Ⅲ型前列腺炎辅助性T细胞亚群的分化

目的 了解Ⅲ型前列腺炎前列腺液中CD4^＋T辅助性T细胞（Th细胞）亚群的分化情况。方法 按照美国国立卫生院（NIH）分类方法将病例分成ⅢA型／组（47例）、ⅢB型／组（29例），另设健康对照组（16例）。采用双抗体夹心酶联免疫法检测前列腺液（EPS）中Th；类细胞因子（IFN-γ）、Th2类细胞因子（IL-4）水平以及Th1／Th2比值（IFN-γ／IL-4）。结果 和对照组比较，ⅢA组、ⅢB组IFN-γ水平明显上调（P〈0．05），ⅢA组较ⅢB组升高更明显（P〈0．05）；和对照组比较，ⅢA组IL-4水平无明显变化（P〉0．05），ⅢB组IL-4水平上调（P〈0．05）：和对照组比较，ⅢA组IFN-γ／IL-4明显升高（P〈0．05），ⅢB组IFN-γ／IL-4无明显改变（P〉0．05）。结论 ⅢA型前列腺炎Th；细胞分化占优势，Th1／Th2平衡向Th1漂移，以细胞免疫反应为主；Th细胞分化也参与了ⅢB型前列腺炎的发病，但Th1／Th2处于相对平衡状态。     

慢性非细菌性前列腺炎辅助性T细胞亚群分化及其对炎症的影响

目的：了解慢性非细菌性前列腺炎（CP）前列腺液（EPS）中Th类细胞亚群分化及其和局部炎症的关系。方法：对47例CP患者（CP组）,根据炎症程度分成Ⅰ组（轻度炎症）26例和Ⅱ组（重度炎症）21例;另以16例健康者为对照组。采用双抗体夹心酶联免疫法法检测各组EPS中Th1类细胞因子（IFN-γ）、Th2类细胞因子（IL-4）水平,以及Th1／Th2比值（IFN-γ／IL-4）。结果：与对照组比较,CP组IFN-γ、IFN-γ／IL-4明显升高（P〈0．05）,IL-4水平无明显变化;其中,Ⅰ组IL-4水平无明显变化,而Ⅱ组IL-4水平显著性下调（P〈0．05）;Ⅱ组和Ⅰ组IFN-γ水平均明显上调（P〈0．05）,但此两组间水平无显著性差别;Ⅱ组IFN-γ／IL-4明显高于Ⅰ组（P〈0．05）。结论：CP患者Th1细胞分化占优势,以细胞免疫反应为主;Th1的极化可能是导致前列腺局部炎症发展原因之一。     

辅助性T细胞亚群分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用

目的 探讨前列腺液(EPS)中CD+4T细胞亚群辅助性T细胞(Th细胞)分化在Ⅲ型前列腺炎免疫发病机制中的作用. 方法门诊诊断前列腺炎患者76例,年龄18～47岁,平均32岁.患者均有慢性前列腺炎典型临床症状,病程均＞3个月.按美国国立卫生院分类方法分为ⅢA型组(47例)、ⅢB型组(29例).其中ⅢA型组根据炎症程度又分为ⅢAl组(轻度炎症26例)和ⅢA2组(重度炎症21例).另设健康对照组(16例),年龄19～45岁,平均31岁.采用双抗体夹心酶联免疫法检测EPS中Th1类细胞因子(IFN-γ)、Th2类细胞因子(IL-4)水平及Th1/Th2比值(IFN-γ/IL-4),比较各组问差异.结果 ⅢA、ⅢB组IFN-γ水平[(134.78±43.67),(109.82±30.09)pg/m1]与对照组[(60.63±15.16)pg/m1]比较,差异有统计学意义(P＜0.05),ⅢA组较ⅢB组升高更明显(P＜0.05);ⅢA组IL-4水平[(51.99±20.59)pg/m1]与对照组[(53.88±17.92)pg/m1]比较差异无统计学意义P＞0.05),ⅢB组IL-4水平[(76.40±17.99)pg/m1]明显上调(P＜0.05);ⅢA组IFN-γ/IL-4水平(2.94±1.12)明显高于对照组(1.20±0.48,P＜0.05),Ⅲ B组(1.49±0.48)无明显改变(P＞0.05).与对照组比较,Ⅲ A1组IL-4水平[(63.03±18.86)pg/m1]无明显变化(P＞0.05),而ⅢA2组水平[(30.20±13.16)pg/m1]显著下调(P＜0.05);ⅢA1组和m A2组IFN-γ水平均明显上调[(127.65±36.57),(143.49±50.76)pg/m1],P＜0.05),但2组间差异无统计学意义(P＞0.05);ⅢA2组IFN-γ/IL-4明显高于ⅢA1组(3.67±0.82 vs 2.34±0.97,P＜0.05).结论 ⅢA型前列腺炎Th1细胞分化占优势,Th1/Th2平衡向Th1漂移,以细胞免疫反应为主;Th细胞分化也参与了ⅢB型前列腺炎的发病,但Th1/Th2处于相对平衡状态.Th1的优势分化可能是导致前列腺局部炎症发展的原因之一.     

Th1/Th2细胞因子在深静脉血栓形成中的变化规律

目的：研究深静脉血栓形成（DVT）中Th1/Th2细胞因子的变化规律。方法：选取DVT患者66例,按病程分为1~3 d组、4~7 d组、8~15 d组和16~30 d组,观察Th1/Th2相关因子TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10水平。结果：DVT患者TNF-α、IFN-γ、IL-4、IL-10均较对照组明显升高,1~3 d组、4~7 d组的IFN-γ/IL-4比值较对照组升高,8~15 d组和16~30 d组IFN-γ/IL-4比值较对照组降低。结论：DVT中存在Th1/Th2的分化失衡,Th1/Th2细胞因子可以作为临床病情评估和疗效评价的指标。     

间质性膀胱炎与1型/2型辅助性T淋巴细胞漂移的相关研究

目的 探讨间质性膀胱炎(IC)患者血浆及膀胱黏膜1型/2型辅助性T淋巴细胞(Th1/Th2)与免疫调节失衡的关系.方法 女性IC患者血浆及黏膜标本16例,输尿管结石患者标本16例作为对照组.2组患者性别及年龄匹配.IC患者符合美国糖尿病、消化及肾病协会诊断标准.依据盆腔疼痛和尿急/尿频症状评分(PUF评分)结果分为低评分(0～20分)和高评分(21～35分)2组.采用酶联免疫吸附试验和免疫组化染色检测2组患者血浆和膀胱黏膜中Th1(IFN-γ和IL2)和Th2(IL-4和IL-10)细胞因子表达情况. 结果①IC患者血浆IFN-γ、IL-2表达量分别为(4.57±2.92)、(17.52±7.52)pg/ml,对照组分别为(4.11±2.27)、(20.99±5.09)pg/ml,2组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05);IC患者血浆IL-4、IL-10表达量分别为(O.34±0.22)、(4.37±2.34)pg/ml,对照组分别为(0.14±0.07)、(1.18±0.61)pg/ml,2组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).②IC患者和对照组膀胱黏膜标本中IFN-γ、IL-2表达强度比较χ2值=1.900、0.514,差异均无统计学意义(P＞0.05);2组IL-4、IL-10表达强度比较χ2值=8.237、8.209,差异均有统计学意义(P＜0.05).③IC患者PUF低评分组血浆IL-4、IL-10表达量分别为(0.16±0.11)、(2.42±1.27)pg/ml,高评分组分别为(0.53±0.12)、(6.31±1.21)pg/ml,2组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).2组膀胱黏膜标本IL-4表达强度比较χ2＝7.608,γ3＝0.467,差异有统计学意义(P＜0.05);IL-10表达强度比较χ2＝8.844,γ3＝0.517,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IC患者存在免疫调节失衡,Th2介导的体液免疫反应增强,且免疫失衡随症状程度而加重.     

慢性乙型肝炎肝纤维化患者Th1／Th2细胞及其细胞因子的变化

目的探讨Th1／Th2细胞及其分泌的细胞因子在慢性乙型肝炎（CHB）肝纤维化患者发生发展中的作用。方法选取2011年3—10月在河北医科大学第三医院感染科接受肝组织病理活检的CHB肝纤维化患者46例,根据纤维化分期分为S0～1期15例,S2～3期20例,S4期11例三组,另取同期健康志愿者10名作为健康对照组。用流式细胞术和实时荧光定量PCR检测外周血Th1、Th2细胞频率和单个核细胞（PBMCs）中干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素4（IL-4）基因表达;用ELISA法检测血清IFN-γ和IL-4水平;用免疫组织化学染色检测肝组织IFN-γ和IL4表达。应用Spearman相关分析、Kruskal—WallisH检验、Logistic逐步回归方法分析Th1／Th2细胞及其细胞因子在CHB肝纤维化患者外周血和肝组织中的变化。结果不同肝纤维化分期的CHB患者外周血Th1／Th2细胞频率的比值、PBMCs中IFN-γ／IL-4mRNA、血清中IFN-γ／IL-4及肝内IFN-γ／IL-4差异均有统计学意义,并随肝纤维化程度加重逐渐下降（χ2=36．259、40．822、26．321和31．852,P〈0．05）。血清及肝组织中IFN-γ,／IL-4比值与肝纤维分期均呈负相关（r=-0．616和-0．531,P〈0．01）。Logistic回归分析显示：AST、凝血酶原时间（PT）和血清IFN-γ／IL4比值是发生显著肝纤维化（S2-4）的三个独立危险因素（OR=5．933,95％CI：1．324～26．586,P=0．02;OR=12．866,95％CI：1．746～94．788,P=0．01;OR=4．755,95％CI：1．034～21．862,P：0．04）。结论CHB患者体内存在Th1／Th2失衡,随着肝纤维化进展,外周血及肝脏内均呈现Th2应答的极化现象,这可能是CHB肝纤维化发生发展的一种机制。     

自身免疫性甲状腺病Th1／Th2细胞因子平衡的偏离

目的探讨自身免疫性甲状腺病中Graves病和桥本甲状腺炎患者外周血Th1／Th2细胞因子平衡偏离的方向。方法应用酶联免疫吸附法分别检测50例Graves病患者，20例桥本甲状腺炎患者和20例健康献血者外周血γ干扰素（IFN-γ）和白介素-4（IL-4）。以IFN—γ/IL-4作为反映Th1/Th2细胞因子的指标。结果与正常对照组对比，Graves病和桥本甲状腺炎患者外周血IFN-γ无明显变化（P〉0．05），IL-4明显下降（P〈0．01），而IFN—γ/IL-4比值升高（P〈0．05）。结论自身免疫性甲状腺病中Graves病和桥本甲状腺炎外周血Th1/Th2细胞因子平衡显现Th2细胞因子低下型，而Th1／Th2相对升高。     

Th1/Th2细胞因子对器官移植排斥反应的影响

目的:研究Th1/Th2细胞因子对同种异系小鼠心脏移植存活时间的影响.方法:使用野生型BALB/c小鼠作为供体,野生型B6小鼠、IL-4基因去除B6小鼠及IFN-γ基因去除B6小鼠作为受体,行腹部异位小鼠心脏移植.部分IL-4基因去除小鼠、IFN-γ基因去除小鼠联合应用α-半乳糖神经酰胺(α-galactosylceramide,α-GalCer),以获得更强的Th1/Th2偏移.比较移植物存活时间.向野生型、IL-4基因去除及IFN-γ基因去除B6小鼠腹腔内注射供体小鼠脾细胞,提取受体小鼠脾脏CD8<'8>T细胞行淋巴细胞毒试验.结果:IFN-γ基因去除组小鼠的移植物存活时间为(6.40±0.55)d,联合应用α-GalCer组移植物存活时间为(8.00±1.15)d.IL-4基因去除组小鼠的移植物存活时间为(8.00±1.00)d,联合应用α-GalCer组移植物存活时间为(8.60±1.34)d.淋巴细胞毒试验显示IFN-γ基因去除小鼠的CD8+T细胞毒性明显增强.结论:Th1/Th2细胞因子与排斥反应之间并不存在简单的对应关系.     

妊娠期糖尿病孕妇血清Th1/Th2比值测定及分析

目的测定妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中Th1细胞分泌的细胞因子干扰素-γ(IFN-γ)及Th2细胞分泌的细胞因子白介素-4(IL-4)的水平,分析Th1/Th2比值与GDM的关系。方法选取2015年10月至2016年10月间在我院住院治疗的GDM孕妇30例为GDM组,同时随机选取同一时期内在我院住院的正常孕妇30例为对照组。两组对象于早晨抽取空腹静脉血测定糖化血红蛋白,采用ELISA方法测定两组对象血清中的IFN-γ和IL-4水平。比较两组对象的上述实验室指标及IFN-γ/IL-4比值。结果两组孕妇的年龄、孕周、糖化血红蛋白水平比较,均无显著性差异(P0.05)。GDM组患者血清中IFN-γ水平显著低于对照组[(87.38±9.14)vs.(96.27±10.24)pg/ml](P0.05),IL-4水平显著高于对照组[(49.09±1.44)vs.(42.38±1.28)pg/ml](P0.05)。GDM组患者血清中IFN-γ/IL-4比值显著低于对照组[(1.78±0.11)vs.(2.27±1.07)](P0.05)。结论 GDM患者体内存在着Th1/Th2失衡的现象,Th2更加优势表达。     

调节性及辅助性T细胞在人类IgA肾病中的表达及意义

目的 探讨CD4+CD25high调节性T细胞（Treg）及辅助性T细胞亚群（Th1、Th2）比例失衡在IgA肾病（IgAN）免疫发病机制中的作用。 方法 用流式细胞仪检测IgAN患者外周血Treg及Th1、Th2的比例。以胞内染色技术检测叉头框蛋白3（FOXP3）的表达。Treg及Th1、Th2的比例与IgAN各项临床病理指标的相关性分析采用Spearman或Pearson相关分析法。 结果 IgAN患者外周血中Treg比例明显高于健康人[（2.14±0.82）％比（1.59±0.53）％，P ＜ 0.05]，与血IgA水平呈正相关（r = 0.397，P ＜ 0.05），与eGFR呈负相关（r = -0.376，P ＜ 0.05）。IgAN患者外周血中Th2细胞比例显著高于健康对照组[（2.57±0.72）％比（1.81±1.10）％，P ＜ 0.05]，与血IgA水平呈正相关（r = 0.468，P ＜ 0.05）。IgAN患者Th1/Th2比值显著低于健康对照组（5.75±1.89比12.73±9.79，P ＜ 0.05），但与临床各指标间没有相关性。 结论 IgAN患者体内存在T细胞亚群表达紊乱。Treg在外周血中的增多以及以Th2为优势的Th1/Th2失衡可能在IgAN的发病中起重要作用。     

Transformation of DNA demethylation in the regulatory region of TGFB1 gene in patients with diabetic nephropathy

Objective To investigate the role of DNA methylation changes in the regulatory region of TGFB1 gene in patients with diabetic nephropathy (DN). Methods According to the WHO 1999 guideline for diabetes mellitus diagnosis and classification standard, 91 patients who were hospitalized in June 2013 to May 2015 and diagnosed as diabetes mellitus were selected, including 42 patients with diabetes mellitus (DM group) and 49 with diabetic nephropathy (DN group). Thirty cases with health examination were selected as healthy control group (Con group). DNA was extracted from all the subjects' peripheral blood and modified by sodium bisulfite. DNA methylation status of TGFB1 gene regulatory region was screened by methylation specific PCR and the DNA methylation level was detected by bisulfite sequencing PCR. ELISA was used to test serum TGF-β1. Blood urea nitrogen, creatinine, fasting blood sugar, postprandial blood sugar, glycosylated hemoglobin and urinary albumin to creatinine ratio (UACR) were detected by automatic biochemistry analyzer. Pearson correlation analysis and multiple stepwise regression were used to analysis TGF-β1-related factors, the correlation between the level of serum TGF-β1 and the pathological grade was analyzed in DN patients. Results There were 12.2% patients in DN group with DNA methylation of TGFB1 gene regulation region, lower than those in DM group (42.8%) with Con group (73.3%) (all P＜0.05). The methylation level of TGFB1 regulatory region was 12.5%±8.1% in DN group, significantly lower than those in DM group (35.6%±6.0%) and Con group (66.7%±9.1%) (all P＜0.05). Moreover, compared with that in DM group (1367.22±126.13 ng/L) and Con group [(296.38±74.37) ng/L], TGF-β1 expression was increased significantly in DN group [(2885.73±411.36 ng/L] (all P＜0.01). In DN patients serum TGF-β1 was correlated with eGFR (β=-0.690, P＜0.01) and the methylation (β=-0.302, P＜0.01), and the serum TGF-β1 was negatively correlated with DNA methylation level (r=-0.925, P＜0.01), but positively correlated with the pathological scores among glomerulus, tubulus and arterioles (rs=0.847, P＜0.01). Meanwhile the methylation level related to the pathological grade (χ2=23.667, P=0.04). Conclusion Demethylation in the regulatory region of TGFB1 may play an important role in the activation of TGFB1 induced by high glucose in mesangial cells, so as to participate in the occurrence and development of DN.     

脾动脉缩窄对门静脉高压大鼠脾脏iNOS表达及Th1/Th2平衡的影响

目的 观察脾动脉缩窄对肝硬化门静脉高压大鼠脾脏iNOS、Th1/Th2型细胞因子表达的影响,并探讨机制.方法 肝硬化门静脉高压大鼠随机分3组(n=10):假手术组(SOG)、脾动脉缩窄术组(SAC)和脾动脉结扎术组(SAL);正常大鼠10只行假手术作为对照组(NCG).免疫组化法测脾脏iNOS表达,RT-PCR法测脾脏IFN-γ、IL-4mRNA表达,对iNOS与IFN-γ、IL-4表达量作相关分析.结果 SOG脾脏iNOS明显高于NCG(P＜0.01),SAC和SAL明显低于SOG(P＜0.01).SOG脾脏IFN-γmRNA和IFN-γ/IL-4明显低于NCG(P＜0.01),IL-4mRNA明显高于NCG(P＜0.01);SAC脾脏IFN-γmRNA高于SOG(P＜0.05),SAC和SAL脾脏IL-4mRNA低于SOG(P＜0.05),而IFN-γ/IL-4高于SOG(P＜0.05).iNOS与IFN-γ负相关(r=-0.672,P＜0.01),与IL-4正相关(r=0.634,P＜0.01).结论 脾动脉缩窄术后门静脉高压大鼠脾脏iNOS表达降低,IFN-γ/IL-4升高,脾脏Th1/Th2失衡改善可能与术后iNOS表达降低有关.     

干预协同刺激信号诱导不明原因早期复发性流产患者外周血Th1/Th2转换的体外研究

目的观察体外干预细胞毒性T细胞相关抗原4(CTLA-4)对不明原因早期复发性流产(URSA)患者外周血辅助性T细胞(Th)1/Th2转换的影响。方法用人绒毛膜癌细胞株JEG-3制备的滋养细胞抗原刺激30例URSA患者外周血单核细胞,分为实验组A:加重组蛋白CTLA-4Ig(10和1 mg/L)组,实验组B:加CTLA-4抗体(10和1 mg/L)组;对照组:加IgG(10和1 mg/L)组。采用酶联免疫吸附试验(ELISIA)测上清液中白细胞介素(IL)-2、干扰素γ(IFN-γ)和IL-4水平。结果与相应浓度的对照组相比,CTLA-4Ig组IL-4水平显著升高(P<0.05),IL-2显著降低(P<0.05),IFN-γ两组间无显著性差异(P>0.05);而CTLA-4抗体组IL-4水平均显著低于对照组(P<0.01),而IFN-γ、IL-2水平均明显高于对照组(P<0.05)。CTLA-4Ig 10 mg/L组与CTLA-4Ig 1mg/L组比较,IL-4显著升高(P<0.05),IL-2显著降低(P<0.05),IFN-γ两组间无显著性差异(P>0.05)。与同浓度的对照组及CTLA-4抗体1 mg/L组相比,CTLA-4抗体10 mg/L组IL-4较低,而IFN-γ和IL-2稍高,但两组间亦无显著性差异(P>0.05)。结论CTLA-4Ig使URSA患者Th1/Th2型细胞因子向Th2型细胞因子偏移,有利于URSA的治疗;而CTLA-4抗体可以上调Th1型细胞因子,下调Th2型细胞因子,不利于妊娠。     

支气管哮喘患儿Th1/Th2细胞免疫平衡变化研究

目的探讨支气管哮喘患儿Th1/Th2细胞免疫平衡变化及其机制。方法选择急性发作期支气管哮喘患儿30名作为发作组,选择30名缓解期支气管哮喘患儿作为缓解组,选择30名健康小儿作为对照组,采用流式细胞仪检测各组静脉血Th1、Th2表达情况,采用酶联免疫吸附法检测三组患儿血清IL-4、IL-10、IFN-γ水平,比较各组患者Th1/Th2及血清IL-4、IL-10、IFN-γ表达变化水平。结果发作组静脉血Th1/Th2低于对照组及缓解组,血清IL-4、IL-10水平高于对照组及缓解组,IFN-γ水平低于对照组及缓解组。缓解组静脉血Th1/Th2低于对照组,血清IL-4、IL-10水平高于对照组,血清IFN-γ水平低于对照组。结论支气管哮喘患儿存在Th1/Th2免疫失衡,其可能是小儿支气管哮喘的发病机制之一。     

糖尿病肾病患者血清视黄醇结合蛋白和基质细胞衍生因子-1与肾功能的关系

目的探讨糖尿病肾病(DKD)患者血清视黄醇结合蛋白(RBP),基质细胞衍生因子-1(SDF-1)与肾功能的关系。方法前瞻性选取2017年10月—2020年10月滨州医学院烟台附属医院收治的2型糖尿病(T2DM)患者438例,根据有无合并DKD分为单纯T2DM组(n=276)和DKD组(n=162),根据尿白蛋白/肌酐比值(UACR)分为正常(n=25),微量(n=75)以及大量白蛋白尿组(n=62),根据估算肾小球滤过率(eCFR)分为C1期(n=28),G2期(n=27),G3a+G3b期(n=35),C4期(n=39)以及G5期(n=33),分析RBP,SDF-1与肾功能指标UACR,血尿酸(UA)、血清尿素氮(BUN)、β2-微球蛋白(β2-MG),血肌酐(Scr)的关系。正态分布的计量资料以均数±标准差(Mean±SD)表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析;计数资料组间比较采用χ^2检验。受试者操作特征曲线(ROC)用于分析RBP,SDF-1对DKD的判别价值;Pearson用于指标间的相关性分析;多元线性回归分析用于RBP的影响因素分析。结果DKD组患者的糖尿病病程长,RBP、UACR、UA、BUN、β2-MG、Ser水平高,SDF-1,eGFR低,与单纯T2DM组相比,差异具有统计学意义(P<0.05)。RBP,SDF-1判别DKD的曲线下面积为0.903,0.868,最佳截断值为70.71 mg/L,5.69 ng/mL。随着尿白蛋白和临床分期的增加,RBP、UACR、UA、BUN、β2-MG、Ser水平逐渐升高,SDF-1、eGFR逐渐降低,差异均具有统计学意义(P<0.05)。DKD患者RBP与UACR、UA、BUN、β2-MG、Ser均具有显著正相关关系(r=0.764,0.787,0.693,0.577,0.801,P<0.0001),与eGFR具有显著负相关关系(r=-0.782,P<0.0001)。SDF-1与UACR、UA、BUN、β2-MG,Ser均具有显著负相关关系(r=-0.744、-0.794、-0.666、-0.605、-0.820,P<0.0001),与eGFR具有显著正相关关系(r=0.767,P<0.0001)。多元线性回归方程为:RBP=29.852+0.007UACR+0.101UA+0.497BUN+0.034Ser-0.083eGFR(P<0.001)。结论RBP和SDF-1对T2DM人群中的DKD患者具有一定的判别价值,且DKD肾功能损伤程度与RBP呈正相关,与SDF-1呈负相关,UACR、UA、BUN、Ser升高以及eGFR下降是RBP升高的危险因素。     

体外调节Th1/Th2平衡治疗脑胶质瘤

目的 观察外源性细胞因子白细胞介素( IL)-2、干扰素(IFN)-γ和IL-4单克隆抗体(McAb)、IL-10 McAb在体外能否促使Th2型细胞因子分泌优势向Th1型逆转,抑制胶质瘤细胞生长。方法 体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,加入外源性细胞因子共同孵育,光学显微镜观察细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Th1/Th2类细胞因子表达变化。结果 实验组较对照组细胞体积变小,生长密度低,细胞数目少;实验组与对照组比较细胞增殖抑制率分别为(26.41 ±3.60)％,其A值与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。对照组细胞只表达Th2类细胞因子,Th1类细胞因子表达缺如,实验组IFN-γ表达增加,IL-4和IL-10表达减弱,但是未见IL-2表达。结论 外源性细胞因子能够抑制脑胶质瘤细胞的生长,促进Th2型细胞因子分泌优势向Th1型逆转。     

共刺激后淋巴细胞产生Th1/Th2细胞因子的变化及免疫抑制剂的影响

目的 探讨CD28、CD40通路共刺激后淋巴细胞产生Th1(IL-2、IFN-γ、IL-12)及Th2细胞因子(IL-4、IL-10)的变化及免疫抑制剂环孢素(CsA)、雷帕霉素(RPM)及霉酚酸(MPA)对共刺激通路激活后淋巴细胞产生Th1及Th2细胞因子的影响.方法采用单克隆抗体(mAb)与淋巴细胞表面CD3、CD28及CD40L分子结合产生相应刺激信号,单刺激及共刺激组分为:a组,CD3 mAb单刺激;b组,CD3 mAb加CD28 mAb共刺激;c组,CD3 mAb加CD28 mAb加CD40 L mAb共刺激;d组,CD3 mAb加CD28 mAb加CTLA4 mAb共刺激.各mAb的终浓度均为100 ng/ml.干预组分别将终浓度为300 ng/ml的CsA、RPM、MPA加入上述4组.ELISA法测定上述细胞培养上清中的细胞因子值.结果 a、b、c 3组IFN-γ分别为(248.91±11.20)、(555.08±24.42)、(548.19±33.06)ng/ml,IL-2分别为(29.48±8.61)、(1100.82±99.29)、(842.23±29.31)ng/ml,IL-4分别为(32.29±6.76)、(116.02±15.03)、(147.28±18.07)ng/ml,IL-10分别为(147.01±10.47)、(291.79±12.47)、(302.52±35.18)ng/ml.b、c组与a组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01);b、c组IL-2、IL-12、IL-4比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).d组IFN-γ、IL-2及IL-10分别为(497.42±29.03)、(739.77±18.58)及(120.33±13.21)ng/ml,与b组相比,差异均有统计学意义(P＜0.05).CsA、RPM及MPA对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA对4种细胞因子产生的抑制作用强于RPM和MPA,其中对IL-2及IL-4的抑制作用更为明显.CsA与CTLA4 mAb有协同作用.共刺激后IL-12产生升高,MPA可抑制单刺激和共刺激后IL-12的产生,CsA和RPM对IL-12的产生无明显抑制作用.结论 CD28、CD40共刺激通路在淋巴细胞活化中起关键作用.CsA、RPM、MPA及CTLA4 mAb对共刺激后Th1/Th2细胞因子的产生均有抑制作用,CsA的抑制作用更为明显.CD40 L mAb使Th1细胞因子及IL-12水平下降,又促进Th2细胞因子(以IL-4为主)产生,该作用可能是抗CD40 L抗体诱导移植物存活期延长的机制之一.     

结直肠癌患者外周血Th1和Th2细胞的检测与临床意义

目的 研究结直肠癌患者外周血CD4+T细胞亚群Th1和Th2细胞的比例以及相关特异性转录因子与细胞因子的表达水平,并观察其与临床分期之间的关系.方法 43名结直肠癌患者(肠癌组)与30名健康体检志愿者(对照组)作为研究对象.结直肠癌患者外周血Th1和Th2细胞占CD4+T细胞的比例运用流式细胞技术进行检测.采用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative Real-time PCR),检测外周血Th1/Th2细胞亚群特异性转录因子的相对基因表达量.血浆细胞因子的表达水平使用液相芯片技术方法定量检测.结果 肠癌组外周血Th2细胞占CD4+T细胞的比例和Th2细胞特异性转录因子GATA-3的mRNA表达量均显著高于对照组(P<0.05).肠癌组外周血Th1细胞特异性转录因子T-bet的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),但Th1细胞占外周血CD4+T细胞的比例与对照组差异无统计学意义(P>0.05).血浆TNF-α、IL-1β和IL-15表达水平组间无显著差异(P>0.05).结直肠癌患者血浆IFN-γ、IL-4和IL-6的表达水平与病程分期有关(P<0.05).结论 结直肠癌患者外周血中Th1细胞比例变化不明显而Th2细胞比例明显升高.结直肠癌患者血浆细胞因子的不平衡表达可作为机体免疫状态转换与病情判断的指标.