前列腺素E1对尿酸所致人肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察前列腺素E1(PGE1)对尿酸所致人肾小管上皮细胞凋亡的影响。方法取处于对数生长期的HK-2细胞随机分为5组:正常对照组、尿酸组(200、400、800μmol·L-1 UA)、尿酸+PGE1组。不同浓度的尿酸刺激HK-2细胞24、48、72 h,用MTT比色法检测细胞活性抑制率;不同浓度尿酸培养HK-2细胞24 h,用Annexin V FITC/PI流式细胞仪检测细胞凋亡率并检测细胞培养液NAG酶的活性,观察尿酸对HK-2细胞的毒性作用;并加入PGE1干预,探讨其对HK-2细胞的保护作用。结果尿酸作用HK-2细胞24 h后,与对照组比较,细胞凋亡率增加至(56.06±4.937)%(P<0.01),NAG酶释放量增加至(15.23±0.617)U·L-1(P<0.01)。加PGE1组,与同浓度单纯尿酸组比较,在不同时间点细胞活性抑制率均明显降低,凋亡率减少至(41.61±4.149)%(P<0.01);NAG酶释放量减至(11.24±0.468)U·L-1(P<0.01)。结论 1尿酸抑制HK-2细胞增殖和促进凋亡,增加其NAG酶的释放;2 PGE1对尿酸损害HK-2细胞有一定的保护作用。     

普罗布考对甲基胍诱导纤维化相关因子在HK-2细胞表达的影响

目的研究降脂药普罗布考对小分子尿毒素甲基胍诱导纤维化相关因子在人肾小管上皮细胞表达的影响。方法 HK-2细胞分3组培养,A组（正常对照,不加干预因素）;B组培养基中加入0.5mmol.L-1甲基胍;C组培养基中加入0.5mmol.L-1甲基胍和20μmol.L-1普罗布考。各组细胞培养48h后用免疫细胞化学、RT-PCR检测TGF-β1、CTGF和FN,并用流式细胞仪对以上因子作定量检测,以观察其在HK-2细胞中的表达。结果在甲基胍刺激后,细胞免疫化学染色,HK-2细胞质中着色,显示TGF-β1、CTGF和FN均有表达。正常对照组HK-2细胞质中无着色。测定结果显示甲基胍组TGF-β1、CTGF和FN显著高于正常对照组（P〈0.01）,加入普罗布考后,表达显著下降（P〈0.01）。结论甲基胍能促进纤维化相关因子在肾小管上皮细胞中表达;普罗布考能抑制甲基胍诱导纤维化相关因子在肾小管上皮细胞的表达。     

SB203580对缺氧/复氧损伤诱导的大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及其机制

目的研究SB203580(吡啶咪唑类抗炎药)对大鼠肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。方法SD大鼠肾小管上皮细胞原代培养,取第2代细胞实验;共分为3组:对照组,正常培养细胞;模型组,细胞缺氧1 h后,复氧6、12、24、48 h培养;SB203580预处理组,在缺氧损伤前1 h,用不同剂量SB203580(0.2、2、20μmol·L~(-1))预处理细胞,尔后进行缺氧/复氧损伤处理,各细胞用Hoechst 33258、Tunnel染色、流式细胞仪及Western blot方法,观察缺氧/复氧后细胞凋亡及p38MAPK的磷酸化水平。结果与对照组相比,缺氧/复氧后,实验组细胞的凋亡率显著增加,且细胞内p38MAPK磷酸化水平明显升高;而应用SB203580预处理细胞,可显著降低实验组细胞的凋亡率及细胞内p38MAPK的磷酸化水平。结论SB203580通过抑制p38MAPK的活性,对缺氧/复氧诱导的肾小管上皮细胞凋亡有保护作用。     

红花黄色素对实验性肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的观察红花黄色素注射液对肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的的影响,探讨其肾脏保护机制。方法45只雄性SD大鼠,随机分为假手术组（A组）、单侧输尿管梗阻（unilateral ureteral obstruction;UUO）组（B组）、UUO联合红花黄色素治疗组（C组）,各15只。C组红花黄色素5mg/（kg·d）,造模术前1d开始腹腔注射给药,各组术后10d处死大鼠,处死后取术侧肾组织行HE、Masson染色,TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡。结果B组、C组可见明显肾间质纤维化的病理改变,可检测到凋亡细胞。C组与B组相比,肾间质纤维化病变程度较轻,凋亡细胞明显减少（P〈0.01）。结论注射用红花黄色素对大鼠肾间质纤维化有保护作用,这种作用可能通过抑制肾小管细胞过度凋亡实现。     

β榄香烯对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞氧化应激和凋亡的影响及作用机制

目的 研究β榄香烯对脂多糖诱导的肾小管上皮细胞(HK-2)氧化应激和凋亡的影响及作用机制.方法 用脂多糖和不同浓度的β榄香烯处理HK-2细胞,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞存活率,蛋白质印迹法检测Bcl-2相关X(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白的表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,试剂盒检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛和活性氧自由基(ROS)的水平.结果 NC组、脂多糖组、β榄香烯(2.5 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L)+脂多糖组细胞凋亡率分别为(4.86±0.62)％、(27.34±2.68)％、(25.64±2.89)％、(23.67±2.24)％、(18.64±2.08)％;GSH-PX水平分别为(82.91±6.18)、(57.23±3.17)、(65.37±2.54)、(70.26±4.36)、(72.46±3.64);SOD水平分别为(36.76±2.68)、(21.13±1.34)、(25.69±1.67)、(27.67±1.65)、(28.96±1.85);丙二醛水平分别为(1.00±0.06)、(1.62±0.13)、(1.43±0.08)、(1.35±0.11)、(1.31±0.09);ROS水平分别为(1.00±0.09)、(3.34±0.32)、(2.34±0.21)、(1.85±0.12)、(1.61±0.11);Nrf2蛋白表达水平分别为(0.79±0.06)、(0.33±0.04)、(0.42±0.04)、(0.57±0.06)、(0.63±0.06);HO-1蛋白表达水平分别为(0.62±0.05)、(0.27±0.03)、(0.35±0.03)、(0.43±0.05)、(0.45±0.05);NC组与脂多糖组比较,脂多糖组与β榄香烯(2.5 mg/L、5.0 mg/L、10.0 mg/L)+脂多糖组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 β榄香烯可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路抑制脂多糖诱导的HK-2细胞氧化应激损伤和凋亡.     

雷帕霉素对肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨雷帕霉素对肾小管上皮细胞增殖和凋亡的影响。方法 体外培养肾小管上皮细胞(HK-2细胞),选择100, 200, 400, 800 ng/ml雷帕霉素作用于HK-2细胞24、48、72h。利用 MTT实验分析雷帕霉素对HK-2细胞增殖的影响,并计算各浓度及不同时间的增殖抑制率优化雷帕霉素作用的浓度和时间;选择最佳的作用浓度和作用时间处理HK-2细胞,通过流式细胞分析技术,分析雷帕霉素对HK-2细胞的凋亡的影响。结果 MTT实验显示不同浓度的雷帕霉素,对增殖有抑制作用,且表现浓度依赖性和时间依赖性;RAPA可以促进HK-2细胞的凋亡。结论 通过HK-2细胞模型研究,发现雷帕霉素可抑制肾小管上皮细胞增殖、促进细胞凋亡。     

梗阻性黄疸对大鼠肾小管上皮细胞的影响

目的研究不同时相梗阻性黄疸(Obstructive jaundice,OJ)大鼠肾小管上皮细胞病理学改变的规律及其机制。方法实验大鼠分为正常对照组(Norm control,N组),假手术组(Shamoperation,SO组),胆总管结扎组(Common bile duct ligation,CBDL组)。其中CBDL组又分为CB-DL3d、CBDL7d、CBDL11d三亚组。模型建立后,使用鲎试剂动态浊度、生化和末端脱氧核甘酸介导生物素标记(TUNEL)技术测量不同组别,不同时相OJ大鼠内毒素(ET)、一氧化氮(NO)、胆红素(TB)、胆汁酸(TBA)、肌肝(Cr)、尿素氮(BUN)水平及肾小管上皮细胞凋亡指数(AI),并进行多元相关性分析。结果胆管梗阻3天时肾脏形态学未见明显改变;7天时可观察到一定数量的肾小管上皮细胞凋亡,充血水肿;11天时凋亡细胞明显增多,同时肾小管上皮细胞严重充血、肿胀,但无坏死特征性表现。多元分析发现,ET与肾小管上皮细胞凋亡水平关系密切(P<0.05)。结论细胞凋亡是OJ引起肾小管上皮细胞损伤的主要方式,ET与之密切相关。     

酸性成纤维细胞生长因子对庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤的保护作用

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)对庆大霉素引起的体外培养的大鼠肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消化,进行肾小管上皮细胞的体外培养。用庆大霉素建立损伤模型,观察aFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果①经形态学观察、GM组与对照组比较,CAT、SOD、Na~+,K~+-ATP酶活性下降,而NAG活性和MDA升高(P<0.01),提示肾小管上皮细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功。②aFGF+GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P<0.01);而aFGF+GM组与对照组比较,CAT、NAG、Na~+,K~+-ATP酶活性差异无显著性,但SOD活性下降、MDA升高差异仍有显著性(P<0.05)。结论aFGF对庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞损伤有明显的保护作用。     

2种静脉铁剂对肾小管上皮细胞及脐静脉内皮细胞的毒性作用

目的：接受血液透析治疗的终末期肾衰患者常接受多种静脉用铁剂，这些铁剂具有潜在的毒性，本实验比较了右旋糖酐铁及蔗糖铁对肾小管上皮细胞（HK-2）及脐静脉内皮细胞的细胞毒性。方法：使用不同剂量的静脉铁剂（0～1．2g·L^-1），分别加入体外培养的人肾小管上皮细胞及脐静脉内皮细胞，孵育0．5～72h。通过检测HDL释放率、MTT吸收率，观察两种铁荆对HK-2细胞及脐静脉内皮细胞的细胞毒性。结果：2种静脉铁剂均能引起细胞致死性损伤；蔗糖铁组的乳酸脱氧酶（LDH）释放率显著高于对照组及低分子右旋糖酐铁组，而低分子右旋糖酐铁组与对照组之间无明显差异。MTT法测细胞生长抑制率结果发现：两种铁剂刺激72h后活细胞数均下降，蔗糖铁组质量浓度不小于0．12g·L^-1时MTT吸收率显著下降，而低分子右旋糖酐铁组浓度为1．2g·L^-1时才出现显著下降。结论：蔗糖铁及低分子右旋糖酐铁均引起剂量依赖性细胞致死性损伤，不同的复合铁剂对肾小管上皮细胞及脐静脉内皮细胞发挥致死性作用的剂量不同，而蔗糖铁的细胞毒性大于低分子右旋糖酐铁。     

甘草酸二铵对马兜铃酸致肾小管上皮细胞损害保护作用的实验研究

目的　探讨甘草酸对马兜铃酸 (aristolochic acid,AA)肾损害的保护作用 ,观察甘草酸是否可以减轻 AA对培养的肾小管上皮细胞的损害 ,并初步探讨其可能机制。方法　 5 % FCS RPMI- 16 4 0培养肾小管上皮细胞株 (L L C- PK1) ,采用结晶紫染色法观察细胞增殖 ;荧光染色观察活细胞数目 ;酶动力学检查 L DH活性 ,比色法检测 NAG水平 ;透射电镜观察细胞超微细胞结构。结果　1AA4 0、80、16 0μg/ ml可明显抑制细胞增殖 ,结晶紫 OD值显著减少 ,与无 AA对照组比较 P<0 .0 1。 2甘草酸二铵 (diammoniumglycyrrhizinate,DG)在 5、10、2 5 μg/ ml时结晶紫 OD值与无甘草酸对照组比较 P>0 .0 5 ,甘草酸在 5 0 μg/ ml时 P<0 .0 5 ,10 0 μg/ ml、2 0 0μg/ ml时 P<0 .0 1,提示大剂量甘草酸可改善 AA抑制细胞增殖的作用。 3在 AA4 0μg/ ml作用下随着时间延长 ,无甘草酸组的细胞存活数目逐渐减少 ,而甘草酸 (10 0μg/ ml、2 0 0μg/ ml)作用组 ,活细胞数目明显增多 ,提示高浓度甘草酸对细胞损伤有一定的保护作用。4甘草酸在 5、10、2 5 μg/ ml时 ,L DH释放率、NAG酶水平与无甘草酸对照组比较 P>0 .0 5 ,甘草酸在 5 0 μg/ ml时 P<0 .0 5 ,甘草酸在 10 0μg/ ml、2 0 0μg/ ml时 L DH释放率、NAG酶明显减少 ,与无甘草     

五味子乙素抗顺铂所致HK-2凋亡及其机制的研究

目的研究五味子乙素(SchB)对顺铂所致HK-2(肾小管上皮细胞)损伤的保护作用,并探讨其可能的机制。方法不同浓度的SchB和顺铂作用于HK-2,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,流式细胞仪检测HK-2细胞凋亡,并检测细胞LDH(乳酸脱氢酶)、MDA(丙二醛)、LPO(脂质过氧化物)的改变,探讨SchB对HK-2保护作用的机制。结果顺铂有抑制HK-2生长、诱导其凋亡的作用IC50为18.39μmol·L-1,而20μmol·L-1的SchB能够明显减少顺铂引起的HK-2的凋亡,保护作用最强;SchB能使顺铂导致的细胞MDA、LPO、LOH升高有明显降低。结论五味子乙素能够有效的抑制顺铂引起HK-2的凋亡。机制可能是通过其抗氧化作用来抑制顺铂引起的氧化应激反应。     

唐古特大黄多糖对过氧化氢诱导的肠上皮细胞凋亡的保护作用及其可能机制

目的探讨唐古特大黄多糖(Rheum tanguticumpoly-saccharide,RTP)组分1(RTP1)对过氧化氢(H2O2)诱导的肠上皮细胞IEC-6凋亡的保护作用及其可能的机制。方法以不同浓度的RTP1(10、30、100 mg.L-1)预处理体外培养的IEC-6细胞后,加入H2O2诱导IEC-6细胞凋亡,MTT法检测细胞活力,激光共聚焦显微镜荧光染色法检测细胞内活性氧的产生,DNA琼脂糖凝胶电泳、吖啶橙染色及流式细胞仪检测细胞凋亡的发生,Western blot测定Caspase-3酶活性。结果 100μmol.L-1H2O2处理细胞2 h明显降低细胞存活率并诱导细胞凋亡,凋亡率为31.3%,细胞内活性氧水平及Caspase-3的活性明显升高,不同浓度(10、30、100 mg.L-1)RTP1预处理细胞24 h,可明显提高细胞存活率,有效抑制DNAladder的发生,流式细胞仪检测凋亡率(30、100 mg.L-1)分别降低至24.4%和21.5%,Caspase-3酶活性降低,并呈现一定的剂量依赖性。结论 RTP1可明显抑制H2O2诱导的IEC-6细胞凋亡,其细胞保护作用可能与降低细胞内活性氧水平和抑制Caspase-3活性相关。     

Apelin-13抑制I/R损伤引起的肾小管上皮细胞炎症

目的：在I/R（肾缺血再灌注）刺激的肾小管上皮细胞HK-2中研究Apelin-13抑制I/R引起的细胞炎症。方法：在I/R刺激的HK-2细胞中给予不同剂量的Apelin-13,通过细胞免疫组化实验技术检测HK-2细胞中Apelin的蛋白水平。MTT检测各组的细胞增殖情况,Real time-PCR（实时定量荧光PCR）技术检测各实验组HK-2细胞中HIF1A（缺氧诱导因子1A）、APJ（G蛋白偶联受体）、ICAM1（细胞间黏附分子-1）和MCP1（单核细胞趋化蛋白-1）基因的mRNA水平变化。结果：（1）I/R刺激引起HK-2细胞中Apelin表达量显著性下降,给药Apelin-13（30 pmol·L^-1和300 pmol·L^-1）能够上升HK-2细胞中Apelin的蛋白水平。（2）MTT检测结果显示I/R刺激的HK-2细胞生长速度明显低于NC组（P<0.01）,同时给予Apelin-13（30 pmol·L^-1和300 pmol·L^-1）后细胞的生长速度明显上升（P<0.05）,差异有统计学意义。（3）与CT组细胞相比,I/R组HK-2细胞中HIF1A、ICAM1和MCP1的基因和蛋白水平显著性上升（P<0.05）;给药Apelin-13（300 pmol·L^-1）能显著性抑制I/R刺激的HK-2细胞中HIF1A、ICAM1和MCP1的基因和蛋白水平（P<0.05）。另外,在I/R刺激的HK-2细胞中Apelin受体APJ的基因和蛋白水平显著性下降,而给予Apelin-13后能显著性上调HK-2血细胞中APJ的基因和蛋白水平。结论：在I/R刺激的HK-2细胞中给予Apelin-13能I/R引起的炎症基因的表达,从而抑制细胞死亡。     

碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素肾损害保护作用的体外实验研究

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对庆大霉素引起的体外培养的大鼠肾小管上皮细胞损害的保护作用。方法　大鼠肾皮质经研磨、过网、胰蛋白酶消化,进行肾小管上皮细胞的体外培养。经Cytokeratin18抗体进行鉴定后,用庆大霉素建立损伤模型,观察bFGF对损伤的肾小管上皮细胞的保护作用。结果　①经形态学观察、Cytokeratin18免疫细胞化学方法鉴定;GM组与对照组比较,CAT、Na+,K+ ATP酶活性下降,而NAG活性和MDA升高 (P<0 01),提示肾小管上皮细胞的培养和庆大霉素损伤的建模成功。②bFGF+GM组与GM组比较,各生化和酶学指标差异均有显著性(P<0 01 );而bFGF+GM组与对照组比较,CAT、Na+,K+ ATP酶、NAG酶活性差异无显著性 (P>0. 05 ),但MDA增高差异仍有显著性(P<0 05)。结论　bFGF能保护损伤的肾小管上皮细胞。     

全反式维甲酸对高糖诱导肾小管上皮细胞增殖及凋亡的影响

摘要： 目的 探讨全反式维甲酸 （ATRA） 对高糖诱导人 HK-2 细胞增殖及凋亡的影响, 以期延缓糖尿病肾病（DN）。方法 体外培养 HK-2 细胞, 随机分为 6 组： 空白组 （未加任何刺激物）、 高糖组 （加 D-葡萄糖 30 mmol/L）、 高渗组 （加入甘露醇 24.5 mmol/L）、 低浓度 ATRA 组 （加入 ATRA 1×10-7 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）、 中浓度 ATRA 组（加入 ATRA 1×10-6 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）、 高浓度 ATRA 组 （加入 ATRA 1×10-5 mol/L+D-葡萄糖 30 mmol/L）。各组细胞培养 48 h。MTT 法检测各组细胞增殖情况, 流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 空白组与高渗组细胞光密度 （OD） 值和凋亡率差异无统计学意义。高糖组较空白组、 高渗组细胞增殖减少, 凋亡率增加; 低浓度、 中浓度、 高浓度 ATRA 组细胞增殖均较高糖组增加, 且低、 中及高浓度 ATRA 组依次增加, 凋亡率较高糖组减少, 且低、 中及高浓度 ATRA 组依次减少 （均 P＜0.05）。结论 ATRA 可促进高糖诱导的 HK-2 细胞增殖, 抑制其凋亡, 并与 ATRA 浓度可能具有一定的依赖性。     

辛伐他汀上调肾小管上皮细胞ADAMTS13 mRNA表达

目的观察不同细胞因子对近端肾小管上皮细胞株(HK-2)血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)的影响及辛伐他汀干预结果。方法炎症因子按浓度分组:TNF-α0、0.1、1、10ng/ml分为A0-A3组;IL-6 0、1、10、100ng/ml分为B0-B3组;IL-4 0、1、5、10ng/ml分为C0-C3组。辛伐他汀0、0.1、1、10μmol/L分为D0-D3组。两者共培养分成不同浓度辛伐他汀+TNF-α10ng/ml(E0-E3)组,不同浓度辛伐他汀+IL-6 100ng/ml(F0-F3)组和不同浓度辛伐他汀+IL-4 10ng/ml(G0-G3)组。孵育HK-2 24h,用实时定量PCR法和Western blot法检测ADAMTS13的mRNA及蛋白表达水平,结果与各组的0组相比较。结果 A组和B组ADAMTS13mRNA表达水平呈剂量依赖性下降(P<0.05或P<0.01)。与D0组比较,ADAMTS13 mRNA表达水平在D1组下降(P<0.05),在D3组上升(P<0.01)。E、F组ADAMTS13mRNA表达呈辛伐他汀浓度依赖性增加(P<0.05或P<0.01)。结论不同的炎症因子对HK-2上ADAMTS13的表达、合成、分泌起到不同的作用,提示与肾脏局部微循环障碍有关。而辛伐他汀能在存在炎症因子的条件下提高肾小管上皮细胞ADAMTS13的表达。     

人参水提物对MPP^＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的研究人参水提物（WEG）对四氢吡啶离子（MPP^＋）诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法体外培养SH-SY5Y细胞,建立MPP＋致SH-SY5Y细胞凋亡的模型,同时给予WEG干预。应用MTT比色法检测细胞活力;Hoechst33258染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果0.5mmol·L^-1MPP^＋作用于SH-SY5Y细胞60h,MTT值降低到（51.97%±2.46%）（P〈0.01）,Hoechst 33258染色可见明显的颗粒状和固缩状荧光,凋亡率增加到（40.52%±1.68%）（P〈0.01）,而WEG则能明显改善SH-SY5Y细胞的凋亡特性,显著升高其MTT值,降低凋亡率（P〈0.05）。结论人参水提物对MPP＋诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的保护作用。