超抗原SEB诱导的免疫耐受与细胞因子无关

目的 研究超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)诱导的耐受效应和耐受调节机制.方法 收集SEB活化10天的细胞,充分洗涤后做为效应细胞,分别与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养,用MTT方法测定细胞的耐受性应答反应.正常淋巴细胞在与ConA、LPS、IL-2共同培养的同时添加效应细胞,用MTF方法测定效应细胞的抑制性应答反应功能.流式细胞技术解析耐受性效应细胞类型.结果 效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低(P<0.01,n=3),但保持对ConA的应答反应能力.效应细胞抑制正常淋巴细胞与ConA、LPS和IL-2的应答反应(P<0.01,n=3),尤其抑制ConA和IL-2诱导的细胞增殖.SEB活化的效应细胞中CD8+NK1.1+、TcRVβ8+NK1.1+和CD4+NK1.1+NKT细胞以及TcRVβ8+T、CD8+T细胞数量明显增加(P<0.01和P<0.05,n=4).结论 超抗原SEB诱导的耐受性应答反应是效应细胞的直接作用,与细胞因子无关;这些效应细胞能抑制T淋巴细胞增殖,并保存识别ConA的受体功能.     

雷公藤对IL2的产生和IL2受体表达的抑制作用

观察雷公藤对T淋巴细胞免疫应答的抑制作用,发现雷公藤水煎液抑制小鼠脾细胞和胸腺细胞用ConA诱导的增殖反应,抑制作用与雷公藤剂量呈正比例。5mg/ml雷公藤完全抑制脾细胞的ConA增殖反应;该剂量雷公藤与脾细胞共育2小时不影响脾细胞的活率,细胞经洗涤后对CouA的增殖反应与正常细胞相同。进一步研究,在ConA诱导脾细胞72小时培养的早期加入雷公藤,完全抑制细胞的增殖反应;而在培养后期加入仅见部份抑制作用,推测雷公藤是抑制细胞的活化而不是对细胞的直接毒性作用和对DNA合成的抑制。ConA诱导脾细胞表达IL2受体和分泌IL2。雷公藤的加入完全抑制受体的表达,也抑制但不完全抑制细胞分泌IL2。外源性IL2的加入也不能逆转雷公藤对脾细胞ConA增殖反应的抑制作用,提示IL2分泌的减少与细胞DNA合成的抑制无直接联系。此外,IL2受体表达的受阻与DNA合成受抑制之间的联系还有待深入研究。     

活化脾细胞免疫诱导同系小鼠低反应性——抑制细胞作用的分析

用ConA活化脾细胞主动免疫同系小鼠,观察了免疫鼠脾细胞在体内外对细胞免疫反应的影响。结果表明,免疫小鼠脾细胞对有丝分裂原以及同种抗原的应答能力比正常小鼠脾细胞弱;它既能抑制抗原非特异性的淋巴细胞转化,又能显著抑制MLR中反应细胞的增生,并且通过过继转输给受者可引起同种移植物存活期延长。提示:免疫小鼠的免疫低反应性形成与体内抑制细胞的诱生有关。     

ConA诱导抑制细胞的功能检测

经ConA诱导后,正常人外周血淋巴细胞中出现一种具抑制功能的T细胞,可主动抑制正常人淋巴细胞对ConA的增殖反应。这种抑制细胞对丝裂霉素处理敏感。在不用丝裂霉素处理情况下,本实验室ConA诱导抑制细胞测定的最适条件为诱导相ConA剂量30μg/ml;效应相20μg/ml;培养时间诱导相为72小时,效应相为96小时;反应细胞与抑制细胞或对照细胞之比为等比组合。在此条件下18例正常人抑制百分比为78.95％±13.48％。我们的实验证明,在最适条件下该方法是稳定和可重复的。     

ConA对CD4~+CD25~+调节性T细胞早期活化和功能的影响

目的:观察常用丝裂原ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制功能的影响与早期活化标志CD69之间的关系。方法:用免疫磁珠分离BALB/c小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞、CD4+CD25-效应性T细胞,加入不同浓度的ConA,12 h后收集细胞,流式细胞术分析其CD69的表达。CFSE标记CD4+CD25-效应性T细胞,按2∶1比例与CD4+CD25+调节性T细胞共同培养,培养同时加ConA,3 d后流式细胞仪分析ConA对CD4+CD25+调节性T细胞抑制CD4+CD25-效应性T细胞增殖的影响。结果:ConA能剂量依赖性地升高CD4+CD25+调节性T细胞和CD4+CD25-效应性T细胞CD69的表达,对两群细胞CD69的升高表现出了相似的作用;另外,ConA在上述浓度能剂量依赖激活CD4+CD25+调节性T细胞的抑制功能。结论:ConA在体外对CD4+CD25+调节性T细胞活化和功能具有促进作用。ConA能一定程度模拟抗原,因而可用于评价药物对调节性T细胞的活化和功能影响。     

超抗原SEB活化耐受性NKT细胞亚群的研究

目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征.方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导, 收集体外扩增10 d的淋巴细胞为效应细胞, 与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3 d, 测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力.在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加效应细胞, 3 d后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激原的应答反应能力.用MTT染色方法记录细胞增殖的A值.以ConA活化的淋巴细胞做参照, 用流式细胞术(FCM)解析了耐受性效应细胞中NKT细胞亚群并显示分化来源与功能的相关性.结果:与正常淋巴细胞对抗原应答反应能力相比, SEB活化的效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低, 细胞生长的A值从正常组的0.80±0.04、0.60±0.03和0.55±0.07下降到0.60±0.05、0.30±0.05及0.27±0.04 (P＜0.01, n=3).效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述抗原的应答反应, 尤其抑制ConA 活化的T淋巴细胞的应答反应;A值分别由正常值降低到0.26±0.002、0.48±0.04及0.34±0.02(P＜0.01, n=3).效应细胞中CD4 NK1.1 、CD8 NK1.1 、TcRVβ8 /NK1.1 NKT细胞亚群显著增加(P＜0.05和P＜0.01, n=4).ConA活化的淋巴细胞是T淋巴细胞并包括CD4-CD8-/CD3 NK1.1 NKT细胞.结论:超抗原SEB活化的耐受功能与CD4 NK1.1 、CD8 NK1.1 、TcRVβ8 NK1.1 NKT细胞亚群有关, 它们由T细胞分化而来. CD4-CD8-/CD3 NK1.1 NKT细胞没有参与耐受性调节.     

肝再生增强因子对大鼠脾单个核细胞增殖及IL-2产生能力的影响

目的：通过体外实验探讨rALR对脾脏单个核细胞是否具有直接的免疫调控作用和作用特点。方法：以3H-TdR掺入法检测脾脏单个核细胞在不同处理情况下的增殖状况：①不同剂量的rALR与5μg/ml ConA同时加入；②5μg/ml ConA预刺激脾脏单个核细胞10和32小时后，再加入30μg/ml rALR；③30μg/ml rALR预处理脾脏单个核细胞至30小时，再加5μg/ml ConA刺激。以环孢霉素A作为阳性对照，以转空质粒的酵母表达上清提取物作为阴性对照。以放免法检测培养上清中IL-2分泌情况。结果：不同剂量的rALR与ConA同时加入时，能以剂量依赖方式明显抑制ConA对脾脏单个核细胞的促增殖作用。ConA预刺激脾脏单个核细胞10、32小时后，再给予30μg/ml rALR仍可明显抑制脾脏单个核细胞的增殖，但用30μg/ml rALR预处理脾脏单个核细胞至30小时，并不影响脾脏单个核细胞对ConA刺激的反应能力。ConA＋rALR（30μg/ml）组的IL-2分泌在24小时明显低于ConA组。结论：rALR对ConA活化的脾脏单个核细胞增殖有明显的抑制作用，而对未活化的脾脏单个核细胞则无明显影响，提示未经抗原激活的免疫细胞可能不表达ALR受体。     

活性T玫瑰花结、人自身T玫瑰花结、OKT8和OKT4细胞、ConA诱导抑制活性与自身抗体的临床关联

作者为了找出以往确决的T细胞亚群之间及其标志和ConA激活抑制活性之间存在的关系,对46例患各种继发性免疫陷病人的T细胞进行了研究。同时还观察了这些患者自身抗体的存在或缺陷与淋巴细胞亚群ConA抑制系统的关系。     

淋巴细胞E受体的研究——Ⅷ.抗猪E受体抗体与植物凝集素促增殖效应的比较研究

关于人淋巴细胞有丝分裂原受体与E受体之间的关系问题,迄今尚未阐明。Silva等报告,绵羊红细胞(SRBC)与人T细胞作用后,能加强后者对亚最适剂量的PHA和ConA的反应以及某些T细胞反应;但对最适剂量的PHA和ConA的效应则无明显影响。一些作者报告,抗人E受体单抗能抑制PHA     

抗激活小鼠T细胞抗原单克隆抗体(2H3)的免疫生物学特性分析

2H3为一株抗激活小鼠T细胞表面抗原的单克隆抗体。间接ELISA法所进行的免疫球蛋白属性分析实验表明:2H3属于IgG_1型抗体。同位素H~3-TdR掺入实验表明:2H3能以剂量依赖的方式明显抑制小鼠激活T细胞及CTLL-2细胞依赖IL-2的增殖;能够明显抑制ConA诱导小鼠脾细胞转化早期(12h内)的非特异性淋巴细胞增殖反应。对不同品系小鼠间的双向混合淋巴细胞反应(MLR),2H3也表现出明显的抑制作用,且这种抑制作用具有剂量相关性和无H-2限制性。实验结果提示:2H3具有抗小鼠细胞膜表面IL-2R单克隆抗体的免疫生物学特征。     

耐受调节性CD8+NKT细胞体外稳定性的研究

目的:探讨超抗原SEB活化并扩增的CD8+NKT细胞耐受调节功能的稳定性.方法:超抗原SEB活化并体外扩增的10 d、20d、30 d和冻存效应细胞被用于本研究.以正常C57BL/J鼠脾细胞为对照,将各个效应细胞与刺激剂刀豆蛋白(ConA)或脂多糖(LPS)共同培养72 h,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力.在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加各效应细胞,72 h后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力.体外扩增和冻存的效应细胞与异源鼠脾细胞做混合淋巴细胞培养,MTT法测定细胞的增殖情况.效应细胞用荧光抗体染色,用流式细胞术(FCM)解析NKT细胞亚群.结果:与正常淋巴细胞对刺激剂的应答反应能力相比,体外扩增10 d、20 d、30 d和冻存效应细胞对ConA或LPS的应答反应能力明显降低,细胞增殖的A值分别由正常值0.67和0.61分别下降至0.30和0.31,0.28和0.20,0.26和0.24,以及0.22和0.23(P＜0.05,n=3).效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述刺激剂ConA或LPS的应答反应,分别由正常值0.67和0.61下降至0.33和0.39,0.30和0.43,0.36和0.43,以及0.26和0.29(P＜0.05,n=3).效应细胞与异源鼠脾细胞反应与对照组相比明显的降低,分别由正常值0.70下降至20d的0.42,30 d的0.42以及冻存效应细胞的0.54(P＜0.05,n=3).在这群效应细胞中,主要是CD8+NKT细胞,由原始的0.36%增加到41.59%(P＜0.05,n=3).结论:耐受调节性CD8+NKT细胞可以在体外进行传代培养,并且这些传代培养细胞的耐受调节功能依然存在.     

雷公藤片诱导小鼠脾脏抑制细胞活性的研究

本文从体内及体外两方面探讨了雷公藤片对小鼠脾脏抑制细胞活性的影响。雷公藤片0.2克/日/只灌胃5天及9天后,小鼠脾脏抑制细胞活性明显增高,达26.9±23.9%及37.9±22.7%;与正常对照组相比(-14.4±37.9%)差异非常显著(P<0.01)。而给药12及15天后抑制细胞活性则有的明显增高,有的明显降低。给药5天后脾细胞对ConA应答明显降低。停药后7天,小鼠脾细胞对ConA应答已部分恢复,但抑制细胞活性仍然保持在较高水平。雷公藤片体外诱导2天后的脾细胞可明显抑制正常脾细胞对ConA的应答,抑制率达47.0±14.8%。本文还对雷公藤片的作用机理加以初步探讨。     

神经肽K物质,P物质对小鼠脾脏和胸腺淋巴细胞的影响

研究了速激肽SK和SP对小鼠脾脏和胸腺淋巴细胞的作用,观察到SK与SP在亚适量的ConA或LPS共同作用下,能促进脾脏细胞的体外增殖和抗体生成。此外,5×10~(-7)M的SK对ConA激活的胸腺细胞有促增殖作用,而SP没有这个效应。FACS分析的结果表明,SK能促使ConA激活的脾脏和胸腺T淋巴细胞亚群发生变化,使脾脏细胞中lyt2~ 细胞所占比例上升,而L_3T_4~ 细胞比例不变;使胸腺细胞lyt 2~ 和L_4~ 比例都下降。以上结果表明神经肽SK、SP对免疫反应有调节作用。     

小鼠肝浸液、脾浸液对体外人淋巴细胞功能和小鼠SRS瘤细胞生长的影响

本文报道小鼠肝浸液能强烈抑制人的淋巴细胞对植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)以及同种异型抗原所诱导的增生反应,而经60％饱和的硫酸铵盐析肝浸液组分,在相等蛋白浓度时,比原先的肝浸液有更强的抑制活性。说明选择性盐析能部分纯化肝脏免疫抑制因子。小鼠肝浸液还能抑制小鼠SRS瘤细胞在体外的生长,但抑制强度远不如对淋巴细胞反应的抑制。虽然肝浸液对同种和异种淋巴细胞增生反应有强大抑制作用,但是并未观察到对人T细胞花环形成功能的影响。小鼠脾细胞浸出液虽能显著地抑制同种淋巴细胞增生反应,但却不能明显抑制人的淋巴细胞对PHA和同种异型抗原的应答反应,也不能抑制小鼠SRS瘤细胞在体外的生长。     

大肠癌模型动物脾细胞的IL-2诱生水平和NK细胞活性的动态观察

本文报道以二甲肼诱发的大肠癌小鼠为动物模型,于肿瘤生长的不同阶段,分别测定其脾细胞产生IL-2能力,对ConA的增殖反应及NK细胞活性。结果表明,荷瘤鼠脾细胞产生IL-2能力和对ConA的增殖反应均明显受到抑制,且随荷瘤期的延长其受抑制程度加剧,但荷瘤鼠的NK细胞活性变化与对照鼠无显著差异。     

刀豆凝集素单克隆抗体特性分析和初步应用

建立了一株能分泌抗刀豆凝集素(ConA)单克隆抗体(McAb)的细胞株-CA2。ELISA证实所得 CA2 McAb仅与 ConA有反应,而与菜豆凝集素(PHA)、美洲商陆(PWM)、花生凝集素(PNA)、扁豆凝集素(LcA)以及牛血清白蛋白(BSA)都无交叉反应。免疫印迹试验进一步证实该McAb 只能与 ConA 形成免疫沉淀线。该McAb 能抑制 ConA对RLc-802细胞的凝集作用,竞争抑制试验显示α-甲基甘露糖、果糖不能抑制 CA2 McAb与 ConA 的结合,提示它可能是针对 ConA蛋白结合点部位抗原决定簇的 McAb。应用该McAb证实了急性T淋巴细胞白血病细胞株Molt_4、CEM和B淋巴母细胞CCRF-sb以及转化的扁桃腺淋巴细胞表面膜存在有分子量大小不同的 ConA受体,提示同是ConA受体,可能具有不同的生物学功能。     

激活FXR抑制MRL/lpr狼疮小鼠肝损害的研究

 目的:观察法尼酯衍生物X受体（FXR）激活是否减轻MRL/lpr狼疮小鼠肝损害。方法:检测FXR在MRL/lpr狼疮小鼠及正常BALB/c小鼠肝脏的表达;观察BALB/c小鼠和鹅去氧胆酸（CDCA）激活FXR的MRL/lpr小鼠再以伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导肝脏炎症反应后的肝脏酶学、炎症因子及病理学的变化。结果:FXR在MRL/lpr狼疮小鼠肝脏中低表达;ConA能在MRL/lpr小鼠诱导出较对照BALB/c小鼠更严重的肝损害;激活FXR减轻MRL/lpr狼疮小鼠ConA诱导的肝脏炎症损伤,并减少一系列炎症因子的释放。结论: CDCA激活FXR 后,能减轻狼疮小鼠肝脏损害。FXR可能是系统性红斑狼疮肝损害的一个保护性因素,激活FXR可能成为狼疮肝损害的一个治疗途径。     

短寿命与刀豆素A诱导的两种抑制性细胞功能的比较研究

本文报告二种抑制性细胞功能的比较研究。20例正常人外周血单个核细胞ConA诱导的抑制率为38.75±13.96％,10例正常短寿命抑制细胞的抑制率为68.3±9.4％。同步比较ConA诱导和短寿命抑制性细胞功能,二者较为接近。     

ConA诱导的抑制细胞及其应用

一、ConA诱导抑制细胞的特征 1976年Shou等发现人外周血中含有一群淋巴细胞,经适当剂量ConA激发后,这群细胞可抑制其他反应系统的免疫反应。该发现引起了广泛兴趣。从76年至今人们发表了数百篇论文,证实了该发现,也从表面     

比较研究人正常,增生性胃粘膜和胃癌时对酶标凝集素的反应

本文用酶标凝集类,对35例胃手术病人的正常胃粘膜、增生性胃粘膜、小肠化生和胃癌等与凝集素的反应,在光镜上作了比较观察。结果表明正常胃粘膜的上皮细胞对PNA、DBA和ConA均为阴性。而胃小凹上皮PNA和DBA则为阳性。增生肥大的胃粘膜、上皮细胞和胃小凹上皮对PNA和DBA均匀阳性反应,其染色强度在胃小凹上皮有所增强。化生的胃粘膜,PNA阳性,但DBA阴性。胃腺的主细胞仅对ConA染色。壁细胞能选择性地与DBA结合,有的壁细胞也能与PNA结合。癌细胞与凝集素反应的能力比增生性粘膜减弱,可能是由于癌细胞缺少糖苷化作用酶的关系,