双荧光素酶报告基因系统检测TSA对γ-干扰素激活位点（GAS）、干扰素刺激应答元件（ISRE）和核因子-κB （NF-κB）的激活的影响。【结果】 TSA以浓度依赖方式下调A549细胞中IFN-γ诱导的IDO表达,并能明显抑制STAT1第701位酪氨酸的磷酸化和STAT1的核转位。双荧光素酶报告基因分析和Western blot结果表明：TSA能显著抑制GAS、ISRE和IRF-1 的激活却不能抑制NF-κB的激活。【结论】TSA能下调IFN-γ诱导的A549细胞中IDO的表达,其机制可能是与其抑制STAT1的磷酸化和核转位,以及抑制STAT1与GAS的结合有关。     

肺腺癌A549细胞株细胞活力变化及GDNF表达

目的探讨GDNF在肺腺癌A549细胞株的表达及细胞活力变化.方法体外培养肺腺癌A549细胞株,观察细胞形态变化.取第1代培养后1 d,5 d两个时间点分别计数细胞;MTT检测两时间点细胞活力变化;用免疫组化检测两时间点GDNF免疫阳性细胞数量变化.并进行统计学分析.结果培养5 d组肺腺癌A549细胞株的细胞数量与1 d组相比,明显增加（P〈0.05）;5 d组的细胞活力较1d组明显下降（P〈0.05）;GDNF的表达百分数比较显示;5 d组亦较1 d组明显下降（P〈0.05）.结论体外培养肺腺癌A549细胞株随细胞增殖过程,活力逐渐下降,同时GDNF表达明显下调,提示细胞增殖和细胞活力不一定完全一致,GDNF减少可能与活力减少有关.     

α-干扰素对人肺腺癌A549细胞周期和P53蛋白表达的影响

目的：探讨α－干扰素（ＩＦＮ－α）对人肺腺癌细胞株Ａ５４９细胞周期和Ｐ５３蛋白表达的影响。方法：用２种不 同质量浓度ＩＦＮ－α（２５μｇ／Ｌ,１００ μｇ／Ｌ）处理人肺腺癌Ａ５４９细胞,并设空白为对照。用流式细胞仪测定ＩＦＮ－α对Ａ５４９细 胞细胞周期的影响,用免疫荧光标记法测定Ｐ５３蛋白的表达。结果：ＩＦＮ－α作用后的Ａ５４９细胞,细胞周期明显改变,Ｓ期细 胞数显著降低,且Ｐ５３蛋白表达明显减少。结论： ＩＦＮ－α能阻止Ａ５４９细胞细胞周期的进程,抑制Ｐ５３蛋白的表达。     

透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞表达血管内皮生长因子-C

目的：研究透明质酸（HA）对体外培养的人肺腺癌A549细胞表达血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的影响。方法：体外培养的A549细胞被随机分为三组，对照组：无血清培养基（FSM）培养；HA10ug／ml组和HA20ug／ml组：分别用HA10ug／ml和20ug／ml的FSM培养，48h后，分别用RT-PCR、Westernblot和免疫荧光方法检测A549细胞VEGF-CmRNA和蛋白表达。结果：对照组VEGF-CmRNA和蛋白表达为弱阳性；HA10ug／ml和HA20ug／ml组VEGF-CmRNA和蛋白表达皆呈强阳性。HA20ug／ml组与HA10ug／ml组相比，VEGF-CmRNA和蛋白表达皆显著增加（P〈0．01）。结论：HA能呈剂量依赖性地诱导A549细胞表达VEGF-C。     

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的影响

目的:探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株细胞周期及凋亡的作用。方法:体外培养人肺腺癌A549细胞株,四甲基偶氮唑蓝比色法测定不同浓度榄香烯乳在不同作用时间下对A549细胞株的生长抑制作用。用流式细胞术检测榄香烯乳作用24h后A549细胞株的周期及凋亡变化。结果:榄香烯乳作用后人肺腺癌A549细胞株增殖明显受抑制,呈时间和剂量依赖性。作用24h后G2/M期比例明显升高,S期细胞比例显著下降,凋亡率增加。结论:榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞株有明显的增殖抑制作用,可引起A549细胞G2/M期阻滞及诱导其凋亡。     

RASSF1A基因转染对人肺腺癌细胞株A549增殖的抑制作用

目的：观察外源性RASSF1A基因对人肺腺癌细胞A549增殖及NF- κB亚单位P65表达的影响。方法：利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3.0-RASSF1A质粒和空载体pcDNA3.0质粒分别导入A549细胞，经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆，Western blotting检测RASSF1A基因表达。采用MTT(四甲基偶氮唑盐)法、流式细胞仪分析转染细胞的生物学行为。 RT-PCR和Western blotting检测基因转染对P65表达的影响。结果：经脂质体转染和筛选，建立了稳定表达RASSF1A基因的A549细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较，转染RASSF1A基因的细胞生长速度明显减慢（P<0.05），细胞周期中G1/G0期比例明显增加（P<0.05），而S期比例减少；转染组细胞核内P65蛋白表达明显降低（P<0.05），而全细胞P65蛋白及mRNA表达未见明显变化。结论：RASSF1A基因可能通过抑制P65活性而抑制人肺腺癌细胞A549的生长。     

肺腺癌A549细胞培养上清液对人单核细胞衍生树突状细胞的影响

目的：观察肺腺癌A549细胞培养上清液（TSN）对人单核细胞衍生树突状细胞（MoDC）的表型、增殖和抗肿瘤A549免疫应答的影响。方法：制备人肺腺癌A549细胞的TSN、灭活TSN和冻融抗原；人MoDC培养按照不同培养条件组合分为7组，分别于培养全程或晚期（第7d）加入TSN或第4d加入冻融抗原冲击致敏，制备MoDC瘤苗，第9d收获细胞。检测各组MoDC表型、MoDC凋亡率、体外混合淋巴细胞反应（MLR）、MoDC诱导的细胞毒性T细胞（CTL）抑瘤活性、培养上清液中IL－12含量。结果：培养全程加TSN的MoDC，相对特异性表型CD80、CD83和人类白细胞抗原（HLA－DR）明显下调，凋亡率明显升高，同时，激活T细胞增殖能力、诱导CTL抑瘤活性及分泌IL－12的量均显著低于正常培养组；培养晚期加TSN的MoDC及培养全程加入灭活TSN的MoDC，均无上述影响；脱离TSN影响、体外正常制备的MoDC瘤苗，表型明显上调、各项免疫指标明显升高，诱导出了高效的抗A549免疫应答。结论：TSN能干扰MoDC成熟过程，下调基表型表达，诱导其凋亡发生、抑制其介导的抗肿瘤免疫应答；而脱离TSH影响、体外正常制备的MoDC瘤苗能够诱导出高铲的抗瘤免疫应答。     

电离辐射对人肺腺癌细胞株A549体外表达VEGF的影响

目的探讨电离辐射对人肺腺癌细胞体外表达血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法人肺腺癌细胞株A549，置RPMI 1640培养液培养，分别接受1、2、4、8Gy电离辐射，继续培养细胞，24、48h后收集细胞上清液，双抗体夹心ELISA法测定VEGF。表达水平。结果与阴性处理细胞比较，人肺腺癌细胞株A549体外接受不同剂量辐照后，VEGF表达明显增高，且具有剂量依赖性和时程依赖性。结论电离辐射能诱导肺腺癌细胞VEGF高表达，这可能是临床肿瘤抗辐射的机制之一。     

PEDF对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨不同浓度色素上皮衍生因子( PEDF)作用不同时间对体外培养的人肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法用不同浓度(0、80、160、320、640 nmol/L)的重组人PEDF蛋白对体外培养的人肺腺癌细胞株A549进行干预,在处理24、48、72 h后,分别用MTT法检测PEDF对A549细胞增殖的抑制率并比较;在作用48 h后,以流式细胞仪检测技术计算、分析 A549细胞凋亡率。结果不同浓度PEDF(0、80、160、320、640 nmol/ L)干预A549细胞相同作用时间(24、48、72 h)情况下,随着PEDF 浓度的增加,PEDF 对 A549细胞的增殖抑制率递增(P <0.05);相同PEDF 浓度(80、160、320、640 nmol/ L)情况下,除了80、160 nmol/ L PEDF 作用24 h 和48 h 的细胞增殖抑制率间差异无统计学意义外,随着PEDF 作用时间的延长,PEDF 对A549细胞的增殖抑制率也基本呈递增趋势(P <0.05)。上述不同浓度的PEDF 处理A549细胞48 h,细胞凋亡率随着PEDF 浓度的升高呈递增趋势(P <0.05)。结论摇PEDF 在体外能抑制人肺腺癌细胞株A549的增殖并诱导其凋亡。PEDF 抑制细胞增殖作用可能和PEDF 浓度及作用时间有关,PEDF 诱导细胞凋亡作用的强弱也与PEDF 浓度有一定关系。     

苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶表达的影响

目的观察苦参碱诱导肺腺癌A549细胞凋亡及对人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的影响。方法以终质量浓度为0.1、0.2、0.4、0.6 mg/mL的苦参碱作用肺腺癌A549细胞48 h后,通过台盼蓝拒染法计数细胞的生长抑制率;以终质量浓度为0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48、72、96 h后,经透射电镜和DNA Ladder实验了解到细胞凋亡的发生,PCR-TRAP法检测端粒酶活性,实时RT-PCR检测hTERT的mRNA表达水平。结果各种质量浓度的苦参碱作用A549细胞48 h后,均显著抑制细胞的增殖且呈浓度依赖性;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞不同时间后,经透射电镜形态学检测和DNA Ladder实验,均显示A549细胞发生了凋亡改变;0.2 mg/mL的苦参碱作用A549细胞48 h后,端粒酶活性明显受抑,hTERT mRNA表达显著降低。结论苦参碱能抑制肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其机制可能与下调hTERT基因表达,抑制端粒酶活性,破坏端粒稳定性有关。