蚊AFLP技术体系的建立

目的探讨蚊扩增片段长度多态性（Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP）的各种影响因素,建立并优化蚊AFLP反应体系。方法以淡色库蚊成蚊为研究材料,对AFLP反应中的关键步骤,即多氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid,DNA）提取、酶切及连接反应、预扩增和选择性扩增体系进行探索。结果酶切及连接反应5h完成,将产物稀释10倍进行预扩增得到清晰的弥散带;预扩增产物稀释10倍及调整选扩循环数,可获得带型丰富且重复性好的结果。结论蚊AFLP反应体系的建立为进一步分子生物学研究提供了基础。     

大连市伤寒沙门菌扩增片段长度多态性分型

目的 运用扩增片段长度多态性(AFLP)技术分析辽宁省大连市2000～2006年伤寒沙门菌分离株的多态性及遗传关系.方法 采用PstⅠ/MseⅠ型内切酶,选择9种引物组合对30株不同来源的菌株进行AFLP分子分型.结果 30株不同来源的伤寒沙门菌分为29个AFLP基因型,呈现丰富的多态性.结论 AFLP技术是一种兼具有效性和效率性,适用于伤寒沙门菌分子流行病学研究.     

辽宁地区伤寒沙门菌的扩增片段长度多态性分析

目的：分析辽宁省不同城市和大连地区2000～2004年伤寒沙门菌的同源性以及在遗传学上的关系。方法：实验采用EcoRI／MseⅠ型限制性内切酶、选择7种引物组合对25株不同地区和不同时间的伤寒沙门菌菌株进行AFLP分型。结果：25株伤寒沙门菌分为16个基因类型，不同来源的菌株呈现多态性分布；大连地区不同年份的15株菌存在多达14个多态型性；而其他3个城市共10株菌仅存在2个多态性，且遗传距离非常相近。结论：AFLP可以通过对内切酶组合的选择和特异性引物上选择性碱基组合的设计优化实验条件；AFLP是伤寒沙门菌的分子流行病学研究中一种十分有效的手段。     

用聚合酶链反应检测伤寒患者血液中的伤寒沙门氏菌

作者报告了用扩增伤寒患者血液中伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因检测伤寒沙门氏菌DNA的聚合酶链反应(PCR)。用三种试验进行PCR。首先,扩增从沙门氏菌和其它细菌分离的DNA,以试验PCR产物的特异性;其次,扩增从伤寒沙门氏菌ATCC19430分离的连续稀释DNA,确定PCR的最低可测水平,第三,用从12例     

扩增片段长度多态性分析用于霍乱弧菌分子分型的方法建立和应用评价

目的建立霍乱弧菌的基于红外荧光标记引物的扩增片段长度多态性(AFLP)分型方法,评价脉冲场凝胶电泳(PFGE)和AFLP对霍乱弧菌的分型能力。方法选择PFGE带型均不相同的47株霍乱弧菌作为评价菌株,建立AFLP对于霍乱弧菌的分型方法;确定操作程序后选择83株分离自1962-2005年11个省的霍乱弧菌,进行AFLP和PFGE对于霍乱弧菌分型能力的比较。AFLP分型方法采用了红外荧光标记PCR引物,利用LI-COR4300自动测序仪完成电泳、SagaMX软件对电泳图谱进行编辑。PFGE采用PulseNet提供的标准化程序。结果AFLP用于霍乱弧菌分型时选择性引物携带碱基数为1,最优引物组合为EcoRⅠ-G／MseⅠ-T,AFLP分型实验的重复性达到99．2％。AFLP将83株霍乱弧菌分为52个型别,D值为0．9545;PFGE将此83株菌分为44种带型,D值为0．9251。结论优化固定了AFLP对于霍乱弧菌的分型程序,重复性好;AFLP比PFGE具有更好的分型能力,能够用于分离菌株的分子分型。结合已成为实验室网络监测标准分析方法的PFGE,可对分离株做更细致的分型比较。     

人防御素-5基因毕赤酵母表达载体的构建及鉴定

[目的]构建人防御素5(HD-5)基因的毕赤酵母表达载体并加以鉴定。[方法]采用PCR技术从人cDNA文库中扩增HD-5基因片段,将HD-5基因扩增产物和毕赤酵母表达载体pPICZαA用EcoRⅠ和XbaⅠ双酶切后连接构成重组质粒,然后转化到E.coliTop10中,筛选阳性克隆,并进行PCR、酶切和序列鉴定。[结果]重组质粒经酶切获得HD-5基因片段大小正确,经序列测定证实HD-5基因正确插入pPICZαA中。[结论]成功构建人防御素5基因的毕赤酵母表达载体。     

基于酪胺信号放大和金标银染的致病菌生物芯片检测方法的灵敏度评价研究

目的对基于酪胺信号放大和金标银染技术的致病菌可视化生物芯片检测方法进行评价。方法以伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌作为检测对象,建立生物芯片的TSA-金标银染高灵敏度可视化检测技术,优化试剂浓度、反应温度、温育及银染时间等检测条件,比较了TSA-金标银染与单独金标银染、TSA-金标银染与TSA-荧光的检测灵敏度。并对进口水产品样品进行了伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌的应用检测。结果检测条件优化结果为：Streptavidin-HRP稀释比例为1：1 500,Biotin-Tyramine稀释比例为1：200＋0.5%H2O2,Streptavidin-Nanogold稀释比例为1：100;温育温度37℃,温育时间20 min,银染显色时间8～10 min。TSA-金标银染比单独金标银染的检测灵敏度提高10～100倍,与TSA-荧光的检测灵敏度相同,达到103CFU/ml。检测进出口水产品样品伤寒沙门氏菌和痢疾志贺菌结果与SN标准方法检测结果一致。结论基于酪胺信号放大和金标银染技术的致病菌可视化生物芯片检测方法,为致病菌低成本快速检测提供了新思路。     

GPC3融合蛋白的表达及鉴定

目的构建人类磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican-3,GPC3)重组真核表达载体,并进行蛋白表达,为后续研究提供基础。方法以人类肝脏c DNA文库为模板扩增出GPC3基因序列,将扩增产物与p MD-18 simple T载体进行连接构建出T-GPC3克隆载体,用EcoRⅠ、Bam HⅠ对T-GPC3克隆载体和pc DNA4.1空载体进行双酶切,从T-GPC3克隆载体上获取GPC3基因片段,用T4连接酶将GPC3基因片段连接到pc DNA4.1酶切后的载体上,构建出pc DNA4.1-GPC3真核表达载体;将构建好的载体再次测序,并进行蛋白表达及WB的鉴定。结果扩增GPC3的PCR产物长度为1 740 bp,质粒测序结果经与NCBI网站比对后序列完全一致,说明pc DNA4.1载体中正确插入了目的片段。Western blotting分析发现有相对分子质量大小约为66 k D的蛋白条带,蛋白经鉴定后亦为GPC3蛋白。结论成功地构建了真核表达载体pc DNA-GPC3并获得了GPC3蛋白。     

肝豆状核变性基因8号外显子突变DNA分析方法的研究

目的对肝豆状核变性(又称Wilson病,WD)基因的突变热点外显子8进行MspⅠ酶切、DNA测序,进而对实验中的方法进行研究.方法对102 例病人和20例对照正常人提取基因组DNA,PCR扩增ATP7B第8号外显子,扩增产物进行MspⅠ酶切反应,并进行双向 DNA直接测序;讨论分析PCR扩增、MspⅠ酶切方法学上的改进,并对测序结果与临床表型做相关研究.结果102例WD病人,在反复多次改进实验方法后,发现35例存在MspⅠ酶切异常,测序示8号外显子Arg778Leu纯合突变,占所有WD病人的34.31%,其中 1例伴Leu770Leu多态性;对照组未检出突变.结论改进实验方法后发现WD突变热点8号外显子中Arg778Leu为主要突变形式,PCR-MspⅠ酶切反应可作为WD病人ATP7B8号外显子突变的筛选方法,直接测序是确定8号外显子突变位点的可靠方法.     

采用脉冲场凝胶电泳和自动化核糖体分型技术分析MPN法分离出的副溶血性弧菌的同源性

目的对15管MPN法分离的78株副溶血性弧菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)和自动化核糖体分型(RP)研究,以确定其同源性。方法EcoRⅠ酶切DNA进行核糖体分型;限制性内切酶SfiⅠ和NotⅠ在50℃和37℃酶切包被的染色体DNA,进行脉冲场凝胶电泳分析,两者的结果均用BioNumerics软件进行聚类分析。结果78株副溶血性弧菌用EcoRⅠ、SfiⅠ、NotⅠ酶切后各产生64、68、71种带型,同一样品中分离的菌株有的带型完全相同,但大部分带型不同,且划分到不同的群中。结论PFGE是一种快速、有力、重复性好的分型技术,而且分辨能力要高于核糖体分型;在今后的溯源研究中,要考虑对可疑食品采用MPN定量法挑取多个菌落进行亲缘关系分析,防止漏检。     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

政府公共财政支出分配公平性研究进展

政府公共财政支出是社会再分配的一种形式，其目的是促进社会公平。因此，政府的公共财政支出应该具有较强的目标针对性，应该向社会贫困人群倾斜，使其从中受益。本文通过查阅国内外政府公共财政支出分配公平性的相关文献资料。阐述了相关研究的进展情况，井着重探讨了政府公共财政支出分配公平性的内涵、研究范围、测算方法和研究意义。以及实际研究中存在的问题，最后提出我国政府公共财政支出分配公平性的研究方向和需要进一步完善的地方。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。