胞外青霉素酰化酶产生菌的选育

胞外青霉素酰化酶产生菌的选育ＳＥＬＥＣＴＩＯＮＯＦＨＩＧＨＹＩＥＬＤＳＴＲＡＩＮＰＲＯＤＵＣＩＮＧＥＸＴＲＡＣＥＬＬＵＬＡＲＰＥＮＩＣＩＬＬＩＮＡＣＹＬＡＳＥ谢世兰王飞＊王庆敏段丽君（山东鲁抗医药股份有限公司研究所，济宁２７２１２１）ＸＩＥＳｈｉ－Ｌ...     

谷胱甘肽产生菌的菌种选育

采用紫外线和亚硝基胍对出发菌株SIPI-G0619进行诱变,同时使用乙硫氨酸、氯化锌和三氮唑三种抗性筛选物为筛选模型,最终筛选得到稳定的谷胱甘肽高产菌株SIPI-Gh435;谷胱甘肽产量为864mg/L,是出发菌株的4.9倍。     

L-亮氨酸产生菌菌种选育

<正> L-亮氨酸是人体必需氨基酸,广泛地应用于医药卫生及食品方面。L-亮氨酸的生产有三种方法。一是从蛋白质水解液中提取,产品的收率低、价格高。二是化学合成法,产品为DL-型的混合物。最后一种方法为微生物发酵法,生产简便,产品价格低。本试验以黄色短杆菌T_(6-13)为出发菌株筛选L-亮氨酸产生菌,获得一株抗2-TA。AHV.AEC三种氨基酸结构类似物突变株R19,它可以积累L-亮氨酸8.2mg/ml,经培养条件考查,它可产16.3mg/ml的L-亮氨酸。     

诺西肽产生菌的菌种选育

目的对诺西肽产生菌进行菌种选育。方法自然分离、物理和化学诱变育种(其中包括紫外线诱变和NTG诱变)的方法。结果选定了出发菌株;考察得到紫外线和NTG对出发菌株进行诱变的最佳剂量;出发菌株经几次诱变得到诱变菌株。结论最终得到的诱变菌株其诺西肽的产量是出发菌株的3倍。     

氨基酰化酶高产菌株的选育与发酵

本实验以赭曲霉F449为出发菌株，发酵产生氨基酰化酶，其野生型菌株产酶单位为12.2u/ml发酵液,我们首先以紫外线诱变处理2min,得到其变异株F9,产酶16u/ml发酵液,然后对F9菌株的原生质生质体进行亚硝基胍诱变处理15min,得F28菌株,产酶24.7u/ml发酵液,将F28菌株在优化培养基中发酵培养,其产酰化酶单位提高到32.4u/ml发酵液,与此同时,提取到粗品酰化酶,其酶活为15,000u/g.     

氨基酰化酶高产菌株的选育与发酵

本实验以赭曲霉F_(449)为出发菌株,发酵产生氨基酰化酶,其野生型菌株产酶单位为12.2μ/ml发酵液。我们首先以紫外线诱变处理2min,得到其变异株F_9,产酶16μ/ml发酵液,然后对F_9菌株的原生质体进行亚硝基胍诱变处理15min,得F_(28)菌株,产酶24.7μ/ml发酵液,将F_(28)菌株在优化培养基中发酵培养,其产酰化酶单位提高到32.4μ/ml发酵液,与此同时,提取得到粗品酰化酶,其酶活为15,000μ/g。     

分离青霉素酰化酶产生菌的简易筛选法

Walton、Baker、Szewczuk等曾报道青霉素酰化酶产生菌的筛选方法。由于以上方法存在灵敏度低、实用性差、操作过程复杂以及仅适用于胞内酰化酶产生菌等问题,本文介绍一种简易快速既适于胞内酶又适于胞外酶产生菌的筛选方法。即改进的微生物学方法和酸量滴定法。微生物筛选法是将待测菌株接种到营养琼脂平皿上,培养过夜后以5ml含青霉素G5mg/ml的营养琼脂敷盖,再将生长在1%蛋白胨,0.5%氯化钠的液体培养基内生长18小时的粘质赛氏杆菌0.2ml涂于坚固的上     

胞外青霉素酰化酶产生菌的筛选及产酶条件

采用青霉素梯度琼脂平皿法，从土壤中快速筛选出３５株产胞外青霉素酰化酶的菌株，经复筛有５株酶活力较高，经鉴定均为芽胞杆菌，Ｂ３５－１７菌株酶活力最高．研究了Ｂ３５－１７菌株的胞外青霉素酰化酶产生条件，该菌株在最适产酶条件下，酶活力达２．６７ｕ／ｍＬ．在发酵培养基中添加０．２％的玉米浆能降低Ｆｅ２＋对酶合成的抑制作用．     

基因工程菌株产生的青霉素酰化酶的纯化及其性质

以构建的青霉素酰化酶基因工程菌(E.Coli 108/PPAHD 1)为材料,经硫酸铵沉淀、离子交换和制备电泳等手段将青霉素酰化酶的纯度提高了155倍,比活达17 u/mg,其凝胶电泳呈现单带。该酶有两个亚基,分子量分别为62300 d 和14900 d。并测定了该酶对温度及 pH 稳定范围、米氏常数等电点。     

青霉素酰化酶产生菌的分子育种及其产酶条件的研究

用EcoR1分别酶切质粒pACYC184和Ec108染色体,经连接、转化、筛选,得到7株克隆了青霉素酰化酶基因的转化体-C600(pPAHD1-7)。重组质粒pPAHD1在不同受体细胞内的酶活表达水平相差20倍。据此构建的工程菌其青霉素酰化酶活比出发菌株提高4～5倍。本文还对工程菌的产酶条件进行了研究。     

秦洛星菌种选育

通过原生质体于生和融合技术选育秦洛星菌种，其最主生物效价可达１１００μｇ／ｍｌ。     

L-缬氨酸产生菌菌种选育和发酵条件考察

以天津短杆菌（ＢｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍＴｉａｎｊｉｎｅｓｅ）Ｔ６－１３为出发菌株，采用硫酸二乙酯诱变处理，筛选α－氨基丁酸和２－噻唑丙氨酸抗性突变株，从中获得一株Ｌ－缬氨酸产生菌４－２８７，可以产Ｌ－缬氨酸１２．８ｇ／Ｌ，经过培养基配方的优化实验，该菌株摇瓶发酵产Ｌ－缬氨酸２８．６ｇ／Ｌ．     

透明质酸产生菌菌种诱变选育及发酵工艺研究

从牛鼻粘膜分离兽疫链球菌，经诱变获得的透明质酸酶缺陷型变异株Ｙ－９２１，在含葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏及无机盐的发酵液中，于ｐＨ７．０、３７℃下发酵４２ｈ，得透明质酸４．５ｇ／Ｌ。其分子量为１．９×１０６ｄ，蛋白质含量０．２％，此种产品适用于化妆品。     

透明质酸产生菌菌种诱变选育及发酵工艺研究

采用透明质酸酶缺陷型链球菌发酵生产透明质酸.从牛鼻粘膜分离兽疫链球菌,经诱变获得透明质酸酶缺陷型变异株Y-921.Y-921在含葡萄糖、蛋白胨、酵母浸膏及无机盐的发酵液中,pH7.0,37℃下发酵42h,得透明质酸4.5g/L,其分子量为1.9×10~6,蛋白质含量0.2%,这种高分子量透明质酸适用于化妆品.     

氨基糖苷类抗生素产生菌的代谢调控与菌种选育

氨基糖苷类抗生素是目前临床上重要的抗感染药物，本文对该类抗生素生物合成的调控机理及有关菌种选育工作的进展进行了综述。     

PF1022A产生菌的菌种选育及培养基优化

目的 筛选PF1022A高产菌株,并优化发酵条件,以提高发酵水平。方法 以PF1022A产生菌座坚壳菌(Rosellinia sp.)HS-NF-1412Z(3050 mg/L)为出发菌株,采用紫外诱变育种,再在单因素试验的基础上结合Box-behnken(BB)响应面法优化发酵条件。结果 获得一株产PF1022A的高产稳定菌株HS-NF5-86-5-88,发酵水平较出发菌株提高了19%。采用优化后的发酵培养基：麦芽糊精163.0 g/L,酵母抽提物19.7 g/L,棉籽饼粉25.0 g/L,豆油5.0 g/L时,硫酸镁2.0 g/L,氯化钠2.0 g/L,碳酸钙2.0 g/L,菌株摇瓶发酵产量5978 mg/L。结论 通过菌种诱变选育与配方优化,PF1022A的摇瓶产量较出发菌株提高了96%,具有工业应用价值。     

青霉素酰化酶研究进展

青霉素酰化酶除了在医药工业上用于大规模生产β－内酰胺类抗生素中间体和半合成β－内酰胺类抗生素之外,还有其它的一些潜在应用;对青霉素酰化酶的研究一直吸引着各国科研人员的兴趣,近年来,用一些经典的和现代的技术手段,对青霉素酰化酶产生菌进行改良,通过理化诱变,使酶活力提高;通过定点突和化学修饰,将酶活性中心的丝氨酸变成半胱氨酸或含硒原子的半胱氨酸,使酶的合成活力相对于水解活力大幅提高,通过基因工程技术提高酶的表达水平,促进分泌或改进生产菌的缺陷,出现了介孔分子筛,二甘醇二甲基酯丙烯酸酯接枝尼龙共聚物等新的;固定化材料及酶膜反应器,多室固定化酶反应器,有望用于工业化生产。ββ