珠子参对小鼠H22肝癌抑制作用及机制研究

目的：观察珠子参对小鼠移植性肝癌（H22）的增殖抑制作用及其作用机制.方法：建立H22小鼠肝癌实体瘤模型,观察珠子参对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,放免法（RIA）检测血清中TNF-α含量,光镜（HE染色）观察肿瘤细胞生长增殖状态,并在透射电镜下观察肿瘤细胞超微结构形态,流式细胞仪技术（FCM）检测细胞凋亡并进行周期分析.结果：珠子参抑瘤率达44.89%;血清中肿瘤坏死因子α（TNF-α）浓度珠子参组高于正常对照组,而比模型对照组低（P〈0.05）;光镜观察到珠子参组小鼠肿瘤组织周围有大量的吞噬细胞和淋巴细胞浸润,电镜下可见珠子参组癌细胞胞质浓染,核固缩,线粒体明显减少;FCM分析显示,珠子参各组G0-G1期和S期细胞（%）减少,而G2-M期细胞和凋亡细胞（%）增加.结论：珠子参对H22肝癌小鼠具有良好的抑瘤作用,其作用机制可能与珠子参阻止G2-M期细胞转换而影响癌细胞在细胞周期中的进程,干扰S期DNA合成以及诱导小鼠肝癌细胞凋亡有关;此外珠子参能明显抑制荷瘤小鼠TNF-α水平的异常增高,使其维持在一定水平而发挥抗肿瘤、调节机体免疫力等作用.     

湖北五峰绿茶体内外抗肿瘤作用研究

目的研究从湖北五峰绿茶提取的茶氨酸（theanine）在体内外抗小鼠H22肝癌细胞的作用及其免疫学机制。方法茶氨酸按不同时间（24～96h）及不同浓度（1～16mg/mL）分别处理H22细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期。建立H22荷瘤小鼠模型,观察小鼠肿瘤的生长情况,计算肿瘤生长抑制率;ELISA法检测茶氨酸处理后小鼠血清中IL-2和IL-12的活性。结果8mg/mL茶氨酸处理H22细胞72h可显著地抑制H22细胞增殖,2mg/mL茶氨酸处理H22细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现,且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,茶氨酸对小鼠体内肿瘤生长也具有抑制作用,而且显著提高荷瘤小鼠血清中IL-2和IL-12的水平。结论茶氨酸可抑制H22细胞增殖并激发细胞凋亡,并能提高机体的免疫功能发挥抗肿瘤作用。     

中药蛇六谷石油醚萃取物对小鼠H22肝癌移植瘤抑制作用的实验研究

[目的]建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,研究中药蛇六谷石油醚萃取物对其生长的抑制作用,并初步探讨其可能的作用机理。[方法]以皮下接种H22肝癌细胞的荷瘤小鼠为模型,进行蛇六谷不同提取物的体内抑瘤实验,观察抑瘤率、与5-Fu的协同抑瘤作用;流式细胞仪检测蛇六谷石油醚萃取物对小鼠H22肝癌细胞凋亡的影响;免疫组织化学方法检测蛇六谷石油醚萃取物对荷瘤小鼠H22肝癌细胞生存素（Survivin蛋白）、Bcl-2相关蛋白X（Bcl-2associated proteinx,Bax蛋白）表达的影响。[结果]蛇六谷石油醚萃取物对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有一定的抑制作用,其机理可能与降低小鼠H22肝癌移植肿瘤Survivin蛋白的表达、上调Bax蛋白的表达,从而促进H22肝癌细胞凋亡相关。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡率及线粒体膜电位的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡率及线粒体膜电位的影响。方法:48只荷瘤小鼠随机分为模型组、环磷酰胺治疗组、扶正抑瘤颗粒大剂量治疗组和扶正抑瘤颗粒小剂量治疗组,分别予以相应药物治疗14 d。碘化丙啶染色,流式细胞术检测各组小鼠肝癌H22细胞的凋亡率。采用荧光探针罗丹明123负载,激光扫描共聚焦显微镜下观察H22细胞的荧光强度,分析H22细胞线粒体膜电位的大小。结果:扶正抑瘤颗粒可以提高小鼠肝癌H22细胞的凋亡率,降低H22细胞的线粒体膜电位,与模型组比较,差异有统计学意义。结论:扶正抑瘤颗粒的抗肿瘤机制可能与降低肿瘤细胞线粒体膜电位,诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

超声辐射微泡治疗小鼠皮下H22肝癌移植瘤的疗效

目的：研究超声辐射微泡对小鼠皮下H22肝癌移植瘤的治疗作用。方法：建立小鼠H22肝癌腹水瘤皮下移植瘤模型，随机分对照组、单纯超声治疗组和超声微泡组。观察肿瘤生长情况，计算瘤重，对治疗后肿瘤组织进行病理学检查，了解肿瘤细胞坏死和凋亡情况，并进行定量分析。结果：相对于对照组，超声微泡组肿瘤生长延缓，肿瘤坏死面积显著增加，凋亡肿瘤细胞数明显增多（P〈0．05）。结论：超声辐射微泡可显著抑制H22肝癌移植瘤的生长，除杀灭肿瘤细胞外，还可诱导瘤细胞凋亡。     

槲皮素-锌抗肿瘤作用及对HepG22的细胞凋亡诱导机制研究

[目的]观察槲皮素-锌配合物的体内外抗肿瘤作用及其机制。[方法]采用四氮唑盐(MTT)法观察槲皮素-锌配合物对人肝癌细胞HepG2的抑制率,并采用流式细胞术(FCM)观察分析癌细胞周期;通过建立荷瘤小鼠模型,观察槲皮素-锌配合物对S180荷瘤小鼠瘤重和H22小鼠生存时间的影响,观察其体内抗肿瘤作用。[结果]槲皮素-锌配合物可显著抑制HepG2的体外增殖,且抑制作用呈浓度依赖性,可使G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少。对S180小鼠的瘤体生长有显著的抑制作用,对H22小鼠的生存时间有显著的延长作用。[结论]槲皮素-锌配合物在体内、外均能有效抑制肿瘤细胞的增殖,并诱导HepG2肿瘤细胞的凋亡。     

瑞香狼毒提取物对小鼠H22肝癌细胞细胞周期的影响

目的 研究中药瑞香狼毒三种不同提取物A、B、C(SCL-A、SCL-B、SCL-C)在体外对小鼠H22肝癌细胞的抑制作用,并探讨其抑制肿瘤的作用机制.方法 联合应用细胞培养技术,MTT比色法,流式细胞术等方法研究三种不同的提取物在体外对小鼠H22肝癌细胞的抑制作用.结果 体外MTT实验结果显示,三种提取物作用于体外培养的H22肝癌肿瘤细胞后,细胞的增殖明显受到抑制,用药组细胞培养孔的OD值明显小于对照组,表现出正的剂量效应关系.SCL-A、SCL-B和SCL-C的IC50分别是:0.43 μg/mL、0.26 μg/mL、0.15 μg/mL.流式细胞分析表明,经药物作用后细胞被阻止在G0G1期,PI指数明显降低,AI指数明显增高.结论 体外抗肿瘤研究表明,SCL-A、SCL-B和SCL-C作用于H22细胞后,可明显抑制细胞增殖、阻止细胞在G0G1期.瑞香狼毒的三种提取物均具有显著抗肿瘤作用.     

涤痰祛瘀汤对小鼠肿瘤的抑制作用及其机制探讨

目的：研究涤痰祛瘀汤对不鼠肿瘤的抑制作用及作用机制,方法：建立小鼠移植性肉瘤（S180）及小鼠艾氏腹水癌（EAC）模型,观察抑率和生命延长率,并用流式细胞仪检测S180瘤细胞周期及细胞凋亡率。结果：涤痰祛瘀汤在5g和10g/kg剂量下灌胃给药,能显著抑制小鼠S180实体的生长,也能延长EAC小鼠的生存时间,还可引起小鼠S180瘤细胞S期及C2－M期细胞减少,G0－G1期细胞及凋亡细胞增加,结论：涤痰祛瘀汤对小鼠移植性肿瘤具有抑制作用,其机制可能与抑制细胞周期中S期DNA合成,干扰细胞的分裂增速度及诱导癌细胞凋亡有关。     

升麻总苷抗肿瘤活性及其对肿瘤细胞周期的影响

目的研究升麻总苷提取物(Total Glycoside of Cimicifuga foetida,TGC)的体内、外抗肿瘤活性及其对人肿瘤细胞周期分布的影响。方法 MTT法检测TGC对人肿瘤细胞株的增殖抑制活性;体内实验观察TGC对小鼠肝癌H22移植瘤和人肝癌裸小鼠异种移植瘤Bel-7402的抑制作用;荧光染色法和流式细胞仪检测其对肿瘤细胞周期的影响。结果 TGC可明显抑制人肝癌HepG2细胞的增殖,其IC50值为(76.16±2.94)mg·L-1;TGC 0.8 g·kg-1剂量可明显抑制小鼠肝癌H22和人肝癌Bel-7402裸小鼠移植瘤的生长;TGC 50 mg·L-1可明显诱导人肝癌HepG2细胞阻滞于G2/M期,呈现出一定的时-效关系。结论 TGC具有明显的体内、外抗肿瘤作用,其活性可能与阻滞肿瘤细胞周期有关。     

生长抑素抑制小鼠肝细胞癌的体外实验研究

目的 探讨生长抑素对小鼠肝细胞癌的抑制作用和机制。方法 用液闪仪测定肿瘤细胞摄入3H-TdR的方法 来检测生长抑素对肿瘤细胞增殖的抑制作用。用流式细胞仪测定肿瘤细胞的周期和增殖指数,以了解生长抑素对肿瘤细胞周期的影响。结果 生长抑素能使肿瘤细胞对3H-TdR的摄入显著减少,使G0/G1期细胞明显增多,细胞增殖指数下降,其作用随生长抑素浓度和作用时间的增加而增强,均有显著差异（P〈0.01）。结论 生长抑素能抑制体外培养的小鼠肝细胞癌H22的生长。生长抑素抑制肿瘤生长的机制可能与抑制肿瘤细胞核酸合成,阻止G0/G1期细胞进入细胞增殖周期有关。生长抑素的运用有可能成为治疗肝细胞癌的一条新途径。     

反应停对小鼠荷瘤H_(22)的影响

目的研究不同剂量反应停及反应停协同环磷酰胺对小鼠荷瘤H22(肝癌)实体型肿瘤的影响。方法建立小鼠肝癌移植实体型肿瘤模型,比较不同剂量反应停对小鼠肝癌的影响,同时观察反应停协同环磷酰胺对小鼠肝癌的影响。通过研究反应停对小鼠迟发型变态反应的影响探究其免疫作用。结果反应停对小鼠荷瘤H22呈现明显剂量依赖性抑制作用,反应停与环磷酰胺具有协同抗小鼠肝癌作用。反应停对小鼠迟发型变态反应呈剂量依赖性促进作用。结论反应停具有抗肝癌作用,而且与环磷酰胺具有协同抗肿瘤作用,此作用与反应停抗免疫作用有关。     

小型化免疫偶联物Fab-ADM抗肿瘤机制的初步探讨

目的:探讨小型化的免疫偶联物Fab-ADM的抗肿瘤机制。方法:建立小鼠肝癌细胞H22及小鼠黑色素瘤细胞B16的皮下移植瘤模型,分别予以生理盐水及ADM、Fab-ADM治疗,治疗结束后取肿瘤组织制备石蜡切片进行HE染色,并通过CD34进行免疫组织化学染色以计数肿瘤微血管。结果:在2种动物模型中,Fab-ADM治疗组小鼠瘤体内可见肿瘤细胞的大片状坏死,微血管密度明显减少,与生理盐水对照组及ADM治疗组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Fab-ADM偶联物较游离ADM具有更强的肿瘤抑制作用,其可显著抑制肿瘤微血管密度的增加,继而引起肿瘤细胞的大面积坏死。     

苦参碱对小鼠H22细胞抗肿瘤作用的实验研究

目的:观察苦参碱在体内和体外的抗肿瘤作用.方法:MTT法检测苦参碱对小鼠腹水瘤细胞H22的体外杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双标记法检测苦参碱对体外培养的H22细胞的诱导凋亡作用;在BALB/C小鼠H22移植瘤模型上观察苦参碱的体内抑瘤活性,透射电镜观察苦参碱治疗后荷瘤小鼠肝癌细胞的超微结构改变;免疫组化法检测荷瘤小鼠肝癌组织中Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:苦参碱在体外能够明显抑制H22细胞的生长和增殖,并可诱导细胞凋亡;对小鼠肿瘤生长也有明显抑制作用,高、低浓度组抑瘤率分别为60.71%和62.53%;用药组小鼠肿瘤组织中,电镜下可见较为典型的细胞凋亡的形态学改变;肿瘤组织中Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax蛋白表达增强,与荷瘤对照组相比有显著性差异(P＜0.01).结论:苦参碱在体内外对H22肿瘤细胞生长均有抑制作用,同时可促进肿瘤细胞表达Bax蛋白,抑制Bcl-2表达,诱导肿瘤细胞凋亡.     

苦参碱对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对免疫功能的影响

目的　研究苦参碱的体内抑瘤效应与荷瘤机体免疫功能的关系 ,初步探讨苦参碱抑瘤作用的免疫学机制。方法　采用 MTT法观察不同剂量苦参碱对荷瘤小鼠外周血淋巴细胞 (PBL )增殖能力的影响 ;采用小鼠 H2 2 肝癌细胞实体瘤模型进行苦参碱的体内抑瘤实验 ,测定肿瘤生长抑制率 (IR) ,观察荷瘤小鼠免疫器官质量和病理学形态的改变 ;EL ISA法检测小鼠血清中白细胞介素 - 2 (IL - 2 )和白细胞介素 - 12 (IL - 12 )水平。结果　高、低剂量苦参碱对小鼠 H2 2 实体瘤生长具有明显抑制作用 ,抑瘤率分别为 6 0 .7%和 6 2 .5 % (P<0 .0 1) ;体外增殖试验显示 ,苦参碱单独作用时 ,对荷瘤小鼠静止 PBL体外增殖的抑制作用较明显 ,但对刀豆蛋白 A (Con A)活化的荷瘤小鼠PBL 的体外增殖反应表现出一定的促进作用 ,随苦参碱质量浓度的增高 ,促进作用随之减弱 ;苦参碱治疗后小鼠的脾脏和胸腺质量减轻 ,其中以脾脏变化更为明显 (P<0 .0 1) ,病理切片显示胸腺皮质变薄 ;苦参碱不能提高荷瘤小鼠血清 IL - 2和 IL - 12水平 (P>0 .0 5 )。结论　苦参碱在体内具有较强的抗肿瘤作用 ,但在体内、体外都表现出一定的免疫抑制作用 ,显示苦参碱的抗肿瘤活性不是通过提高机体的免疫功能来实现的。     

博落回总碱对肝癌细胞的毒性作用和体内抗肿瘤作用

OBJECTIVE: To observe the cytotoxic effects in vitro and antitumor effects in vivo of total alkaloid of Macleaya cordata. METHODS: MTT assay was used to assess the proliferation of Hep3B and H22 cells in vitro treated with the alkloid, and the inhibitory effects of the alkaloid on H22 and S180 tumors were observed in mice with subcutaneous inoculation of the tumor cells. RESULTS: The total alkaloid significantly inhibited the proliferation of human Hep3B cells and murine H22 cells in a dose-dependent in vitro. IC(50) of the alkloid in 3 repeated experiments was 3.04, 3.98 and 2.98 mug/ml respectively in Hep3B cells, and was 2.89, 2.21 and 2.34 mug/ml in H22 cells. In the tumor-bearing mice, the alkaloid inhibited the development of H22 tumor and prolonged the survival of S180 tumor-bearing mice. At the daily dose of 1, 2, and 4 mg/kg.b.w (i.p.) and 4 mg/kg.b.w. (i.g.) for 10 days, the inhibition rates of the alkaloid on H22 tumor in 3 repeated experiments were 18.6%, 35.1%, 44.9% and 7.9% respectively, and the rates of survival prolongation of the tumor-bearing mice were 24.8%, 48.9%, and 52.7%, respectively. CONCLUSION: The alkloid possesses antitumor effects both in vitro and in vivo.     

融合基因GM-CSF/IL-2转基因瘤苗在肝癌特异性免疫治疗中的应用

目的 制备人白细胞介素2(hIL-2)与鼠粒-单核细胞集落刺激因子(mGM-CSF)融合基因修饰的H22肝癌全细胞瘤苗,探索融合基因GM.CSF/IL-2转基因瘤苗,在肝癌主动免疫治疗中特异性抗肿瘤作用.方法 用含hlL-2与mGM-CSF融合基因的真核表达载体在体外转染H22肝癌细胞,制成疫苗,皮下接种Balb/c小鼠,同时建立Balb/c小鼠荷瘤模型,ELISA法检测H22/pcDNA3.1( ).GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(分别接种H22/pcDNA3.1( )瘤苗、H22瘤苗、PBS)血清中IL-10、IFN- γ水平,观察小鼠存活期;同时用51Cγ释放法测定H22/pcDNA3.1( )-GM-CSF/IL-2瘤苗免疫组小鼠与各对照组小鼠(单纯荷瘤组、正常组)脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤活性.结果 成功制备了含有hIL2与mGM-CSF融合基因的H22肝癌瘤苗,转基因瘤苗免疫组小鼠的脾细胞在体外对亲本H22肝癌细胞的杀伤率为38.3%,显著高于对照组小鼠的脾细胞对亲本H22肝癌细胞的杀伤率(分别为13.6%和7.5%),也高于其对S180细胞的杀伤率(9.1%)(P＜0.05).转基因瘤苗免疫组小鼠血清IFN-γ较对照组明显升高(P＜0.01),血清IL-10较对照组明显降低(P＜0.01).同时,转基因瘤苗免疫组小鼠生存期亦有明显延长.结论 转染hIL-2与mGM-CSF融合基因的同系肿瘤细胞瘤苗可激发特异性细胞介导的免疫反应,改善抗肿瘤免疫反应,延长荷瘤小鼠生存期.     

生存素反义核酸抑制肝癌细胞增殖及对5-FU的增敏作用

目的探讨生存素反义核酸抑制肝癌细胞增殖及对5-FU的增敏作用。方法WST法、台盼蓝拒染法、克隆形成抑制实验检测聚乙烯亚胺携带生存素反义核酸(PEI-ASODN)对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用。建立小鼠肝癌腋下移植瘤和腹水瘤模型,检测PEI-ASODN联合5-FU对肝癌移植瘤小鼠瘤重、瘤体积的改变,对肝癌腹水瘤小鼠平均存活天数的影响。结果不同浓度的PEI-ASODN作用于SMMC-7721细胞48h后,0.75μmol/L的PEI-ASODN分别作用细胞24、48、72和96h后,均能对细胞产生明显的抑制作用;PEI-ASODN对细胞的克隆形成也有显著的抑制作用,与细胞对照组相比有显著的统计学差异(P<0.01)。肝癌腋下移植瘤小鼠,各治疗组的瘤重、瘤体积均得到不同程度的抑制,其中以联合用药组(5-FU+PEI-ASODN)最明显,瘤重抑瘤率高达56.91%,瘤体积抑制率高达57.83%;肝癌腹水瘤小鼠模型,联合用药组生命延长率为94.09%,与生理盐水组相比,具有显著性差异(P<0.01)。结论聚乙烯亚胺携带生存素反义核酸(PEI-ASODN)可显著抑制肝癌细胞生长,并可提高荷肝癌小鼠对5-FU的敏感...     

不同治疗方案对H22肝癌荷瘤小鼠的疗效比较

摘要 目的：比较常用治疗方案对H22肝癌荷瘤小鼠的疗效。方法：采用H22腋下实体瘤昆明种小鼠及小鼠标准化、计量化辨证方法,观察复合化疗方案局部注射、索拉非尼口服,及两者联合应用等对小鼠抑瘤率和证候的影响。结果：所选用3个治疗方案均具有一定的抑瘤作用,综合对气血阴阳证候的影响及胸腺和脾脏重量,以复合化疗方案局部注射联合索拉非尼口服最好。结论：局部介入联合索拉非尼口服方案疗效较好。     

黄蘑多糖对H22荷瘤小鼠肿瘤生长及其VEGF表达的影响

目的：观察黄蘑多糖对H22（小鼠肝癌细胞系）荷瘤小鼠的抑制肿瘤效果,并探讨该机制是否与提高机体免疫力和抑制肿瘤血管生成有关。方法：采用腋下接种癌细胞悬液建立荷瘤小鼠模型,造模成功24 h后灌胃给药,连续给药12 d后,处死动物,剥离瘤块、胸腺、脾脏并分别称重,计算抑瘤率、胸腺指数、脾指数;眼球取血计数有核细胞数;以冰冻切片免疫组织化学法检测各组瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）表达程度。结果：黄蘑多糖各组的肿瘤重量均低于模型组,其中,中、高剂量组的抑瘤效果显著（P〈0.05）,且各项免疫指标显著高于环磷酰胺组（CTX组）和模型组（P〈0.01或P〈0.05）;黄蘑多糖各组的VEGF表达率显著低于模型组（P〈0.01）,黄蘑多糖低、中剂量组VEGF的表达与CTX组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,高剂量组与CTX组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：黄蘑多糖对H22移植瘤的生长有一定抑制作用,可降低瘤组织中VEGF的表达,亦可作为生物反应调节剂,通过增强机体免疫功能等作用达到抗肿瘤的功效。     

蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响

目的 观察蜂毒素对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响，探讨其抗肿瘤的可能作用环节。方法 以MTT法测定蜂毒素体外对小鼠肝癌H22细胞增殖的影响，运用流式细胞术分析增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，并观察iv蜂毒素对荷瘤小鼠的抑瘤作用。结果蜂毒素对H22细胞的抑制作用随药物浓度增加而增强；蜂毒素作用于H22细胞后，细胞PCNA平均荧光强度低于对照组；iv蜂毒素对小鼠皮下H22肝癌细胞具有明显的抑制作用，抑瘤作用随浓度增加而增强。结论蜂毒素在体内外对小鼠肝癌H22细胞增殖均有明显的抑制作用，下调细胞PCNA表达可能是其作用环节之一。