肝硬化患者外周血单核细胞表面TLR4和TLR2表达的临床意义

目的:探讨肝硬化患者外周血中单个核细胞(PBMC)表面Toll样受体4(Toll-likereceptor4,TLR4)、TLR2表达与肝硬化患者细菌感染的关系,观察抗生素治疗对TLR4与TLR2表达的影响.方法:采用三色荧光染色法,荧光素标记的抗TLR2/抗TLR4/抗CD14mAb对42例肝硬化患者及正常人的血液单核细胞表面TLR2、TLR4及CD14分子进行免疫荧光染色,应用流式细胞仪检测.结果:肝硬化腹水组TLR2和TLR4表达(n=30,TLR2,47.65±0.75;TLR4,22.28±0.80)与正常对照组(n=15,TLR2,24.40±2.77;TLR4,14.45±3.23)比较有显著性差异(P<0.05),肝硬化腹水患者治疗前(n=20,TLR2,47.79±0.76;TLR4,28.58±0.79)和治疗后(n=20,TLR2,17.22±2.48;TLR4,12.37±0.35)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化腹水患者与肝硬化无腹水患者组(n=12,TLR2,25.37±1.62;TLR4,14.81±0.29)比较有显著性差异(P<0.05);肝硬化无腹水患者组与正常对照组比较无显著性差异(P>0.05).结论:肝硬化腹水患者TLR4与TLR2的表达显著上调,抗生素治疗后显著下调.     

原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞Toll样受体表达与调节性T细胞相关性分析

目的 探讨原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者外周血单个核细胞(PBMC)Toll样受体2、4、9(TLR2,TLR4,TLR9)表达及PBMC中CD4+ CD25+调节性T细胞(Tregs)特点和影响因素.方法 采用流式细胞术检测PBC患者(52例)和健康对照者(22例)外周血PBMC中TLR2、4、9阳性细胞及Tregs比例,比较其在PBC患者和健康对照者中的差别并分析TLR与Tregs相关性.结果 PBC患者Tregs比例低于健康对照者[(1.53+1.33)vs(4.42±1.43),P＜0.0001],TLR4阳性细胞比例高于健康对照者[(36.95±3.53)vs(32.84±8.06),P=0.003];PBC患者Tregs比例与TLR9阳性细胞比例呈负相关(R2 =0.115,P=0.016),健康对照者Tregs比例与TLR2,4和TLR2,4,9联合表达阳性细胞比例呈负相关(R2=0.326,P=0.007;R2 =0.226,P=0.034).结论 PBC患者外周血PBMC中Tregs比例降低,TLR4表达升高,可能受肝硬化失代偿期腹腔感染的影响.     

HBeAg导致慢性乙型肝炎患者外周血Th1/Th2型细胞因子失衡

目的 探讨HBeAg对慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)功能的调节作用. 方法 以重组的HBeAg体外刺激CHB患者和健康志愿者的PBMC,用流式细胞术和酶联免疫吸附试验法检测其刺激前后Th1/Th2型细胞因子的变化情况,并观察HBeAg对CHB患者PBMC表面细胞程序性死亡受体(PD)1及其配体(PD-L)1表达的影响.两组间资料比较采用独立样本t检验; PD-1/PD-L1表达水平与HBV DNA拷贝数的相关性采用Spearman相关分析.结果 HBeAg刺激后可使HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者CD3+CD4+T淋巴细胞内干扰素(IFN)γ表达水平(0.17％±0.08％与0.17％±0.04％)明显低于未刺激组(0.30％±0.16％与0.32％±0.12％),t值分别为-2.382和-4.190,P值均＜0.01;培养上清液中白细胞介素(IL)-6、IL-10和肿瘤坏死因子α含量明显高于未刺激组(HBeAg阴性CHB患者的t值分别为2.504,3.583和4.324,健康志愿者t值分别为3.542,6.246和5.273,P值均＜0.01).HBeAg刺激PBMC后,HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者CD14+细胞表面PD-L1表达水平分别为13.02％±4.98％和3.10％±2.47％,明显高于未刺激组的5.89％±1.56％和0.97％±0.83％,t值分别为4.815和3.454,P值均＜0.05.基础状态下在HBeAg阳性CHB患者外周血中,CD3+CD4+T淋巴细胞内IFNγ表达水平为0.23％±0.09％,明显低于HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者的0.34％±0.15％和0.35％±0.09％(t=-3.177,P＜0.01 ; t=-4.541,P＜0.01);而IL-4表达水平为0.39％±0.16％,明显高于HBeAg阴性CHB患者和健康志愿者的0.26％±0.12％和0.23％±0.12％,t值分别为3.382和4.393,P值均＜0.01.基础状态下在HBeAg阳性CHB患者外周血中,CDB+T淋巴细胞表面PD-1和PD-L1表达水平明显高于HBeAg阴性CHB患者及健康志愿者(P值均＜ 0.01),CD14+T淋巴细胞表面PD-L1表达水平显著高于HBeAg阴性患者和健康志愿者,t值分别为5.092和5.473,P值均＜0.01 ; HBeAg阴性CHB患者外周血中CD3+T淋巴细胞表面PD-L1表达水平明显高于健康志愿者(t=3.214,P＜0.01).结论 HBeAg可以明显抑制Th1型细胞因子IFN γ的产生,促进Th2型细胞因子IL-6和IL-10分泌,上调外周血PBMC表面PD-1/PD-L1的表达,从而有利于形成对HBV感染的免疫耐受.因此,HBeAg可能是造成慢性HBV感染者体内免疫耐受的重要因素之一.     

慢性HBV感染患者外周血CD4~+CD25~+调节性T细胞表达及其临床意义

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞与慢性HBV感染后不同临床转归和临床特点的相关性。方法在26例慢性乙型肝炎(CHB)患者、15例无症状HBsAg携带者(ASC)和11例肝炎肝硬化(LC)患者和16例正常对照者,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞仪检测CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平。结果CHB组和ASC组的CD4+CD25+调节性T细胞占CD4+T细胞的百分率分别为4.40±2.76%和4.43±2.10%,均高于正常对照组(2.70±0.97%),差异显著(P0.01);CD4+CD25+调节性T细胞的表达水平与HBVDNA水平无相关性(r=0.018,P0.05);在HBeAg阳性与阴性组患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达也无明显的差异(P0.05)。结论慢性HBV感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞水平升高,可能与HBV感染的慢性化有关。     

CD28-T细胞亚群在类风湿关节炎患者外周血和关节液中的表达

目的 探讨CD28-T细胞亚群在类风湿关节炎(RA)患者外周血和关节液中的变化和意义。方法 随机选择RA患者45例,取新鲜抗凝外周血单个核细胞(PBMC),其中15例同时提取关节液单个核细胞( SFMC),以流式细胞技术检测CD28-T细胞数量及其表面可诱导共刺激分子(ICOS)的表达。2 组间比较用独立样本t检验。结果 ①与PBMC相比,RA患者SFMC中CD4+CD28+ ICOS+、CD4+CD28-ICOS+、CD8+ CD28+、CD8+ CD28+ ICOS+T细胞明显升高[(36±19)％与(15±8)％,t=-4.234,P＜0.01;(2.1±2.2)％与(0.6±1.4)％,t=-3.143,P＜0.01;(62±15)％与(47±18)％,t=-2.885,P＜0.01;(9±9)％与(3±3)％,t=-2.131,P＜0.05];CD8+CD28-T细胞明显降低[(38±15)％与(54±18)％,t=2.975,P＜0.01];CD8+ CD28- ICOS+、C1D4+CD28+和CD4+CD28-T细胞无明显变化（P＞0.05）。②同一RA患者SFMC与PBMC相比,CD4+CD28+ICOS+、CD8+ CD28+T细胞明显升高[(38±18)％与(16±10)％,t=-4.065,P＜0.01;(61±16)％与(41±21)％,t=-2.883,P＜0.01];CD8+ CD28-T细胞明显降低[(39±16)％与(59±21)％,t=2.949,P＜0.01]。③缓解期与活动期RA患者相比,PBMC中CD4+CD28-、CD8+ CD28-、CD28-ICOS+T细胞无明显变化（P＞0.05）。结论 RA患者关节液中CD28-T细胞亚群失衡和ICOS分子表达异常,可能是导致RA关节损伤的重要机制。     

乙型肝炎病毒感染不同阶段患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的测定

目的 测定HBV感染不同阶段患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)的频率及标记分子,并分析其与临床指标的相关性.方法 采集79例慢性乙型肝炎(CHB)、12例急性乙型肝炎(AHB)患者、26例无症状HBV携带者(ASC)和20例健康对照的外周血,流式细胞仪分析Treg频率、Treg细胞表面和胞内特征性分子的表达.普通RT-PCR和相对荧光定量PCR测定叉头/翼状转录因子3(Foxp3)在CD25+Treg细胞的表达水平.所有患者及健康对照均经ELISA检测HBV血清标记物水平,实时荧光定量PCR测定血清HBV DNA载量,并进行肝功能检测.结果 总CD4+CD25+T细胞占外周血CD4+T细胞的比率,在各患者组和健康对照组之间差异均无统计学意义(P＞0.05).HBeAg阳性CHB组CD4+CD25高表达T细胞频率(3.42%±0.81%)与HBeAg阴性CHB组(3.19%±0.67%)、ASC组(3.05%±0.64%)比较,差异无统计学意义(均P＞0.05),但明显高于健康对照组(2.72%±0.71%,P=0.034)和AHB组(2.25%±0.54%,P=0.013).CD4+CD25高表达T细胞表面高表达CD45RO、CD25分子,低表达CD45RA,细胞内高表达细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)和Foxp3.各患者组及健康对照组Treg中Foxp3表达水平的差异无统计学意义(P＞0.05).CHB组患者的Treg频率与血清病毒载量呈正相关(r=0.48,P=0.018).结论 Treg可能通过抑制T细胞免疫应答反应而影响病毒清除,并与CHB患者的持续感染密切相关.     

Y链细胞因子对慢性乙型肝炎患者CD8+T细胞上TIM-3表达的调节

目的 通过检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子(TIM-3)在慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)CD8+T细胞上的表达,探讨共用γ链细胞因子对CHB患者CD8+T细胞上TIM-3表达的影响.方法 选取2014年1-5月在第四军医大学唐都医院传染科就诊的CHB初治患者15例,以及健康体检者8例.抽取两组全血,利用Ficoll密度梯度离心法分离出PBMC.分别给予γ链细胞因子白细胞介素(IL)2、IL-7、IL-15、IL-21和人抗CD3/CD28刺激,未刺激孔作为阴性对照.培养4d后,用单克隆抗体染色,采用流式细胞仪检测CD8+T细胞上TIM-3的表达情况.计量资料比较采用成组t检验.结果 与未刺激组相比,TIM-3在CD8+T细胞上表达如下:人抗CD3/CD28和IL-2、IL-15、IL-7刺激组显著升高,分别为(9.629 ±9.916)％,P=0.000 1;(3.817 ±2.694)％,P=0.000 6;(5.772±4.732)％,P=0.005 4;(3.560 ±2.045)％,P=0.030 2.IL-21刺激组表达虽有所增加,为(2.503 ±2.117)％,但差异无统计学意义,P=0.934 l.结论 人抗CD3/CD28、γ链细胞因子中的IL-2、IL-7和IL-15都能够有效上调TIM-3在CHB患者CD8+T细胞上的表达,提示通过抑制它们不仅可以下调TIM-3的表达,而且可能会增强CHB患者体内CD8+T细胞的杀伤作用.     

乙型肝炎肝硬化患者小肠细菌过度生长与外周血树突状细胞异常的相关性

目的:探讨乙型肝炎肝硬化患者树突状细胞(dendritic cells,DCs)表面标志物表达异常与小肠细菌过度生长(small intestinal bacteria overgrowth,SIBO)的关系.方法:乙型肝炎肝硬化患者47例,健康对照者15例,作为研究对象.乳果糖氢呼气试验(lactulose hydrogen breath test,LHBT)评估小肠细菌过生长情况.采集外周血体外诱导、培养DCs,采用流式细胞仪检测DCs表型.多组间比较采用单因素方差分析.结果:47例肝硬化中22例有SIBO,患病率(46.8%)显著高于正常对照组的6.7%(P=0.005).Child-Pugh A、Child-Pugh B、Child-Pugh C的SIBO患病率分别为18.2%、43.8%、65.0%;肝硬化失代偿期(Child-PughB、C级)SIBO患病率55.6%,显著高于肝硬化代偿期(A级)的18.2%(P=0.030).乙型肝炎肝硬化组DCs表面标志物HLA-DR阳性率与对照组比较无显著性差异(P=0.338),CD80、CD83、CD1a的表达率与健康对照组比较有显著性差异(P0.05).肝硬化SIBO阳性组患者CD80、CD83、CD1a表达率(分别为17.22%±2.08%、24.65%±1.47%、14.05%±1.33%)显著低于SIBO阴性组(22.13%±2.34%、34.52%±2.84%、17.40%±3.22%,P0.05),肝硬化SIBO阳性组患者HLA-DR表达率高于SIBO阴性组(81.47%±7.56%vs 70.15%±6.32%,P0.05).结论:肝硬化患者SIBO发生率明显升高,这种小肠菌群的异常与DCs异常存在相关性.     

γ链细胞因子对慢性乙型肝炎患者CD8~+T细胞上TIM-3表达的调节

目的通过检测T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子(TIM-3)在慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血单个核细胞(PBMC)CD8+T细胞上的表达,探讨共用γ链细胞因子对CHB患者CD8+T细胞上TIM-3表达的影响。方法选取2014年1-5月在第四军医大学唐都医院传染科就诊的CHB初治患者15例,以及健康体检者8例。抽取两组全血,利用Ficoll密度梯度离心法分离出PBMC。分别给予γ链细胞因子白细胞介素(IL)2、IL-7、IL-15、IL-21和人抗CD3/CD28刺激,未刺激孔作为阴性对照。培养4 d后,用单克隆抗体染色,采用流式细胞仪检测CD8+T细胞上TIM-3的表达情况。计量资料比较采用成组t检验。结果与未刺激组相比,TIM-3在CD8+T细胞上表达如下:人抗CD3/CD28和IL-2、IL-15、IL-7刺激组显著升高,分别为(9.629±9.916)%,P=0.000 1;(3.817±2.694)%,P=0.000 6;(5.772±4.732)%,P=0.005 4;(3.560±2.045)%,P=0.030 2。IL-21刺激组表达虽有所增加,为(2.503±2.117)%,但差异无统计学意义,P=0.934 1。结论人抗CD3/CD28、γ链细胞因子中的IL-2、IL-7和IL-15都能够有效上调TIM-3在CHB患者CD8+T细胞上的表达,提示通过抑制它们不仅可以下调TIM-3的表达,而且可能会增强CHB患者体内CD8+T细胞的杀伤作用。     

原发性干燥综合征外周血单个核细胞P2X7受体表达及其与焦虑、抑郁的相关性

目的 探讨原发性干燥综合征（primary Sj（o）gren＇s syndrome,pSS）患者外周血单个核细胞（PBMC）表面P2X7受体表达情况及其与焦虑、抑郁的相关性.方法 用汉密尔顿焦虑、抑郁量表对31例pSS患者（pSS组）进行心理评估,分离其PBMC,在有或无ATP刺激后用流式细胞术检测CD14＋PBMC及CD14-PBMC表面P2X7受体的表达水平,并用酶联免疫吸附试验测定ATP刺激前后白介素（interleukin,IL）-1β、IL-6水平.另外,分别设有19例类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者（RA组）及18例单纯焦虑、抑郁障碍患者（焦虑抑郁组）作为阳性对照,20例健康人（健康组）为阴性对照.结果 所有4组受试者PBMC表面均有P2X7受体表达.ATP刺激较未刺激,CD14＋PBMC（单核细胞）表面P2X7受体表达仅在pSS组[（5.6%3±2.48%） vs.（3.98%±1.68%）,t=3.647,P=0.001]显著增高,而在CD14-PBMC（主要为淋巴细胞）表面其表达在pSS组[（16.92%±9.25%）vs.（10.06%±4.35%）,t=4.908,P〈0.001]及焦虑抑郁组[（12.68%±8.15%） vs.（8.07%±5.05%）,t=3.412,P=0.003]均显著增高.ATP刺激后,pSS组CD14＋PBMC表面P2X7受体表达显著高于RA组[（5.63%±2.48%）vs.（4.15%±2.20%）,P=0.044]、焦虑、抑郁组[（5.63%±2.48%） vs.（3.35%±1.80%）,P=0.004]及健康组[（5.63%±2.48%） vs.（3.25%±2.05%）,P=0.002].ATP刺激后,pSS患者PBMC上清中IL-1β水平与刺激后外周血CD14＋PBMC表面P2X7受体表达呈显著正相关（r=0.447,P=0.025）.pSS组存在焦虑的患者占45.2%（14/31）,存在抑郁的患者占32.3%（10/31）.ATP刺激后,CD14-PBMC表面P2X7受体表达与pSS组、焦虑抑郁组焦虑评分（r=0.344,P=0.030）及抑郁评分（r=0.319,P=0.045）呈显著正相关.结论 pSS患者PBMC表面P2X7受体高表达,可能与pSS的发病机制及其合并焦虑、抑郁相关.     

Toll样受体与动脉粥样硬化

固有免疫应答与动脉粥样硬化斑块形成有关.固有免疫识别中的模式识别受体Toll样受体信号通路与动脉粥样硬化发病机理的关系,解释了针对外来病原体的非特异性防御以及内源性炎症分子导致动脉粥样硬化的可能机制.     

Toll-like receptor signaling and atherosclerosis

PURPOSE OF REVIEW: Chronic inflammation and disordered lipid metabolism represent hallmarks of atherosclerosis. Considerable evidence has accumulated to suggest that innate immune defense mechanisms might interact with proinflammatory pathways and exacerbate or perhaps even initiate development of arterial plaques. Until recently the preponderance of such evidence has been indirectly emerging from clinical and epidemiologic studies, with some support from experimental animal models of atherosclerosis. RECENT FINDINGS: Recent data now directly implicate signaling by toll-like receptor 4 and the common adaptor molecule MyD88 in the pathogenesis of atherosclerosis, establishing a key link between atherosclerosis and defense against both foreign pathogens and endogenously generated inflammatory ligands. SUMMARY: Here we briefly review these and closely related studies, highlighting areas that should provide fertile ground for future studies aimed at a more comprehensive understanding of the interplay between innate immune defense mechanisms, atherosclerosis and related vascular disorders.     

Toll样受体与心血管疾病

Toll样受体(TLRs)是在自身免疫反应中起重要作用的类型识别受体家族,是心血管疾病发展与免疫系统之间的桥梁。许多遗传学研究、临床研究和基础研究发现TLRs在动脉粥样硬化、充血性心力衰竭、心肌肥厚发生、发展中起了作用,但尚有许多未知领域有待研究。     

Toll样受体4与动脉粥样硬化

近年来慢性炎性反应与动脉粥样硬化之间的联系逐渐受到重视,而复杂的炎性反应也对动脉粥样硬化定向有效的治疗提出了挑战.目前体内外研究认为,Toll样受体(TLR)途径介导的免疫反应参与动脉粥样硬化的发生和发展,TLR4途径的激动剂和拮抗剂的使用可能成为未来动脉粥样硬化治疗的新靶点.     

Toll样受体4与肝脏疾病

Toll样受体最早在果蝇体内被发现,对果蝇的天然免疫起重要作用。1997年Medzhitov等发现在哺乳动物体内的与果蝇TOll结构相似的受体蛋白,即TOLL样受体（TLRs）。TLRs作为一种重要的模式识别受体,构成了机体抗感染的第一道防线,并对获得性免疫的发生和类型起重要作用。Toll样受体4（TLR4）是最早发现的哺乳动物TLRs蛋白,被认为与革兰氏阴性细菌及其内毒素的识别和激活有关,并在肝脏疾病包括酒精性肝病、病毒性肝炎、肝纤维化等的发生、发展过程中发挥重要作用,成为目前的研究热点之一。本文将从TLR4的结构、信号通路及在各种肝病中的作用分别加以阐述。     

Toll样受体3与肿瘤免疫

Toll样受体3(TLR3)是参与天然免疫的一类重要分子,是病毒双链RNA的模式识别受体.TLR3表达于免疫细胞和某些非免疫细胞如皮肤角质化细胞、纤维母细胞和肺上皮细胞等,近年来发现人肿瘤组织中也有TLR3表达.TLR3配体双链RNA能直接激活自然杀伤细胞,增强抗原特异性CD8+ T细胞应答,促进树突状细胞的抗原呈递激活.双链RNA也能通过激活多条信号转导途径,直接诱导肿瘤细胞凋亡.TLR3激动剂作为免疫佐剂已应用到某些肿瘤的辅助性免疫治疗.TLR3在肿瘤免疫中的作用及其相关分子机制值得进一步深入研究.