胚胎脊髓组织植入成年鼠损伤脊髓的形态学研究

利用胚胎脑组织移植术,观察胚胎大鼠脊髓组织在同种成年鼠损伤脊髓内存活,生长情况,结果表明,将孕１３～１６ｄ的胚胎大鼠脊髓组织移植入成年鼠脊髓Ｔ１１－Ｌ１背外侧组织创伤后３～５ｄ的腔隙内,胚胎脊髓组织在能在宿主鼠脊髓内存活,并生长发育成为成熟鼠脊髓组织构筑,移植组织存活率５０％,胚胎鼠脊髓移植组织的存活受宿主脊髓损伤程度,供体胚龄,移植时间和部位,移植组织营养及供血等因素的影响。     

大鼠胚胎脊髓植入对成年鼠急性脊髓损伤的功能修复作用

把E_(14)胎鼠脊髓移植到成鼠损伤脊髓后7、15、30、60、120和240 d后,作者测定了宿主鼠脊髓SSEP和SMEP。并观察了其后肢的临床运动机能。同时用单纯脊髓损伤和髓内肌肉移植鼠作为实验对照。结果表明,移植后30 d时,宿主鼠的运动机能基本恢复正常。但诱发电位测定显示,无论是SSEP还是SMEP,其潜伏期直至术后240 d时才恢复正常。与此同时,对照组大鼠的两种诱发电位也在术后呈逐步恢复的趋势。作者认为,胚胎脊髓在成鼠脊髓的机能修复中可能具有一定的促进作用,但如何证实两者间的机能联系,仍需借助诱发电位测定以外的更高技术手段。     

神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的：探讨神经干细胞移植治疗脊髓损伤的新方法，为治疗脊髓功能障碍性疾病打下基础，方法：制作脊髓横断大鼠模型，造成大鼠下肢瘫痪，分别在损伤急性期和损伤3周后移植胎鼠组织神经干细胞，观察移植后的动物行为变化，脊髓神经电生理变化和脊髓组织形态学变化，结果：细胞移植后第8d即可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复，2－3周后可出现爬行，4周后后肢活动沃跃；对照组瘫痪的肢体无任何恢复。脊髓诱发电位部分出现，动作电位波幅较高，对照组未出现诱发电位，且动作电位波幅明显减低，脊髓移植肉眼可见有增生的组织充填，镜下有大量新生的细胞，表现为神经元和神经胶质细胞阳性染色，结论：神经干细胞移植可使脊髓横断大鼠运动功能恢复，有望成为治疗脊髓损的有效手段。     

神经干细胞在脊髓损伤修复中的应用研究进展

脊髓损伤修复是世界性的难题与研究重点,神经干细胞的发现给神经损伤的修复带来了新的希望。近年来研究表明具有多向分化潜能的神经干细胞存在于神经系统的多个区域,且外源性神经干细胞能够适应性地与宿主中枢神经整合。本文就脊髓损伤的机制、神经干细胞的基本特性及其在脊髓损伤修复中潜在应用前景进行了综述。     

神经干细胞移植治疗损伤脊髓的实验研究

目的 探讨异体胚胎神经干细胞(neural stem cell，NSC：)移植修复治疗损伤脊髓的疗效。方法 由胚胎SD鼠大脑海马区脑组织培养出NSC，经传代、5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU)标记后植入按Allen法制成的SD鼠的损伤脊髓内，术后观察鼠的行为改变、斜板试验及改良运动功能Tarlov评分评价功能恢复；体感诱发电位(SEP)和磁刺激运动诱发电位(MEP)监测脊髓感觉及运动电位传递；光镜及电镜观察植入区组织结构；以示踪剂麦胚凝集素。辣根过氧化物酶(WGA-HRP)显色观察轴突的生长及功能恢复；以免疫组化方法检测神经胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和饱和硫蛋白(S100)阳性细胞。结果 NSC在损伤脊髓中能成活并分化为神经元及神经胶质细胞，有轴突形成，分化倾向于神经元，能迁移1cm距离。WGA—HRF，能被运输到挫伤以外区域，运动电位能传递到损伤区远端，行为学观察受试组优于对照组。结果 异体胚胎NSC能在损伤区替代受损的神经元及神经胶质细胞，形成神经轴突联系，使损伤的脊髓功能得到一定程度的恢复。     

胚胎脊髓组织植入成年鼠损伤脊髓的形态学研究

利用胚胎脑组织移植术,观察胚胎大鼠脊髓组织在同种成年鼠损伤脊髓内存活、生长情况。结果表明,将孕 １３～１６ｄ 的胚胎大鼠脊髓组织移植入成年鼠脊髓 Ｔ１１ Ｌ１ 背外侧组织创伤后 ３～５ｄ 的腔隙内,胚胎脊髓组织能在宿主鼠脊髓内存活,并生长发育成为成熟鼠脊髓组织构筑。移植组织存活率为 ５０％ 。胚胎鼠脊髓移植组织的存活受宿主脊髓损伤程度、供体胚龄、移植时间和部位、移植组织营养及供血等因素的影响。     

转基因神经干细胞在脊髓损伤修复中的应用

脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是神经科学领域致死率、致残率最高的创伤之一,可直接导致神经元坏死、神经轴突中断、脊髓结构严重破坏.损伤后的微环境又有诸多不利于脊髓神经轴突再生的因素,如多种神经营养因子的缺乏以及胶质疤痕和多种抑制再生的物质存在等.近年来,随着对脊髓损伤机制、病理生理及损伤后局部微环境变化研究的不断深入,已将具有自我更新能力和多元分化潜能的神经干细胞(neural stem cells,NSCs)运用于SCI的实验治疗,并取得良好效果,而转基因NSCs能克服神经营养因子水平低,移植后存活时间短等不足,使得人们对攻克SCI越来越充满信心.现就转基因NSCs应用于SCI修复的研究进展作一综述.     

脊髓损伤的干细胞移植治疗

以前一般认为,成年哺乳动物的中枢神经系统（central nervous system,CNS）在损伤后,死亡的神经元不能通过再生而被替换,损伤的轴突也不能再生,因此丧失的功能不能恢复。在成年哺乳动物脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后,由于脊髓内的神经元大量死亡和萎缩,加上轴突不能再生,脊髓丧失了感觉和运动功能。近年来的研究发现CNS内受损的神经元在一些治疗因素的作用下能够存活,丧失的功能可得到部分恢复。另外,研究也发现在成年哺乳动物的CNS中存在有神经干细胞,能产生新的神经元代替死亡的神经元。目前脊髓损伤后的修复治疗研究取得了许多进步,其中比较有希望的治疗方法是细胞移植治疗。移植的细胞具有分泌促进轴突再生的因子、为轴突的再生提供桥梁或替换受损的神经元等的作用,这些研究的进展为中枢神经系统损伤特别是脊髓损伤的治疗带来新的希望,其中以干细胞移植治疗的应用前景最为可观。干细胞是指具有自我复制能力、能够分化成为至少一种功能细胞以上的早期未分化细胞。根据干细胞分化潜能的大小,可分为全能干细胞、多能干细胞以及只能向一种细胞类型分化的单能干细胞。     

神经营养因子修饰胚胎脊髓神经干细胞移植后脊髓损伤大鼠的功能恢复和损伤局部基因表达

目的 探究神经营养因子修饰胚胎脊髓神经干细胞移植后脊髓损伤大鼠的功能恢复与损伤局部基因表达.方法 于2016年8月从孕18 d的30只大鼠胚胎脑部皮质中提取适量的脊髓神经干细胞,对其进行体外培养,然后采用巢蛋白免疫荧光染色方法进行鉴定,将鉴定后的胚胎脊髓神经干细胞植入成年的大鼠损伤脊髓,并将其分为3组,对照组10只、神经干细胞组10只、神经干细胞加胚胎细胞衍生的神经因子移植10只,对胚胎神经干细胞的存活进行观察分析,并对大鼠的损伤后的功能恢复情况以及局部基因表达进行比较分析.结果 经过胚胎神经干细胞移植后,7、21 d大鼠的运动功功能评分分别为(26.37±4.62)分、(39.55±2.42)分,对照组7、21 d的运动功能评分分别为(25.62±2.523)分、(32.43±2.46)分,差异有统计学意义(P<0.05),脊髓损伤局部空洞面积也得到了减小(P<0.05),在胚胎神经干细胞中加入修饰胚胎脊髓的神经营养因子后,大鼠的运动功能恢复与局部损伤基因状况改善更加明显,神经干细胞不仅存活,而且能够向损伤头尾处迁移4 mm.结论 采用神经营养因子修饰胚胎脊髓神经干细胞移植后,不仅能够使神经细胞存活,迁移,而且能促进大鼠功能的有效恢复.     

骨髓基质干细胞及其在脊髓损伤修复中的应用前景

骨髓基质干细胞（MSCs）是成年动物或人骨髓中的非造血组织干细胞,具有多能干细胞的特点,可向多个方向分化．在特定条件下可诱导分化为神经元。近几年的实验研究发现,MSCs在体内及体外一定条件下可定向分化为神经元和胶质细胞,在体内能与神经干细胞一样迁移至脊髓并进行整合。动物实验显示MSCs在治疗脊髓损伤有着良好的应用前景。     

骨髓间充质干细胞移植促进大鼠损伤脊髓的功能恢复

 目的研究骨髓间充质干细胞(MSCs)移植对大鼠脊髓损伤的作用。方法将大鼠MSCs移植到大鼠脊髓损伤处,移植后评估大鼠行为学改变,免疫组织化学染色法观察BrdU标记的MSCs在脊髓损伤处存活情况,辣根过氧化物酶(HRP)逆行示踪,观察脊髓损伤处神经通路的重构建,皮层体感诱发电位(CSEP)测定脊髓损伤处神经通路传导功能的恢复。结果术后移植组评分均高于损伤组,移植组大鼠脊髓损伤区远端检测到BrdU阳性细胞,脊髓损伤近侧端检测到HRP阳性细胞,CSEP波形恢复但波幅减低,潜伏时延长。结论MSCs可在损伤区存活并分化为神经元,在损伤局部形成神经元通路,使损伤脊髓的远端和近端建立联系,神经纤维传导功能部分恢复。     

Co-transplantation of Neural Stem Cells and Schwann Cells within Poly (lactide-co-glycolide acid) Scaffolds Facilitates Axonal Regeneration in Hemisected Rat Spinal Cord

背景 为了促进脊髓损伤后的轴突再生,已经开发了各种组织工程学方法。我们的目的是研究是否神经干细胞能在PLGA支架中存活,与雪旺细胞共移植时被诱导向神经元分化,并形成突触联系,最终促进轴突及髓鞘化和运动功能。 方法 神经干细胞和雪旺细胞种植于PLGA取向支架,然后移植于半横断大鼠脊髓。 对照组大鼠也半横断后,但移植的支架中仅有神经干细胞或无细胞。分析神经干细胞存活、迁移、分化及突触形成情况,轴突再生及髓鞘化情况和运动功能。 结果 有神经干细胞存活下来,但是大部分迁移到邻近脊髓而死亡。与雪旺细胞共移植,神经干细胞存活情况改善,并且可被诱导向神经元分化,还肯能形成突触连接。当种植细胞后,轴突再生和髓鞘化情况及运动功能改善了。实验组的运动诱发电位恢复率及波幅显著高于对照组。同侧二次半横断后运动诱发电位再次消失,运动功能消失数天后恢复。但是对侧二次半横断后双侧运动功能完全消失。 结论 神经干细胞可在PLGA支架内存活。在体内,雪旺细胞可促进神经干细胞存活,并且向神经元分化,后者甚至可能形成了突触连接。种植了细胞的支架促进了轴突再生和髓鞘化及运动功能恢复。但是再生轴突对运动功能的恢复有限。     

神经干细胞对谷氨酸兴奋毒性损伤神经元的保护作用

目的 研究未分化状态的神经干细胞对损伤脊髓神经元的直接保护作用。方法 建立体外大鼠脊髓神经元谷氨酸损伤细胞模型，在实验组中加入神经干细胞，对照组中加入培养液。通过MTT比色试验、彗星试验检测神经干细胞对神经元的保护作用。结果 MTT比色试验表明实验组神经元活力明显高于对照组，彗星试验表明实验组拖尾率和彗尾长度均低于对照组。结论 神经干细胞能有效保护谷氨酸损伤的脊髓神经元，其作用可能是通过自分泌、旁分泌因子产生的。     

神经干细胞与嗅鞘细胞移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）与嗅鞘细胞（OECs）移植对脊髓全横断大鼠后肢运动功能的影响．方法SD大鼠行T11脊髓全横断术后，随机分为NSCs移植组、OECs移植组、联合移植组和对照组．术后将取自绿色荧光蛋白（GFP）转基因胚胎小鼠海马和新生小鼠嗅球的、经培养鉴定后的NSCs和OECs，以明胶海绵做载体分别或联合移植到各移植组动物脊髓损伤处，对照组不移植细胞，用BBB评分法评价1～8周大鼠后肢运动功能恢复的程度．8周后移植各组动物行左心室主动脉内4％多聚甲醛灌注，取横断处上下各约1mL脊髓，连续冰冻切片（片厚20tam），置于荧光显微镜下观察切片中有无绿色荧光细胞，确定NSCs及OECs的存活情况．结果NSCs及OECs细胞在移植脊髓损伤后能存活，并向周围迁移；术后3和4周末，NSCs组、OECs组和联合移植组大鼠运动功能均较对照组有明显改善（P〈0．05）；且3周时，联合移植组和OECs组比NSCs组后肢运动功能变化显著（P〈0．05）；而联合移植组和OECs组比较后肢运动功能未见显著差别（P〉0．05）．绪论NSCs、OECs和联合移植在早期均可促进脊髓全横断大鼠运动功能恢复；OECs组、联合移植组效果均优于NSCs组；联合移植对大鼠运动功能恢复在早期没有显现最佳作用．     

骨髓基质干细胞对急性脊髓损伤大鼠模型神经功能修复的影响

目的探索骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）体外定向诱导分化为神经细胞后移植治疗急性脊髓损伤动物模型的疗效。方法对BMSCs进行体外诱导,并鉴定。将模型大鼠分为3组,将诱导及未诱导的BMSCs和生理盐水分别注入模型鼠脊髓半切点附近,在3个月内用BBB评分法对治疗情况进行评价。结果BMSCs体外诱导后的细胞经免疫组化检测可证实为神经细胞;进行细胞移植的两组动物死亡率明显下降,神经功能有明显恢复（P〈0.05）;并且BMSCs诱导后移植组神经功能恢复较未诱导组明显（P〈0.05）;而生理盐水组移植前后评分变化不明显。结论BMSCs诱导组治疗脊髓损伤模型的疗效总体好于未诱导的BMSCs组,前两组的疗效均好于生理盐水组。     

大鼠胚胎脊髓源性神经干细胞的培养和分化

目的探讨大鼠脊髓源性胚胎神经干细胞体外分离培养增殖及分化,为进一步的实验研究提供基础。方法取孕14~16 d的SD大鼠胚胎脊髓在条件培养基中培养增殖传代分化,用神经干细胞特异性抗体—巢蛋白(Nestin)鉴定克隆细胞,用特异性的单克隆抗体鉴定克隆球诱导分化后的细胞。用Brdu免疫荧光对神经干细胞传代能力检测。结果获得了大量能自我增殖并分化的神经干细胞,分化后主要产生神经元特异性微管相关蛋白染色阳性的神经元质纤维酸性蛋白阳性的星型胶质细胞和少突胶质细胞三种神经组织细胞。Brdu免疫荧光显示神经球中绝大多数细胞为Brdu阳性细胞,其细胞核中可见荧光标记物。结论大鼠胚胎脊髓能分离、培养出神经干细胞,并能诱导分化为神经元、星型胶质细胞和少突胶细胞。     

神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响

目的观察神经干细胞移植对脊髓损伤后大鼠行为和神经组织学的影响。方法建立脊髓损伤动物模型,脊髓内注射神经干细胞,采用改良Gale联合评分法评价神经功能,通过H—E染色及尼氏体染色观察脊髓灰白质及神经元的组织学改变。结果脊髓损伤神经干细胞移植组大鼠感觉、运动功能恢复明显（P〈0．05）;灰、白质中出现小片状出血,神经元肿胀、破裂、溶解,尼氏小体减少程度较脊髓损伤组轻,损伤坏死区胶质细胞较脊髓损伤组增多（P〈0．05）。结论使用神经干细胞移植能减轻神经细胞坏死程度,减轻脊髓损伤,并使损伤坏死区胶质细胞增多,促进脊髓损伤的修复,对脊髓损伤大鼠感觉、运动功能的恢复有促进作用。     

Effects of Co-grafts Mesenchymal Suspension in the Repair of Spinal Stem Cells and Nerve Growth Factor Cord Injury

To investigate effect of the transplantation of mesenchymal stem cells （MSCs） in combination with nerve growth factor （NGF） on the repair of spinal cord injury （SCI） in adult rats, spinal cord of adult rats （n= 32） was injured by using the modified Allen＇ s method. One week after the injury, the injured cords were injected with Dubeeeo-modified Eagles medium （DMEM , Group Ⅰ ）, MSCs （Group Ⅱ ）, NGF （Group Ⅲ）, and MSCs plus NGF （Group Ⅳ）. One month and two months after the injury, rats were sacrificed and their injured cord tissues were sectioned for the identification of the transplanted cells. The axonal regeneration and the differentiation of MSCs were examined by immunoeytoehemieal staining. At the same time, rats were subjected to behavioral tests by using the open-field BBB scoring system. Immunoeytoehemieal staining showed that axonal regeneration and the transplanted cells partially expressed neuron-specific nuclear protein （NeuN） and glial fibrillary acidic protein （GFAP）. At the same time, significant improvement in BBB locomotor rating scale （P〈0. 05） were observed in the treatment group. More importantly, further functional improvement were noted in the combined treatment group. MSCs could differentiate into neurons and astroeytes. MSCs and NGF can promote axonal regeneration and improve functional recovery. There might exist a synergistic effect between MSCs and NGF.     

Effects of Co-grafts Mesenchymal Stem Cells and Nerve Growth Factor Suspension in the Repair of Spinal Cord Injury

Endogenous repair ability of mammalsisli mit-ed after the damage of central nervous system.It isdifficult to produce the new neurons for the dam-aged adult central nervous system,and neither canthe damaged systemstart the functional axonal re-generation. At present ,a good many methods arebelieve to be able toi mprove the damagedlocal mi-croenvironment , such as cell transplantation andprovision of exogenous neurotrophic factors ,whichare ai med at promoting the regeneration of thedamaged spin…